细胞与分子免疫学杂志
Chinese Journal of Cellular and Molecular Immunology 세포여분자면역학잡지
- 主管单位： 中国免疫学会；第四军医大学
- 主办单位： 陕西省免疫学会,中国免疫学会
- 影响因子： 0.81
- 审稿时间： 1-3个月
- 国际刊号： 1007-8738
- 国内刊号： 61-1304/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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硫化氢对实验性病毒性心肌炎小鼠的保护作用及其机制
目的 探讨硫化氢(H2S)对病毒性心肌炎(VMC)小鼠的保护作用及其机制.方法 将70只BALB/c小鼠随机分为正常对照组(n=10)、心肌炎组(n=20)、炔丙基甘氨酸(PAG)组(n=20)、硫氢化钠(NaHS)组(n=20),后3组小鼠腹腔接种0.1 mL内含柯萨奇病毒B3(CVB3)的Eagle液建立VMC模型,对照组仅接种Eagle液.接种后当日,PAG、NaHS组分别腹腔注射40 mg/kg PAG、50 μmol/kg NaHS,其余2组腹腔注射PBS,1次/d,连续2周.第15天称体质量(BM)后处死全部小鼠,比较各组死亡率,分离血清,通过ELISA测定血清心肌肌钙蛋白I(cTnI)水平,取心脏,称心脏质量(HM),计算HM/BM,HE染色计算心肌病理积分,测定心肌匀浆液中丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、过氧化氢酶(CAT)活性,ELISA检测心肌组织中白介素1β(IL-1β)、IL-6、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量,Western blot法检测心肌细胞核内核因子-κB (NF-κB) p65表达水平.结果 心肌炎组HM/BM、血清cTnI水平、心肌MDA活性、胞核NF-κB p65表达水平及心肌IL-1β、IL-6、TNF-α含量较对照组增加(P＜0.05或0.01),而心肌SOD、GSH-Px和CAT活性较对照组减少.与心肌炎组比较,PAG组HM/BM、血清cTnI水平、心肌病理积分、心肌MDA活性、胞核NF-κB p65表达水平及心肌IL-1β、IL-6、TNF-α含量增加,心肌SOD、GSH-Px和CAT活性则减少(P＜0.05),但2组死亡率比较差异无显著性(P＞0.05).与心肌炎组相比,NaHS组死亡率、HM/BM、血清cTnI水平、心肌病理积分、心肌MDA活性、胞核NF-κB p65表达水平及心肌IL-1β、IL-6、TNF-α含量降低(P＜0.05),而SOD、GSH-Px、CAT活性则升高(P＜0.05).结论 H2S对VMC小鼠产生良好的保护作用,其机制可能与增强抗氧化能力及抑制炎症反应有关.
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慢性乙型肝炎病毒感染树鼩Kupffer细胞TLR2和TLR4的表达及其意义
目的 探索慢性乙型肝炎病毒(HBV)感染树鼩Kupffcr细胞Toll样受体(TLR)家族中的TLR2和TLR4在mRNA水平的表达情况及其对Kupffcr细胞功能的影响.方法 树鼩分为确定慢性感染HBV的树鼩、疑似慢性感染HBV的树鼩和未接种HBV的正常对照树鼩.全部动物定期抽血和进行肝活检手术,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)分析血清和肝组织的HBVDNA水平;对手术切取的树鼩肝组织进行Kupffcr细胞的分离、纯化和原代培养,采用qRT-PCR检测TLR2、TLR4以及TNF-α的mRNA表达水平;采用迁移实验及溶酶体荧光探针等方法分析TLR2和TLR4对Kupffcr细胞迁移能力及溶酶体数量的影响.结果确定慢性感染HBV的树鼩TLR2mRNA和TLR4mRNA表达水平均低于疑似慢性感染HBV的树鼩和未接种HBV的正常对照树鼩(P＜0.05),表达水平均与动物肝组织的HBV DNA拷贝数呈负相关(P＜0.05),与Kupffcr细胞的细胞迁移数、溶酶体密度及TNF-α mRNA表达水平呈正相关(P＜0.05).结论Kupffcr细胞中的TLR2和TLR4可能通过影响Kupffcr细胞功能而参与树鼩HBV感染后肝脏病变的慢性化发展过程.
