细胞与分子免疫学杂志
Chinese Journal of Cellular and Molecular Immunology 세포여분자면역학잡지
- 主管单位： 中国免疫学会；第四军医大学
- 主办单位： 陕西省免疫学会,中国免疫学会
- 影响因子： 0.81
- 审稿时间： 1-3个月
- 国际刊号： 1007-8738
- 国内刊号： 61-1304/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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反义端粒酶RNA对SMMC7721细胞P16、P21表达的增强作用
目的观察反义端粒酶RNA对SMMC7721细胞周期的影响,检测P16和P21的表达,探讨端粒酶与细胞周期调控间的关系及反义端粒酶RNA在肝癌基因治疗中的意义.方法经脂质体介导,将反义端粒酶RNA真核表达载体pBBS212-hTR导人SMMC7721细胞中.细胞克隆转移扩大培养后,采用流式细胞仪、TRAP-PCR-ELISA及免疫组化技术,结合图像分析,在检测SMMC7721/pBBS212-hTR细胞端粒酶活性的同时,检测P16和P21的表达.结果与对照组相比较,反义端粒酶RNA在抑制SMMC7721细胞端粒酶活性的同时,P16和P21蛋白的表达水平显著增高.结论转染反义端粒酶RNA在封闭细胞端粒酶活性表达的同时,伴发1P21与P16表达水平的升高.本实验研究为探讨肝癌发病机制及治疗提供了一定的依据.
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培养人RPE细胞核因子κB的表达及地塞米松对其表达的影响
目的观察培养人视网膜色素上皮细胞(RPE细胞)核因子κB(Nucleartranscriptionfactor-κB,NF-κB)的表达,及地塞米松对其表达的影响.方法培养人RPE细胞接种于24孔板,随机分为阴性对照组、脂多糖(Lipolysaccharide,LPS)刺激组和地塞米松及LPS作用组,做免疫组化ABC法染色,显微镜下观察.结果对照组NF-κB在培养RPE细胞胞浆中表达,LPS刺激后转入胞核表达,地塞米松作用后,再以LPS刺激,RPE细胞核及细胞浆内NF-κB的表达减弱,胞核中表达水平减弱明显,且减弱的程度与地塞米松浓度有关.结论LPS能够激活RPE细胞的NF-κB使其向核内转入,一定浓度的地塞米松对RPE细胞的NF-κB表达及向胞核转入有抑制作用.
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人血管内皮生长因子受体Flt-I胞外配体结合域的筛选及其结构分析
目的应用酵母双杂交系统筛选人血管内皮生长因子受体Flt-1胞外小配体结合域.方法采用PCR技术,从人胎盘cDNA文库扩增出4个截短的Flt-1 cDNA,分别含胞外第2、1-2、2-3和1-3个loop,构建酵母双杂交系统融合表达质粒,并将pGBT9/hVEGF165与pGAD424/Flt-ls两两配对转化酵母菌SFY526.采用滤纸法和液体培养法对阳性克隆进行β-半乳糖苷酶活性分析.结果Flt-1胞外loop2-3与loop1-3的配体结合能力相差不大,loop1-2的结合力较弱,单独第2个loop无配体结合能力.结论利用酵母双杂交系统,筛选出了Flt-1胞外小配体结合域-2-3loop,这对研制分子量更小、安全性更高的可溶性Flt-1片段,开发其在肿瘤、糖尿病性视网膜病变等血管生成相关疾病基因治疗中的应用具有重要的指导意义.
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CXC趋化因子CRG-2真核表达载体的构建及表达
CRG-2属于趋化因子家嗾中的CXC亚族,人源类似物称为IP-10,其受体CXCR3主要分布于激活的T细胞[1].趋化因子是一类在炎性因子刺激下表达的小分子分泌蛋白,参与淋巴细胞的定向迁移、渗出与激活,在伤口愈合及炎症中有重要作用[2].初认为,趋化因子主要对不同的淋巴细胞亚群有作用,随后发现其也参与其它的生理及病理过程,如趋化因子受体可作为HIV感染的辅助受体参与艾滋病的发病,以及血管生成的调节等[3].为探讨趋化因子作为候选分子在肿瘤抑制疗法中的应用,我们选择了对T细胞有特异性趋化作用的鼠CRG-2分子,构建真核表达载体,转染了Lewis肺癌细胞系.
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IL-10的表达和调控在角质形成细胞诱导免疫抑制中的作用
目的探讨白细胞介素10(IL-10)的表达和调控,在角质形成细胞诱导免疫抑制作用中的意义.方法从体外建立的混合表皮淋巴细胞培养体系(MELC)中,分离贴壁的角质形成细胞,并分析IL-10的表达来源.我们将抗IL-10单抗引入培养体系中,观察其对角质形成细胞所诱导的免疫抑制的影响.结果在混合培养体系中,IL-10主要来源于角质形成细胞.抗IL-10单抗可有效地阻断角质形成细胞所诱导的免疫抑制效应.结论IL-10的表达在角质形成细胞所诱导的免疫抑制效应中可能起重要作用.
