细胞与分子免疫学杂志
Chinese Journal of Cellular and Molecular Immunology 세포여분자면역학잡지
- 主管单位： 中国免疫学会；第四军医大学
- 主办单位： 陕西省免疫学会,中国免疫学会
- 影响因子： 0.81
- 审稿时间： 1-3个月
- 国际刊号： 1007-8738
- 国内刊号： 61-1304/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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体外电刺激对维生素C诱导的多能干细胞向心肌细胞分化的影响
目的 探讨电刺激在体外对诱导性多能干细胞(iPSCs)向心肌细胞分化的作用.方法 复苏小鼠来源的iPSCs,悬滴培养法形成拟胚体,维生素C诱导其分化,诱导过程按是否给予电刺激分为电刺激组与非电刺激组.观察各组细胞生长情况,记录各组拟胚体出现跳动的时间和跳动拟胚体的数量,计算心肌细胞分化率.共聚焦显微镜成像结合免疫荧光细胞化学检测心肌特异性肌钙蛋白T(c-TnT)的表达.RT-PCR检测干细胞多能性标志因子Oct-4、心肌早期特异性转录因子GATA-4和心肌特异性肌球蛋白0重链(α-MHC)的基因表达.结果 电刺激组拟胚体较非电刺激组分化更快,更早出现搏动,心肌细胞分化率更高[(68.89 +5.09)％ vs(52.22±3.85)％,P＜0.05].两组搏动区域细胞均表达c-TnT,电刺激组细胞c-TnT表达更明显.在诱导过程中,Oct-4表达水平随诱导时间延长逐渐减少,电刺激组较非电刺激组递减更快(P＜0.05).两组均检测到心肌特异性标记分子GATA-4和α-MHC的表达.在诱导分化相同时间点,电刺激组GATA-4和α-MHC表达水平高于非电刺激组(P＜0.05).结论 模拟心脏电学微环境的电刺激有助于维生素C诱导的iPSCs在体外向具有心肌细胞表型特征的细胞分化.
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脉冲电刺激对H9c2细胞增殖及分化的影响
目的 观察脉冲电刺激对H9c2细胞增殖的抑制作用,探讨脉冲电刺激对H9c2细胞分化的诱导作用.方法 用不同频率(0、1、5、10、50、100 Hz)、电压(0、5、10、20、40、50 v)、时间(0、1、2、4、6、8 h/d)的组合脉冲电刺激作用于大鼠H9c2细胞,以5-氮胞苷作为干预因素对照.采用MTT法检测H9c2细胞增殖率.采用免疫荧光细胞化学染色检测心肌肌钙蛋白T(cTNT)及八聚体结合转录因子4(Oct4)的表达.采用RT-PCR法检测cTNT、肌球蛋白重链α(α-MHC) mRNA的表达.结果 脉冲电刺激能抑制H9c2细胞增殖(P＜0.05),脉冲电刺激的参数为频率1 Hz、4 h/d、10 V时对H9c2细胞增殖的抑制作用大且不致细胞死亡.用此参数脉冲电刺激作用于H9c2细胞2周后细胞Oct4表达减少(P＜0.05),而cTNT和α-MHC表达仍十分明显.结论 脉冲电刺激能抑制大鼠胚胎心脏组织成肌细胞株H9c2细胞的增殖,同时cTNT和α-MHC表达增强,Oct4表达减弱,对H9c2细胞具有诱导分化作用.
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重组人生长激素对THP-1单核细胞TNF-α和IL-6分泌的影响与NF-κB活性的相关性研究
目的 探讨重组人生长激素(rhGH)对THP-1单核细胞TNF-α和IL-6分泌的影响,并研究其与NF-κB活性的相关性.方法 应用ELISA检测rhGH诱导THP-1细胞培养上清中TNF-α和IL-6的分泌情况,并观察LPS和NF-κB特异性抑制剂BAY11-7082对其分泌的影响；应用荧光素酶报告基因和电泳迁移率实验(EMSA)检测NF-κB在rhGH诱导的单核细胞中的活化程度.结果 rhGH单独可以促进THP-1细胞分泌TNF-α和IL-6,抑制LPS诱导的细胞因子的分泌；BAY11-7082能显著抑制rhGH和LPS诱导的TNF-α和IL-6的分泌,NF-κB活性与TNF-α和IL-6的分泌呈现明显的相关性.结论 rhGH可通过NF-κB信号通路双向调节THP-1单核细胞TNF-α和IL-6的分泌.