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Thymoglobulin与CD3单克隆抗体在细胞因子诱导的杀伤细胞制备中的作用比较
目的 研究人胸腺球蛋白(TG)在临床治疗级培养体系中,对细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK细胞)增殖、免疫细胞表型和细胞毒作用的影响.方法 分离11例健康正常人外周血单个核细胞(PBMC),γ干扰素预处理;1d后,TG或CD3 mAb刺激;随后,每3d补充IL-2等添加物,培养至21 d.台盼蓝拒染法计数细胞总数和活力;流式细胞术分析CD3、CD4、CD8、CD16/CD56和NK细胞活化/抑制受体表达情况以及CD25+ Foxp3+调节T细胞(Treg)的变化;乳酸脱氢酶释放法检测细胞毒活性.结果 TG和CD3 mAb均能刺激CIK细胞生长,但CD3 mAb作用弱于TG.培养7d,2组CIK细胞中,CD3+ CD16+ CD56+细胞、CD3-CD16+ CD56+细胞及NK细胞活化/抑制受体表达均出现一过性减少;培养14 d,开始恢复,并持续增加至21 d;在7d、14 d和21 d等3个检测点,CD3 mAb组的三者均低于TG组(P＜0.05),而且,细胞毒活性也低于TG组.值得注意的是,培养7d,Treg一过性增加,且TG组明显高于CD3 mAb组(P＜0.05);另外,在整个培养期间,2组CIK细胞中,CD3+ CD4+细胞持续减少,而CD3+ CD8+细胞在7d,即迅速增加,并维持该水平至21 d,这种改变在2组间无差异.结论 TG能选择性地促进CIK细胞中主要效应细胞增殖、分化和成熟,提高其细胞毒活性,因此,其具有替代CD3 mAb用于制备临床级CIK细胞制品的可行性;CD3 mAb和TG培养体系均可一过性地扩增负相调控细胞Treg,剔除或减少Treg可能有助于提高主要效应细胞产率.
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Ficolin 3的表达、纯化及其对RAW264.7巨噬细胞的活化作用
目的 构建人ficolin-3基因的原核表达载体在大肠杆菌中表达后纯化,检测可溶性His-ficolin在诱导巨噬细胞系RAW264.7活化中的作用.方法 从人外周血单个核细胞cDNA中扩增人ficolin-3基因的cDNA序列,将其插入pET22原核表达载体中,酶切鉴定并测序验证重组质粒pET22b-ficolin 3后,在大肠杆菌BL21中诱导表达并纯化His-ficolin 3.以His蛋白为对照,利用流式细胞术检测不同浓度可溶性His-ficolin 3对RAW264.7细胞吞噬鸡红细胞能力的影响,利用ELISA检测His-ficolin 3对RAW264.7细胞分泌IL-6、IL-12和TNF-α的影响.结果 酶切鉴定获得预期目的片段,测序证实重组质粒pET22b-ficolin 3构建成功.SDS-PAGE提示相对分子质量(Mr)33 000处有可溶性目的蛋白His-ficolin 3表达,His柱纯化后产物纯度在90％以上.Western blot法检测证实纯化产物为His-ficolin3.和His蛋白相比,His-ficolin 3对RAW264.7细胞的吞噬能力具有剂量依赖性,即His-ficolin 3浓度越高,吞噬能力越强;此外,His-ficolin 3能显著诱导RAW264.7细胞分泌IL-6、IL-12和TNF-α等炎性细胞因子.结论 成功构建了pETb-Ficolin 3重组载体并获得了纯度为90％以上的His-ficolin 3.His-ficolin 3能够显著促进巨噬细胞RAW264.7的活化.
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myc-cyclin B1重组基因的克隆表达和细胞内定位
细胞周期蛋白B1(cyclin B1)是调控细胞由G2期向M期转换的重要因子之一,G2末期cyclin B1的表达达到高峰.激活细胞周期蛋白依赖性激酶2 (cyclindependent kinase 2,CDK2),形成cyclin B1/CDK2复合物,进入细胞核,裂解一系列底物蛋白,推动细胞从DNA合成期进入有丝分裂.肿瘤细胞的永生化与细胞周期的调控失常有密切关系,并且发现,作为一种细胞周期调节因子,cyclin B1与肿瘤有着非常密切的关系,它是与肿瘤有直接关系的癌基因之一[1-2].Cyclin B1[3]在许多癌细胞中均存在高表达[4-5],如在卵巢癌、胃肠癌、宫颈癌和膀胱移行细胞癌中.在细胞周期G2/M起正性调控作用,启动有丝分裂,cyclin B1高表达使细胞周期紊乱,促进肿瘤的发生[6-7].使用抗癌药可以降低cyclin B1表达,细胞周期阻滞在G2/M期[8].本实验拟构建cyclin B1的真核表达载体,并验证其在细胞内的定位情况,为进一步研究cyclin B1与肿瘤的关系奠定了实验基础.
