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细胞与分子免疫学

细胞与分子免疫学杂志

Chinese Journal of Cellular and Molecular Immunology 세포여분자면역학잡지

CSCD核心期刊
  • 主管单位: 中国免疫学会;第四军医大学
  • 主办单位: 陕西省免疫学会,中国免疫学会
  • 影响因子: 0.81
  • 审稿时间: 1-3个月
  • 国际刊号: 1007-8738
  • 国内刊号: 61-1304/R
  • 发行周期: 月刊
  • 邮发: 52-184
  • 曾用名: 单克隆抗体通讯
  • 创刊时间: 1985
  • 语言: 英文
  • 编辑单位: 《细胞与分子免疫学杂志》编辑部
  • 出版地区: 陕西
  • 主编: 杨安钢
  • 类 别: 基础医学
期刊荣誉:
  • 不同培养条件对小鼠诱导性多能干细胞分化为神经元样细胞的影响

    作者:陈旭东;范文娟;袁科理;袁磊;王晓兰;王福青

    目的 研究小鼠诱导性多能干细胞(iPSC)在不同培养条件诱导下向神经元样细胞分化的能力.方法 将小鼠iPSC悬浮培养形成拟胚体,然后随机分为全反式维甲酸(ATRA)组、脑片共培养组和脑组织匀浆上清组,将其诱导分化成神经元样细胞.倒置显微镜下观察细胞形态变化;免疫荧光染色技术对其进行鉴定分析;Western blot法检测巢蛋白(nestin)、微管相关蛋白2(MAP2)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达.结果 小鼠iPSC在不同培养条件下都能够向神经元样细胞分化,这些神经元样细胞可以被神经细胞标志物nestin、MAP2标记;ATRA组的nestin、MAP2、GFAP蛋白相对表达量明显高于脑片共培养组和脑匀浆上清诱导组,但脑片共培养组和脑匀浆上清诱导组间无显著性差异.结论 脑片微环境和脑组织匀浆上清均可诱导小鼠iPS细胞向神经元样细胞分化,但效果不及ATRA组.

  • 人胰岛素样生长因子1受体β结构域蛋白的原核表达及活性检测

    作者:郭靖;冯滢滢;王涛;张柯;李玲;冀全博;徐小洁;叶棋浓

    目的 构建人胰岛素样生长因子1受体(IGF1 R)β亚基胞外结构域(ED)和胞内激酶(PKD)结构域的原核表达载体,获得纯化的GST-IGF1Rβ-ED和GST-IGF1R β-PKD融合蛋白,并检测其活性.方法 用PCR方法从乳腺cDNA文库中扩增IGF1R β-ED和GST-IGF1Rβ-PKD基因编码序列,将其正确插入pGEX-KG载体.重组质粒转化大肠杆菌Rossate表达后,用GST-Sepharose 4B珠子纯化融合蛋白,并用Western blot法检测融合蛋白表达,后用GST pull-down技术检测纯化蛋白与已知蛋白表皮生长因子受体2驱动的细胞运动调节蛋白(MEMO)的相互作用.结果 构建得到GST-IGF1Rβ-ED和GST-IGF1Rβ-PKD基因的原核表达载体,双酶切鉴定得到与预期片段大小相符的外源基因插入片段,测序后与目的序列一致;在Rossate 菌中诱导表达出与预期位置相符的目的蛋白,并经过Western blot检测,融合蛋白成功表达;纯化得到GST-IGF1Rβ-ED和GST-IGF1Rβ-PKD两个融合蛋白,GST pull-down证明蛋白GST-IGF1R β-PKD可以和MEMO相互作用.结论 成功克隆GST-IGF1Rβ-ED和GST-IGF1Rβ-PKD基因,并获得活性良好的GST-IGF1R β-ED和GST-IGF1Rβ-PKD蛋白.

  • IL-16在小鼠同种移植的皮肤组织中表达增强

    作者:李春霞;张惠;曲锦;戴军;马群;李志华;王博;司传平

    目的 检测小鼠同种皮肤移植后,白细胞介素16(IL-16) mRNA及蛋白在皮肤移植物中的表达并检测了血清IL-16的含量.方法 建立小鼠皮肤移植模型,实验分为同基因组(C57BL/6→C57BL/6)和异基因组(BALB/c→C57BL/6),每组45只.每组受体小鼠分别于术后1、3、5、7d,制备血清及移植皮肤.ELISA检测小鼠血清及移植皮肤组织匀浆中IL-16含量,反转录PCR检测移植组织中IL-16 mRNA的水平.结果 移植术后3、5、7d,异基因组小鼠皮肤移植物中IL-16 mRNA和蛋白含量均不同程度增加,血清IL-16水平明显升高,显著高于同基因组.结论 IL-16在小鼠移植后的皮肤组织中高表达.

