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细胞与分子免疫学

细胞与分子免疫学杂志

Chinese Journal of Cellular and Molecular Immunology 세포여분자면역학잡지

CSCD核心期刊
  • 主管单位: 中国免疫学会;第四军医大学
  • 主办单位: 陕西省免疫学会,中国免疫学会
  • 影响因子: 0.81
  • 审稿时间: 1-3个月
  • 国际刊号: 1007-8738
  • 国内刊号: 61-1304/R
  • 发行周期: 月刊
  • 邮发: 52-184
  • 曾用名: 单克隆抗体通讯
  • 创刊时间: 1985
  • 语言: 英文
  • 编辑单位: 《细胞与分子免疫学杂志》编辑部
  • 出版地区: 陕西
  • 主编: 杨安钢
  • 类 别: 基础医学
期刊荣誉:
  • Syndecan-1高表达载体及不脱落突变体的构建及表达鉴定

    作者:刘俊;王继德;邝杰思;张绍衡;唐源淋;王中秋;秦和平;陈烨

    目的:建立小鼠syndecan-1的pcDNA3.0高表达和不脱落的真核表达载体并进行表达鉴定.方法:(1)PCR扩增syndecan-1编码序列,构建载体pcDNA3.0-widetype-syndecan-1( WT-sdc1),经定点突变技术构建载体pcDNA3.0-unshedding-syndecan-1( uS-sdc1);(2)设立阴性对照组、转染组(分别为pcDNA3.0转染组、WT-sdc1转染组及uS-sdc1转染组,转染48 h),予1μmol/L的佛波酯(PMA)刺激15 min后经RT-PCR、Western blot及Dot blot鉴定刺激前后syndecan-1表达的情况.结果:(1)真核表达载体WT-sdc1测序完全正确;载体uS-sdc1目的突变点已成功突变,除了一处无义突变外,其余序列与GenBank中的序列完全一致;(2)转染48 h后,WT-sdc1和uS-sdc1转染组细胞均强表达syndecan-1mRMA和蛋白,细胞上清中仅检测出少量脱落的syndecan-1.PMA刺激后,各组mRMA表达无显著改变;WT-sdc1转染组syndecan-1蛋白表达量较uS-sdc1转染组显著减弱,上清中脱落的syndecan-1含量显著增加.结论:成功构建了WT-sdc1载体和uS-sdc1载体,为深入研究syndecan-1及其脱落在胃肠道疾病中的具体作用及基因治疗奠定了基础.

  • Smac基因过表达增强顺铂对食管癌Eca109细胞化疗的敏感性

    作者:杜宁;杨斌;胡丽娟;赵阳;孙欣;郭志伟;任宏

    目的:探讨Smac基因过表达对食管癌细胞株Eca109顺铂化疗敏感性的影响.方法:脂质体介导将带有GFP的pcDNA3.1-Smac重组体及带有GFP的pcDNA3.1空白载体转染入食管癌细胞株Eca-109,G418筛选阳性克隆,荧光显微镜下观察转染效率,Western blot检测转染前后细胞内Smac蛋白表达水平的变化.顺铂处理组(1、5、10 mg/L)和顺铂未处理组分别处理转染前后的食管癌细胞株Eca109,Annexin V/PI双染法经流式细胞术检测细胞凋亡率.结果:分别建立稳定表达Smac基因+GFP基因,新霉素抗性基因(neo)+GFP基因的食管癌亚克隆细胞株Eca109/Smac,Eca109/neo.Eca109/Srnac的Smac蛋白表达水平明显高于Eca109/neo和Eca109(P <0.05).在顺铂未处理组,Eca109/Smac、Eca109/neo和Eca109的细胞凋亡率组间无明显统计学差异.在顺铂处理组,顺铂浓度分别为1 mg/L、5mg/L、10 mg/L,Eca109/Smac的细胞凋亡率明显高于Eca109/neo和Eca109,组间具有统计学差异(P<0.05),且随着顺铂浓度的升高,Eca109/Smac细胞凋亡率随之升高(P<0.05).Eca109/neo和Eca109组间无明显统计学差异.结论:Smac基因转染未经顺铂处理的Eca109细胞株中不诱发凋亡,在顺铂处理组其过表达能增强Eca109对顺铂的化疗敏感性.