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瘦素对矽肺大鼠肺组织纤维化的影响及与HIF-1α的相关性分析
目的 观察瘦素(LP)在矽肺模型大鼠肺组织的表达和对肺组织纤维化的影响以及与低氧诱导因子1α(HIF-1α)的相关性.方法 120只SD大鼠随机分为正常对照组、矽肺模型组、LP干预组(根据LP浓度分为LP5干预组、LP10干预组、LP20干预组).对照组大鼠气管内灌注1 mL生理盐水,其余各组大鼠气管内灌注1 mL Si02混悬液(40 mg/mL),从造模后1d开始,LP5、LP10及LP20干预组分别给予5 ng/kg·d、10 ng/kg·d、20 ng/kg·d LP腹腔注射,第7天、14天、21天、28天各组分别处死6只大鼠.采用ELISA检测4个时间点各组大鼠肺组织LP的表达以及第28天羟脯氨酸含量.应用Westem blot法测定矽肺模型组大鼠肺组织LP及HIF-1α蛋白表达.结果 相同时期各组肺组织LP表达差异均有统计学意义(P＜0.05),矽肺模型组显著高于正常对照组,3个不同浓度LP干预组均高于矽肺模型组(P＜0.05).第28天羟脯氨酸含量在正常对照组、矽肺模型组、LP5干预组、LP10干预组、LP20干预组分别为(0.89士0.16)mg/g、(3.14±0.40)m∥g、(3.78±0.27) mg/g、(4.35±0.13) mg/g、(4.87 ±0.16) mg/g,矽肺模型组LP表达较正常对照组明显增加(P＜0.05),LP干预组LP表达均显著高于矽肺模型组(P＜0.05).各时间点模型组HIF-1α与LP的表达均呈正相关(r=0.88,0.79,0.86,0.85,P＜0.05).结论 LP在矽肺模型大鼠肺组织表达增加,增加外源性LP,能增加矽肺大鼠肺组织胶原蛋白沉积,且LP与HIF-1α蛋白表达呈正相关.
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波形蛋白基因转染增强SW780人膀胱癌细胞的侵袭力
目的 构建人波形蛋白(vimentin)基因的真核表达载体,转染SW780入膀胱癌细胞,检测vimentin上调对SW780细胞侵袭能力的影响.方法 PCR扩增人vimentin基因的cDNA序列,将其插入pcDNA3.1真核表达载体中,酶切鉴定并测序验证重组质粒pcDNA3.1-vimentin后,转染人膀胱癌SW780细胞.Westem blot法检测vimentin及基质金属蛋白酶9(MMP-9)的表达,明胶酶谱分析MMP-9活性,TranswellTM实验检测vimentin对膀胱癌细胞侵袭能力的影响.结果 酶切鉴定有预期目的片段,测序证实重组质粒pcDNA3.1-vimentin构建成功.Westem blot法检测提示pcDNA3.1-vimentin转染SW780细胞后,vimentin 与MMP-9表达水平均上调.明胶酶谱表明vimentin能够显著促进SW780细胞MMP-9的分泌.TranswellTM实验提示vimentin能显著增强SW780细胞的侵袭转移能力.结论 成功构建了pcDNA3.1-vimentin真核表达载体并将其成功转染膀胱癌SW780细胞.Vimentin上调能够增强SW780细胞的侵袭能力,可能与上调MMP-9的表达及促进MMP-9分泌有关.
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慢病毒介导的CARMA1稳定沉默抑制K562细胞的侵袭和转移能力
目的 研究RNAi技术稳定沉默caspase募集结构域膜相关鸟苷酸激酶蛋白1(CARMA1)基因后对K562细胞增殖、克隆形成和侵袭转移的影响.方法 应用慢病毒介导的RNAi技术构建稳定沉默CARMA1基因的K562细胞,反转录PCR和Western blot法分别检测CARMA1 mRNA和蛋白的抑制情况.应用台盼蓝拒染法分析细胞增殖情况,克隆形成实验观察细胞克隆形成,TranswellTM实验(含Matrigel或不含Matrgel)检测体外迁移与侵袭能力的改变.反转录PCR和Western blot技术分析相关信号通路分子的改变,并探讨可能机制.结果 成功构建6株细胞株:其中1株为阴性对照(K562/sh-eGFP),另5株为CARMA1基因沉默的细胞株.K562/shCARMA 1-93对CARMA1的抑制效果好,利用该模型进行后续研究.台盼蓝拒染法和克隆形成实验表明,K562/shCARMA 1-93的生长和克隆形成能力受到明显抑制(P＜0.01).与空白对照K562和阴性对照K562/sh-eGFP相比,细胞生长抑制率分别为29.3％和28.6％;克隆形成抑制率分别为37.6％和34.1％.体外迁移和侵袭转移实验证实,与对照组相比,K562/shCARMA1-93穿膜细胞数明显减少,有统计学差异(P＜0.01).CARMA1受抑制后,信号通路分子核转录因子-κB(NF-κB)及早期生长反应基因1(EGR1)的表达也随之下降.结论 CARMA1的稳定沉默会抑制K562细胞的增殖、克隆形成和侵袭转移,这可能与NF-κB、JNK/EGR-1信号通路受抑制有关.