  • 白细胞介素37抑制小鼠脾脏树突状细胞的运动和迁移

    作者:罗悦晨;刘芳;李文文;吴万通;孙志娜;赵春晓;沈悦

    目的 探讨白细胞介素37(IL-37)对小鼠脾脏树突状细胞(DC)运动和迁移能力的影响.方法 应用免疫磁珠细胞分选法分离小鼠脾脏内的DC,流式细胞术鉴定细胞纯度,激光共聚焦显微镜连续拍摄细胞,Volocity软件分析DC运动速度,基因芯片分析C趋化因子受体1(XCR1)的mRNA表达水平,聚合酶链式反应和流式细胞术验证芯片结果,TranswellTM方法检测DC的迁移能力.结果 免疫磁珠能分离获得纯度>95%的DC,IL-37降低细胞的运动速度,减少XCR1的表达,抑制DC的迁移.结论 IL-37抑制DC的运动和迁移.

  • Toll样受体4增强β2糖蛋白1免疫小鼠B细胞的活化

    作者:成思;周红;解鸿翔;孔祥民;谢娅超;何超;于尹婧;夏龙飞

    目的 探讨Toll样受体4(TLR4)在β2糖蛋白Ⅰ(β2GP1)免疫的小鼠中,对B细胞活化过程的影响.方法 将C3H/HeN(TLR4正常型)和C3 H/HeJ(TLR4缺陷型)2种小鼠随机分为β2GP1免疫组和生理盐水对照组,分别注射β2GP1或等量的生理盐水进行免疫.采用皮下多点注射进行初次免疫,2次腹腔注射加强免疫,后冲击免疫的方法免疫小鼠.采用间接ELISA检测小鼠血清中抗β2GP1抗体的效价;HE染色观察小鼠脾脏生发中心数量及大小的变化;免疫组织化学法观察脾脏生发中心内的CD40配体(CD40L)表达;流式细胞术检测小鼠脾脏B淋巴细胞中共刺激分子CD80和CD86的水平变化.结果 经β2GP1免疫后,2种小鼠血清中均出现高效价的抗β2GP1抗体,且C3H/HeN血清效价高于C3H/HeJ小鼠.与生理盐水对照组相比,2种小鼠经β2GP1刺激后,CD40L、CD19+ CD80+细胞和CD19+ CD86+细胞的数量均显著增加;但C3H/HeJ小鼠CD40L,CD19+ CD80+细胞和CD19+ CD86+细胞的数量低于C3H/HeN小鼠.经β2GP1刺激的小鼠脾脏生发中心,比生理盐水组更大更多,C3H/HeN小鼠的生发中心的数量多于C3H/HeJ小鼠.结论 TLR4增强β2GP1免疫小鼠B细胞的活化.

  • 靶向敲低肿瘤转移相关基因1可减缓裸鼠喉鳞癌移植瘤生长并降低其转移能力

    作者:刘舟;周建荣;王致娟;柏露

    目的 通过RNA干扰(RNAi)技术,观察肿瘤转移相关基因1(MTA1)对裸鼠喉鳞癌移植瘤生长和转移能力的影响.方法 设计MTA1的短发夹RNA (shRNA)慢病毒干扰载体,进行包装与转染Hep-2细胞.将无关shRNA对照组和MTA1shRNA感染的Hep-2细胞接种于裸鼠爪垫,每组5只.复制人喉癌移植瘤淋巴转移模型,9周后处死裸鼠,取下肿瘤组织及腹股沟淋巴结,进行HE染色形态学观察,反转录PCR检测MTA1、β联蛋白(β-catenin)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)、细胞周期蛋白D1(cyclin D1) mRNA的水平,Western blot法检测MTA1、β-catenin、MMP-9、cyclin D1蛋白水平.结果 慢病毒MTA1干扰载体筛选成功;2组人喉癌裸鼠爪垫移植瘤100%成瘤;MTA1 shRNA转染细胞裸鼠肿瘤体积在同一时间点均明显小于无关shRNA对照组;MTA1 shRNA转染细胞5只裸鼠爪垫肿瘤未发现淋巴结转移;无关shRNA对照组5只裸鼠腹股沟淋巴结切片均可见喉癌细胞;与无关shRNA对照组相比,MTA1 shRNA转染细胞MTA1、β-catenin、MMP-9、cyclin D1的mRNA和蛋白水平明显降低.结论 抑制MTA1基因能够减缓裸鼠喉鳞癌的生长并降低其转移能力.

  • 过表达Src羧基末端激酶结合蛋白的Jurkat细胞荷瘤小鼠模型的建立与鉴定

    作者:高美华;马宇;王冰;张蓓;张敏锐;张树超

    目的 建立过表达Src羧基末端激酶结合蛋白(CBP)的T系白血病Jurkat细胞动物模型.方法 5周龄雌性BALB/c-nu小鼠随机分为空白对照组、正常Jurkat细胞对照组、空病毒Jurkat细胞对照组、病毒转染过表达CBP模型组,每组5只.小鼠腋窝皮下注射Jurkat细胞1×107个/0.1 mL.建模成功后取出完整瘤体组织称质量、HE染色观察小鼠皮下肿块的病理变化;流式细胞术检测小鼠外周血Jurkat细胞增殖水平;ELISA检测小鼠血清中白细胞介素2(IL-2)水平.结果 病毒转染过表达CBP模型组小鼠瘤体组织块体积和质量小于对照组,HE染色瘤体内有Jurkat细胞增殖,外周血Jurkat细胞增殖水平低于正常Jurkat细胞对照组和空病毒Jurkat细胞对照组,血清中IL-2水平低于正常Jurkat细胞对照组和空病毒Jurkat细胞对照组.结论 成功建立了过表达CBP的Jurkat白血病细胞小鼠荷瘤模型,CBP可抑制Jurkat细胞IL-2分泌和增殖.