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人FHL1各LIM结构域融合蛋白的原核表达、纯化及活性检测
目的 构建人FHL1各LIM结构域的原核表达载体,获得纯化的GST-FHL1-LIM1/2、-LIM1、-LIM2、-LIM3和-LIM4融合蛋白,并对其活性进行检测.方法用PCR法从FHL1真核表达载体中扩增FHL1的LIM1/2、LIM1、LIM2、LIM3和LIM4基因编码序列,将其正确插入pGEX-KG载体,重组质粒转化大肠杆菌Rossate表达后,用GST-Sepharose 4B珠子纯化融合蛋白,并用Western blot法检测融合蛋白表达,通过GST pull-down技术检测纯化蛋白与已知结合蛋白雌激素受体α(ERα)的相互作用.结果 构建得到FHL1-LIM1/2、-LIM1、-LIM2、-LIM3和-LIM4基因的原核表达载体,双酶切鉴定得到与预期片段大小相符的外源基因插入片段,经测序与目的序列完全一致；在Rossate菌中诱导表达出与预期大小相符的目的蛋白,经Western blot法检测,融合蛋白成功表达；纯化得到GST-FHL1-LIM1/2、-LIM1、-LIM2、-LIM3和-LIM4五个融合蛋白,GST pull-down证明FHL1全长以及FHL1-LIM1/2、-LIM2蛋白可以和ERα相互作用.结论成功克隆FHL1-LIM1/2、-LIM1、-LIM2、-LIM3和-LIM4基因,并获得了活性良好的GST-FHL1-LIM1/2、-LIM1、-LIM2、-LIM3和-LIM4蛋白,为研究FHL1在乳腺癌中的作用奠定了实验基础.
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华蟾酥毒基对肝癌HepG2细胞c-Src基因表达的影响
目的 观察华蟾酥毒基作用于HepG2细胞后,c-Src基因的表达改变.方法 华蟾酥毒基作用于HepG2细胞6h后,提取细胞RNA和蛋白,半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测c-Src mRNA的表达变化,Western blot法检测c-Src蛋白的表达.结果 华蟾酥毒基作用于HepG2细胞6h后,c-Src mRNA和蛋白的表达均降低.结论 华蟾酥毒基可在转录和翻译水平上抑制HepG2细胞c-Src的表达.
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肿瘤微环境中IL-10限制SOCS1基因沉默的树突状细胞疫苗的抗肿瘤作用
目的 观察SOCS1基因沉默的DC疫苗对荷黑素瘤小鼠的抗肿瘤作用及肿瘤微环境中IL-10对该DC疫苗抗瘤作用的影响.方法 从小鼠股骨分离骨髓细胞,GM-CSF和IL-4联合诱导DCs分化,然后感染携带沉默SOCS1基因的Len-SOCS1-shRNA慢病毒；用TRP2抗原肽负载沉默SOCS1的DC细胞制备DC疫苗,LPS诱导成熟,流式细胞仪分析DC细胞表面MHCⅡ和CD86的表达,real-time PCR分析该DC细胞的SOCS1、IL-10和IL-12p40表达.用B16细胞或降低IL-10基因表达的B16(B16-IL-10-/-)制备荷瘤小鼠模型,瘤内注射DC疫苗(3×106/只),观察肿瘤生长和荷瘤小鼠生存期.采用不连续梯度离心法分离肿瘤浸润淋巴细胞,流式细胞仪观察CD8+T细胞的分布；并采用微量细胞毒的方法分析CTL活性.结果 Len-SOCS1-shRNA慢病毒感染DC后,可使SOCS1表达下调80％；下调SOCS1表达的DC细胞MHCⅡ和CD86表达有增加趋势,但与对照组DC相比无明显差异；下调SOCS1表达可降低DC细胞的IL-10表达,提高IL-12p40的表达.沉默SOCS1的DC疫苗对B16荷瘤小鼠的生存率没有明显影响,但可显著提高B16-IL-10-/-荷瘤小鼠的生存率(P＜0.05).下调SOCS1表达的DC疫苗不仅可提高B16-IL-10-/-荷瘤小鼠肿瘤浸润CD8+T淋巴细胞数,还可促进CD8+T细胞IFN-γ的分泌及CTL活性.结论 沉默SOCS1可提高DC疫苗的活性,但肿瘤微环境的IL-10依然是限制该DC疫苗有效发挥抗瘤作用的因素.