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桥本甲状腺炎中细胞凋亡与增殖关系的实验研究
目的探讨桥本甲状腺炎(HT)中Fas、FasL与增殖细胞核抗原(PCNA)的关系.方法以非毒性甲状腺肿(NTG)的标本为对照,采用TUNEL及免疫组织化学双标记法,分别检测16例HT患者甲状腺标本中细胞凋亡水平及PCNA、Fas、FasL的表达及分布.结果凋亡率(AR)在NTG组为(0.9±0.64)%,HT组为(33.92±14.69)%;增殖率(PR)分别为(4.23±2.36)%和(8.45±3.61)%.AR、PR在HT组均显著高于NTG组(P＜0.01).HT中部分甲状腺滤泡细胞PCNA与Fas、FasL共表达;浸润淋巴细胞PCNA高表达,Fas/FasL弱或无表达.结论HT中甲状腺滤泡细胞凋亡与增殖活动均活跃,凋亡水平增高更为显著;浸润淋巴细胞增殖活跃,凋亡少见.其凋亡和增殖的失平衡可能是HT病理改变的主要机制之一.
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Ⅴ型腺病毒纤毛基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达
目的克隆腺病毒纤毛基因,为构建腺病毒靶向性载体创造条件.方法应用限制性内切酶酶切技术,酶切腺病毒骨架质粒pAdEasy-1,经多次亚克隆后完成克隆纤毛基因,并构建纤毛基因原核表达载体.用IPTG诱导纤毛蛋白的表达,再用SDS-PAGE和Western blot对其进行分析.结果成功地克隆纤毛基因.质粒pBS/Fiber经限制性内切酶酶切鉴定及测序证实了其正确性.经质粒pQE/Fiber转化的细菌,在IPTG诱导下可表达一种新的蛋白,并于5h表达量高.经Western blot证实,在变性条件下表达蛋白的Mr为62 000,在非变性条件下为186 000.结论已克隆的纤毛基因能在大肠杆菌中表达,并具有三聚体结构,可用于腺病毒载体靶向性构建.
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HLA-A2相关肝癌抗原肽的初步研究
目的寻找肝癌细胞表达的肿瘤抗原肽.方法应用0.2mol/Lph3.0柠檬酸缓冲液酸洗肝癌细胞系HHCC,经Sephadex G-25过滤及反向高效液相色谱分离纯化,获得可与HLA-Ⅰ类分子结合的不同组分短肽.将其与抗原加工缺陷的HLA-A2+T2细胞反应,进行肿瘤细胞特异性表位测定,同时进行CTL杀伤鉴定.结果获得4个可与HLA-A2结合的组分,其中2个可以激发较强的CTL杀伤反应.结论肝癌细胞系HHCC中存在能够激发CTL特异性反应的肿瘤抗原肽,并证实上述寻找肿瘤抗原肽的技术路线具有可行性.
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人乳头瘤病毒16型E5转化基因的克隆及原核表达
目的建立人乳头瘤病毒16型E5基因的无性繁殖系,为进一步研究其致癌机理作准备.方法用PCR技术从HPV16质粒DNA中扩增出E5基因序列,连接到pGEM-T载体,将阳性的重组pGEM-T用BamH Ⅰ/EcoRⅠ双酶切并回收目的片段连接到原核表达载体pGEX-2T,转化DH5α菌株.取工程菌,IPTG诱导表达,SDS-PAGE电泳鉴定.结果①经PCR、测序和双酶切鉴定,认为HPV16E5正确插入上述表达载体,建立了该转化基因的无性繁殖系.②经IPTG诱导的pGEX-2T-E5质粒表达出约42KD的融合蛋白,分析含有约16KD HPV16 E5蛋白,与预期含HPV16 E5的融合蛋白分子量相符.结论①采用PCR克隆技术,扩增HPV16 E5转化基因目的片段,将其克隆到pGEM-T载体在国内首次建立了HPV16 E5转化基因的无性繁殖子.②成功构建HPV16 E5基因的原核表达质粒,并表达出GST-E5融合表达蛋白.
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分泌型重组TRAIL基因真核表达载体的构建及其凋亡效应
目的研究新型凋亡因子-TRAIL基因在肿瘤基因治疗中的作用.方法用RT-PCR法,从Balb/e小鼠脾脏的总RNA中扩增出编码凋亡诱导功能区的TRAIL cDNA片段,并克隆入pUC-T载体中.经DNA测序鉴定正确后,亚克隆入真核表达载体pSEC-hy-gromycin的免疫球蛋白κ链信号肽编码区的下游,形成含有κ链信号肽与TRAIL凋亡诱导功能区的融合基因,构建可分泌表达TRAIL的重组真核表达载体pSEC/TRAIL.该重组载体经阳离子脂质体转染入小鼠前胃癌细胞株MFC615中,以台盼蓝拒染法和Hoechst3258荧光染色法,观察重组TRAIL对肿瘤细胞的凋亡效应.结果TRAIL的cDNA克隆成功,构建了可高效分泌表达可溶性TRAIL的重组真核表达载体pSEC/TRAIL,该产物能显著促进MFC615肿瘤细胞凋亡.结论重组真核表达载体pSEC/TRAIL的成功构建,为研究肿瘤的基因治疗提供了理想的工具.
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人era基因酵母双杂交诱饵载体的构建及其激活作用的检测
era基因是细菌生存繁殖所必需的重要基因,与细胞周期和细胞分裂有关.era基因首先在大肠杆菌被发现,由于其编码的氨基酸序列与人及酵母的BAS蛋白有部分相似之处,故命名为E.coli RAS-like(era)基因[1].era基因不仅广泛存在于原核生物中,而且在真核生物(如蠕虫、小鼠和人)的组织中都发现有与细菌era高度同源的基因存在[2-4].人era基因的全长cDNA于1998年被克隆,与原核era基因具有很高的同源性.人ERA蛋白与大肠杆菌ERA蛋白的氨基酸序列有30%相同,两者的相似性为53%.人era基因的功能尚不清楚.我们拟采用酵母双杂交技术,克隆了人era结合蛋白基因,研究了人era与其结合蛋白的相互作用,以便对其功能的研究提供依据.