  • 人Six1真核表达载体的构建及应用

    作者:周丽英;徐小洁;李玲;王涛;张立;范忠义;郑志兵;叶棋浓

    Six1 (sineoculis homeobox homolog 1,Six1)是一种转录调控因子,属于同源盒基因家族成员,是转录因子E2F1的转录靶基因,激活G1/S期的转录,增加S期转录水平,并通过激活靶基因如细胞周期蛋白A1(cyclin A1)、cyclin D1等,启动靶基因转录,从而抑制与DNA结合能力,后被蛋白酶水解[1].当Six1过表达时,这一作用则被削弱,因此加速细胞周期的进程,造成细胞增殖,导致肿瘤的发生.

  • miR-199a-5p抑制低氧条件下大鼠气道平滑肌增殖和低氧诱导因子1α表达

    作者:章辉;朱述阳;张灿堂;刘文静;朱洁晨

    目的 探讨miR-199a-5p在常氧及低氧环境下的大鼠气道平滑肌细胞(ASMC)中的表达以及miR-199a-5p对ASMC增殖的调控和低氧诱导因子1α(HIF-1α)表达的影响.方法 用贴壁法体外培养大鼠ASMC,在常氧及低氧条件下培养24 h,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测ASMC中miR-199a-5p含量;人工合成大鼠miR-199a-5p的拟似物和抑制物,用脂质体转入低氧培养的ASMC,qRT-PCR检测miR-199a-5p及HIF-1αmRNA的表达,Western blot法检测HIF-1 α蛋白的表达,CCK-8法检测ASMC的增殖情况.结果 与常氧组相比,低氧处理促进细胞增殖,低氧组HIF-1α mRNA及HIF-1 α蛋白的相对水平显著升高;低氧组miR-199a-5p的量较常氧组减少;转染miR-199a-5p拟似物可以显著减缓低氧条件下ASMC的增殖,而其抑制物可促进低氧条件下的细胞增殖.拟似物组HIF-1 α蛋白较对照组降低,抑制物组则升高,而低氧条件下各组HIF-1α mRNA水平无明显差异.结论 miR-199a-5p能抑制低氧条件下ASMC的增殖和HIF-1α蛋白的表达.

  • Toll样受体4及相关炎性信号分子在高脂饮食诱导的肥胖小鼠肾脏组织水平升高

    作者:张曼曼;张蓓蓓;王林;李向阳;华慧;汤仁仙;张鹏;郑葵阳

    目的 探讨Toll样受体4(TLR4)、髓样分化因子88(MyD88)、核因子κBp65 (NF-κBp65)在高脂饮食(HFD)诱导的肥胖小鼠肾脏组织中的表达.方法 45只健康C57BL/6雄性小鼠随机分为HFD组(n=39)和对照组(n=6).HFD组给予高脂高糖饲料,对照组给予普通饲料,均喂养20周.每周测量小鼠体质量,取体质量增长值高的13只为饮食诱导肥胖(DIO)组,称量内脏脂肪质量.检测血清肌酐、尿素氮(BUN)及内毒素水平.HE染色、显微镜观察肾脏形态.实时定量PCR(qRT-PCR)检测小鼠肾脏组织TLR2、TLR4、MyD88、NF-κBp65及TNF-α mRNA水平,Western blot法检测小鼠肾脏组织TLR4、MyD88、NF-κBp65蛋白水平.结果 成功构建DIO小鼠模型;与对照组相比,DIO小鼠血内毒素水平升高,血肌酐、BUN水平无显著性差异,2组小鼠肾脏结构未见明显异常;与对照组小鼠相比,DIO小鼠肾脏TLR4、MyD88、NF-κBp65、TNF-α mRNA水平升高,TLR2 mRNA水平无显著性差异;DIO小鼠肾脏TLR4、MyD88、NF-κBp65蛋白水平升高.结论 TLR4及相关炎性信号分子在饮食诱导肥胖小鼠肾脏组织表达水平增加.

  • 稳定表达RFP-GFP-LC3的RAW264.7细胞株的建立

    作者:王婉;张庆;赵润鹏;徐雪维;邢应如;张荣波;吴静;胡东

    目的 建立能够稳定表达红色荧光蛋白-绿色荧光蛋白-微管相关蛋白轻链3(RFP-GFP-LC3)的小鼠RAW264.7巨噬细胞.方法 构建含RFP-GFP-LC3基因的慢病毒重组质粒载体,将重组质粒与慢病毒包装质粒共转染HEK293T细胞,收集病毒上清后感染RAW264.7细胞.经嘌呤霉素筛选获得稳定表达RFP-GFP-LC3的RAW264.7细胞株,用荧光显微镜和流式细胞术分析感染效率.饥饿处理稳定感染细胞,荧光显微镜下观察RFP-GFP-LC3斑点.结果 成功构建了慢病毒pLV-CMV-RFP-GFP-LC3,经感染和嘌呤霉素筛选获得稳定表达RFP-GFP-LC3的RFP-GFP-LC3-RAW264.7细胞;荧光显微镜和流式细胞术显示RFP和GFP荧光率均达到100%,饥饿处理后自噬斑点显著增多.结论 成功建立稳定表达RFP-GFP-LC3的RAW264.7细胞株,为自噬研究建立了可靠细胞平台.