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p300介导高糖和甲基乙二醛糖化终产物致人系膜细胞氧化应激及纤维连接蛋白表达
目的 观察转录共激活子p300和蛋白激酶C(PKC) β2在高糖及甲基乙二醛糖化终产物(AGEs)诱导人系膜细胞(HMCs)活性氧(ROS)产生和纤维连接蛋白(FN)蛋白表达中的作用及相互关系.方法 将培养的HMCs分为以下几组:①正糖组(NG)、高糖组(HG)、渗透压组(LG)、正糖+血清白蛋白组(BSA)、正糖+糖化终产物组(AGEs)；②高糖+空载体组(HN)、高糖+ PKCβ2转染组(P0)、高糖+PKCβ2抑制剂CGP53353组(PI)、糖化终产物+空载体组(AN)、糖化终产物+PKCβ2转染组(APO)、糖化终产物+PKCβ2抑制剂CGP53353组(API)；③正糖+p300抑制剂组(NG+Gar)、高糖+p300抑制剂组(HG+ Gar)、血清白蛋白+p300抑制剂组(BSA+ Gar)、糖化终产物+p300抑制剂组(AGEs+ Gar),以上各组细胞均培养2d.荧光显微镜及荧光酶标仪检测细胞内ROS水平；Western blot法检测各组细胞p300、PKCβ2及FN蛋白表达.结果 HG组及AGEs组p300、PKCβ2蛋白表达及ROS水平增加,分别较NG组及BSA组增加了1.04倍、1.26倍、0.78倍和1.45倍、1.07倍、0.71倍(P＜0.05).同HG组及AGEs组相比,HG+ Gar组及AGEs+ Gar组ROS水平显著降低,分别为HG组及AGEs组的43％和39％ (P ＜0.05).PO组及APO组分别较HG组和AGEs组p300、PKCβ2蛋白表达进一步上调,分别为HG组及AGEs组的1.19倍、1.73倍和1.23倍、1.69倍(P＜0.05)；PI组和API组p300、PKCβ2蛋白表达显著下调(P＜0.05)；HN组和AN组p300、PKCβ2蛋白表达分别较HG组及AGEs组差异无统计学意义；HG+ Gar组及AGEs+ Gar组p300、FN蛋白表达显著下降,分别为HG组及AGEs组的31％、43％和37％、29％ (P ＜0.05).结论 高糖及MGO-糖化终产物通过诱导HMCs转录共激活子p300激活参与系膜细胞氧化应激水平上调及FN蛋白表达.
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人组蛋白H3真核表达载体的构建及功能初步检测
目的 构建带myc标签的人组蛋白H3基因真核表达载体,获得Myc-H3融合表达蛋白,并对其功能进行初步检测.方法 采用PCR技术从乳腺文库中扩增人H3基因编码序列,将其正确插入pXJ-40-myc载体,重组质粒转染人胚肾293T细胞,W3st3rn blot法检测融合蛋白表达,通过免疫共沉淀技术检测融合蛋白与已知结合蛋白组蛋白赖氨酸特异性去甲基化酶(LSD1)和组蛋白甲基转移酶(EZH2)的相互作用.结果 构建得到组蛋白H3基因的真核表达载体,双酶切鉴定得到与预期片段大小相符的外源基因插入片段,经测序与目的序列完全一致；经Western blot法检测,融合蛋白成功表达；免疫共沉淀检测证实Myc-H3融合蛋白可以和已知相互作用蛋白LSD1及EZH2相互作用.结论 成功构建组蛋白H3真核表达载体,该融合蛋白正确表达.
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白细胞相关免疫球蛋白样受体-1在破骨细胞发育中的作用
目的 研究白细胞相关免疫球蛋白样受体-1(LAIR-1)在破骨细胞(0C)发育过程中的表达规律及影响.方法 PCR检测小鼠LAIR-1(mLAIR-1)分子在体外诱导OC生成过程中mRNA水平的变化；重酒石酸盐抗性酸性磷酸酶(TRAP)染色观察OC的数量；Coming Osteo Assay surface检测OC骨吸收陷窝的形成；ELISA检测类风湿性关节炎(RA)患者血清可溶型LAIR-1(sLAIR-1)与疾病的炎症状态和活动度是否相关.结果 PCR结果显示在OC形成过程中,LAIR-1 mRNA显著降低；TRAP染色和骨吸收陷窝实验均显示加入mLAIR-1单克隆抗体后,OC数量明显减少.RA病人类风湿因子高低水平组之间的血清sLAIR-1水平存在显著差异.结论 LAIR-1分子可能参与了OC的发育过程,并且与RA疾病的炎症状态有一定关系.