  • TFDP3对前列腺癌LNCaP细胞自噬及凋亡调控作用的初步研究

    作者:任丽芬;马越云;岳乔红;苏明权;郝晓柯

    目的:研究TFDP3对前列腺癌LNCaP细胞自噬及凋亡作用的影响,以及探讨TFDP3与E2F1相互作用后对前列腺癌LNCaP细胞自噬及凋亡的调控作用.方法:采用重组质粒pcDNA3.1-TFDP3,pCMV-E2F1-HA分别转染LNCaP细胞,并设空载体对照组.转染24h后提取细胞总RNA和蛋白,以实时定量RT-PCR检测TFDP3、E2F1、以及LC3B基因表达的变化,Western blot方法检测自噬相关基因(LC3B)蛋白表达水平的变化.并采用流式细胞仪检测细胞凋亡的变化.结果:TFDP3可以诱导LNCaP细胞中自噬基因LC3B的表达,并且这种作用可以受到E2F1的抑制;TFDP3可以抑制E2F1诱导的细胞凋亡.结论:TFDP3可以诱导LNCaP细胞中自噬基因LC3B的表达,可以抑制E2F1诱导的细胞凋亡,提示TFDP3在前列腺癌细胞中发挥着重要的调控作用.

    关键词: TFDP3 E2F1 自噬 凋亡
  • 过表达整合素连接激酶肺癌A549细胞的建立及生物学活性

    作者:胡海艳;陈全;陈炎;刘革力;张璐渝

    目的:建立稳定过表达整合素连接激酶(ILK)的肺癌A549细胞模型,探讨ILK过表达对肺癌A549细胞生物学活性的影响.方法:以RT-PCR法扩增人ILK基因,构建pEGFP-ILK重组质粒.经酶切及测序鉴定后,将pEGFP-ILK质粒用脂质体转染肺癌A549细胞,G418压力筛选出稳定转染细胞克隆并扩大培养(A549/pEGFP-ILK组),设pEGFP-C1空质粒转染A549细胞(A549/pEGFP-C1组)及空白A549细胞对照组.用荧光显微镜观察EGFP-ILK融合蛋白的表达及细胞内定位,RT-PCR法检测各组细胞中ILK mRNA的转录水平,Western blot法检测各组细胞中ILK蛋白表达水平,MTT比色法检测各组细胞的增殖活力,流式细胞术检测各组细胞的凋亡情况,HE染色观察细胞形态变化.结果:酶切及测序证实,pEGFP-ILK重组质粒构建成功.该质粒转染A549细胞、并经G418压力筛选后,获得了表达绿色荧光蛋白的稳定转染株,ILK基因表达产物主要定位于细胞质内.与对照组相比,A549/pEGFP-ILK细胞ILK的mRNA及蛋白表达水平明显升高,其过表达率分别为218.18%和245.45% (P <0.05);过表达ILK的A549细胞增殖活力显著增强(P<0.05);凋亡水平被显著抑制(P<0.05);过表达ILK的A549细胞的核分裂相增多.结论:成功建立过表达ILK肺癌细胞模型,ILK过表达可促进癌细胞增殖、抗凋亡及核分裂相增多.

  • 慢病毒介导RNA抑制黑素瘤细胞Foxp3蛋白表达

    作者:陈殿君;李晓松;赵晖;石秀丽;张欢欢;范忠义;姚咏明;杜楠

    目的:利用RNA干扰(RNAi)技术在体外干扰小鼠B16黑素瘤细胞Foxp3基因表达,探讨RNA干扰用于黑素瘤治疗的可行性.方法:针对Foxp3基因设计小干扰RNA( siRNA),构建起短发夹状RNA( shRNA)慢病毒表达载体,并转染小鼠B16细胞,在体外诱导RNA干扰.分别采用Western blot和RT-PCR检测Foxp3基因的表达情况;ELISA检测TGF-β1、TGF-β2和IL-10等细胞因子的变化;将干扰后的小鼠B16细胞与CD4+ CD25-T淋巴细胞共培养,CCK8法检测CD4+ CD25-T淋巴细胞增殖能力.结果:通过Foxp3 shRNA的转染,可实现对B16细胞Foxp3表达的沉默,可下调肿瘤细胞对CD4+ CD25-T淋巴细胞增殖抑制的能力,并且下调TGF-β1、TGF-β2和IL-10等细胞因子的表达,尤其是TGF-β2的表达.结论:RNA干扰可抑制小鼠黑素瘤细胞靶基因Foxp3的表达及细胞增殖,并对CD4+ CD25-T淋巴细胞增殖抑制的能力减弱,同时减弱抑制性细胞因子的分泌,为黑素瘤的基因治疗提供了新思路.