  • miR-1284过表达增加胃癌耐药细胞的药物敏感性及机制

    作者:詹泽栩;韦尉元;曹稳珑;张笑石;余晗;谢玉波;肖强

    胃癌细胞的多药耐药性常常是导致化疗失败的主要原因.小RNA(microRNA,miRNA)为调节基因转录的重要因子,miR-15b和miR-16在胃癌多药耐药SGC-7901/VCR细胞中低表达,通过上调miR-15b和miR-16,可靶向抑制抗凋亡蛋白Bcl-2,进而部分逆转细胞的多药耐药表型[1].Chen等[2]使用miRNA芯片检测结果表明,miR-1284在胃癌淋巴结转移阳性组织比原发性胃癌组织表达少,但miR-1284在胃癌细胞中的功能尚不清楚.本研究通过构建目的miR-1284慢病毒,观察miR-1284过表达后对人胃癌耐药SGC-7901/VCR细胞耐药性的影响,并探讨其可能的作用机制.

  • 他莫昔芬抑制G蛋白偶联雌激素受体沉默的乳腺癌相关成纤维细胞的增殖并促进其凋亡

    作者:严玉钊;余腾骅;涂刚;柳满然;袁杰;杨光伦

    目的 通过构建G蛋白偶联雌激素受体(GPER)的慢病毒短发夹RNA (shRNA)表达载体,感染人乳腺癌相关成纤维细胞(BCAF)后,探讨他莫昔芬对BCAF增殖及凋亡的影响.方法 构建GPER-RNAi慢病毒载体及对照病毒载体后,进行病毒包装,实时定量PCR检测GPER mRNA水平,Western blot法检测GPER蛋白水平;将BCAF分为4个组,包括阴性对照组、GPER-RNAi组、阴性对照联合10-8 mmol/L他莫昔芬组和GPER-RNAi联合10-8 mmol/L他莫昔芬组,CCK-8法检测他莫昔芬处理后细胞增殖,异硫氰酸荧光素标记的膜联素V/碘化丙啶(annexin V-FITC/PI)双染色结合流式细胞术检测他莫昔芬处理后的细胞凋亡情况.结果 Western blot结果显示感染慢病毒的BCAF中,GPER表达显著降低.与阴性对照相比,CCK-8法检测结果显示他莫昔芬显著促进BCAF增殖.GPER敲低的BCAF,他莫昔芬的促增殖作用减弱;流式细胞术检测结果显示,他莫昔芬抑制BCAF凋亡,但在GPER敲低的BCAF,他莫昔芬的抑制细胞凋亡作用减弱.结论 Lemi-GPER-shRNA慢病毒感染BCAF,可有效沉默GPER表达;GPER敲低的BCAF,他莫昔芬刺激细胞增殖和抑制凋亡作用减弱.

  • 脑膜炎奈瑟菌外膜蛋白NMB0315作为B群流脑疫苗候选抗原的免疫效果

    作者:谢梅花;李赫宁;余敏君;唐双阳;李开铭;张璐思;邓苏宏;胡四海

    目的 研究原核重组表达的B群脑膜炎奈瑟菌外膜蛋白0315(rNMB0315)在诱导小鼠产生特异性免疫应答中的作用、免疫血清抗体体外杀菌活性和重组蛋白的免疫保护效果,初步评价rNMB0315作为B群流脑疫苗候选抗原的潜力.方法 将构建的原核表达载体pET30a-NMB0315转化大肠杆菌BL21表达重组蛋白,纯化鉴定后的重组蛋白免疫雌性BALB/c小鼠,检测体液免疫和细胞免疫水平;测定血清抗体在补体介导下的体外杀菌活性,观察rNMB0315蛋白疫苗对实验小鼠的免疫保护效果.结果 rNMB0315具有良好的免疫原性,能诱导产生较高水平的体液免疫应答:包括血清特异性IgG、IgG1、IgG2a、IgG3、IgG2b和生殖道黏膜特异性分泌型IgA (sIgA),免疫后第6周抗体效价分别为1∶150 000、1∶85 000、1∶60 000、1∶35 000、1∶30 000和1∶30 000;也能激发较高水平的细胞免疫应答,免疫小鼠脾淋巴细胞增殖反应的刺激指数(SI)值明显高于PBS、Freund佐剂对照组.在免疫的2、4、6周,血清IgG2a/IgG1比值均小于1,提示rNMB0315疫苗以诱导Th2细胞性体液免疫应答为主.rNMB0315疫苗免疫血清在补体介导下的体外杀菌抗体效价为1∶128;72 h内,对实验小鼠的免疫保护率为90%.结论 原核表达的rNMB0315具有良好的免疫活性和免疫保护效果,NMB0315外膜蛋白具有作为预防B群流脑蛋白疫苗候选抗原的潜力.

