细胞与分子免疫学杂志
Chinese Journal of Cellular and Molecular Immunology 세포여분자면역학잡지
- 主管单位： 中国免疫学会；第四军医大学
- 主办单位： 陕西省免疫学会,中国免疫学会
- 影响因子： 0.81
- 审稿时间： 1-3个月
- 国际刊号： 1007-8738
- 国内刊号： 61-1304/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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SEB诱导的CD4+ T细胞无能、凋亡及MHC-I类分子表达下调
目的: 探讨超抗原金黄色葡萄球菌肠毒素(SEB)体外诱导外周T细胞免疫耐受的作用机制.方法: 采用SEB体外刺激C57BL/6J(B6)小鼠的脾细胞后, 以MTT比色法检测脾细胞的增殖, 并用PI染色后以流式细胞术(FCM)分析不同时间段处于S期、G0～G1期的细胞及无能T细胞的凋亡, 测定T细胞亚群及MHC-I(H-2Kb)表达的变化.用琼脂糖凝胶电泳, 观察不同时间段凋亡T细胞的DNA特征.结果: 部分去除CD8+ T细胞后, SEB可刺激B6小鼠脾细胞中CD4+ T细胞大量增殖.在SEB刺激后第3天, CD4+ T细胞中处于S期的比率大, 此后开始下降; 而处于G0～G1期的CD4+ T细胞变化则相反.在初次刺激后第3天, 增殖的CD4+ T细胞出现无能.FCM检测及用琼脂糖凝胶电泳检查DNA ladder证实, 在第7天, 无能CD4+ T细胞出现凋亡, 且凋亡细胞的比率逐渐增多, 不因加入抗CD3抗体或ConA而逆转.在SEB刺激后, CD4+ T细胞表面MHC-I类分子(H-2Kb)的表达, 随细胞无能的出现而明显下调.结论: SEB诱导的T细胞免疫耐受, 可能与CD4+ T细胞的无能、凋亡及细胞表面分子MHC-I的表达下调有关.
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人截短型凋亡诱导因子的表达对HeLa细胞的促凋亡作用
目的: 观察人截短型AIF基因的表达对HeLa细胞的促凋亡作用.方法: 用RT-PCR法分段克隆全长人AIF基因.经改造截去其N-端线粒体定位信号及部分Spacer区域(1～120位氨基酸)的编码序列, 从而获得人截短型AIF(AIF△1-120)基因.将其克隆入pIRES2-EGFP绿色荧光蛋白(EGFP)共表达载体, 用脂质体法转染HeLa细胞, 通过荧光显微镜观察、免疫组织化学检测、间接免疫荧光检测、电镜观察等方法, 检测目的基因在转染细胞中的表达, 以及对转染细胞的形态及生长状况的影响.结果: 成功地构建了人截短型AIF(AIF△1-120)基因的真核表达载体.转染HeLa细胞后, 可检测到人截短型AIF分子的表达.随着转染后时间的延长, 可观察到表达人截短型AIF分子的HeLa细胞呈现典型的凋亡特征.结论: 人截短型AIF基因的表达可诱导HeLa细胞凋亡.
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人Fas配体蛋白在大肠杆菌中的融合表达与应用
目的: 在大肠杆菌中融合表达人Fas配体蛋白. 方法: 应用RT-PCR技术, 从激活的人外周血淋巴细胞中提取总RNA, 扩增Fas配体 cDNA, 克隆入PCR2.1载体.测序验证后, 克隆入带有组氨酸盒的表达载体pQE-31, 在大肠杆菌中表达, 经亲和层析柱纯化后, 用SDS-PAGE和Western blot 鉴定表达产物.结果: 表达的融合蛋白为人Fas配体, 其相对分子质量(Mr)为40 000.经透析复性后, 具有诱导Jurkat细胞凋亡的作用.用该蛋白分子免疫BALB/c小鼠制备抗血清, 以间接ELISA检测了部分自身免疫病与肿瘤患者血清中可溶性FasL的含量, 结果与进口试剂盒的灵敏性相似.结论: 获得人Fas配体蛋白, 并制备出抗FasL抗血清, 为进一步研制抗FasL单克隆抗体, 深入研究FasL的应用提供了材料.
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人血管内皮生长因子165基因真核表达载体的构建及表达
目的: 构建人血管内皮生长因子165(hVEGF165)的真核表达载体, 并在大鼠骨髓基质细胞中进行表达.方法: 利用基因克隆技术, 将原核克隆载体pSP73中的目的基因VEGF165用BamH I和Xho I双酶切后, 再克隆到真核表达载体pcDNA3.1中, 构建重组质粒pcDNA3.1-VEGF165.对重组质粒进行酶切分析和测序鉴定.通过脂质体介导, 用重组质粒转染SD大鼠骨髓基质细胞, 然后以G418筛选阳性克隆, 用免疫细胞化学鉴定. 结果: 经酶切鉴定及基因测序证实, 重组体中已插入目的基因片段VEGF165.免疫细胞化学证实, 重组质粒转染的骨髓基质细胞中有VEGF165基因的表达.结论: 成功地构建真核表达载体pcDNA3.1-VEGF165, 并在骨髓基质细胞中得到表达, 为将表达VEGF基因的骨髓基质细胞作为骨组织工程的种子细胞的可能性提供了实验依据.