  • rBTI蛋白对人肝癌HepG2细胞增殖、迁移及ROS产生的影响

    作者:李玉英;贾海燕;郭慧;王转花

    目的:研究重组荞麦胰蛋白酶抑制剂(rBTI)对HepG2细胞增殖、凋亡、迁移及胞内活性氧(ROS)的影响.方法:以不同浓度的rBTI蛋白(1.25~10 μmol/L)作用肝癌HepG2细胞,通过MTT比色法检测rBTI蛋白对HepG2细胞增殖抑制作用;DAPI荧光染色法观察凋亡细胞的发生及形态学变化,流式细胞术(FCM)检测细胞内活性氧变化、划痕擦伤实验检测rBTI蛋白对HepG2细胞迁移的影响.结果:rBTI蛋白对HepG2细胞的生长具有明显的抑制作用,并呈剂量依赖效应,但对正常细胞HL-7702影响很小;DAPI染色发现细胞产生凋亡小体;细胞内活性氧水平检测结果表明rBTI可以诱导HepG2细胞内ROS水平显著升高;划痕擦伤实验显示rBTI在一定浓度范围内可以抑制HepG2细胞迁移.结论:rBTI蛋白能够诱导HepG2细胞发生凋亡并抑制细胞增殖和迁移.

  • 人PRMT1真核表达载体的构建及鉴定

    作者:李晨燕;孙青竹;杨旭东;钟波;韩燕;吕社民

    目的:构建人PRMTl基因真核表达载体,并进行表达检测及鉴定.方法:采用RT-PCR技术扩增人PRMT1全长cDNA;经过双酶切、连接等反应,构建pcDNA3.1(+)-PRMT1真核表达载体,并转化DH5α感受态细胞;用含氨苄青霉素的LB培养基筛选阳性克隆;经菌液PCR及测序鉴定重组质粒;瞬时转染A549细胞,采用实时定量PCR检测重组质粒的表达水平及PRMT1对eotaxin-1和ccr-3表达的影响.通过Western blot从蛋白水平检测重组质粒在真核细胞内的表达.结果:RT-PCR扩增的人PRMTl全长cDNA为1136 bp;所筛选出的pcDNA3.1(+)-PRMT1重组载体中插入片段与NCBI GenBank文库中人PRMT1 cDNA的序列完全一致;实时定量PCR和Western blot检测证实重组质粒在A549细胞内可高效表达;并且PRMT1与eotaxin-1和ccr-3的表达呈正相关性.结论:成功构建了pcDNA3.1(+)-PRMT1重组载体,为进一步研究PRMT1基因的作用机制奠定基础.

  • 重组耻垢分枝杆菌Ag85B-ESAT6-rMs对小鼠巨噬细胞功能的影响

    作者:郝彦斐;罗泰来;王平;康健;柏银兰;王丽梅;徐志凯

    目的:探讨重组耻垢分枝杆菌Ag85B-ESAT6-rMs对小鼠巨噬细胞功能的影响.方法:将耻垢分枝杆菌(Ms)与重组耻垢分枝杆菌Ag85B-ESAT6-rMs分别感染小鼠巨噬细胞系RAW264.7,通过抗酸染色和细胞内细菌菌落形成单位计数评价Ms和Ag85B-ESAT6-rMs被巨噬细胞吞噬和消化能力;采用流式细胞术检测巨噬细胞凋亡情况;分别采用实时定量PCR技术和ELISA检测细胞因子TNF-α的表达和分泌水平.结果:小鼠巨噬细胞实验证实,Ag85B-ESAT6-rMs比Ms具有更强的感染和促进巨噬细胞的吞噬能力,Ag85B-ESAT6-rMs可增加巨噬细胞表达和分泌TNF-α的水平,并促进受感染巨噬细胞的凋亡.结论:Ag85B-ESAT6-rMs可以促进巨噬细胞的吞噬消化功能,将有助于增强巨噬细胞对Ms抗原的递呈和机体抗Ms感染的特异性免疫.

  • 多种活化因子共刺激对人外周血单个核细胞体外增殖和表型的影响

    作者:刘军权;朱云;陈复兴;张南征;吕小婷;周忠海;张娟;张颂;陶征中;李昳

    目的:观察多种活化因子共刺激后对人外周血淋巴细胞增殖和表型的影响.方法:用淋巴细胞分离液分离人外周血单个核细胞(PBMC),根据加入刺激因子(CD3 mAb、CD28 mAb、IFN-γ、IL-1α、IL-2、IL-15和IL-21)种类和方法不同将实验分为7组.用全自动五分类血液分析仪计数不同细胞因子诱导培养的PBMC增殖力、流式细胞术测定诱导后共刺激细胞表面CD3,CD4,CD8,CD28,CD16、CD56+ CD16,CD3+ CD8+,CD3+ CD4+,CD3+CD56+,CD45RO等分子的变化、乳酸脱氢酶释放法测定诱导后的共刺激细胞对SGC-7901、SW-1990和SW-116细胞株的杀伤活性.结果:在PBMC培养体系中加入不同的刺激因子其细胞增殖能力有明显的差异,以含刺激因子CD3、CD28、IFN-γ、IL-2、IL-1α、IL-15和IL-21组增殖倍数高,在培养第10 d时该组的增殖倍数为255.3±6.3,明显高于仅含CD3、IFN-γ和IL-2培养体系组(166.6±5.5)(P<0.05).在PBMC培养体系中加入不同的刺激因子其部分细胞表面标志有所差异,在培养体系中无IL-15时CD16+ CD56+(NK细胞)细胞和CD3+CD56+细胞比例明显高于其他组;CD45RO+的记忆性T细胞以延迟3d添加IL-15和IL-21组升高明显.经不同活化因子刺激培养10 d的PBMC对SGC-7901、SW - 1990和SW-1116细胞杀伤活性有明显差异,以延迟3d添加IL-15和IL-21组高(分别为76.2%、60.3%和70.6%),明显高于仅含CD3、IFN-γ和IL-2培养体系的细胞组(分别为54.9%、44.6%和50.4%)(P<0.05).培养的细胞对胃腺癌细胞SGC-7901杀伤活性强.结论:不同刺激因子活化的PBMC其增殖能力、表面标记和杀伤活性有明显差异,在培养体系中增加相应的刺激因子对细胞定向培养有一定价值.