  • 肠道病毒71型VP1蛋白在昆虫杆状病毒表达系统的表达

    作者:赵培培;孔枕枕;刘海冰;茅凌翔;苏兆亮;仝佳;王胜军;陈建国

    目的 利用昆虫杆状病毒表达系统表达肠道病毒71型VP1蛋白并对其进行纯化.方法 首先通过化学合成法合成EV71 VP1基因,然后将EV71 VP1基因插入到供体质粒pFastBac1中,构成重组质粒pFastBac1-VP1,再转入JM190感受态细菌扩增,然后提取重组质粒pFastBac1-VP1转入DH10BacTM感受态细胞,通过转座从而获得重组质粒bacmid-VP1,采用脂质体Cellfectin Reagent将重组质粒bacmid-VP1转染Sf9细胞.通过SDS-PAGE、Western blot法检测目的蛋白的水平,经镍离子亲和层析,纯化VP1蛋白.结果 SDS-PAGE及Western blot法检测获得蛋白的相对分子质量与预期结果一致.Bradford分析纯化后蛋白的浓度为70 μg/mL,纯化度达90%.结论 利用昆虫杆状病毒表达系统成功表达EV71 VP1蛋白.

  • IL-18和TNF-α增加3T3-L1脂肪细胞及RAW264.7巨噬细胞IL-18Rβ的水平

    作者:金国玺;张燕;毕娅欣;于磊

    目的 探讨白细胞介素18(IL-18)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)对3T3-L1脂肪细胞、RAW264.7巨噬细胞的白细胞介素18受体β(IL-18Rβ)表达的影响.方法 采用反转录PCR和Western blot法检测不同浓度IL-18、TNF-α处理后3T3-L1脂肪细胞、RAW264.7巨噬细胞的IL-18Rβ mRNA及蛋白的表达.结果 10 ng/mL、100 ng/mL TNF-α显著增加3T3-L1脂肪细胞IL-18Rβ的mRNA及蛋白表达,10 ng/mL、100 ng/mL IL-18显著增加RAW264.7巨噬细胞IL-18Rβ的mRNA及蛋白表达.结论 IL-18、TNF-α可能通过促进巨噬细胞、脂肪细胞IL-18R的表达参与糖尿病和肥胖的脂肪组织慢性炎症过程.

  • Ser176/180磷酸化位点突变的IKKα真核表达载体的构建及鉴定

    作者:何岩;郑倩倩;朱亚勤

    目的 构建Ser176/180磷酸化位点突变的核因子κB抑制剂激酶α(IKKα)真核表达载体.方法 通过PCR获得带有IKKα Ser176/180突变位点和无义突变KpnⅠ位点的片段,以及带有无义突变KpnⅠ位点的片段,两片段分别经过HindⅢ/Kpn Ⅰ以及Kpn Ⅰ/EcoR Ⅰ双酶切,载体pEGFP经HindⅢ/EcoR Ⅰ双酶切后连接.共聚焦显微镜技术观察激活型/死型pEGFP-IKKα KA/KD融合蛋白在真核细胞中的定位及其对P65核质易位的影响.Western blot法检测重组蛋白表达.结果 测序显示载体构建成功.pEGFP-IKKα KA分布在细胞核和细胞质,并能使P65发生核穿梭.pEGFP-IKKα KD主要分布在细胞质,不能使P65发生核质易位.Western blot结果显示出融合蛋白的特异性条带.结论 成功构建IKKα磷酸化位点激活型及死型的真核表达载体,在真核细胞中可有效表达.pEGFP-IKKα KA/KD在真核细胞中蛋白表达呈现不同定位,对下游P65的核质穿梭调控发挥不同效应.

  • 应用分子伴侣探索e23sFv/His融合蛋白的可溶性表达

    作者:常镜;欧阳清;杜晓;杨安钢;赵晶;阎博

    目的 探讨利用分子伴侣实现e23sFv/His融合蛋白可溶性表达的可行性.方法 将分子伴侣质粒pGro7、pKJE7与e23sFv原核表达载体共转化BL21(DE3)感受态细胞.16℃诱导融合蛋白可溶性表达,比较可溶性表达产物相对于常规包涵体不溶形式表达产物在产量和抗原结合活性方面的差异.结果 可溶性表达的e23sFv/His产量较小,纯化得率低,其抗原结合活性没有明显优于包涵体表达纯化产物.结论 应用pGro7、pKJE7有助于e23 sFv/His融合蛋白的可溶性表达,但其表达和纯化得率较低.