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雷公藤多苷降低糖尿病肾病大鼠炎性细胞因子的表达
目的 观察雷公藤多苷(TWP)对糖尿病肾病(DN)大鼠核因子κB(NF-κB)、C-C型趋化因子配体5(CCL5)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素6(IL-6)等炎性细胞因子表达的影响.方法 链脲佐菌素(STZ)腹腔注射建立DN大鼠模型.动物随机分为正常组、模型组、1.8 g/kg/d TWP治疗组.用药8周末,计算肾脏指数(KI)、全自动生化分析仪检测大鼠血糖(BG)、糖化血红蛋白(HbAlc)、血肌酐(Scr)、血尿素氮(BUN)等生化指标.ELISA检测大鼠血清超敏C反应蛋白(hs-CRP)和肾匀浆IL-6、TNF-α和CCL5的含量;HE染色观察大鼠肾脏病理学改变;免疫组织化学染色检测大鼠肾组织NF-κB的表达.结果 与模型组相比,TWP可改善DN大鼠一般状况;明显降低DN大鼠空腹BG、HbAlc、KI、BUN及Scr水平,增加DN大鼠体质量(P＜0.01);与模型组比较,TWP明显降低DN大鼠血清hs-CRP水平及肾匀浆中IL-6、TNF-α和CCL5的水平,明显下调DN大鼠肾组织NF-κB的表达(P＜0.01),经TWP治疗后DN大鼠肾脏病理变化减轻.结论 TWP可降低糖尿病大鼠血清及肾脏炎性细胞因子表达,减轻肾脏病变.
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胆固醇诱导人血管平滑肌细胞表型转化
目的 观察胆固醇对人血管平滑肌细胞(VSMC)表型转化的影响.方法 体外培养人血管平滑肌细胞株,分别用(12.5、25.0、50.0)mg/L浓度的胆固醇作用细胞48 h;50.0 mg/L的胆固醇分别作用细胞24、48、72 h.采用实时定量PCR检测VSMC中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)及平滑肌22α(SM22α)mRNA的表达;采用Western blot法检测胆固醇对VSMC中α-SMA、SM22α及单核细胞趋化蛋白-1诱导蛋白(MCPIP)表达的影响;CCK-8法检测VSMC增殖.结果 (12.5、25.0、50.0) mg/L胆固醇作用VSMC 48 h较对照组相比,α-SMA及SM22α mRNA水平及蛋白水平表达均降低(P＜0.05),50.0 mg/L胆固醇作用后表达水平低,存在剂量依赖效应;用50.0 mg/L胆固醇分别作用VSMC 48、72 h后,α-SMA及SM22α mRNA及蛋白表达与对照组相比均降低(P＜0.05).与对照组相比,胆固醇作用均明显促进VSMC增殖(P＜0.05).50.0 mg/L胆固醇作用VSMC48 h可诱导MCPIP蛋白表达增加.结论 胆固醇作用VSMC后可降低收缩型标志蛋白α-SMA及SM22α的表达、促进VSMC增殖,提示胆固醇可诱导VSMC表型转化.
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Wortmannin和U0126抑制胰岛素对大鼠骨骼肌成肌细胞的促分化作用
目的 观察wortmannin和U0126抑制胰岛素对大鼠成肌细胞向成熟肌细胞分化作用,探索定向诱导肌分化的途径及其分子机制.方法 分离和培养大鼠骨骼肌成肌细胞,用含不同浓度胰岛素的DMEM培养基培养,收集细胞,在相差显微镜下观察形态变化,并通过免疫细胞化学方法和Western blot法检测生肌素(myogenin)表达.用磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)特异性抑制剂wortmannin和MEK特异性抑制剂U0126干预后,观察胰岛素对骨骼肌成肌细胞分化的影响.结果 胰岛素能明显促进骨骼肌成肌细胞形成肌小管,诱导2d开始有肌管形成并逐渐增多到7d达到高峰;胰岛素促进骨骼肌成肌细胞的生肌素阳性细胞核和生肌素蛋白表达增多,而wortmannin和U0126能下调胰岛素的这种作用.结论 Wortmannin和U0126可阻断胰岛素促进骨骼肌成肌细胞向成熟肌细胞分化,使肌管生成减少,生肌素表达下调.
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肝素结合血凝素通过抑制A549细胞的自噬作用增强耻垢分枝杆菌的感染能力
目的 将肝素结合血凝素(HBHA)重组表达于耻垢分枝杆菌(MS),鉴定其对A549细胞自噬作用的影响.方法 将HBHA克隆于穿梭表达质粒pMV261,构建HBHA重组载体,电转化至MS;感染A549细胞,Western blot法鉴定A549细胞微管相关蛋白轻链3(LC3)的表达情况,并检测LC3Ⅱ/LC3 Ⅰ比值的变化可估计自噬的水平;利用单丹磺酰尸胺(MDC)将自噬体染色后,激光共聚焦观察细胞内自噬体变化的情况;通过MS、rMS-HBHA感染A549细胞18 h,计算胞内活菌数,鉴定感染状况.结果 rMS-HBHA经42℃热诱导成功表达HBHA蛋白;相对野生型MS,重组表达HBHA蛋白的MS (rMS-HBHA)可以显著抑制A549细胞中的LC3 Ⅰ和LC3Ⅱ的表达,rMS-HBHA组的LC3Ⅱ/LC3 Ⅰ比值为0.625显著低于MS组2.025,表明rMS-HBHA组自噬体形成受到抑制;并且rMS-HBHA感染A549细胞18h后胞内活菌为6.3×106,明显高于MS组1×10s.结论 外源性HBHA可以通过抑制A549细胞的自噬作用增强MS的感染能力.