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SPIDDM家系一级亲属IGT患者NA、胰岛β细胞功能变化的研究
HLA-DQβ链第57位的非门冬氨酸(NA)或门冬氨酸(A)与l型糖尿病的易感性有关.国内外已有广泛报道,这些基因紧密连锁,使各单倍型由亲代完整传递到子代[1].现已明确,糖尿病(DM)家族成员发生糖尿病者远高于非DM家族成员,特别是DM患者一级亲属,在发生DM前有明显的β细胞功能减退[2].糖耐量低减(IGT)是糖尿病的前期表现,本研究通过对IGT患者的HLA-DQβ链第57位NA或A,以及β细胞功能变化的研究,进一步认识成人缓慢进展型l型糖尿病(Slowly pro-gressive IDDM,SPIDDM)家系一级亲属的IGT在糖尿病病程中的地位,这将有助于开展对糖尿病的预防研究[3].
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抑癌基因PTEN诱导人脑胶质瘤SHG-44细胞凋亡
目的研究外源性PTEN基因对人脑胶质瘤细胞系SHG-¨凋亡的影响,探讨PTEN基因抑制肿瘤细胞增殖的机制.方法以携有人PTEN基因的真核表达载体体外转染SHG-44细胞,筛选阳性转染的细胞克隆并扩增培养.以原位杂交和免疫组化染色法检测PTEN基因的表达.采用透射电镜、流式细胞仪和核DNA琼脂糖凝胶电泳,检测转染PTEN基因后SHG-44胶质瘤细胞的凋亡.观察导人人PTEN基因对SHG-44细胞裸鼠致瘤能力的影响.结果获得PTEN基因稳定转染的胶质瘤细胞SHG-44,并检测到PTEN基因和蛋白的表达.透射电镜下可见转染PTEN基因后细胞核染色质浓缩边集、胞浆浓缩、核碎裂及凋亡小体形成等典型的凋亡表现.流式细胞仪显示,细胞周期从G1期到S期发生抑制,并在G1期峰前出现1个明显的凋亡峰(12.9%).细胞核DNA琼脂糖凝胶电泳显示凋亡细胞特有的梯状条带.转染空载体及未转染的SHG-44细胞未见明显的凋亡表现.转染PTEN基因后,SHG-44细胞对裸鼠致瘤能力明显降低.结论将外源性PTEN基因导入SHG-44肿瘤细胞后,可诱导细胞凋亡,这可能是PTEN基因抑制肿瘤细胞增殖的重要机制之一.
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正常足月胎盘和胎儿宫内生长迟缓胎盘中滋养细胞的凋亡及相关基因表达
目的比较正常足月胎盘与胎儿宫内生长迟缓胎盘(IUGR)中的滋养细胞凋亡指数,以及bcl-2和fas的表达,以探讨滋养细胞的凋亡与bcl-2和fas表达的关系.方法取正常足月胎盘组织和Ⅰ-UGR胎盘组织各5例,固定、石蜡包埋、切片,每组分别TUNEL法以及ABC法抗bcl-2和抗fas免疫组织化学染色.镜下计数滋养细胞的凋亡指数,并对bcl-2和fas的表达量进行显微图像分析.结果与正常足月胎盘相比,IUGR胎盘的凋亡指数显著增多(P＜0.01),bcl-2表达量显著减低(P＜0.01),而fas表达量无显著差异(p＞0.05).结论IUGR胎盘滋养细胞的凋亡指数明显增多可能与细胞bcl-2表达量减少有关,而不受fas表达量的影响.
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子宫内膜异位症患者γδ+T细胞及NK细胞的功能分析
目的分析子宫内膜异位症患者中γδ+T细胞和天然杀伤细胞(NK)功能的变化,以及探讨患者腹腔液对正常人γδ+T细胞和自然杀伤细胞(NK)功能的影响.方法采用免疫荧光细胞检测及细胞毒活性检测法,分析22例子宫内膜异位症患者外周血、腹腔液中γδ+T细胞及NK细胞的表型与功能.结果子宫内膜异位症(疾病组)患者外周血、腹腔液中CD56+细胞与正常对照组相比较无明显差异,而疾病组腹腔液中γδ+T细胞的百分率高于其外周血和正常对照组.疾病组腹腔液中的γδ+T细胞及NK细胞的功能低于外周血及正常对照组.疾病组的腹腔液对正常人外周血γδ+T细胞及NK细胞的功能具有负调节作用.结论子宫内膜异位症患者的γδ+T细胞及NK细胞的功能低下,处于被抑制状态,提示患者的腹腔液中,可能存在γδ+T细胞及NK细胞的功能抑制因子.
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类风湿性关节炎患者血浆中ET和CGRP的变化及意义
目的探讨内皮素(ET)及降钙素基因相关肽(CGRP)在类风湿性关节炎(RA)发生、发展过程中的作用.方法采用放射免疫分析法,对30例RA患者及20例正常对照组血浆中ET及CGRP的水平进行检测.结果RA患者血浆中ET的水平及ET/CGRP的比值明显升高,CGRP水平明显降低,与正常对照组相比较差异显著(P＜0.01).进一步分析表明,活动期RA患者及关节x线改变为Ⅲ～Ⅳ期的RA患者,血浆ET的水平及ET/CGRP的比值明显高于稳定期及关节改变为Ⅰ～Ⅱ期的RA患者;而血浆CGRP的水平明显低于后者(P＜0.01).结论RA患者体内存在明显地ET及CGRP的平衡失调,且与RA患者的病情严重程度密切相关,提示ET及CGRP参与了RA的发病过程.