  • 雷公藤内酯醇对大鼠胶原性关节炎及足爪组织基质金属蛋白-2表达的影响

    作者:李宜川;叶文忠;刘国玲;张玉霞;沈永杰;常景芝

    目的:研究雷公藤内酯醇(TP)对大鼠胶原性关节炎(CIA)及足爪组织基质金属蛋白酶-2(MMP-2)表达的影响.方法:采用鸡Ⅱ型胶原建立CIA大鼠模型,观察药物对CIA大鼠体重及足肿胀度的影响,免疫组化法观察大鼠足爪组织中MMP-2蛋白的表达.结果:TP可有效缓解CIA大鼠体重减轻及明显抑制CIA大鼠足爪肿胀;治疗后TP组足爪组织MMP-2阳性表达比模型对照组明显降低(P<0.01).结论:TP对CIA大鼠具有治疗作用,其机制可能与其下调MMP-2表达、降低血清炎性细胞因子水平有关.

  • 脱水淫羊藿素对小鼠巨噬细胞免疫功能的影响

    作者:赖新强;黄秀艳;曾耀英

    目的:研究脱水淫羊藿素(AHI)在体外对脂多糖(LPS)诱导的小鼠巨噬细胞免疫功能的影响.方法:分离制备小鼠骨髓来源巨噬细胞;CCK-8法检测不同终浓度的AHI对巨噬细胞的毒性;采用Griess试剂盒检测AHI对巨噬细胞产生NO的影响;流式细胞术(FCM)检测AHI对巨噬细胞吞噬E.coli颗粒的影响;利用FCM结合双色免疫荧光染色技术检测AHI对巨噬细胞早期活化标志CD69的表达情况;使用流式液相蛋白定量检测技术(CBA)检测AHI对LPS刺激巨噬细胞分泌细胞因子的影响.结果:终浓度为2.5、5、10 μmol/L的AHI对活化的小鼠巨噬细胞均具有明显的免疫抑制作用,特别是5 mol/L AHI能明显抑制经LPS刺激的巨噬细胞早期活化,释放NO,吞噬E.coli颗粒,以及分泌IL-6、MCP-1、TNF和IL-12p70四种细胞因子.结论:AHI对LPS诱导的小鼠巨噬细胞的活化具有明显的抑制作用,是一种潜在的免疫抑制剂.

  • 稳定表达融合基因Hyper-IL-6的肝癌细胞克隆株的建立

    作者:郄春花;李顺天;曹武奎;陆伟;梁树人

    Hyper-IL-6是Fischer等依据白细胞介素6受体(interleukin 6 receptor,IL.-6R)的结构信息设计的一种"设计细胞因子( designer cytokines)",即将人类IL-6基因与截短形式的可溶性细胞介素6受体(soluble interleukin 6 receptor,sIL-6R)基因通过基因操作共价连接,并在真核细胞进行表达得到的一种具有超高效IL-6活性的融合蛋白[1].

  • 人干扰素α高效表达质粒pEE14.1-IFN-α的构建和表达

    作者:高燕;汪习;张巍;徐元基;于继云;郭炳冉;阎瑾琦

    目的:构建人干扰素α的高效表达质粒pEE14.1-IFN-α,并在真核细胞中验证其表达.方法:通过PCR获得人IFN-α基因,连入过渡载体pCI-GPI,然后克隆入高效表达载体pEE14.1中,构建重组表达质粒pEE14.1-IFN-α.瞬时转染293T细胞后48 h收获上清,采用ELISA,Western blot分别验证目的基因表达.结果:pEE14.1-IFN-α经酶切和测序分析,与预期设计完全一致,表明重组质粒构建成功.ELISA法检测瞬时转染细胞上清中α干扰素含量,浓度约为3.15ng/mL,说明表达的蛋白有免疫活性,Western blot检测也显示该重组质粒在上清中分泌表达.结论:成功构建高效表达质粒pEE14.1-IFN-α,为慢性乙肝免疫治疗提供新的备选方案.