  • 重组质粒pFLAG-CMV2-FcDDR2的构建及应用

    作者:赵薇;张昭;黄同列;穆楠;田菲;张伟

    目的 构建人盘状结构域受体2(DDR2)与IgG Fc段嵌合受体的重组质粒(pFLAG-CMV2-FcDDR2),检测其自主磷酸化水平.方法 设计FcDDR2克隆引物,以质粒pSecTag2B-FcDDR2为模板,PCR扩增IgG Fc段与DDR2跨膜区和胞内区的cDNA序列(FcDDR2),将其插入pFLAG-CMV2真核表达载体中.PCR扩增鉴定并测序验证重组质粒pFLAG-CMV2-FcDDR2后,将其转染人胚肾HEK293T细胞,Western blot法验证HEK293T细胞中目标蛋白FcDDR2的表达效率.将pcDNA3.1-DDR2转染HEK293T细胞,给予2型胶原蛋白刺激后作为阳性对照,用小鼠来源抗DDR2抗体免疫沉淀pFLAG-CMV2-FcDDR2阳性的HEK293T细胞及胶原刺激的pcDNA3.1-DDR2阳性的HEK293T细胞,4G10抗体分析DDR2的磷酸化水平,评价FcDDR2的自主磷酸化能力.结果 重组质粒pFLAG-CMV2-FcDDR2的PCR扩增产物为大小约2800 bp左右的片段,与预期相符,测序验证正确.Western blot结果提示pFLAG-CMV2-FcDDR2转染后的HEK293T细胞,FLAG-FcDDR2表达水平显著上调.免疫沉淀结合Western blot分析提示FcDDR2的磷酸化水平与胶原刺激后的DDR2水平相当.结论 成功构建了pFLAG-CMV2-FcDDR2真核表达载体,FcDDR2的自主磷酸化与胶原蛋白刺激后DDR2的活化水平相当,可以用作DDR2经胶原蛋白刺激后的活化替代形式.

  • 双相脉冲电刺激可促进脂肪干细胞分化为心肌细胞样细胞

    作者:李志园;杨刚;黄华;肖正华;任小梅

    目的 设计一套用于心肌组织工程的双相脉冲电刺激(BPES)系统,并研究.BPES对体外培养的脂肪干细胞(ADSC)向心肌细胞样细胞分化的影响.方法 分离和培养SD大鼠ADSC,通过流式细胞术对细胞表型进行鉴定,通过成脂、成骨分化证明其多向分化潜能.选择第3代细胞随机分为2组:BPES组接种24h后,给予BPES(脉宽2 ms、幅度2V、频率2 Hz、刺激时间2 h/d,连续刺激3、7、14 d),每3d换1次液;对照组培养条件与BPES组相同,但不给予BPES.通过倒置相差显微镜观察细胞形态变化,MTT法检测细胞增殖,免疫荧光技术检测细胞同源盒蛋白Nkx-2.5和连接子蛋白43(CX43)的水平.结果 流式细胞术证明分离的细胞是ADSC,成脂诱导后并用油红O染色,可见细胞内脂滴被染成红色,成骨诱导后碱性磷酸酶(ALP)和Von Kossa染色,可见钙结节特征;细胞增殖无明显变化,BPES组Nkx-2.5和CX43蛋白表达量明显高于对照组.结论 成功设计了可用于组织工程的BPES系统,并证明BPES可在体外促进ADSC向心肌细胞样细胞分化.

  • 非受体蛋白质酪氨酸磷酸酶14在胆管癌组织的表达及临床意义

    作者:王丽娟;席文锦;郑国旭;周聪雅;金桂花;何晨琛;蔡梦娇;朱青

    目的 检测非受体蛋白质酪氨酸磷酸酶14(PTPN14)蛋白在胆管癌组织中的表达,探讨PTPN14与胆管癌临床病理特征间的关系,并分析PTPN14的表达与胆管癌患者预后的关系.方法 用免疫组织化学染色检测胆管癌组织及癌旁组织中PTPN14蛋白的表达;利用统计学分析软件分析PTPN14蛋白与胆管癌患者临床病理特征之间的关系;利用生存分析曲线分析PTPN14蛋白与胆管癌患者术后5年生存率的关系.结果 PTPN14蛋白在胆管癌组织中的阳性表达率为49.1%,在癌旁组织中的阳性表达率为75.4%;PTPN14蛋白的表达与胆管癌临床分期及分化程度密切相关,与胆管癌患者性别、年龄无显著相关性;PTPN14蛋白阳性表达的胆管癌患者术后5年生存率显著高于阴性表达的患者.结论 PTPN14在胆管癌组织低表达,且PTPN14低表达与胆管癌的良性临床病理特征及总体生存率呈负相关.

  • 细胞因子体外诱导脐带血单个核细胞向成熟肥大细胞分化

    作者:陈惠芳;何颖;张兰珍;刘兆宇;邹泽红;陶爱林

    目的 分离脐带血单个核细胞并进行体外定向诱导培养,获得人源化、纯度高的成熟肥大细胞.方法 用重组人干细胞生长因子(rhSCF)、重组人白细胞介素6(rhIL-6)定向诱导从脐带血中分离的单个核细胞,使其分化成为成熟的肥大细胞.收集不同时间段的细胞,进行甲苯胺蓝染色并用流式细胞术检测其膜上FcεRⅠ受体,以鉴定其成熟程度.成熟的肥大细胞经过敏原激发后,检测细胞上清中的组织胺及类胰蛋白酶.结果 在加入rhSCF和rhIL-6诱导2周以后,肥大细胞即开始表达FcεRⅠ受体,诱导3周后达到高峰,同时细胞质内嗜碱性颗粒增多.诱导成熟后的细胞经过敏原激发后,能有效释放类胰蛋白酶和组织胺.结论 脐带血单个核细胞可定向诱导成为成熟的肥大细胞,可用于过敏原性的体外评价试验.