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结直肠癌中血管内皮生长因子与p53表达关系的研究
血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growth fac-tor,VEGF)是一种血管内皮细胞特异的有丝分裂原,对血管的通透性也起重要作用.许多研究表明,肿瘤组织中VEGF的高表达和肿瘤的增殖、转移密切相关[1],但有关VEGF表达的调控机制仍未被彻底阐明,近一些实验表明,头颈部肿瘤、胃癌等肿瘤组织p53基因的突变与肿瘤细胞VEGF的表达有一定的相关性
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Doxycycline对PC-3细胞金属蛋白酶表达及生物学行为影响的意义
目的研究Doxycycline抑制雄性激素非依赖型前列腺癌细胞PC-3细胞金属蛋白酶蛋白酶的表达及其与体外侵袭转移能力的关系.方法以免疫组织化学方法和transwell小室法研究不同浓度的Doxycycline对PC-3中金属蛋白酶的表达的影响及对体外侵袭转移能力的影响.结果免疫组织化学方法检测结果表明Doxy-cycline可以抑制PC-3细胞对金属蛋白酶蛋白的表达,transwell小室法结果显示Doxycycline可以抑制PC-3的侵袭转移能力,且两者均具有浓度依赖性.结论Doxycycline可以抑制PC-3的侵袭及转移,与其抑制金属蛋白酶的表达有关.为Doxycycline治疗前列腺癌提供了实验依据.
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纯红细胞再生障碍和再生障碍性贫血的免疫抑制治疗
目的观察免疫抑制剂对纯红细胞再生障碍(PRCA)、重型再生障碍性贫血(SAA)与非重型再生障碍性贫血(NSAA)的治疗作用.方法采用小剂量环孢素A(3～5 mg/kg.d)治疗7例PRCA、4例SAA及4例NSAA,动态监测环孢素A的血药浓度.从外周血象的变化,来判断环孢素A的临床疗效.结果环孢素A治疗3个月后,除1例SAA外,其余14例患者的血红蛋白水平均有较大程度的提高.随着治疗时间的延长,7例SAA与NSAA的白细胞数、中性粒细胞绝对数及血小板数也呈逐渐上升趋势.结论环孢素A治疗PRCA、SAA及部分NSAA的近期效果良好.
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丙型肝炎高变区多肽的同源模建与抗原性研究
目的通过计算机同源模建,寻找丙型肝炎高变区中保护性多肽抗原表位.方法用计算机同源模建预测多肽的抗原性,然后用淋巴细胞转化试验验证其抗原性.结果同源模建与实验结果相一致.结论同源模建是一种高效寻找具有保护性的抗原多肽的经济快速的方法.
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单纯疱疹病毒Ⅰ型糖蛋白B胞浆区编码基因的原核表达、纯化及抗体制备
目的获得高纯度的重组单纯疱疹病毒Ⅰ型(HSV-1)糖蛋白B(gB)胞浆区蛋白并制备其特异性抗体.方法从感染HSV-1的BHK细胞中,提取总RNA,用RT-PCR特异性扩增HSV-1gB胞浆区编码基因,经双酶切后,克隆入表达载体pGEX4T-1中,进行融合表达.以纯化的重组蛋白免疫小鼠制备抗体,进行Western b1ot鉴定.结果用IPTG诱导后,表达出相对分子质量(Mr)约42 000的融合蛋白.用纯化的融合蛋白免疫小鼠制备的抗体滴度为1:400.结论获得重组HSV-1 gB胞浆区蛋白及其特异性抗体,为后续功能研究奠定了基础.
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两种不同基质的联合应用对体外分散培养神经元的促贴壁作用
随着神经生物学的飞速进展,神经细胞原代培养成为神经药理、病理生理及活性物质等方面研究的一个很好模型.为此,观察和分析神经元体外特性(神经元存活、突起生长以及神经元形态变化等)的一些指标也相继出现.由于分散的单一细胞培养能够比较理想地反映在体情况,现多选用这一方法进行体外调控和观察.但是培养中细胞脱落和细胞重聚现象又给结果分析造成一定困难,影响了实验结果的客观性.因此,需选择合适的细胞外基质来解决这些问题.常用的细胞外基质有胶原和多聚赖氨酸.胶原Ⅳ(collagenⅣ)是一种细胞支持物,它是细胞外基质的主要成分,可直接或间接参与细胞的附着[1];多聚赖氨酸(PLL)可通过改善培养皿的电荷状况及吸附培养液成分,促进细胞贴壁[2,3].然而两种方法各有利弊,本实验在常规的技术方法基础上,联合应用两种基质,旨在探索更适于分散单一神经元生长和存活的新方法.
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IgA肾病患者肾间质肥大细胞浸润的临床意义
目的研究肥大细胞(MC)在IgA肾病患者肾间质中的分布及与间质纤维化的关系.方法采用甲苯胺蓝特殊染色法及MC特异酶(即类胰蛋白酶,tryptase)免疫组化染色法,对12例IgA肾病患者肾活检标本中的MC进行了观察.结果(1)肾脏皮、髓质均可见到MC,多见于纤维化区域、血管周围、萎缩或扩张小管周围及肾小球周围.(2)系膜细胞的增殖程度与MC数无关,而随着IgA肾病患者MC的数增加,间质纤维化加重,差异显著(P＜0.025).结论IgA肾病患者的肾间质中存在MC,并与肾间质的纤维化有关.