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蒙药特润舒都乐浸膏对脂多糖刺激RAW264.7细胞分泌炎性因子的影响
蒙药特润舒都乐是传承至今的传统蒙药复方,有7味草药构成,具有良好的抗炎和提高免疫力作用.在此基础上对蒙药复方做了乙醇回流提取,依次用石油醚、正丁醇、乙酸乙酯等不同有机溶剂进行萃取,得到石油醚层浸膏、乙酸乙酯层浸膏、正丁醇层浸膏和水母液浸膏[1].在前期工作中,发现蒙药特润舒都乐水母液浸膏具有较强提高机体免疫力和抗炎作用[2-3].但是前期的实验主要是动物实验,本研究从另一个角度,采用细胞培养的方法,构建脂多糖(lipopolysaccharides,LPS)刺激小鼠RAW264.7巨噬细胞的炎症模型.观察蒙药特润舒都乐水母液浸膏对RAW264.7细胞释放炎性细胞因子的影响,从而为蒙药特润舒都乐用于奶牛乳房炎的治疗提供进一步的理论依据.
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含猪链球菌2型溶菌酶释放蛋白基因片段的重组腺病毒构建与鉴定
目的 构建猪链球菌2型(SS2)溶菌酶释放蛋白(MRP)基因片段的重组腺病毒并对其进行鉴定.方法 根据MRP的基因序列,设计合成1对引物,以SS2型基因组为模板,扩增MRP基因片段(467-1351)序列.将PCR产物通过pMD18-T载体克隆后,再连接至腺病毒穿梭载体pShuttle-CMV中构建重组穿梭质粒pShuttle-CMV-MRP,再经PmeI酶切,然后转化至含腺病毒骨架质粒pAdEasy-1的BJ5183-AD-1感受态细胞中,经同源重组获得重组腺病毒质粒pAdeno-CMV-MRP.PacI酶切线性化该重组腺病毒质粒,再转染AD-293细胞进行病毒包装,后对细胞包装的病毒液进行PCR和Western blot法鉴定.结果 重组腺病毒质粒pAdeno-CMV-MRP转染AD-293细胞8d后出现明显的细胞病变,在培养细胞的上清病毒液中也检测到了MRP基因片段及其表达的蛋白.结论 成功构建了SS2型MRP基因片段的重组腺病毒(rAdeno-MRP).
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不同途径的乳球菌介导重组IL-12基因抗小鼠黑素瘤的效果
利用自身免疫系统或其组分治疗肿瘤是一种新的治疗手段.白细胞介素-12(interleukin-12,IL-12)是一种具有多种生物学活性的免疫调节因子,它可以促进NK细胞和细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic lymphocyte,CTL)的活性,能刺激T细胞及NK细胞的增殖,并诱导分泌IFN-γ等多种细胞因子[1],因此在抗肿瘤及抗感染中起重要作用.与其他细胞因子一样,直接应用IL-12会导致全身不良反应甚至危及生命.2003年Huber等[2]发现通过滴鼻给药可以降低IL-12介导的不良反应,此外有研究表明利用质粒、腺病毒或腺病毒转染的间质干细胞靶发送IL-12基因到肿瘤部位表达也能抑制肿瘤生长[3-5],而不致产生严重的不良反应.然而质粒发送存在缺乏组织的特异性和靶向性、转染效率较低且基因表达时间短[6]等缺点,发送重组腺病毒载体易导致转染细胞毒性及死亡、基因表达时间受限、可诱导机体产生免疫反应[7]等,限制了这些方式临床应用的效果.
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CDK2 RNA干扰后HepG2细胞蛋白表达的变化
目的 探讨稳定转染CDK2干扰RNA对人肝癌细胞株HepG2细胞生物活性及细胞核蛋白质的改变.方法 构建稳定转染pGenesil-1-CDK2的HepG2细胞系,MTT法检测细胞增殖、流式细胞术检测细胞周期的改变.通过RT-PCR和双向凝胶电泳-质谱技术-数据库搜索,比较转染前后CDK2 mRNA的表达和细胞核蛋白质的变化.并通过Western blot法对显著差异蛋白进行验证.结果 与空质粒组PHK-siRNA-HepG2细胞和未转染组HepG2细胞相比,pCDK2-siRNA-HepG2组细胞的生长速度减慢(P＜0.01),稳定转染CDK2 RNAi组细胞的CDK2 mRNA表达水平显著下降.通过双向电泳-质谱技术得到4个稳定转染CDK2 siRNA的HepG2细胞不表达的蛋白质,Westem blot法证实双向电泳结果的可信性.结论 CDK2干扰RNA可明显降低HepG2细胞CDK2 mRNA的表达,抑制HepG2细胞的增殖,干扰后的HepG2细胞不表达的蛋白质分别是类核糖体蛋白S12、β-肌动蛋白、锌指蛋白276和伴侣蛋白10相关蛋白.