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PPAR-γ激动剂抑制IFN-γ和TNF-α诱导的肾小管上皮细胞趋化因子表达
目的 探讨过氧化物酶体增殖物激活受体γ (PPAR-γ)激动剂15-脱氧-12,14-前列腺素J2(15 d-PGJ2)对IFN-γ和TNF-α共同诱导HK-2肾小管上皮细胞趋化因子表达的影响.方法 在IFN-γ和TNF-α联合刺激HK-2细胞的同时加入不同浓度的15d-PGJ2共同作用48 h,用实时定量PCR(qRT-PCR)和ELISA分别检测CXCL9、CXCL10和CXCL11的mRNA表达和蛋白分泌水平.结果 在HK-2细胞中,IFN-γ和TNF-α联合刺激能够诱导趋化因子CXCL9、CXCL10、CXCL11的mRNA表达和蛋白分泌;经不同浓度的15d-PGJ2干预后,CXCL9、CXCL10、CXCL11的mRNA表达和蛋白分泌均被抑制,在15d-PGJ2浓度为2.0 ng/mL时,15d-PGJ2对CXCL9、CXCL10、CXCL11的mRNA和蛋白分泌的影响大,与IFN-γ联合TNF-α组(15d-PGJ2浓度为0 ng/mL)相比,CXCL9、CXCL10、CXCL11的mRNA分别下降76.8％、78.7％和81.9％,培养上清中趋化因子蛋白分泌分别下降66.9％、86.6％和39.9％,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 PPAR-γ激动剂可抑制IFN-γ和TNF-α联合作用诱导的肾小管上皮细胞趋化因子CXCL9、CXCL10和CXCL11表达.
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慢性阻塞性肺疾病的炎症反应与Foxp3、T-bet、GATA3表达失衡有关
目的 观察慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠调节性T细胞(Treg)、叉头状转录因子3(Foxp3)、T-bet、GATA连接蛋白3(GATA3)的变化.方法 将30只大鼠随机分为对照组、模型组,每组15只.模型组大鼠采用烟熏加脂多糖(LPS)气管滴入方法建立COPD模型.模型复制成功第28天,采用ELISA检测大鼠血清、支气管肺泡灌洗液(BALF)白介素4(IL-4)、γ干扰素(IFN-γ)水平,流式细胞术检测外周血Treg表达,分别采用逆转录PCR及Western blot法检测肺组织Foxp3、T-bet、GATA3 mRNA和蛋白表达.结果 模型组大鼠肺泡腔及肺间质内大量炎性细胞浸润,肺组织结构破坏.与对照组比较,模型组大鼠血清IFN-γ表达升高(P＜0.01),IL-4、CD4+ CD25+ Treg、CD4+ CD25+ Foxp3+ Treg降低(P＜0.05);模型组Foxp3、GATA-3mRNA、蛋白表达降低,T-bet mRNA和蛋白升高(P＜0.01).相关性分析显示,T-bet、GATA-3、Foxp3基因和蛋白表达与IL-4、IFN-γ分泌相关(P＜0.05).结论 COPD炎症反应与T-bet、GATA-3、Foxp3表达失衡有一定关系.
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肺炎衣原体持续性感染与原发性IgA肾病相关
目的 探讨肺炎衣原体(CP)感染与IgA肾病(IgAN)的相关性.方法 选取70例原发性IgAN病例为研究对象,同时以70例健康献血员血清和12例意外死亡者的尸检肾组织为对照.应用间接免疫荧光法检测血清CP IgG和CP IgA抗体滴度;应用荧光定量PCR检测肾组织CP DNA.分析CP感染和肾组织CP DNA阳性与IgAN临床表现和肾组织病理改变的关系.结果 IgAN组CP持续感染率高于健康献血组,差异有统计学意义(P＜0.01).IgAN组内不同临床类型的CP急性感染、既往感染、未感染构成比无显著性差异(P＞0.05).大量蛋白尿者、持续性肾功能不全的CP持续感染高于非大量蛋白尿者(P＜0.05).CP持续性感染患者肾小球病理评分、肾小管间质评分高于非持续性感染患者(P＜0.05).CP持续性感染患者肾脏病理病变较非持续性感染患者明显而严重.大量蛋白尿者和持续性肾功能不全型的CP DNA阳性率高于临床类型表现为非大量蛋白尿者(P＞0.05).肾组织CP DNA阳性患者肾小球病理评分(P＜0.05)、肾小管间质病理评分(P＜0.01)高于阴性患者.肾组织CP DNA阳性患者病理病变较阴性患者明显而严重.CP持续性感染和肾组织CP DNA阳性相关(P＜0.01).结论 IgAN发病与CP持续感染相关,而与CP既往感染、急性感染不明显.