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CD28协同刺激分子对T细胞受体介导的胸腺细胞亚群凋亡的影响
目的: 分析anti-TCRαβ mAb、anti-TCRαβ mAb+anti-CD28 mAb诱导小鼠胸腺淋巴细胞不同亚群的凋亡及凋亡程度, 分析CD28协同刺激分子对TCR受体介导的胸腺细胞亚群凋亡的影响.方法: 新鲜分离胸腺细胞, 加入anti-TCRαβ mAb、 anti-TCRαβ mAb+anti-CD28 mAb等培养20 h, 进行多重染色, 流式细胞仪分析.结果: 与胸腺细胞自发凋亡的结果相比较: ①双信号刺激可明显增加胸腺细胞凋亡的数目, 尤其是CD4+CD8+胸腺细胞的凋亡数目.②凋亡的CD4+CD8+亚群、CD4+CD8 亚群细胞表面CD28的表达均增多.结论: CD28共刺激分子对TCR受体介导的胸腺细胞亚群凋亡的影响与细胞的成熟程度有关.CD28共刺激分子能明显增强不成熟皮质胸腺细胞的凋亡.
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小鼠p27Kip1基因的克隆及与外周B细胞凋亡和生存的关系
目的: 克隆小鼠的p27Kip1基因, 并以此为探针分析p27Kip1在外周血B细胞中的表达, 以及其在抗原受体和CD40介导的抑制和促进增殖信号中的作用.方法: 从培养的B细胞中提取总RNA, 用RT-PCR扩增并克隆p27Kip1基因.用流式细胞仪检测B细胞凋亡.用Northern blot观察p27Kip1mRNA的表达水平.结果: 成功地克隆了小鼠的p27Kip1基因.发现抗原受体交联在引起外周血B细胞凋亡之前, 出现p27Kip1表达上调, 若同时激活CD40则使p27Kip1表达降低, B细胞也免于凋亡.用针对p27Kip1的反义寡核苷酸处理, 可阻断抗原受体交联引起的外周血B细胞凋亡.结论: p27Kip1可能在抗原受体信号介导的B细胞凋亡和CD40信号介导的B细胞生存中发挥一定的作用.
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肺间质纤维化大鼠肺泡巨噬细胞STAT1的活化及其依赖性免疫应答基因ICAM-1的表达
目的: 探讨肺泡巨噬细胞(AM)中STAT1(signal transducers and activators of transcription 1)的活化在大鼠肺间质纤维化中的作用.方法: 50只健康雌性Wistar大鼠随机分成博莱霉素(BLM)组和生理盐水(NS)组各25只, 气管内分别灌注BLM和NS.用Western-blot法测定AM中STAT1活化的动态变化; 用免疫组化染色法测定AM的ICAM-1(intercellular adhesion molecule-1)的表达.结果: NS组中的AM内只有少许STAT1活化, 气管内灌注BLM后1 d, AM中STAT1的活化即开始显著增高, 于第7 天达高峰, 以后逐渐下降, 但28 d后仍高于NS组(P<0.05).NS与BLM组的AM中表达ICAM-1的细胞数增高的模式, 与AM中STAT1活化的模式相同.AM中STAT1活化的程度与AM中ICAM-1的表达呈正相关(r=0.913, P<0.01), 而后者又与肺组织炎症的积分呈正相关(r=0.947, P<0.01).结论: 实验性肺间质纤维化大鼠AM中存在STAT1的异常活化, 并参与了肺泡炎和肺纤维化的形成.
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一氧化氮对香烟烟雾提取物诱导大鼠肺泡巨噬细胞核因子κB活化的影响
目的: 探讨一氧化氮(NO)对香烟烟雾提取物(CSE)诱导的大鼠肺泡巨噬细胞(AM)中核因子κB(NF-κB)活化的影响及机制. 方法: 将大鼠AM与不同浓度的NO前体左旋精氨酸(L-Arg)或iNOS特异性抑制剂N6-(1-亚氨乙基)赖氨酸(L-NIL)及CSE共同培养, 用免疫细胞化学染色法检测NF-κB, 用Western blot检测I-κB蛋白含量, 用Griess法测定培养上清液中NO的水平.结果: CSE可使NF-κB活化细胞的百分率增加, I-κB的水平下降.加入CSE和低浓度L-Arg培养的AM, NF-κB活化细胞的百分率显著高于只加入CSE的AM; 而I-κB的水平显著低于只加入CSE的AM.加入CSE和高浓度L-Arg培养的AM, NF-κB活化细胞的百分率显著低于只加入CSE的AM, 而I-κB的水平无显著变化.加入CSE和不同浓度的L-NIL培养的AM, NF-κB活化细胞的百分率显著低于只加入CSE的AM; 而I-κB的水平则显著高于只加入CSE的AM, 并呈浓度依赖(P<0.01).结论: 内源性NO对香烟烟雾所致NF-κB的活化具有双向调控作用.