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Krüppel样因子4基因干扰对RAW264.7细胞凋亡和吞噬的影响
目的 应用RNA干扰技术沉默小鼠RAW264.7巨噬细胞Krüppel样因子4(KLF4)基因,建立稳定干扰细胞株,观察其对细胞增殖、凋亡和吞噬活性的影响.方法 针对小鼠KLF4基因设计合成重组KLF4 shRNA质粒,脂质体法将重组质粒转染至RAW264.7细胞,经G418筛选后获得稳定表达细胞株.Western blot法检测细胞中KLF4蛋白的表达；CCK-8法检测细胞增殖活性；AnnexinV-FITC/PI双染色法检测细胞的凋亡情况；荧光素标记的大肠杆菌结合流式细胞仪检测细胞的吞噬活性.结果 KLF4 shRNA能明显抑制RAW264.7细胞的KLF4蛋白的表达,抑制率76％以上；从第3天开始,shKLF4组细胞的生长速度明显低于NC组(转染阴性质粒pGPU6/GFP/Neo-NC)(P ＜0.05)；WT组(野生型RAW264.7)、NC组和shKLF4组的细胞凋亡率分别为:1.73％、6.85％和12.76％,shKLF4组明显高于NC组(P＜0.05)；各组细胞的平均荧光强度分别为:WT组(122.0±2.80)、NC组(48.97±5.69)和shKLF4组(80.10 +4.61),与NC组相比,shKLF4组的细胞吞噬活性明显增高(P＜0.05).结论 成功构建了稳定干扰KLF4基因表达的RAW264.7巨噬细胞株,KLF4下调能够明显抑制RAW264.7细胞增殖,促进细胞凋亡,增强细胞的吞噬活性.
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含噻唑烷-4-酮的免疫刺激剂CH2a增强人iNKT细胞的功能
目的 研究含噻唑烷-4-酮的糖类衍生小分子免疫刺激剂CH2a对人iNKT细胞功能的影响.方法 分离健康人外周血单个核细胞(PBMC),经α-半乳糖神经酰胺(a-Galcer)和IL-2体外扩增后,利用磁珠分选分离纯化得到恒定型自然杀伤T细胞(iNKT细胞).5(6)-羧基二乙酸荧光黄琥珀酰亚胺酯(CFDA-SE)标记的纯化iNKT细胞,与CH2a共孵育后,流式细胞术检测细胞增殖和分代,IFN-γ和IL-4的表达；MTT法定量检测细胞增殖率及对K562细胞的杀伤活性.ELISA检测CH2a处理细胞培养基中IFN-γ和IL-4水平.结果 CH2a能显著促进IL-2引起的iNKT细胞体外增殖；提高IFN-γ和IL-4的生成量及IFN-γ/IL-4的比值；并显著增强iNKT细胞的杀伤活性.结论 CH2a有可能通过诱导iNKT分泌Thl类的细胞因子,调节T细胞向Th1分化,从而增强细胞免疫功能；同时显著提高iNKT的细胞毒功能.
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自体外周血干细胞移植对乙肝相关终末期肝病患者免疫功能的调节作用
目的 探讨自体外周血干细胞移植对乙型肝炎病毒(HBV)相关终末期肝病患者外周血中T淋巴细胞亚群和细胞因子的免疫调节作用.方法 采用流式细胞术检测患者外周血中Thl、Th2、调节性T细胞(Treg)的百分比,ELISA检测血浆IFN-γ、IL-6、IL-10水平.结果 自体外周血干细胞移植能明显改善HBV相关终末期肝病患者肝功能,同时上调患者外周血中Th2、Treg的百分比,下调血浆IL-6和IL-10水平(P＜0.05),而对Thl细胞及其细胞因子IFN-γ影响无统计学意义.结论 自体外周血干细胞移植可能是通过调节机体免疫微环境,抑制肝脏炎症反应,从而改善HBV相关终末期肝病患者肝功能.
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类风湿关节炎滑膜组织中多种G蛋白偶联受体mRNA的检测
在多数动物体内,G蛋白偶联受体(G proteincoupled receptors,GPCRs)构成了绝大部分的基因家族,并且绝大部分的细胞表面受体家族属于GPCRs[1].通过与相应的配体结合,GPCRs可以被激活并启动细胞内的信号转导系统,将配体包含的胞外信息传递到胞内,从而成为细胞内外的一个"门户"[2].由于GPCRs具有广泛存在性,多样的分子识别功能和信号始动等作用,使其成为临床治疗的重要靶标,在目前的药物市场份额中,靶向GPCRs的药物占据了约40％的市场份额[3].GPCRs在先天性、获得性和病理性的免疫系统反应中都具有重要作用,可以被广泛的免疫炎症调节因子,如前列腺素、白细胞三烯和组胺等调控[4].类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)是一种以慢性滑膜炎和侵袭性关节炎为主要表现的慢性自身免疫性疾病,其基本的病理改变是关节滑膜炎[5-6].