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肿瘤患者自体CIK细胞输注增强再次制备时CD3+CD56+细胞的体外扩增能力
目的 探讨自体细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK细胞)输注治疗对再次制备CIK细胞亚群的构成和活性的影响.方法 选取经2个疗程CIK细胞治疗的患者201例,分为CIK治疗后90d内(含90d)制备检测组和大于90d制备检测组.台盼蓝拒染法检测细胞增殖;流式细胞术分析CD3、CD4、CD8,CD56和NKG2D受体表达情况的变化;乳酸脱氢酶释放法检测细胞毒活性.结果CIK细胞输注治疗后90d内再次制备CIK细胞的CD3+ CD56a细胞百分率(16.7±9.1)％,与CIK细胞输注治疗前相比(13.5±8.6)％,显著增加(P＜0.01),而且,表面受体NKG2D表达水平((84.1±10.8)％,也比CIK细胞输注治疗前明显增高((81.1±14.8)％)(P＜0.05).与此相反,CIK细胞输注治疗后导致再次制备时,CIK细胞群体中CD3a CD4a百分率(15.2±9.7)％,与CIK输注治疗前(17.6±12.5)％相比,显著下降(P＜0.01).值得注意的是,CIK细胞输注治疗后超过90 d再次制备CIK细胞的CD3a CD56a细胞分布和NKG2D受体表达,与CIK细胞输注治疗前相比均无明显变化,但CIK细胞输注治疗后仍可导致再次制备时,CIK细胞群体中CD3a CD4a百分率(14.5±9.4)％,与CIK细胞输注治疗前相比(18.2±12.9)％,明显下降(P＜0.01).另外,2组再次制备CIK细胞的总数和体外细胞杀伤活性无明显差异.结论CIK细胞输注治疗有助于提高肿瘤患者CD3a CD56a细胞前体细胞,在相同CIK细胞培养制备体系中增殖、定向分化和活化的能力,该作用持续时间不超过90d,因此,CIK细胞治疗疗程间隔时间不应超过90d.
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髓系来源抑制细胞在胃癌患者外周血和肿瘤组织中的数量及其临床意义
目的 观察髓系来源抑制细胞(MDSC)在胃癌患者外周血的数量和肿瘤组织、癌旁组织的表达,探讨MDSC的数量与胃癌患者临床病理特征间的关系.方法 收集62例胃癌患者外周血和其中12例患者的新鲜肿瘤组织和癌旁组织以及20份健康志愿者外周血,流式细胞仪分析HLA-DR-CD33+ CD11b+MDSC的数量,采用One-way ANOVA和Mann-Whitney U检验以及t检验分析胃癌患者外周血MDSC的数量与肿瘤的浸润深度、分化程度、患者TNM分期和淋巴结转移的关系.结果 和健康志愿者相比,初诊胃癌患者外周血MDSC数量增加(P＜0.01);MDSC在胃癌患者外周血的数量与肿瘤的浸润深度、分化程度、患者TNM分期和淋巴结转移显著相关(P＜0.05);MDSC在同一病人胃癌组织中的表达明显高于癌旁组织;复发/转移组患者外周血MDSC的数量明显高于无复发/转移患者(P＜0.05);胃癌患者外周血HLA-DR-CD33+ CD11b+MDSC高表达负性协同刺激分子T细胞免疫球蛋白黏蛋白分子3(Tim-3).结论 MDSC在胃癌患者外周血的数量与肿瘤恶性程度及复发转移密切相关.
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血浆可溶型B7-H3可作为乙型肝炎病毒相关性肝癌辅助诊断标志物
目的 研究血浆中可溶型B7-H3(sB7-H3)与乙型肝炎病毒相关性肝癌(HBV-HCC)的关系.方法选择在解放军第302医院住院治疗的HBV-HCC患者23例及健康体检者(HC) 15例,采用ELISA检测外周血浆中sB7-H3含量;设计sB7-H3基因特异性引物,采用相对实时定量PCR(qRT-PCR)方法检测外周血单个核细胞(PBMC)、癌和癌旁组织中sB7-H3 mRNA的表达;采用免疫组织化学染色检测癌和癌旁组织中的膜型B7-H3(mB7-H3)表达.结果HBV-HCC患者血浆中sB7-H3含量显著高于健康对照组(P＜0.05),但HCC患者和健康对照组PBMC中sB7-H3的mRNA表达水平无显著差异(P＞0.05);而肝癌切除术后HBV-HCC患者血浆中sB7-H3含量显著下降(P＜0.05),同时HBV-HCC患者癌和癌旁组织中表达的sB7-H3 mRNA比其PBMC显著升高,分别可达到PBMC中sB7-H3 mRNA表达量的60倍和1 800倍;癌旁组织中的sB7-H3 mRNA水平高于自身癌组织近30倍;癌旁组织中mB7-H3表达显著高于癌组织.结论 肝癌及癌旁组织是外周血中sB7-H3的主要来源之一,sB7-H3可作为HBV-HCC的辅助诊断标志物.