  • 脂多糖活化的单核细胞对人Th17细胞分化的影响

    作者:杨慧;任英;朱平;陈丽娜;吕明华;樊春梅;王彦宏

    目的:拟建立体外人外周血CD4+T细胞与CD14+单核细胞共培养体系,观察脂多糖(LPS)活化的单核细胞,在联合或不联合抗CD3 mAb、不同浓度和时间条件下对诱导Th17细胞分化的影响.方法:采用免疫磁珠法分离纯化健康志愿者外周血CD4+T细胞与CD14+单核细胞,在两者共培养体系中分别单加LPS或抗CD3 mAb、抗CD3 mAb刺激下添加不同浓度LPS刺激培养3d或同时加入LPS和抗CD3 mAb刺激培养3~10d.以流式细胞术检测细胞表面分子CD4,胞内细胞因子IL-17及IFN-γ,确定各种刺激培养条件下,诱导生成的Th17及Th1等细胞亚群占CD4+T细胞的百分比.结果:单独采用LPS或抗CD3 mAb刺激,分别仅能诱导(1.30±0.19)%、(1.10±0.21)%CD4+T细胞分泌表达IL-17,而采用LPS联合抗CD3 mAb刺激显著增加Th17频率,可达(2.01±0.46)%(P<0.05).在抗CD3 mAb刺激条件下,LPS浓度分别为0.1 μg/mL,1μg/mL,10 μg/mL时,诱导生成Th17细胞频率依次为(1.92±0.21)%、(1.30±0.37)%、(1.01±0.25)%,随LPS浓度增加,Th17细胞生成显著减少(P<0.05).LPS体外刺激3d可诱导(2.13±0.32)% Th17细胞生成,随时间推移,Th17细胞减少(P<0.05),Th1细胞在6d达高频率(17.45±3.04)%,10 d时下降到(11.34±1.29)%.结论:低剂量LPS联合抗CD3 mAb活化的单核细胞可在短时间内诱导CD4+T细胞向Th17细胞分化,所建立的共培养体系更加贴近类风湿关节炎等炎症性疾病体内异常免疫应答的微环境.

  • C-erbB2基因shRNA表达质粒对结肠癌细胞生物学行为的影响

    作者:赵东利;党诚学;隋燕霞

    目的:观察C-erbB2基因shRNA表达质粒对结肠癌HT-29细胞生长抑制、细胞周期和凋亡的影响.方法:用MTT法及流式细胞仪分别检测pGenesil-erbB2实验组(PEG)、转染试剂对照组(TRCG)、阴性质粒对照组(NPCG)细胞对结肠癌细胞生长曲线、细胞周期及细胞凋亡率的影响.结果:pGenesil-erbB2实验组、转染试剂对照组、阴性质粒对照组的生长抑制率分别为39.65%、7.23%、8.05%,实验组明显高于其他两组(P<0.01);pGenesil-erbB2实验组、转染试剂对照组、阴性质粒对照组的G0/G1期细胞分别占74.93%、67.19%、68.05%,实验组明显高于其他两组(P<0.05);S期细胞分别占7.81%、14.02%、13.70%,实验组明显低于其他两组(P<0.05);pGenesil-erbB2实验组、转染试剂对照组、阴性质粒对照组的凋亡率分别为19.21%、3.13%、4.08%,实验组明显高于其他两组(P<0.01).结论:C-erbB2基因siRNA重组质粒可以明显抑制结肠癌细胞的生长;可以将细胞周期阻滞于G0/G1期;可以明显增加结肠癌细胞的发生凋亡;说明C-erbB2基因在结肠癌的发生和发展中也起到非常重要的作用.

  • 醛固酮致心肌纤维化相关基因的筛选

    作者:陈劲松;莫群;谢永进;郭玉松;黄婷婷;任磊;王升启;伯晓晨;任艺虹

    目的:寻找醛固酮独立致心肌纤维化(MF)的分子.方法:利用差速贴壁法分离培养胎儿心肌成纤维细胞(FCFs);选择3~4代细胞给予醛固酮(ALD)处理8h、提取各组总RNA,用基因组芯片检测差异表达基因,利用Westernblot和RT-PCR对部分基因表达产物进行验证.结果:ALD处理后表达水平改变的基因共1 519个,其中上调的714个,下调的805个.选择与MF发生机制关系密切的趋化因子(C-C基元)配体7(CCL7)、基质金属蛋白酶26( MMP-26)及白细胞介素31受体α(IL31RA)等基因进行RT-PCR和Westernblot验证,结果与芯片检测一致.结论:利用基因芯片检测出ALD处理后FCFs多种基因表达发生改变,部分基因可能与MF有关.