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白癜风患者血清前黑素小体蛋白17自身抗体的检测
目的 获取重组前黑素小体蛋白17(Pmel 17)并用于检测白癜风患者血清中Pmel 17自身抗体的分布.方法 通过RT-PCR从原代黑素细胞中获得人的Pmel 17基因,先后插入克隆载体pMD19-T和表达载体pGEX-4T-1,以构建重组质粒.IPTG诱导Pmel 17蛋白表达后以亲和层析法进行纯化.间接ELISA检测白癜风患者血清中抗Pmel 17自身抗体的阳性率.结果 重组质粒经测序,与预期设计完全一致,同时Pmel 17蛋白成功表达和纯化.ELISA检测进展期白癜风患者血清中抗Pmel 17自身抗体阳性率为22％,稳定期白癜风患者阳性率仅为2％,健康对照组未检测到抗Pmel 17自身抗体,进展期和稳定期阳性率差异具有统计学意义.结论 成功表达了Pmel 17重组蛋白,证明Pmel 17自身抗体与白癜风的疾病严重程度有一定关系.
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矽肺患者血清细胞因子和氧化损伤水平检测
尘肺病是由于在职业活动中长期吸人生产性粉尘,并在肺内潴留而引起的以肺组织弥漫性纤维化为主的全身性疾病[1].我国职业病目录规定的13种尘肺中,矽肺是主要的一种.研究显示Th1和Th2型细胞因子与矽肺发生有关,但作用机理仍不清楚.调节性T细胞是不同于Th1和Th2的具有调节功能的T细胞群,具有免疫抑制功能,可通过调节Th1/Th2型细胞因子分泌等多种途径,在免疫性疾病中起重要作用,在矽肺发生发展中的作用机制值得探讨.
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类风湿关节炎患者Th17和CD161+Th17细胞水平的变化
目的 观察类风湿关节炎(RA)患者和健康对照组外周血中CD4+ IL-17+T细胞(Th17)和CD4+ CD161+ IL-17+T细胞(CD161+Th17)的水平,探讨其在RA发病过程中的意义.方法 采用流式细胞术测定36例RA患者和11例健康对照组外周血中Th17细胞及CD161+ Th17的细胞百分率.结果 RA患者外周血Th17及CD161+ Th17细胞水平明显高于健康对照组(P＜0.01)且与疾病活动指数(DAS28)、血沉和C-反应蛋白水平呈显著正相关(P ＜0.05)；RA患者和健康对照组外周血中CD161+ Th17细胞百分率明显高于Th17细胞百分率(P＜0.01)；Th17细胞百分率与CD161+ Th17细胞百分率显著正相关(P＜0.01).结论 Th17及CD161+ Th17细胞在RA患者外周血中均增高且与疾病活动度正相关.
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脑膜炎奈瑟氏菌表面蛋白A的克隆表达及血清学分析
目的 构建并表达功能性的脑膜炎奈瑟氏菌表面蛋白A (NspA)的重组蛋白,并检测流行性脑脊髓膜炎(流脑)恢复期患者血清中的抗NspA抗体水平,探讨NspA作为新的流脑抗原疫苗的意义.方法 从流脑患者流行株中克隆NspA基因构建原核表达载体,在大肠杆菌中实现可溶性表达,GSTrap FF亲和层析纯化出具有生物活性的NspA融合蛋白.采用纯化得到的NspA融合蛋白检测流脑恢复期患者血清中的抗NspA抗体.结果 成功表达了功能性NspA蛋白,相对分子质量(Mr)为44 000.并用NspA融合蛋白检测到患者恢复期血清中存在有抗NspA抗体,且滴度为1:40时,阳性率为90％.结论 成功表达了NspA重组蛋白,并检测到自然感染流脑患者恢复期血清中的NspA抗体.