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利用噬菌体呈现技术筛选单抗MG7 ScFv片段
动物源性全抗体应用于人体往往会引起人抗动物抗体反应及过敏反应[1],将其小型化可显著降低这些不良免疫反应.目前,主要依赖基因工程技术来实现动物源性抗体的小型化,其中近10年来发展和逐渐成熟起来的噬菌体呈现技术是抗体小型化的佳方式[2,3].单抗(mAb)MG7是我所研制的一种特异性较高的鼠抗人胃癌的mAb,其针对的抗原在临床病例中的阳性率达90%,因此将其用于胃癌的靶向治疗具有一定的临床前景[4].为降低MG7全抗体用于体内研究时出现的强抗原性,我们以MG7杂交瘤为材料,利用噬菌体呈现技术,制备并筛选了mAb MG7ScFv,为进一步加强该mAb的应用研究奠定了基础.
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人甘露糖结合凝集素(MBL)的纯化与兔抗人MBL抗血清的制备
甘露糖结合凝集素(mannose-bindinglectin,MBL)是哺乳动物C型凝集素超家族的成员,在机体抗感染免疫反应中处于第一线[1].MBL能特异性地识别多种病原微生物表面的多糖结构,进而激活补体系统和调理吞噬杀灭病原[2,3].同时,它也参与多种免疫性疾病的发生[4].目前,有关其与疾病的关系,以及其在疾病治疗和预防中作用的研究正方兴未艾,因而获取有活性的MBL蛋白,并制备其特异性抗体,已成为这些研究必不可少的工具.
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细胞因子对K562/ADM耐药细胞株耐药性的逆转作用
目的探讨细胞因子和抗Pgp单抗(mAb)对K562/ADM耐药细胞株耐药性的逆转作用.方法利用K562细胞的耐阿霉素细胞株K562/ADM,采用免疫细胞化学染色法和流式细胞术,分别检测mAb MRK-16及rhGM-CSF、rhM-CSF或TNF-α对其PgP表达的影响.结果将TNF-α(100 kU/L)、rhGM-CSF(10μg/L)或rhM-CSF(10μg/L)分别单独与K562/ADM细胞孵育48 h,Pgp表达细胞的阳性率分别为72.19%、80.04%和70.30%,与未经任何作用的K562/ADM细胞PgP表达的阳性率(77.02%)相比较,无明显差异(P＞0.05).mAb MRK-16(10 mg/L)以及mAb MRK-16分别与TNF-α或rhGM-CSF共同作用于K562/ADM细胞后,PgP表达的阳性率分别为67.49%、67.14%和70.56%,与K562/ADM细胞的表达率(77.02%)相比较,PgP的表达率虽有降低,但差别不明显(P＞0.05);只有rhM-GSF与mAb MRK-16共同作用(Pgp表达的阳性率为64.29%),可明显抑制K562/ADM细胞上Pgp的表达(P＜0.05).结论rhM-CSF加mAb MRk-16联合应用,具有逆转K562/ADM细胞MDR的作用.
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两株抗LPS-mAb交叉反应性的鉴定
由于LPS在众多不同种属细菌中抗原性的差异,用单一或几种细菌的LPS免疫小鼠所制备的抗LPS mAb存在着明显的交叉反应局限性,致使其在临床上LPS的检测和内毒素血症的治疗中应用受到限制.因而,研制具有广泛交叉反应性的抗LPS mAb就具有非常重要的意义.脂多糖高密度脂蛋白(LPS-HDL)复合物是LPS在体内代谢的一种中间产物,90%的LPS在体内可形成LPS-HDL,并具有与同样的致休克与DIC活性.因此,LPS-HDL与LPS可能具有共同的抗原决定簇,不同种属的LPS形成的LPS-HDL复合物,可能具有相同的主要抗原决定簇.mAb C3A2和H3D3是从E Coli J5中提取的LPS-HDL复合物作为抗原而筛选的抗LPS-mAbp[1].
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大容量人源天然噬菌体抗体文库的建立
随着噬菌体展示技术的发展,抗体库的构建方案日趋成熟,使人们可以从人源噬菌体抗体库中淘选到全人源化的基因工程抗体[1].为抗病毒、抗肿瘤以及自身免疫性疾病等的治疗,开辟了新的途径[2].
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抗人aFGF单克隆抗体抗原表位的筛选
成纤维细胞生长因子(fibroblast growth factor,FGF)是一类多功能的分子,现已发现其有多种同源结构形式,形成了一个生长因子的家族.酸性FGF(acidic FGF,aFGF),也称为FGF-1,是FGF家族中的主要成员,其结构与功能方面的研究受到广泛的关注[1,2].本室曾制备了抗人aFGF(haFGF)的单克隆抗体(mAb),并建立了检测haFGF的双抗体夹心测定方法[3,4].在此基础上,我们采用噬菌体多肽展示技术,筛选出抗haFGF mAb的抗原表位,为haFGF的免疫分析方法的进一步改进,以及对FGF结构与功能深入研究提供一些信息.