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慢性荨麻疹患者外周血单个核细胞Toll样受体和DC-SIGN的检测和分析
目的 检测慢性荨麻疹(CU)患者外周血单个核细胞(PBMC) Toll样受体2(TLR2)、TLR7、TLR9与树突状细胞特异性细胞间黏附分子-3-结合非整合素分子(DC-SIGN)的表达.方法 分离CU患者20例与正常对照组20例外周血PBMC,部分细胞提取RNA,采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应检测TLR2、TLR7、TLR9和DC-SIGN mRNA表达,采用流式细胞术检测剩余PBMC中TLR2、TLR7、TLR9和DC-SIGN的蛋白表达.结果 CU患者PBMC的DC-SIGN mRNA表达明显低于正常对照组,差异具有统计学意义(P＜0.01).CU患者PBMC TLR2蛋白表达高于正常对照组(P＜0.05),DC-SIGN蛋白表达低于正常对照组(P＜0.05).结论 CU患者PBMC的DC-SIGN表达降低,TLR2蛋白表达增强.
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白念珠菌感染特异性Csa2蛋白双抗体夹心ELISA体系的建立与评价
目的 以白念珠菌Csa2蛋白为靶标,建立双抗体夹心ELISA检测体系,评价该方法的检测灵敏度和特异性.方法 构建pPIC9K-Csa2重组表达载体,电转化毕赤酵母GS115,甲醇诱导表达、纯化重组蛋白rCsa2.rCsa2蛋白分别免疫新西兰大白兔和豚鼠制备免疫血清.以纯化兔多抗和豚鼠抗血清配对,利用棋盘滴定法,确定佳实验条件,建立双抗体夹心EHSA检测系统.检测rCsa2和白念珠菌不同培养时间的上清,确定检测方法的灵敏度;检测其他3种念珠菌、5种曲霉、新型隐球菌和马尔尼菲青霉的培养上清,评价检测方法的特异性.结果 成功构建表达载体并获得真核表达重组蛋白rCsa2,经SDS-PAGE鉴定相对分子质量(Mr)为13 300,符合预期值;Westem blot法证实该蛋白可与特异性抗体结合.免疫动物获得高效价免疫血清,并以此成功建立双抗体夹心ELISA,可检测rCsa2蛋白的灵敏度约为240 pg/mL,并早可检测到培养18 h的白念珠菌培养上清,与其他10种临床常见真菌的培养上清无交叉反应.结论 建立了有较高的检测灵敏度和特异性的Csa2的双抗体夹心ELISA,为区别诊断白念珠菌感染提供新的方法.
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TLR2和TLR4相关疾病与药物的研究进展
Toll样受体(TLR)家族的TLR2和TLR4在天然免疫和炎症反应中起到重要作用,有利于机体抵抗病原体感染或组织损伤,但是过度的免疫反应也会带来负面影响,与心血管疾病等多种免疫过度相关疾病的发生密切相关.因此,将TLR2、TLR4作为这些疾病防治和药物开发的潜在靶点,研发TLR2、TLR4拮抗剂、对TLR2、TLR4进行负调控成为近年来的热点之一.本文重点对TLR2、TLR4相关的心血管疾病及TLR2、TLR4拮抗剂研发现状进行回顾与总结.
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PD-1/PD-L1参与肿瘤免疫逃逸的研究进展
程序性死亡分子1及其配体(PD-1/PD-L1)是一对负性免疫共刺激分子,正常情况下,组织细胞表面的PD-L1与淋巴细胞表面的PD-1结合后,可抑制淋巴细胞功能,诱导活化的淋巴细胞凋亡,从而在自身免疫耐受及防止自身免疫性疾病中发挥重要作用.多种肿瘤细胞表面也表达PD-L1,肿瘤细胞表达的PD-L1,可与肿瘤浸润淋巴细胞表面的PD-1分子结合,抑制淋巴细胞的功能及细胞因子的释放,并诱导淋巴细胞凋亡,从而抵抗淋巴细胞的杀伤作用,终导致肿瘤发生免疫逃逸.