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超抗原SEB诱导的免疫耐受参与免疫赦免部位的应答反应
目的: 探讨超抗原葡萄球菌肠毒素B(SEB)诱导的耐受性是否参与免疫赦免部位的应答反应.方法: 以LEW大鼠作为受体, F344大鼠作为供体, 进行角膜移植.将受体鼠随机分成5组, 即在手术前7 d及移植后7 d, 以球旁途径分别注射30 μg/kg、60 μg/kg、90 μg/kg和120 μg/kg的SEB组和注射生理盐水的阴性对照组.阳性对照组分别为移植后注射糖皮质激素(GC)、FK506、环孢素A(CsA)和白介素-1受体拮抗剂(IL-1ra)组.镜下观察移植后30 d内角膜的浑浊、水肿和新生血管, 用抗排斥反应指数记录移植片存活天数.采用NK1.1-PE荧光抗体进行组织染色, 观察移植后不同时间受体鼠角膜片的炎症细胞浸润和受体鼠眼局部NK细胞的变化.结果: 注射120 μg/kg SEB的大鼠移植片比生理盐水对照组的存活天数延长了22 d.与FK506、CsA、IL-1ra和GC组相比也明显延长.120 μg SEB/kg受体鼠的移植片排斥反应指数为3.42±2.18, 明显低于对照组6.58±3.15(P＜0.01).其中水肿指数和新生血管指数明显降低.组织染色结果显示, SEB注射后NK细胞数量增加.结论: 注射SEB能降低大鼠角膜移植的排斥反应, 提示SEB诱导的耐受性参与了免疫赦免部位的应答反应.
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新城疫病毒对肿瘤细胞生物学行为的影响
目的: 研究新城疫病毒(NDV)对肿瘤细胞的作用.方法: 采用空斑试验观察NDV对鸡胚成纤维细胞(CEF)的作用, 通过细胞抑制试验、琼脂糖凝胶电泳、TUNEL染色、细胞骨架染色及细胞唾液酸含量测定等,观察NDV对肿瘤细胞的影响.结果: NDV对CEF、HeLa及Hep-2等肿瘤细胞可产生明显的病变, 而对人的羊膜细胞(Wish细胞)无明显影响; 对Hela细胞和Hep-2细胞能产生明显的生长抑制作用, 但无量效依赖关系. NDV还可导致以凋亡为主的细胞死亡, 引起Hela细胞和Hep-2细胞的细胞骨架发生改变, 以及去除肿瘤细胞表面唾液酸的作用.结论: NDV能选择性地作用于人肿瘤细胞, 抑制肿瘤细胞的生长, 导致肿瘤细胞发生凋亡, 有望成为一种有效的抗肿瘤生物制剂.
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人卵巢癌细胞HLA分子与其相关基因表达的研究
目的: 探讨人卵巢癌细胞中HLA分子及其相关基因的表达与IFN-γ诱导HLA分子表达的相互关系. 方法: 采用Western blot、免疫组化和流式细胞术, 检测卵巢癌细胞中HLA分子表达, 以RT-PCR技术, 分析卵巢癌细胞TAP、LMP和MHC II类分子反式激活蛋白(CIITA)基因表达. 结果: 被检测的11株卵巢癌细胞中, HLA-I 类分子异常的表达率达为45%.而HLA-I类分子表达的异常与TAP1、TAP2、LMP2和LMP7 4种基因表达的异常有关.卵巢癌细胞或其他肿瘤细胞HLA-II类分子的表达与CIITA基因的表达一致.组成性或诱导性表达CIITA基因的肿瘤细胞, 经IFN-γ作用后, 其HLA-I、-II类分子的表达增强; 而诱导后仍不表达CIITA基因的肿瘤细胞, 其HLA分子的表达无增强作用. 结论: 卵巢癌细胞中TAP和LMP基因表达的缺陷, 是引起HLA-I类分子表达异常的重要因素, 提示CIITA基因参与了调控肿瘤细胞HLA-I、-II类分子的表达.
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TAT-乙肝病毒靶向核糖核酸酶融合蛋白原核载体的构建及表达
目的: 构建蛋白质转导结构域(protein transduction domain, PTD)TAT和乙肝病毒靶向核糖核酸酶(targeted ribonuclease, TR)融合蛋白的原核表达载体, 并在大肠杆菌中表达. 方法: 将已构建的乙肝病毒靶向核糖核酸酶基因、乙肝病毒核心蛋白(HBV core protein, HBVc)基因、人嗜酸性粒细胞来源的神经毒素(human eosinophil derived neurotoxin, hEDN)基因, 克隆入含PTD TAT的pTAT原核表达载体, 在大肠杆菌BL21(DE3)LysS 内, 以IPTG诱导融合蛋白表达.表达产物用SDS-PAGE及Western blot分析鉴定.结果: 成功地构建了乙肝病毒靶向核糖核酸酶及其两个对照的融合蛋白原核表达载体, 并在IPTG诱导下获得特异性表达. 结论: Tat-乙肝病毒靶向核糖核酸酶融合蛋白的构建, 为体内应用靶向核酸酶治疗乙型肝炎奠定了基础.
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钙离子载体对外周血单核细胞来源的树突状细胞的影响
目的: 探讨钙离子载体(calcium ionophore, CI)对外周血单核细胞来源的树突状细胞(DC)的影响.方法: 分离健康献血者外周血单核细胞, 分别加入重组人粒/单集落刺激因子(rhGM-CSF) 100 μg/L、rhGM-CSF 100 μg/L+CI 10 μg/L及rhGM-CSF+CI 各100 μg/L.体外培养40 h后, 于光镜及电镜下观察细胞的形态、流式细胞仪检测细胞的表面标志, MTT比色法检测上述分子对自体T细胞的刺激增殖作用.结果: 外周血单核细胞在GM-CSF+CI 各100 μg/L的条件下培养40 h, 就可看到典型的DC形态, 其表面CD14分子表达减少, HLA-DR、CD40、CD83及CD86分子的表达明显增高, 且具有明显刺激自体T细胞增殖的能力.结论: CI有显著加速GM-CSF诱导的外周血单核细胞向DC转化的作用.