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抗HBsAg人IgG在CHO细胞中表达的影响因素探讨
目的探讨CHO-HB2细胞株表达抗HBsAg人IgG的影响因素.方法观察CHO-HB2细胞表达抗体的稳定性,不同培养基以及添加剂的效用,细胞接种密度和培养持续时间的选择,金属离子Zn2+诱导表达的作用,以及滚瓶的培养效果.结果CHO-HB2细胞的亚克隆株F4经液氮冻存半年多复苏后,在无氨甲喋呤(MTX)的培养基中连续传代第2个月,抗体表达量开始下降,5个月时接近用(MTX)施加选择压力前的基础水平.在培养基中添加多种氨基酸和维生素,并加入适量的Zn2+诱导金属硫蛋白启动子,可使表达量明显增加.滚瓶培养可进一步增加抗体的表达量,在无蛋白的无血清培养基中的表达量,从6.2mg/L提高到28mg/L.结论应及时用MTX对细胞株进行再加压筛选,以保持细胞稳定表达抗体的能力.通过优化培养条件,使用完全无蛋白的无血清培养基,可收到较好的效果,且有利于表达抗体的纯化.
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人源性抗汉坦病毒抗体VH基因噬菌体表面展示文库的构建与筛选
目的构建人抗汉坦病毒(HV)抗体重链可变区(VH)基因噬菌体表面展示文库,筛选人源性抗HV单克隆抗体(mAb).方法从HV吸附筛选的特异性人外周血B淋巴细胞中,用RT-PCR扩增VH基因,与噬菌粒pHEN1连接,构建VH基因噬菌体表面展示文库.经3轮吸附一洗脱一扩增的亲和筛选后,用ELISA鉴定抗HV噬菌体抗体的活性.结果HV吸附筛选的特异性人外周血B淋巴细胞中,成功扩增出VH基因,并构建了VH基因噬菌体表面展示文库.经3轮亲和筛选,获得24个具有与HV结合活性的重组噬菌粒克隆.对其中一个克隆的VH基因(VH-D10)的序列分析表明,该基因的全长为363bp,编码121个氨基酸,与EMBL和GenBank中所有已知免疫球蛋白(Ig)基因进行同源性比较,其同源序列均为人Ig Vn基因.结论成功地构建了人抗HV抗体VH基因噬菌体表面展示文库,并筛选到有HV结合活性的重组噬菌体克隆,为制备人源性抗HV mAb奠定了基础.
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兔抗人BMP-2成熟肽抗血清的制备
目的利用在大肠杆菌中表达的人骨形成蛋白-2(hBMP-2)成熟肽,制备兔抗hBMP-2成熟肽抗血清.方法将含有hBMP-2成熟肽基因的表达载体pDH2m,转化大肠杆菌,热诱导表达hBMP-2成熟肽,经纯化、复性后,再用其免疫兔子,制备兔抗hBMP-2成熟肽抗血清.并以Western-blot和免疫组化方法对抗血清进行鉴定.结果Western-blot结果显示在对应于hBMP-2成熟肽位置有阳性条带,免疫组化结果显示人软骨细胞胞浆阳性着色.结论hBMP-2成熟肽在大肠杆菌中获得高表达,并成功制备了兔抗hBMP-2成熟肽抗血清.
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抗人CD130胞内磷酸化酪氨酸单克隆抗体的制备与鉴定
目的获得一组抗人CD130胞内磷酸化酪氨酸单克隆抗体(mAb),用于研究IL-6介导的信号转导.方法按照CD130分子胞内N752-G766区的氨基酸序列,化学合成Y759磷酸化的15肽作为抗原,应用细胞融合法制备一组抗CD130磷酸化酪氨酸的mAb,并用ELISA、Western blot、免疫沉淀和免疫组化染色等技术,对这组mAb的性质和功能进行探讨.结果(1)通过细胞融合获得了4株稳定分泌抗CD130胞内Y759磷酸化mAb的杂交瘤细胞株(MIY1、MIY2、MIY3和MIY4),这组mAb仅对合成肽N752-G766产生特异性反应.(2)Western blot分析表明,这组mAb识别的靶分子的相对分子质量(Mt)为13×104～14×104的.用此组mAb免疫沉淀的Mr为13×104～14×104蛋白,可被抗CD130 mAb所识别;同时用抗CD130mAb免疫沉淀的13×104～14×104分子也可被这组mAb所识别;(3)进一步研究证实,这组mAb可识别由IL-6诱导的细胞内酪氨酸磷酸化的蛋白分子.结论成功地研制了抗人CD130胞内磷酸化酪氨酸的mAb.
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粘膜免疫系统的研究进展
粘膜免疫系统(mucosal immune system,MIS)是指广泛分布于呼吸道、胃肠道、泌尿生殖道粘膜下及一些外分泌腺体处的淋巴组织,是执行局部特异性免疫功能的主要场所.粘膜免疫系统在结构和功能上均有别于传统的系统免疫系统,主要表现在以下几个方面:(1)MIS是大量免疫细胞和免疫分子弥散在粘膜上皮内或粘膜下固有层(弥散淋巴组织),或由单个或多个淋巴滤泡聚集成的粘膜相关淋巴组织(mucosalassociated lymphoid tissues,MALT),包括:肠相关淋巴组织(GALT)、支气管相关淋巴组织(BALT)和鼻相关淋巴组织(NALT)等.机体50%以上的淋巴组织和80%以上的免疫细胞集中于粘膜免疫系统.(2)MIS分泌的是一类粘膜相关的免疫球蛋白,即分泌型IgA(secretory IgA,sIgA)和sIgM.