  • 小鼠脊髓损伤早期不同炎症因子的表达变化

    作者:郑晶晶;姚安会;刘芳芳;王亚周;于才勇;陈鹏;张坤;鞠躬;王键

    目的:探讨小鼠脊髓夹伤后早期各时间点损伤区中IL-1β、IL-6、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、巨噬细胞炎性蛋白-1( MIP-1)、IL-4、IL-10、GF-β的表达变化情况.方法:6~8周雄性BALB/c小鼠行T8节段脊髓重度夹伤模型,分别于术后6h、12 h、24h、3d和7d取以损伤区为中心共5mm脊髓,用TRIzol试剂提取总RNA,反转录后进行实时定量PCR检测上述各基因的表达情况.结果:小鼠脊髓损伤早期,损伤区促炎因子IL-1β、IL-6及趋化因子MCP-1、MIP-1急剧升高,6h内即达高峰,随后开始下降,3d内归于正常;而炎症抑制因子IL-4早期不升反降,3d降至低;IL-10在6h有所升高,但无统计学意义;TGF-β逐渐升高,12 h至高峰,随后下降,7d再度升高.结论:脊髓损伤早期损伤区促炎因子表达增加,炎症抑制因子表达不变或减少,可能使损伤局部的炎症反应呈扩大趋势,从而导致继发的炎症损伤.

  • MADD在肺腺癌组织中的表达及对肺腺癌A549细胞增殖和凋亡的影响

    作者:魏玉平;吴金香;郭元芳;孙高英;张强;毕文祥;董亮

    目的:探讨MADD在肺正常组织及肺腺癌组织中的表达及其对肺腺癌细胞增殖和凋亡的影响.方法:收集肺临床病理组织标本,免疫组化法检测肺正常组织和肺癌组织MADD表达;培养人肺腺癌A549细胞,逆转录PCR检测其IG20基因表达;用携带MADD基因的质粒和能够沉默MADD表达的慢病毒载体分别转染A549细胞,Western blot、MTT分析和流式细胞术检测其MADD表达、增殖及凋亡.结果:肺腺癌组织MADD表达水平明显高于肺正常组织和肺鳞癌组织;A549细胞能够表达MADD;高表达MADD能抑制A549细胞凋亡,提高其增殖活力,而沉默MADD表达则能促进A549细胞凋亡,降低其增殖活力.结论:肺腺癌组织MADD表达明显增高;MADD可通过抑制凋亡来促进肺腺癌细胞生存.

  • 慢性乙肝患者外周血单个核细胞中CXCR1、CXCR2及IL-8mRNA表达与干扰素治疗关系

    作者:毕惠娟;王健;黄河胜;刘军华

    目的:了解乙型肝炎病毒(HBV)慢性感染患者外周血单个核细胞(PBMC)中CXCR1、CXCR2及IL-8 mRNA表达水平及与α干扰素(IFN-α)治疗的关系.方法:采用实时定量PCR法动态观察30例慢性乙型肝炎患者接受IFN-α治疗前、治疗3个月、6个月后其外周血单个核细胞CXCR1、CXCR2及IL-8 mRNA表达水平.结果:治疗前慢性乙肝患者CXCR1、CXCR2及IL-8 mRNA表达水平分别为(0.4474±0.0386)、(0.4720±0.0458)、(1.1897±0.1028),均高于正常对照组(n=36),其中CXCR1及IL-8 mRNA水平升高显著,差异有统计学意义(P<0.01).治疗过程中CXCR1、CXCR2及IL-8表达水平均显著下降.IFN-α治疗6个月后CXCR1、CXCR2及IL-8 mRNA表达水平分别为(0.4129±0.0395)、(0.4461 ±0.0477)、(0.8660 ±0.1307),与治疗前相比,差异有显著性(P<0.01或P<0.05).治疗前的CXCR1、CXCR2及IL-8的表达水平在HBV高复制组(HBV-DNA> 106,n =22)明显高于HBV低复制组(HBV-DNA<106,n=8),差异有统计学意义(P<0.05).结论:慢性乙肝患者外周血单个核细胞中CXCR1和IL-8表达水平显著升高,在干扰素治疗后,其表达水平下调,证明其可能与慢性乙肝炎症的发生机制相关.