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PD98059对慢性髓细胞白血病Ras-MAPK信号转导的作用
目的: 探讨PD98059对慢性髓细胞白血病信号转导的作用及其作用机制.方法: 将PD98059加入慢性髓细胞白血病细胞系K562细胞中, 通过细胞活力、DNA合成、集落形成和MAPK活性的变化, 观察PD98059对慢性髓细胞白血病信号转导的作用.结果: PD98059可明显抑制K562细胞活力、DNA合成、集落形成和MAPK活性(与对照组比较, P<0.05), 其抑制作用具有浓度依赖性.结论: PD98059可通过阻断Ras-MAPK信号通路而发挥其抑制作用.Ras-MAPK通路极有可能成为 CML治疗的新靶点.
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热休克蛋白70、90在子宫内膜癌中的表达
目的: 探讨子宫内膜癌组织中热休克蛋白(HSP)70、90的表达及意义. 方法: 用免疫组化Envision法及图象分析仪, 检测30例正常子宫内膜、30例增生过长子宫内膜和53例子宫内膜癌中HSP70、HSP90的表达. 结果: 子宫内膜癌中HSP70表达的灰度值为(209.06±5.36), 明显高于正常内膜[(145.21±4.09), P<0.01]和增生过长内膜[(148.59±4.23), P<0.01]; 子宫内膜癌中HSP90表达的灰度值为(166.98±5.71), 明显低于正常子宫内膜[(208.57±31.14), P<0.05]和增生过长子宫内膜[(249.73±4.94), P<0.01].子宫内膜癌中HSP70的表达随肿瘤病理分级的增加而增强(P<0.01), 非内膜样癌(229.90±3.77)较内膜样癌表达强[(198.37±3.15), P<0.01]; 子宫内膜癌中HSP90表达随肿瘤病理分级的升高而表达减弱, 非内膜样癌(140.21±3.22)较内膜样癌表达减弱[(176.59±2.79), P<0.01].子宫内膜癌中HSP70、90的表达与肌层浸润深度、临床分期及淋巴结转移未见显著相关性(P>0.05).结论: HSP70、 90可能与子宫内膜癌的发生及预后有关.
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口腔颌面部肿瘤细胞系中PTEN抑癌基因蛋白表达的研究
目的: 研究口腔颌面部恶性肿瘤细胞系内源性PTEN蛋白的表达, 比较高转移性癌细胞系与亲本细胞PTEN蛋白表达的差异.方法: 应用ABC免疫组化染色法, 检测8例癌细胞系PTEN蛋白的表达, 包括舌癌细胞系Tca8113和HSC-3、口底癌细胞系 HSC-2、颊癌细胞系BcaCD885、粘液表皮样癌细胞系MEC-1、腺样囊性癌细胞系SACC83以及高转移性舌癌细胞系Tb-TLP和高转移性粘液表皮样癌细胞系M3SP2.结果: 5/8例癌细胞系PTEN蛋白的表达呈阳性, PTEN蛋白定位于靠近细胞核周围的细胞质中.3/8例癌细胞系PTEN蛋白的表达呈阴性, 即BcaCD885细胞及高转移性Tb-TLP和M3SP2细胞.结论: PTEN蛋白表达缺失与癌细胞转移可能有一定的关系.
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Th1、Th2样细胞因子对CD158+细胞比率的调节作用
目的: 观察Th1、Th2样细胞因子对外周血CD158+细胞比率的调节作用, 为寻找干细胞移植免疫耐受的方法提供论理依据.方法: 将Th1样细胞因子(IL-2、IFN-γ)和Th2样细胞因子(IL-4、IL-6), 单独或联合与人外周血单个核细胞(PBMC)培养72 h, 用流式细胞法分析总CD158a+、CD158b+细胞及CD3+、CD4+、CD8+和CD16+CD56+细胞亚群中CD158a+、CD158b+细胞的比率.结果: ①细胞因子对CD3+、CD4+、CD8+细胞及CD16+CD56+细胞的影响: IL-2和IFN- γ均可增加上述细胞的百分率(P＜0.05), 但IL-2的作用大于IFN- γ (P＜0.05). IL-2+IFN-γ联合处理的效应高于IFN-γ单独处理(P＜0.05). IL-4+IL-6可降低上述细胞的百分率(P＜0.05). IL-2+IL-4对上述细胞百分率的影响, 高于IL-4(P＜0.05)但低于IL-2(P＜0.05). ②细胞因子对CD158a+/b+细胞的影响: IL-2可增加总的CD158a+/b+细胞及CD3+、CD4+、CD8+和CD16+CD56+细胞中的CD158a+/b+细胞的百分比率(P＜0.05); IL-2+IFN-γ可增加CD158a+/b+细胞的百分率(P＜0.05), 但与IL-2单独处理无明显区别, IL-4+IL-6可降低CD158a+/b+细胞的百分率(P＜0.05).IL-2+IL-4可增加总的CD158a+/b+细胞及各亚群中CD158a+/b+细胞的百分率(P＜0.05), 但低于IL-2单独处理(P＜0.05) .结论: IL-2有促进CD158基因表达或使CD158a+、CD158b+细胞增殖的作用, 而IL-4、IL-6则对CD158a+、CD158b+细胞的增值起下调作用, IL-4对IL-2调节CD158a+、CD158b+细胞调节起拮抗作用.