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多肽疫苗佐剂的研究进展
多肽抗原需要与适当载体形成复合物才能诱导有效的免疫应答,但载体效应又难以避免.目前所用佐剂和连接方式很多,包括:将多肽抗原与BSA、KLH和HSP等蛋白偶联;以多抗原肽(MAP)连接方式提高多肽的拷贝数和相对分子质量(Mr);与一些毒素偶联;与树突状细胞(DC)共孵育;以QS-21或Quil A为佐剂;与其它多肽或MHC分子偶联形成复合物;以含CpG基序的寡核苷酸为佐剂;以HIV-1病毒M型的Tat(第53～68)、O-型的Tat(第9～20)和功能结构域Tat(第21～40)等多肽为佐剂;以LT(R192G)制作的粘膜免疫佐剂等.此外,还在构建脂肽和免疫刺激复合物(ISC0M)等方面做了大量的探索,取得了一些成果,但效果却各说不一.特别是人用佐剂还有不少问题,制作T细胞疫苗或CTL疫苗的佐剂还需要做更多的工作.
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核因子κB在眼科疾病中的研究进展
核因子κB(NF-κB)是近年发现的一种重要转录因子,参与多种炎症细胞因子及免疫基因表达的转录、调节.一般情况下,NF-κB与抑制蛋白IκB结合呈非活性状态,受刺激激活后与其抑制蛋白IκB解离,进入核内,参与细胞因子、粘附分子、生长因子和急性期蛋白等因子的转录调控,在疾病的调节,尤其是炎症疾病的启动中起重要作用.本文就其在眼科方面的研究进展作一综述.
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高浓度聚丙烯酰胺凝胶的简易干燥法
聚丙烯酰胺凝胶电泳分析小分子多肽时，凝胶浓度通常在16％以上。对这类高浓度凝胶我们曾采用文献[1，2]的方法制干胶，但效果不好，凝胶易干裂或皱缩。经反复实验，我们摸索出一种极为简便的方法，仅用一张玻璃纸即可将高浓度凝胶制成平整光亮，清晰透明的理想干胶，此方法也适用于其他浓度的凝胶。具体方法如下：
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HSP患儿治疗前后血清sTNF-R水平变化及意义
sTNF-R是细胞表面膜结合型肿瘤坏死因子受体(mTNF-R),经蛋白激酶等裂解而形成的.sTNF-R有两型:sTNF-RI和sTNF-RIⅡ.TNF(包括TNF-α和TNF-β)是一种具有多种生物学效应的炎性介质,其生物学活性通过与mTNF-R结合而介导[1].为了探讨HSP患儿血清sTNF-R的水平变化及其意义,我们检测了过敏性紫癜(HSP)患儿治疗前后、有无并发肾炎HSP患儿及其中9例治疗后复发的急性期HSP患儿血清sTNF-R的水平.
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乙型肝炎、肝硬化患者外周血中IL-1β和IL-4水平的变化
IL-1是一种单核因子,主要由活化的单核一巨噬细胞产生,IL-1可作用于机体的各个系统,如参与免疫调节,介导炎症反应和影响组织代谢.IL-4是一种由TH2细胞产生的具有多种生物学活性的细胞因子,IL-4可抑制单核一巨噬细胞分泌IL-1和TNF-α,而且促进IL-1受体拮抗剂的表达.我们对慢性乙肝、肝硬化患者血清中IL-1β、IL-4水平进行了检测,旨在探讨IL-1β和IL-4在肝炎发病过程中的作用.
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长期大量饮酒者的红细胞免疫功能及意义
酒精对人体心、肝和脑等器官的损害已众所周知，其降低人体红细胞的变形性（RCD）也有报道，但其对人体红细胞免疫功能的影响，尚未见报道。为此，我们观察了山东省利津县长期大量饮酒者红细胞免疫功能的状态。
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一氧化氮与男性免疫性不育的相关性
男性不育症的原因非常复杂.近年已证明,免疫因素是其中的重要原因之一.精子有较强的抗原性,能刺激自身、同种生殖道局部产生特异性抗体.现已揭示,抗精子抗体(antisperm antibody,ASAb)是不育的重要免疫因素[1,2].为进一步探讨免疫不育的机制,我们检测了150例ASAb阳性男性不育患者精浆中的一氧化氮(mtric oxide,NO)含量.
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急性胰腺炎患者血中NO、TNF-α和sTNF-R的水平变化
急性胰腺炎(AP)常并发全身炎症反应综合征(SIRS),可发展为脓毒血症、多器官功能障碍综合征(MODS)乃至死亡.SIRS一般可按"SIRS→脓毒症→严重脓毒血症→脓毒性休克"的形式而演变.TNF和NO均为炎性介质.前者可通过其受体(mTNF-R)而发挥作用[1].但sTNF-R能与mTNF-R竞争结合TNF-α,而参与免疫调节.后者作为内皮源性舒张因子及神经递质参与免疫防御,但也可引起炎症和免疫介导的组织损伤.为此,我们检测了54例AP患者血中NO、TNF-α和sTNF-R的水平,旨在探讨其水平变化的临床意义.