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基于抗原-抗体共表达的细菌展示技术的优化
目的 建立细菌周质内抗原抗体共表达系统.方法 将人白介素-1β(hIL-lβ)基因和抗人白介素1β单链抗体(antihIL-1β scFv)基因分别插入到细菌展示载体pBFD的pelB前导肽(游离型前导肽)和NlpA前导肽(锚定型前导肽)下游构建出重组载体pBFD-Ab-Ag.将pBFD-Ab-Ag转入到E.coli DH5α中诱导表达,抗原和抗体蛋白相互结合而被锚定到细菌内膜外侧,破除细菌外壁(原生质球制备)后与适当浓度的FITC标记的小鼠抗hIL-1β抗体进行孵育,后经流式细胞仪检测荧光信号,根据荧光信号强弱分析抗原抗体表达和相互作用情况.结果 pBFD-Ab-Ag E.coli DH5α具有很强的荧光信号,阳性率获得了大大的提高.结论 成功建立了建立细菌周质内抗原抗体共表达系统,实现了抗体和抗原细菌周质内的正确折叠和相互识别.简化了现有的抗体筛选的流程,为蛋白质相互作用的研究提供了新的技术手段.
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病毒性出血性败血症病毒单克隆抗体的制备及其特性分析
目的 制备抗病毒性出血性败血症病毒(VHSV)的单克隆抗体(mAb).方法 以差速离心法提纯VHSV作为免疫原,免疫BALB/c小鼠.应用杂交瘤细胞技术进行细胞融合,间接ELISA进行筛选检测,且对mAb进行特性分析.结果 制备出1株抗VHSV mAb,命名为4A5.对其进行特性分析结果显示该抗体腹水效价104以上；属于IgG3型,K链；仅与VHSV本身反应,与其他病毒和细胞均不发生交叉反应；对应的抗原位点在VHSV蛋白的相对分子质量(Mr)70 000的条带处,该蛋白带是VHSV的G蛋白.结论 制备出的特异性好的抗VHSV mAb,为该病毒的快速诊断及流行病学监测提供了检测试剂.
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抗B型葡萄球菌肠毒素高亲和力单链抗体的制备
目的 构建针对B型葡萄球菌肠毒素(SEB)的特异性单链抗体(scFv),并进行纯化和鉴定.方法 设计抗SEB高亲和力单克隆抗体(mAb) FMU-SEB-No.2重链和轻链可变区基因片段VH和VL的引物,利用RT-PCR技术,从本室制备的抗SEBmAb FMU-SEB-No.2杂交瘤细胞株中扩增出VH和VL基因片段；然后通过在轻链引物上设计linker序列,重叠引物延伸法(SOE)将VH和VL基因拼接成scFv基因片段,并将其克隆入原核表达载体PGEX4T-1中；转化E.coli BL21(DE3)感受态细胞,IPTG诱导表达,融合蛋白经谷胱甘肽亲和层吸柱纯化.采用SDS-PAGE,Western blot,ELISA等方法对其表达水平和特异性进行分析.结果 成功从1株抗SEB mAb FMU-SEB-No.2杂交瘤细胞株中扩增出VH和VL可变区基因,并通过linker序列将其拼接成scFv片段,大小约750 bp,编码250个氨基酸.PCR、酶切鉴定和测序结果表明表达载体构建成功.转化E.coli BL21(DE3),经IPTG诱导后,以可溶形式表达相对分子质量(Mr)约54 000的融合蛋白.经谷胱甘肽亲和层析法纯化融合蛋白,可获得纯度达90％以上的scFv,ELISA和Western blot法检测结果表明,可溶性scFv与抗原SEB有较强的结合活性.结论 成功构建并表达出抗SEB的特异性单链抗体.
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Cryopyrin炎性体在痛风性关节炎发病中的作用机制
痛风性关节炎的发病率在我国呈现出增高的趋势.随着对痛风发病机制研究的不断深入,发现cryopyrin炎性体在其发病过程中发挥非常重要的作用.Cryopyrin炎性体是一种多蛋白复合体,它能介导半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-1(capsase-1)激活,从而促进致炎细胞因子白细胞介素1β(IL-1β)和IL-18的分泌和成熟,在炎症反应和天然免疫中发挥主要作用.尿酸钠晶体沉积于组织会激发强烈的炎症反应,并激活cryopyrin炎性体及其参与的信号通路从而导致痛风的发生.现就有关cryopyrin炎性体的研究进展及其在痛风发病过程中的作用进行综述.
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自然杀伤细胞受体介导抗病毒免疫的分子机制
自然杀伤(NK)细胞是参与固有免疫的主要成分,其表面可表达多种受体.识别和杀伤靶细胞与其表面受体特性密切相关.根据所介导的功能不同,将NK细胞受体分为抑制性受体和活化性受体.前者识别一定型别的MHC I类分子后,通过免疫受体酪氨酸抑制基序(ITIM)传递抑制信号,阻抑对相应靶细胞的杀伤.后者识别靶细胞表面的相应配体后,通过免疫受体酪氨酸活化基序(ITAM)传递活化信号,产生细胞毒活性和分泌细胞因子/趋化因子,从而发挥抗感染作用.细胞毒作用可能主要依赖于ERK途径,而细胞因子/趋化因子的分泌可能主要依赖于NF-κB和(或)p38MAPK或JUK/AP-1途径.