  • IL-33增强体外培养的外周血单个核细胞细胞因子的分泌以及杀伤功能

    作者:李晓晨;吕全省;夏瑞;古彦铮;高腾飞;虞培娟;张学光;朱一蓓

    目的 探讨白细胞介素33(IL-33)是否能在体外增强外周血单个核细胞(PBMC)分泌细胞因子和杀伤功能.方法 常规分离培养健康人PBMC,分别经CD3单克隆抗体(mAb)/CD28 mAb/IL-2、CD3 mAb/CD28 mAb/IL-2/IL-12、CD3 mAb/CD28mAb/IL-2/IL-12/IL-33三种组合刺激培养72 h,收集细胞.经实时定量PCR(qRT-PCR)检测各组细胞γ干扰素(IFN-γ)、颗粒酶B(granzyme B)mRNA的水平;CCK-8法检测各组细胞对A549人肺腺癌细胞的杀伤活性;采用流式细胞术分析各组细胞IFN-γ、程序性死亡蛋白1(PD-1)的水平.结果 各组因子组合刺激的PBMC,形态无明显差异;qRT-PCR检测发现,IL-33刺激组的PBMC中IFN-γ、granzyme B mRNA的水平升高;IL-33刺激组的PBMC对A549的杀伤能力更强;IL-33刺激组的PBMC中CD3+ CD8+细胞亚群IFN-γ的水平升高、PD-1的水平降低.结论 IL-33能够在体外增强PBMC的效应功能.

  • 釉成熟蛋白多肽多克隆抗体的制备和应用

    作者:张娟娟;冀洪海;柳云霞;孙岩

    目的 制备兔抗鼠釉成熟蛋白(amelotin)的多克隆抗体并进行鉴定和应用.方法 对amelotin的蛋白质序列进行分析,选取一段氨基酸序列合成多肽并与钥孔戚血蓝素(KLH)偶联免疫新西兰大白兔,制备多肽抗体,ELISA检测抗体效价,Western blot法分析抗体特异性.免疫组织化学技术观察amelotin在小鼠下颌组织的表达情况.结果 制备的兔抗amelotin抗体效价为1:1 000 000,特异性高.免疫组织化学染色结果显示amelotin在3、7d小鼠的磨牙釉质全层有强表达,并且在7d小鼠下颌下腺的导管上皮细胞质中也有表达.结论 成功制备了效价高、特异性好的兔抗amelotin抗体.

  • UNC5B单克隆抗体的制备及对黑素瘤细胞体外迁移能力的影响

    作者:左元玲;杨剑峰;何杨;赵益明

    目的 制备非协调性分子5同源蛋白B (UNC5B)的单克隆抗体(mAb),分析其功能.方法 将UNC5B基因片段与原核表达载体pET-32a连接,连接产物转化大肠杆菌BL21 (DE3),进行原核诱导表达并纯化重组蛋白.用UNC5B重组蛋白免疫BALB/c小鼠,经杂交瘤技术筛选可稳定分泌抗UNC5B的杂交瘤细胞株,并用Western blot法、ELISA和流式细胞术鉴定.利用细胞划痕实验观察UNC5B mAb对黑素瘤细胞迁移能力的影响.结果 表达并纯化了UNC5B重组蛋白;筛选出1株高效价的2C9 mAb,通过ELISA、Western blot法和流式细胞术证实该mAb特异性识别UNC5B;划痕实验证明在netrin-1存在的条件下,UNC5B mAb可促进黑素瘤细胞迁移.结论 成功制备了UNC5B的特异性mAb,在netrin-1存在时,该抗体可促进黑素瘤细胞迁移.

  • CD4+T细胞亚群在再生障碍性贫血中的作用及机制

    作者:史月;李建平;李文倩;冯建明

    再生障碍性贫血(AA)是一组多种原因引起的骨髓造血功能衰竭,主要表现为全血细胞减少的综合征.CD4+T淋巴细胞在AA发病中发挥更重要作用,AA患者中Th1细胞的极化、Th17细胞的高表达及调节性T细胞(Treg)数量的减少,都与AA的发病密切相关.Th1细胞的极化和Th17细胞/Treg比例的失衡,T细胞异常活化,导致骨髓造血细胞的凋亡,也是目前AA研究的热点之一.Th22细胞的增多、Th9细胞的双向性生物学效应、滤泡辅助T细胞的辅助作用及各亚群之间的相互作用,也都提示了CD4+T细胞亚群参与AA的发病.本文在分析各亚群生物学特性和功能的基础上,重点阐述CD4+T细胞亚群与AA发病关系的研究进展.