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人CTLA4Ig腺病毒载体的构建及其生物学功能研究
目的: 通过同源重组构建CTLA4Ig腺病毒载体, 研究其生物学活性, 并用于基因治疗诱导心脏移植耐受.方法: 通过基因重组技术, 将CTLA4Ig基因克隆至腺病毒穿梭质粒pCA13中. 然后将该质粒与腺病毒辅助质粒同源重组, 经过293细胞包装, 构建CTLA4Ig腺病毒载体.用RT-PCR、SDS-PAGE及Western blot等技术, 检测包装的病毒感染293细胞后CTLA4Ig蛋白的表达及分泌, 通过体外实验, 观察病毒感染的293细胞上清对混合淋巴细胞反应( MLR)的抑制作用.通过大鼠体内实验, 检测用CTLA4Ig腺病毒载体基因治疗后, CTLA4Ig在体内的表达.结果: CTLA4Ig腺病毒载体构建成功.体外实验证实, CTLA4Ig腺病毒感染的293细胞上清液, 能够抑制异基因脾细胞的单向MLR.体内实验表明, 经过静脉途径给予受体大鼠CTLA4Ig腺病毒载体, 能够诱导移植耐受, 延长心脏移植物的存活.结论: 构建的CTLA4Ig腺病毒载体, 体外感染293细胞能够分泌CTLA4Ig蛋白.该蛋白可抑制T细胞的活化, CTLA4Ig腺病毒载体可用于体内基因治疗诱导移植耐受.
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肿瘤热休克蛋白70联合IL-2对荷瘤小鼠的治疗作用
目的: 研究肿瘤热休克蛋白70(HSP70)与IL-2联合应用对荷瘤小鼠的治疗作用. 方法: 用液相色谱法纯化小鼠肿瘤细胞株中的HSP70.对纯化产物用SDS-PAGE及Western blot 进行定性分析, 再用毛细管电泳鉴定其纯度.通过动物实验, 观察HSP70与IL-2单独应用及联合应用的抗肿瘤作用.结果: HSP70与IL-2联合应用较单独应用的治疗效果更明显, 但治疗作用仍以HSP70为主.单独应用IL-2只能延长小鼠的生存期限[平均为(36.6±13.0) d], 而HSP70 10 μg组可使40%荷瘤小鼠的肿瘤终全部消退, 生存期长者>90[平均生存期(>59.2±29.6) d], 与对照组相比较差异显著(P<0.01).HSP70与IL-2联合应用组可使60%荷瘤小鼠的肿瘤完全消退, 平均生存期(>70.8±26.5)d, 与对照组相比差异十分显著(P<0.01).结论: 合适剂量的HSP70与IL-2联合应用, 对荷瘤小鼠有明显的治疗作用, 可明显抑制肿瘤进展, 提高生存率.以上结果对研究人类恶性肿瘤的免疫治疗具有较大的参考价值.
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人-鼠嵌合抗血小板单抗SZ-2 Fab片段基因的构建和表达研究
目的: 降低鼠源性抗血小板单克隆抗体SZ-2的免疫原性, 为其进一步研究、应用奠定基础.方法: 用Trizol试剂从SZ-2杂交瘤细胞抽提RNA, 应用RT-PCR技术, 扩增出SZ-2重链、轻链可变区基因, 克隆入载体pUCm-T, 测序分析.应用基因重组技术, 将SZ-2轻、重链可变区基因与人免疫球蛋白γ1重链CH1和κ轻链恒区基因进行拼接, 构建人-鼠嵌合Fab片段基因表达质粒pSW1-2 Fab/Hu, 并导入大肠杆菌XL1-blue诱导表达.以ELISA、Western blot和瑞斯托霉素诱导血小板聚集抑制试验, 对表达产物进行检测、验证.结果: 克隆的基因序列符合小鼠轻、重链可变区基因的特征; 表达质粒pSW1-2 Fab/Hu拼接正确; 在大肠肝菌中的表达量约为180 μg/L; 表达产物具有与血小板GPIb结合的特性并可抑制瑞斯托霉素诱导血小板聚集.结论: 成功地克隆了SZ-2可变区基因; 并表达了可溶性人-鼠嵌合Fab基因工程抗体.
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抗人层黏连蛋白单克隆抗体的制备及特性鉴定
目的: 制备抗人层黏连蛋白(laminin, LN)单克隆抗体(mAb)并鉴定其特性. 方法: 以人LN免疫BALB/c小鼠, 采用杂交瘤技术制备抗人的mAb; 同时采用间接ELISA法检测mAb的腹水效价及mAb的相对亲和力; 采用ELISA法鉴定mAb的Ig亚类、进行表位分析及特异性鉴定.结果: 获得4株可分泌特异性mAb的杂交瘤细胞2A3、2C6、3G7和4H2, 其腹水mAb的效价为3.6×104～2.1×106; 4株mAb的Ig亚类为IgG1, 轻链均属κ型; 相对亲和力2C6在1012以上, 2A3、3G7和4H2在106以上; 其中2株与1个表位结合, 另2株与另外的1个表位结合. 结论: 成功地制备出抗人LN的mAb, 为进一步研究LN在一些疾病中的作用提供了工具.