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NOD1/2介导的信号通路及其抗病原微生物免疫应答的研究进展
NOD1/2蛋白为胞质内的模式识别受体,识别进入胞内的细菌胞壁及其降解产物,介导NF-κB和丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号途径.NOD1受体还通过干扰素刺激基因因子3(ISGF3)信号途径诱导产生l型干扰素,NOD2受体能识别ssRNA和病毒基因组ssRNA,通过线粒体抗病毒信号蛋白(MAV)信号途径而激活干扰素调节因子3(IRF3).它们分别参与了抗细菌、抗病毒、抗寄生虫等病原微生物免疫应答.对NOD1和NOD2受体的进一步认识,为研究相关病原感染和慢性炎症性疾病的防治措施提供了新的思路.
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桥本甲状腺炎免疫相关机制的研究进展
桥本甲状腺炎(HT)是一种器官特异性自身免疫性疾病,发病的具体免疫机制尚未阐明,但相关研究表明HT患者的T细胞和NK细胞数量和功能存在异常.辅助性T细胞和调节性T细胞(Treg)是T细胞的两个重要亚群,前者又包括Thl、Th2、Thl7和滤泡辅助性T细胞(Tfh)等细胞.Thl/Th2比例失衡可诱导异常免疫应答;Thl7细胞分泌IL-17直接促进甲状腺组织炎性反应损伤甲状腺细胞;Tfh细胞通过分泌IL-21调节B细胞功能,诱导机体特异性抗体的产生;功能异常Treg不能有效抑制自身免疫反应的发生;CD4/CD8比例异常可致免疫功能紊乱;NK细胞的免疫调节异常可影响后续免疫反应的发生.以上免疫机制均发现与HT发生有关,本文将分别对这两类T细胞亚群及NK细胞在HT发病中的作用进行综述.
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γδT细胞与呼吸道合胞病毒感染后支气管哮喘的研究进展
根据T细胞受体(TCR)不同T淋巴细胞分为α3T淋巴细胞和γδT淋巴细胞,γδT细胞在支气管哮喘的发病中起着重要作用.呼吸道合胞病毒(RSV)是一种单股负链非节段性的RNA病毒,其感染与哮喘的发病和加重存在明显的相关性.本文综述了γδT细胞与RSV感染后支气管哮喘的关系.
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肺微血管内皮细胞原代培养方法的建立
目的 建立大鼠肺微血管内皮细胞原代培养方法,观察细胞生长状态并鉴定细胞性质.方法 4～5周龄大鼠随机分成3组,无菌状态下剥除胸膜,将肺组织边缘剪成1 mm3的大小,贴入一次性培养瓶,分别用含肝素钠的DMEM完全培养液、RPMI1640完全培养液以及含原代内皮细胞培养特制添加剂的完全培养液培养,在倒置显微镜下观察细胞生长和形态,免疫荧光组织化学染色观察细胞CD31的表达.结果 与2组对照组相比,采用含原代内皮细胞培养特制添加剂的完全培养液培养,获得的肺微血管内皮细胞数量多,纯度高.内皮细胞于24 h迁移出肺组织块,14 d左右汇合,呈多角形,以铺路石样镶嵌状排列生长.传代细胞呈长梭形,生长迅速,具有自发形成血管的倾向.细胞为CD31免疫反应阳性,证实其为内皮细胞.结论 采用组织块贴壁法,选择原代内皮细胞培养特制添加剂以及优化分离过程,可以获得高纯度原代大鼠肺微血管内皮细胞.
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一种高效分离和培养人脐动脉内皮细胞方法的建立
目的 探索和建立一种高效的人脐动脉内皮细胞分离和培养方法.方法 用PBS灌注清洗脐动脉后,以0.1 g/L1型胶原酶消化脐动脉内膜,收集、离心消化液,重悬细胞在特定培养基中培养.观察其形态特点,同时用CD31免疫荧光染色和内皮细胞管状结构形成实验对所得细胞进行鉴定.结果 倒置相差显微镜下观察所获得的细胞为单层生长,呈现铺路石样形态,并且大量表达内皮细胞特异性膜蛋白CD31,同时能够形成明显的管状结构.结论 本研究建立了操作简单、快速、高效分离人脐动脉内皮细胞的方法,所分离得到的内皮细胞纯度高、成活率高.
| 年 | 期数 |
| 2018 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2017 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2016 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2015 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2014 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2013 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2012 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2011 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2010 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2009 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2008 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2007 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2006 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2005 | 01 02 03 04 05 06 z1 |
| 2004 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2003 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2002 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2001 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2000 | 01 02 03 04 05 06 |
| 1999 | 01 02 |
| 1995 | 01 02 03 |
| 1994 | 01 02 |
| 1993 | 01 02 03 04 |
| 1992 | 01 02 03 04 |
| 1991 | 01 02 03 04 |
| 1990 | 01 02 |
| 1989 | 01 02 03 04 |