  • ISG20在病毒性肝炎中作用的研究进展

    作者:马茜;秦波

    病毒性肝炎具有传染性较强,传播途径复杂,流行面广泛,发病率高等特点,肝炎病毒的慢性感染已成为严重的公共卫生问题.相对分子质量(Mr)20 000的干扰素刺激基因产物(ISG20)是由1型、2型干扰素诱导产生的一种具有3'-5'核酸外切酶活性的蛋白,已证实其有抑制病毒复制的功能.ISG20作为干扰素信号通路下游的重要效应分子,在病毒性肝炎患者对抗病毒感染过程中发挥重要作用,且对慢性病毒性肝炎患者接受干扰素抗病毒治疗疗效有较高的预测价值;其抗病毒作用机制多认为与核酸外切酶活性相关,现就ISG20在病毒性肝炎中作用及相关机制的研究进展进行综述.

  • 上调Foxp3+调节性T细胞在治疗类风湿性关节炎策略中的意义

    作者:熊莺;李运曼

    CD4+ CD25+ Foxp3+调节性T细胞(Treg)是一类具有强大负性免疫调节功能的T细胞亚群,在类风湿性关节炎(RA)中,Foxp3+ Treg由于存在相对的数量减少和/或功能障碍,因而不能有效对抗关节炎的发生与发展.通过不同的策略上调机体中Foxp3+ Treg,如采用过继Foxp3+ Treg、信号通路抑制剂、靶向细胞因子的制剂、靶向免疫细胞的制剂等进行干预,均能有效地抑制机体的免疫性炎症反应,发挥治疗关节炎的作用.因此,上调机体Foxp3+ Treg在治疗RA的策略中具有重要的意义.

  • 浆细胞样树突状细胞是诱导免疫耐受的重要细胞

    作者:刘志佳;肖漓;孔祥瑞;石炳毅

    浆细胞样树突状细胞(pDC)是一种功能较为特殊的DC,可以通过胞质内Toll样受体(TLR)识别病毒RNA或细菌非甲基化DNA,产生大量1型干扰素,参与抗病毒免疫过程,同时pDC可以提呈抗原给T细胞,诱导CD8+细胞毒T细胞和CD4+效应T细胞分化并决定其反应类型,是联系固有免疫和适应性免疫的重要细胞.pDC的共刺激分子表达谱与经典的DC(cDC)不同,其活化性共刺激分子表达较少,刺激T细胞免疫反应的能力较弱,有利于诱导CD4+或CD8+调节性T细胞,对于诱导和维持免疫耐受具有十分关键的作用,在自身免疫性疾病和器官移植中有非常重要的应用前景.本文综述了pDC的发生、发育和功能特点以及近年来在诱导免疫耐受方面的研究进展.

  • T细胞亚群在肥胖引起炎症中的作用

    作者:董莉君;王辉

    肥胖是一种以慢性炎症为主要特征的代谢性疾病,这种炎症的发生发展与各免疫细胞如巨噬细胞、B淋巴细胞、T淋巴细胞、自然杀伤细胞、树突状细胞等关系密切.T细胞作为一种重要的免疫细胞对肥胖时炎症的发生发挥关键作用,肥胖时各个T细胞亚群如CD4+T淋巴细胞、CD8+T淋巴细胞等比例失衡;T细胞分泌的炎症性细胞因子增多;T细胞相关基因表达异常等,这些变化可通过激活相关炎症信号通路来促进炎症的发生发展.本文综述了各个T淋巴细胞亚群在肥胖引起的炎症中的不同作用及其利用免疫细胞等治疗肥胖引起炎症的策略.

  • 记忆性CD4+T细胞的形成及其影响因素

    作者:刘悦越;国泰;李琦涵

    疫苗设计的关键在于产生足够数量和质量的抗原特异的记忆性淋巴细胞,使得机体获得长期保护以抵御病原体的再次感染.CD4+T细胞能够分化为多种辅助性T细胞和调节性T细胞,在适应性免疫反应中发挥重要作用,不仅参与体液免疫而且参与细胞免疫的调节.那么哪些效应性CD4+T细胞能够转化为记忆性细胞,哪些因素影响该过程成为疫苗研发者所关注的重点,对疫苗株的筛选、免疫程序设计和佐剂的使用等均具有指导性作用.本文主要综述了近几年关于记忆性CD4+T细胞形成的细胞学基础及其影响因素的研究进展,为疫苗研发和效果评价提供参考.

  • 白细胞介素22与肝脏疾病关系的研究进展

    作者:黄高铂;连建奇;张野

    白细胞介素22(IL-22)是IL-10细胞因子家族成员之一,在多种感染性和炎症性疾病中发挥重要作用.而IL-22是兼具保护性作用和促进炎症应答的双重功能细胞因子,其功能与细胞因子特异性表达的环境、IL-22的浓度以及发挥作用的时间密切相关.病毒性肝炎患者外周血及肝脏组织IL-22表达水平升高,且与肝脏炎症应答、肝纤维化、肝细胞癌等疾病的发病密切相关.本文主要综述了IL-22的生物学功能及其在病毒性肝炎、肝硬化、肝癌及急性肝损伤等肝脏疾病中的作用.

细胞与分子免疫学分期目录
期数
2018 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12
2017 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12
2016 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12
2015 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12
2014 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12
2013 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12
2012 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12
2011 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12
2010 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12
2009 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12
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1992 01 02 03 04
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1990 01 02
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