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抗人CD100单克隆抗体的制备与初步鉴定
目的: 研制可识别天然CD100分子的单克隆抗体(mAb).方法: 采用真核表达的CD100分子免疫BALB/c小鼠, 以间接ELISA法筛选阳性杂交瘤, 并分别用人急性T淋巴细胞性白血病细胞系MOLT-4、猿T淋巴细胞系MLA-144及猴EB病毒转化的B淋巴细胞系(BLCL), 进行间接免疫荧光染色和流式细胞术鉴定mAb的特异性.结果: 共获得7株可稳定分泌mAb的杂交瘤细胞株.所有mAb均可识别人和猴细胞系的膜表面天然CD100分子, 其中6株可识别猿细胞系膜表面的天然CD100分子.结论: 成功地制备了7株抗CD100分子的特异性mAb, 为研究人和猿、猴CD100分子的结构与功能提供了新的手段.
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RACE策略克隆抗人CD16单克隆抗体轻链可变区基因
鼠源性单克隆抗体(mAb)应用于人体治疗首先需对其进行基因工程化改造.目前, 常用的克隆mAb可变区基因的方法, 是利用抗体可变区内骨架区(FR)序列的保守性, 设计一组通用引物, 采用RT-PCR法扩增可变区基因[1,2].但由于引物的简并性, 克隆过程中将不可避免地改变抗体可变区两侧(FR1、FR4)的氨基酸序列, 这些改变可能导致基因工程抗体亲和力降低[3].我们对传统方法进行了改进, 采用5′-RACE(rapid amplification of cDNA end, RACE)克隆的策略, 获得了抗人CD16 mAb轻链可变区(VL)基因的真实序列.
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用抗HCV多抗从随机15肽库中筛选抗原表位
目的: 分析丙肝患者血清中抗HCV抗体的抗原表位.方法: 制备Protein A亲和层析柱, 从丙肝患者血清中纯化、制备抗HCV多克隆抗体; 并以此为筛选配基, 对噬菌体表面展示的随机15肽库进行亲和筛选.结果: 三轮筛选的投入产出比逐轮升高至3.3×10-3, 假阳性率逐轮降低至0.2%, 提示具有良好的富集效果.对从第3轮挑选出的16个克隆进行结合试验, 发现9个克隆只与HCV抗体有较强的结合力而不与正常人血清起反应.测序表明, 8个克隆的外源肽含有核心序列WPWS.用阳性噬菌体克隆检测20例丙肝患者血清, 有程度不等的阳性反应.结论: 用多克隆抗体从噬菌体随机肽库中, 筛选到有一定功能的模拟表位.
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噬菌体展示ICAM-1模拟肽的制备及活性鉴定
目的: 获得具有生物学活性的细胞间黏附分子-1(ICAM-1)模拟肽.方法: 以噬菌体扩增及PEG沉淀法, 大量制备展示十二肽P1、P2的噬菌体.采用ELISA、竞争抑制试验及免疫组化染色法, 分别鉴定P1、P2模拟ICAM-1分子的结合特性及生物学活性.结果: 噬菌体展示肽P1、P2能与抗ICAM-1单克隆抗体(mAb)15.2特异性结合.该结合作用可被ICAM-1分子竞争性抑制, P1、P2能模拟ICAM-1分子与LFA-1结合的功能.结论: 噬菌体展示的短肽P1、P2具有天然ICAM-1的生物学活性.
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重组幽门螺杆菌尿素酶B亚单位疫苗鼻腔免疫的实验研究
目的: 探讨基因工程疫苗Hp重组尿素酶B亚单位(rUreB)鼻腔接种的免疫效果.方法: 以rUreB不同剂量或加不同佐剂滴鼻免疫BALB/c小鼠.末次免疫7 d后, 收集血清及胃黏膜、小肠黏膜、鼻黏膜及气管黏膜冲洗液, 用ELISA法检测抗rUreB特异性抗体.结果: rUreB鼻腔免疫后各实验组血清特异性IgG及各黏膜冲洗液中特异性IgA的水平均明显增高, 与对照组相比较差异显著(P<0.01).20 μg剂量组与10 μg剂量组相比较, 仅血清特异性IgG水平增高, 其它黏膜特异性IgA的水平未见增高.大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位(LTB)的佐剂效果较霍乱毒素B亚单位(CTB)强, 卡泊波可增强鼻腔接种疫苗在胃黏膜洗液中的抗体应答水平.结论: CTB、LTB、卡泊波均可作为rUreB鼻腔黏膜接种的佐剂.Hp rUreB鼻黏膜接种, 不仅可诱导血清特异性抗体反应, 而且能引起多个黏膜部位的免疫应答, 是一种方便、有效、廉价的免疫途径.
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通过载体DHFR基因的弱化提高抗体在CHO细胞中的表达
目的: 提高抗人膀胱癌人-鼠嵌合抗体在二氢叶酸还原酶缺陷的CHO细胞株(CHO/DHFR )中表达的产量.方法: 对表达载体中DHFR基因表达调控序列进行一系列的删除突变和点突变后, 构建不同的嵌合抗体表达载体.用这些载体转染CHO细胞并以递增量的氨甲喋呤(MTX)筛选, 用ELISA法测定每个加压水平的各组细胞中抗体的表达水平.结果: 通过对表达载体中DHFR基因表达调控序列的突变, 使DHFR的基础表达水平产生了不同程度的弱化.转染CHO细胞后, 可明显提高MTX加压增加抗体表达的效果, 抗体表达水平的增加基本与DHFR基因的弱化程度呈正相关.从弱化程度高的pWS2-BDI组中, 我们筛选得到表达量达55 μg/(106细胞*24 h)的高表达细胞株, 经锌离子进一步诱导后, 表达量可达100 μg/(106细胞*24 h)以上.结论: 弱化表达载体中DHFR的表达, 可提高MTX对工程抗体表达的增加效果.