  • CD3、CD4、COX-2在非小细胞肺癌中的表达及意义

    作者:赵晓;燕翔;鞠艳芳;于海明;焦顺昌

    目的:探讨非小细胞肺癌(NSCLC)组织中CD3、CD4及环氧化酶-2(COX-2)的表达及临床意义.方法:用免疫组化法检测37例NSCLC手术标本中CD3、CD4、COX-2的表达情况,用Spearman秩和检验分析它们与患者总生存(OS)间的关系.结果:NSCLC患者组织中CD3平均面密度、CD4平均光密度均与患者OS相关(P<0.05),CD3高表达者OS较长,CD4低表达者OS更长.COX-2表达与患者术后生存时间无关(P>0.05).结论:CD3表达越强,患者术后OS时间越长;CD4表达越强,患者术后生存时间越短;COX-2的表达强度与患者生存时间无明显相关.

  • HBx和CEACAM1在乙肝相关性肝癌中的表达及意义

    作者:刘凯歌;许刚柱;姚杨;兀威;李亚军;任婷婷;徐光华;叶琳

    目的:探讨HBx和癌胚抗原相关细胞黏附分子1(CEACAM1)在乙肝相关性肝癌中的表达及意义.方法:采用免疫组织化学方法(SP法)检测81例乙肝相关性肝癌组织中HBx及CEACAM1的表达情况,分析HBx和CEACAM1与乙肝相关性肝癌的临床病理特征.Western blot检测人正常肝细胞系QZG、肝癌细胞HepG2及稳定转染HBx的肝癌细胞HepG2(HepG2-X)中CEACAM1的表达.结果:81例乙肝相关性肝癌组织中HBx表达阳性率为74.07% (60/81),CEACAM1表达阳性率为71.60% (58/81),二者与门静脉侵袭、淋巴结转移和TNM分期存在显著相关,HBx与CEACAM1的表达呈负相关(rs=-0.310,P<0.01);在HepG2-X中,CEACAM1蛋白表达水平与肝癌细胞HepG2及人正常肝细胞系QZG相比显著降低.结论:HBx的高表达和CEACAM1的低表达与乙肝相关性肝癌的侵袭、转移密切相关,HBx有可能通过抑制CEACAM1的表达而诱导乙肝相关性肝癌的侵袭与转移.

  • 系统性红斑狼疮患者外周血CD14+单核细胞表达PD-L1的分析和意义

    作者:谢长好;王元元;李志军;唐洁;李柏青

    目的:探讨PD-L1在系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血单核细胞(Mo)上的表达及临床意义.方法:应用流式细胞仪检测51例SLE患者和38例健康对照者外周血CD14+ Mo表面PD-L1表达水平,比较SLE不活动组、活动组和健康对照组以及狼疮肾炎组和无狼疮肾炎组之间CD14+ Mo表面PD-L1表达的百分比,并分析其与临床表现及实验室检查数据的相关性.结果:SLE活动组和稳定组CD14+ PD-L1+ Mo百分率均高于健康对照组,差异均有统计学意义(P<0.05).狼疮肾炎患者CD14+ PD-L1+ Mo百分率高于无狼疮肾炎患者(P<0.05).SLE患者CD14+ PD-L1+Mo百分率与SLEDM评分、尿蛋白定量呈正相关.SLE患者中抗dsDNA抗体、抗Sm抗体、抗U1 snRNP抗体、抗核小体抗体阳性组外周血CD14+ PD-L1+单核细胞百分率均高于对应阴性组,且均有统计学意义(均P<0.05).结论:SLE患者外周血CD14+ Mo细胞表达PD-L1异常,与病情活动性和抗体产生有关.

  • 呼吸道合胞病毒毛细支气管炎患儿外周血CD4+CD25+调节性T细胞与Th17细胞功能变化及意义

    作者:李宾;吴福玲;冯学斌;孙大康;崔晴晴;赵志旭

    目的:探讨呼吸道合胞病毒(RSV)毛细支气管炎患儿外周血CD4+ CD25+调节性T细胞和Th17细胞及其分泌细胞因子IL-10、TGF-β、IL-17水平变化与RSV毛细支气管炎发病的关系.方法:收集2010-09/2011-04在滨州医学院附属医院儿科住院的33例RSV毛细支气管炎患儿、28例做为阳性对照的非RSV感染性肺炎患儿(肺炎组)及26例正常对照组的健康体检儿外周血,采用流式细胞术(FCM)检测外周血CD4+ CD25+调节性T细胞、Th17细胞百分率,酶联免疫吸附(ELISA)法检测血浆IL-10、TGF-β、IL-17的水平.结果:RSV毛细支气管炎患儿外周血CD4+ CD25+调节性T细胞、IL-10、TGF-β水平显著低于肺炎患儿及健康体检儿(P<0.05),而Th17、IL-17水平则显著高于肺炎患儿与健康体检儿(P<0.05).结论:RSV毛细支气管炎患儿外周血存在CD4+ CD25+调节性T细胞与Th17细胞表达失衡,可能是RSV毛细支气管炎发病机制之一.