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基因重组人中瘤坏死因子的同时纯化及复性新工艺
目的建立一套新的同时纯化和复性工艺,用于基因重组人肿瘤坏死因子-α(rhTNF-α)的纯化.方法采用高效疏水作用色谱,直接从表达rhTNF-α的大肠杆菌裂解液中纯化rhTNF-α,并采用稀释法和透析法对上述样品进行复性研究.结果高效疏水作用色谱在纯化rhTNF-α的同时,可获得高复性效率.同时,也使原来需要几步才能完成的操作,在疏水作用色谱上一次完成,大大简化了操作步骤.用SDS-PAGE和考马斯亮兰染色,对纯化的rhT-NF-α进行分析和鉴定,其一步纯化的纯度达到95%以上,活性回收率分别较稀释法和透析法高2倍和3.5倍.结论建立的纯化及同时复性的新工艺,具有简单、快速和纯度高的优点.
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抗中性粒细胞胞浆抗体的检测方法及临床意义
抗中性粒细胞胞浆抗体(ANCA)是一种针对中性粒细胞和单核细胞胞浆成分的自身抗体,1982年,Bavies等在少数非典型血管炎患者中发现.目前认为ANCA与某些疾病,尤其是自身免疫性病相关,并将其作为诊断系统性血管炎等相关疾病的血清学标志物.其主要检测方法为免疫荧光染色. 应用间接免疫荧光法(IIF)可将ANCA分为C-ANCA和P-ANCA两类.C-ANCA的靶抗原主要为蛋白酶3(PR-3)相对分子质量(Mr)为29000,P-ANCA针对的靶抗原主要为髓过氧化物酶(MPO)Mr为120000.抗PR-3自身抗体与韦格氏肉芽肿密切相关,抗MPO自身抗体与原发性局部坏死性肾小球肾炎密切相关.除PR-3和MPO以外粒细胞胞浆内碱性磷酸酶也可能是ANCA的靶抗原之一.随着ANCA及靶抗原研究的进展,检测ANCA的方法也逐步完善.
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高糖腹膜透析液对小鼠腹腔巨噬细胞活力和NO产生的影响
目的探讨商业用腹膜透析液(commercial peritoneal dialysate,CDS)对腹腔巨噬细胞功能的影响.方法培养的小鼠腹腔巨噬细胞(Mφ)在含不同葡萄糖浓度(15、25和42 g/L)的CDS中,经不同时间(10、30和60 min)的暴露,观察MФ还原MTF的能力及其NO的产量.结果低葡萄糖浓度(25 g/L)暴露10 min实验组,MФ还原MTT的能力(A570nm值)为0.210±0.008,NO的产量为(9.1±1.3)μmol/L,均明显低于对照组(P＜0.01);高葡萄糖浓度(42 g/L)和较长时间(60 min)暴露组,MФ还原MTF的能力(A570nm值)为0.056±0.004,NO的产量为(5.7±1.1)μmol/L,与对照组相比较,改变明显(P＜0.01).结论短时间CDS暴露,即可降低MФ的活力及NO产生,这种作用与CDS中的葡萄糖浓度以及MФ暴露于CDS的时间呈正相关.
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直接法将质粒从酵母电转化至大肠杆菌
随着人类基因组计划的完成,蛋白质的功能研究将成为后基因组时代的主要任务[1].任何蛋白质功能的发挥,离不开与其他蛋白质之间的相互作用.随着分子生物学方法的发展,出现了以基因文库为基础的蛋白探测、噬菌体呈现等技术,但这些方法反映的都只是蛋白的体外相互作用.酵母双杂交系统是一种新的直接在真核细胞内检测蛋白相互作用的新方法,灵敏度高[2,3].双杂交系统是基于一些转录激活因子(如酵母的Gal4蛋白和细菌的Lex4蛋白),往往由两个在结构上可以分开、功能上相互独立的结构域构成,这两个结构域在同一细胞内只要空间上靠近,就可以激活下游报道基因的表达[4].第三代酵母双杂交载体系统由pGBKT7和pGADT7组成,编码诱饵蛋白的基因一般融合到质粒pGBKT7中,表达文库一般构建在质粒pGADT7中.
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快速制备抗原-佐剂乳化液新方法
在制备多克隆抗体或单克隆抗体过程中,初次和二次免疫时,常需制备抗原溶液-佐剂乳化液.以往所用乳化的方法(如研磨或搅拌),虽能得到较好乳化液,但可造成抗原的损失,特别是珍贵抗原的损失,为可惜;采用两个注射器推拉的方法,可避免抗原的损失,但由于遵从有关教科书的规定,注射器中不允许存有气体!故常需两个人操作,既费力又费时.有时,由于劳累和烦燥常发生崩漏事故,实令人沮丧.近本人在一次偶然"失误"的操作中,竞获得了意想不到,却又是情理之中的极满意的结果.从而建立了下述改良的方法.将装好抗原溶液和佐剂的注射器,首先分别吸入一定量的气体(约1mL).然后塑料管或塑料三通管将两注射器连接,当然接口处要扎紧.一个人两只手各执一注射器,先将抗原溶液迅猛地推向佐剂方注射器,另一只手再迅猛推回.这样操作10余次,大约1-2min内乳化即告成功.
| 年 | 期数 |
| 2018 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2017 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2016 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2015 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2014 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2013 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2012 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2011 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2010 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2009 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2008 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2007 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2006 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2005 | 01 02 03 04 05 06 z1 |
| 2004 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2003 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2002 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2001 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2000 | 01 02 03 04 05 06 |
| 1999 | 01 02 |
| 1995 | 01 02 03 |
| 1994 | 01 02 |
| 1993 | 01 02 03 04 |
| 1992 | 01 02 03 04 |
| 1991 | 01 02 03 04 |
| 1990 | 01 02 |
| 1989 | 01 02 03 04 |