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生物工程技术制备人源抗-HBs Fab 片段
目的: 用生物工程技术制备人源性抗-HBs Fab.方法: 将从抗体文库中筛选出的人源抗-HBs Fab基因克隆入pBAD/g ⅢA载体, 进而转化Top10大肠杆菌.对重组质粒菌发酵表达后, 利用Ni-NTA-Agarose螯合层析柱纯化周质腔可溶性Fab蛋白.对所得包涵体依次变性、溶解、纯化后, 利用透析进行复性.用Western blot检测Fab蛋白的特异性, Dot blot测定其生物学活性.结果: 经Ni-NTA-Agarose柱纯化的周质腔可溶性Fab蛋白, 有较好的生物学活性, 并且总量达到80 mg/L.对所获包涵体进行透析复性后, 也可得到少量有活性的蛋白, 但比例很小.结论: 用pBAD/g ⅢA-Top10表达系统表达人源抗-HBs Fab片段, 发酵培养后, 经有效纯化可得到生物学活性较好的可溶性蛋白, 为人源抗-HBs Fab片段的大量制备提供了有效手段.
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刺激人γδ+T细胞增殖的结核杆菌多肽抗原的纯化与活性鉴定
目的: 纯化可刺激人γδ+ T细胞增殖的结核杆菌耐热多肽抗原.方法: 采用快速蛋白液相色谱仪(FPLC)S-100分子筛层析柱, 对结核杆菌耐热抗原(Mtb-Ag)初步分离.将获得的结核杆菌耐热Mr低的多肽抗原(Mtb-LW-Ag)洗脱峰, 分别再经FPLC Mono Q离子交换层析柱进一步纯化, 并且采用流式细胞仪对获得的Mtb-LW-Ag进行刺激γδ+ T细胞增殖活性的测定.结果: Mtb-Ag经FPLC S-100柱可分离出1个大分子蛋白峰A和3个Mr低的多肽峰(B, C, D).Mr低的多肽峰分别经Mono Q柱层析, 鉴定出B峰含有6个主峰, C峰含有1个主峰, D峰含有8个主峰. 对Mtb-LW-Ag及其纯化多肽进行活性检测, 发现多肽峰B和C以及纯化多肽B-Ⅲ和C-主肽均可显著刺激γδ+ T细胞扩增.结论: 利用FPLC法可快速高效地从Mtb-Ag中纯化出多种Mr低的多肽, 而且其中的B-Ⅲ多肽和C-主肽可能是促进γδ+ T细胞活化增殖的主要多肽.
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EB病毒蛋白诱导IgG和IgM产生的作用
目的: 检测热灭活或紫外线(UV)灭活的EB病毒(EBV)刺激培养的人脐带血B细胞产生IgG 和IgM的效应.方法: 常规分离人脐带血单个核细胞(UBMC), 以L-亮氨酸甲酯去除法, 去除单核细胞、NK细胞和细胞毒性T细胞, 以2-氨乙基硫脲溴化物(AET)处理绵羊红细胞(SRBC)的花环形成分离法, 去除T细胞以获得纯化的B细胞.分别用UV和热灭活的EBV刺激培养的B细胞后, 用夹心ELISA法检测培养上清中IgG和IgM的产生.结果: 以UV灭活的EBV刺激培养B细胞后18 d起, IgG和IgM的产生具有意义(P<0.05); 而热灭活的EBV刺激后, 各时间点均无显著差异(P>0.05).结论: UV灭活EBV具有诱导IgG和IgM产生的作用, 但有明显的时效性, 提示EBV诱导IgG和IgM 产生, 可能是通过病毒的蛋白成分实现的, 为进一步验证EBV功能蛋白诱导天然自身抗体(NAA)产生中的作用奠定了基础.
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通痹灵总碱对活化的小鼠T淋巴细胞CD69表达的影响
目的: 研究通痹灵(TBL)总碱对活化的小鼠T淋巴细胞表达CD69的影响及其可能的免疫调控机制.方法: 培养小鼠淋巴细胞, 加入不同浓度的TBL总碱预孵1h后, 再加佛波醇酯(PDB)或刀豆蛋白(ConA), 24 h后, 用流式细胞术检测T淋巴细胞CD69的表达率.结果: 不同质量浓度的TBL总碱对PDB或ConA激活的T淋巴细胞表达CD69, 均有明显的下调作用(对ConA激活的T淋巴细胞的作用要强于PDB激活的T淋巴细胞), 呈明显的量效关系.结论: TBL总碱可明显抑制活化的小鼠T淋巴细胞CD69的表达, 为其用于类风湿性关节炎的治疗提供了实验依据.
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正常人淋巴结中CGRP、ACTH和5-HT的表达
目的: 检测降钙素基因相关肽(CGRP) 、促肾上腺皮质激素 (ACTH)、 5-羟色胺(5-HT) 在正常人淋巴结中的表达, 并探讨它们对免疫系统的影响. 方法: 采用免疫组织化学SABC染色法, 检测35例正常人淋巴结(包括反应性增生淋巴结)中CGRP、ACTH、5-HT的表达. 结果: 35例正常人淋巴结中, CGRP、 ACTH及5-HT表达阳性率依次为: 88.5%(31/35)、85.4%(30/35)及94.2%(33/35).3种标记物在淋巴结中的分布大致相同, 主要分布在副皮质区的T细胞、淋巴滤泡生发中心B细胞及巨噬细胞等部位. 结论: 人外周淋巴结中CGRP、ACTH、5-HT的表达率很高, 且其分布与免疫细胞的分布基本一致.