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共刺激分子B7-H1参与肿瘤免疫的研究进展
B7-H1是继B7-1和B7-2之后发现的第3个B7家族分子.B7-H1可以抑制T淋巴细胞的增殖分化,促进调节性T细胞(Treg)的分化以及抑制性细胞因子的分泌,从而抑制免疫应答.B7-H1高表达于多种肿瘤细胞表面,它可通过与肿瘤浸润淋巴细胞上的相应受体结合,诱导淋巴细胞凋亡.因此高表达于肿瘤细胞的B7-H1可能参与了肿瘤的免疫逃逸过程.B7-H1在肿瘤组织中的表达水平和肿瘤患者的临床病理特征及预后紧密相关.此外,B7-H1也参与上皮间质转化过程,提示该分子还可能与肿瘤的发生和转移有关.通过靶向干预B7-H1通路,有望重建肿瘤浸润淋巴细胞对肿瘤的免疫应答,抑制肿瘤的生长和转移,从而达到治疗肿瘤的目的,这一策略在临床实验中也取得了不错的效果.
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蛋白质组学在免疫学研究中的应用
蛋白质组学即应用一系列的技术手段,在基因组规模分析蛋白质表达情况,包括蛋白质表达丰度及其翻译后修饰等.正是因为蛋白质组学关注的对象是蛋白质(本质上催化和控制所有生物学过程的分子),蛋白质组学在众多组学分支中显得尤其引人注目.而对于高等动物的免疫系统而言,蛋白质除了发挥执行者的作用外,还具有调节免疫系统,清除病毒或微生物病原体感染,恶性肿瘤细胞的转化等重要功能.因此,蛋白质组学的方法是适于在分子水平进行免疫学研究的理想工具.本综述旨在介绍蛋白质组学在免疫学相关研究中的应用以及对免疫学领域热点问题的推动作用.
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肝原位移植瘤裸鼠模型的建立及活体荧光成像检测
目的 建立能够通过活体荧光成像系统实时监测肿瘤进展的肝原位移植瘤裸鼠模型.方法 重组质粒pcDNA3.1-Luc转染细胞构建稳定表达荧光素酶的PLC/PRF/5肝癌细胞株,将该细胞注入裸鼠肝脏实质内,应用活体成像技术动态监测肿瘤进展情况,解剖荧光信号阳性裸鼠观察肿瘤组织生长情况.免疫荧光检测肿瘤组织中HBsAg表达.结果 对裸鼠肝原位移植瘤应用活体荧光系统成像,在肿瘤细胞注射部位检测到荧光信号,解剖动物后可在肝脏组织中观察到异质细胞团块.免疫荧光证实移植瘤中有HBsAg表达.结论 肝脏原位移植瘤裸鼠模型建立成功,为抗肝癌药物的研发提供了工具.
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实时荧光定量PCR检测RAW264.7巨噬细胞中Th1/Th2型细胞因子转录水平方法的建立及初步应用
目的 建立小鼠RAW264.7巨噬细胞的Th1和Th2型细胞因子荧光定量PCR检测方法.方法 依据GenBank中小鼠的β-actin基因序列、Th1型及Th2型细胞因子的核苷酸序列设计特异性引物,以RAW264.7巨噬细胞mRNA反转录后的cDNA为模板,通过构建质粒阳性标准品,建立检测上述细胞因子转录水平的real-time PCR方法.结果 用建立的荧光定量PCR方法,检测牛型布鲁氏菌S2308株感染RAW264.7巨噬细胞后,巨噬细胞Th1和Th2型细胞因子的转录水平.低检测量为102拷贝/μL,线性关系很好,R2≥0.982,该方法具有良好的特异性和重复性.结论 成功建立了检测巨噬细胞中Th1和Th2型细胞因子转录水平的荧光定量PCR方法.
| 年 | 期数 |
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| 2017 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2016 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2015 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
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| 2011 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2010 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2009 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2008 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2007 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2006 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2005 | 01 02 03 04 05 06 z1 |
| 2004 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2003 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2002 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2001 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2000 | 01 02 03 04 05 06 |
| 1999 | 01 02 |
| 1995 | 01 02 03 |
| 1994 | 01 02 |
| 1993 | 01 02 03 04 |
| 1992 | 01 02 03 04 |
| 1991 | 01 02 03 04 |
| 1990 | 01 02 |
| 1989 | 01 02 03 04 |