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组织型纤溶酶原激活物基因的DNA改组
目的: 探索利用DNA改组(DNA shuffling)技术, 获得更高活性tPA的可能性.方法: 以人、恒河猴及大白鼠tPA cDNA为一组基因, 进行tPA的DNA改组 (DNA family shuffling).以改组后构建的tPA多样性文库转染CHO细胞并进行克隆和筛选.结果: 得到了两株有意义的克隆:t9和t17, 其中t9克隆表达的tPA活性略高于人tPA, 初步的比活性测定结果表明, 活性约提高4倍.t17克隆表达的tPA虽然有88个氨基酸的缺失, 但仍表现出与人tPA相同的活性.两株克隆经测序证明, 为改组后的基因, 其序列以人和恒河猴的tPA cDNA序列为主, 少数序列来源于大白鼠tPA cDNA.结论: 这一探索性结果将为后续几轮的tPA DNA改组探明道路, 为终从改组后tPA多样性基因库中筛选到比较理想的重组体打下基础.
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特异性类胰蛋白酶抑制剂双苯甲脒对肥大细胞分泌的调控作用
目的: 研究新型的特异性类胰蛋白酶抑制剂双苯甲脒, 对肥大细胞稳定性的影响.方法: 扁桃体组织经酶消化后, 将细胞成分用全HEPES缓冲盐溶液(HBSS)重新悬浮.肥大细胞激发和抑制剂作用的试验在试管中37℃条件下完成.类胰蛋白酶水平用ELISA法测定.结果: 同时加入扁桃体细胞悬液中的双苯甲脒, 可以剂量依赖的方式抑制抗IgE诱导的类胰蛋白酶释放.仅1 mg/L(1.54 μmol/L)的双苯甲脒, 即可抑制肥大细胞释放类胰蛋白酶达52%, 10 mg/L则能抑制76%的释放.将预培养时间延长30 min, 对双苯甲脒的抑制作用无明显影响.在培养到45 min时, 双苯甲脒可抑制高达47%的基础类胰蛋白酶释放.与细胞培养15 min后, 抗IgE抗体(1 g/L)或钙离子导入剂(CI, 1 μmol/L)引起的类胰蛋白酶释放的量, 分别为基础分泌量的3.2和2.6倍.但是, 当细胞与全HBSS预培养超过10 min后, 肥大细胞对抗IgE抗体或CI的反应性明显降低.结论: 双苯甲脒能够抑制人类扁桃体肥大细胞的IgE依赖性类胰蛋白酶释放.因此, 有望开发成为一种新型的肥大细胞稳定剂.
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结核分枝杆菌Ag85B基因疫苗免疫保护作用的初步研究
目的: 研究编码结核分枝杆菌分泌蛋白Ag85B的基因疫苗pTB30m和pTB30s对免疫动物的保护作用.方法: 以基因疫苗pTB30m和pTB30s肌注免疫BALB/c小鼠. 免疫完成6 wk后, 用5×105 CFU的MTB H37Rv毒株经小鼠尾静脉攻击感染. 同时用尼龙毛柱分离基因免疫BALB/c小鼠的T细胞, 并以5×106 T细胞/只小鼠过继免疫正常BALB/c小鼠, 立即用105 CFU 的MTB 毒株经小鼠尾静脉攻击感染.4 wk后分别计数脾脏中的细菌负荷.结果: 与生理盐水对照组相比较, pTB30m及pTB30s质粒免疫组BALB/c小鼠脾脏中的细菌负荷均减少, 分别为0.645(log10CFU, P<0.01)和0.839(log10CFU, P<0.001); 而空质粒对照组小鼠脾脏中的细菌负荷减少较少.经质粒pTB30m和pTB30s免疫的BALB/c小鼠的T细胞, 过继免疫的正常BALB/c小鼠, 对攻击感染的MTB H37Rv毒株在脾脏中的增殖具有部分抑制作用.结论: pTB30s免疫的BALB/c小鼠, 对MTB H37Rv毒株攻击的保护作用优于pTB30m质粒免疫, 有望进一步用于结核病的防治研究.
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从HLDA8新CD编号候选分子看免疫学发展趋势
人白细胞分化抗原(human leukocyte differentiation antigen, HLDA)及其单克隆抗体在免疫学研究中发挥着日益重要的作用.随着人类基因组计划的完成和细胞膜表面分子功能研究的深入, 不断有新的功能重要的白细胞分化抗原被发现.
| 年 | 期数 |
| 2018 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2017 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2016 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2015 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2014 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2013 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2012 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2011 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2010 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2009 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2008 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2007 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2006 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2005 | 01 02 03 04 05 06 z1 |
| 2004 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2003 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2002 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2001 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2000 | 01 02 03 04 05 06 |
| 1999 | 01 02 |
| 1995 | 01 02 03 |
| 1994 | 01 02 |
| 1993 | 01 02 03 04 |
| 1992 | 01 02 03 04 |
| 1991 | 01 02 03 04 |
| 1990 | 01 02 |
| 1989 | 01 02 03 04 |