  • CGRP-shRNA慢病毒载体的构建与鉴定

    作者:韩静;余俊达;王伟

    目的:构建针对CGRP基因的shRNA载体并进行鉴定.方法:针对小鼠CGRP的mRNA序列,设计并合成编码的shRNA的两条寡核苷酸序列,经退火成互补双链,再克隆至质粒,构建重组体pLLU2G/CGRP,转化至stbl3细菌,挑选阳性克隆测序鉴定.慢病毒包装后,脂质体转导至neuro2A,显微镜观察荧光蛋白的表达.结果:测序证实质粒为所需的序列,脂质体转导至neuro2A 48 h后可见绿色荧光蛋白,转导率达90%.结论:成功地构建了针对CGRP基因的shRNA表达载体,为下一步进行RNAi的相关研究奠定了基础.

  • 人外周血树突状细胞MicroRNA表达谱的鉴定与分析

    作者:董辉;魏军;贾伟;赵志军;赵婧;张兆波;徐广贤

    目的:探讨MicroRNA在专职抗原提呈细胞(APC)树突状细胞(DC)中的表达数种与数量分析.方法:从健康人外周血中分离单核细胞,经重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(rhGM-CSF)和重组人白细胞介素4(rhIL-4)刺激,待成长为成熟DC后,提取总RNA,用miRCURY LNATM microRNA Array进行分析.结果:经分析显示DCs中高表达(标准值>2)的miRNA有85个,其中显著高表达的有hsa-miR-720、hsa-miR-142-3p、hsa-miR-1260b、hsa-miR-1290、hsa-miR-22、hsa-miR-21、hsa-miR-142-5p、hsa-miR-1246、hsa-miR-4284、hsa-miR-24、hsa-miR-491-3p、hsa-miR-3613-3p、hsa-miR-23b、hsa-miR-1280、hsa-miR-342-3p、hsa-miR-1260、hsa-miR-23a、hsa-miR-29b、hsa-miR-16等.结论:提示以上miRNA分子在DCs参与的免疫应答中可能发挥着重要作用.

  • 银屑病患者调节性B细胞检测及意义

    作者:万明;高继鑫;张继刚;任婧;周晓燕;李巍;刘玉峰

    目的:检测与分析银屑病患者外周血调节性B细胞的数量(即B10细胞),探索B10细胞与银屑病的相关性.方法:收集初发男性银屑病患者并分离其外周血单核细胞(PBMC),以年龄性别相匹配的正常人外周血单个核细胞( PBMC)为对照,体外培养中添加离子霉素、佛波酯、CD40配体等作用5h,流式细胞术检测CD19+ IL-10+细胞比例以分析B10细胞数量,体外刺激48 h分析CD19+ IL-10+细胞比例以评估B10前体细胞数量.结果:银屑病患者外周血中B10细胞数量低于正常对照,B10前体数量明显高于正常对照.结论:银屑病患者外周血B10前体细胞增加,B10细胞减少,B10细胞可能对银屑病有保护作用.

  • DPX封片胶在牙组织免疫组化染色防脱片中的作用

    作者:王文勇;黄晓峰;闫庆国;李擒龙;张素珍;王伯沄

    目的:研究DPX封片胶在牙组织免疫组化染色中的防脱片效果.方法:狗上前牙EDTA脱钙、常规石蜡包埋、切片、脱蜡、水洗、干燥后,用DPX封片胶在组织边缘和玻片上涂抹一圈,37℃烤干DPX封片胶,EnVision技术观察IL-1、基质金属蛋白酶1(MMP-1)、MMP-9的表达.结果:DPX封片胶处理后的切片,经微波抗原修复后,切片上的组织完整没有边缘脱落破损现象.免疫组化染色后,组织形态基本完整,相应分子表达定位准确,染色结果清晰.结论:DPX封片胶在牙齿等含钙组织免疫组化染色中有良好的防脱片作用.

  • 献血者乙型肝炎病毒体液免疫和细胞免疫水平研究

    作者:杨永林;黄祖瑚;蔡旭兵;蔡杰;马贵明

    目的:研究自然状态下献血者对乙型病毒性肝炎不同抗原成份的体液、细胞免疫应答水平,及两者的相关性.方法:ELISA检测献血者血浆中HBsAb、HBcAb、preS1+ S2-Ab的阳性率,ELISOPT检测外周血单个核细胞中抗原特异性IFN-γ分泌细胞水平.结果:体液免疫应答检测结果表明preS1+ S2-Ab的检出率高,占85.7% (48/56),核心杭体的检出率低30.4% (17/56);特异性细胞免疫检测结果提示献血者总体preS1+ S2-Ag、HBcAg的特异性细胞免疫应答水平有着良好的一致性,无统计学差异(P>0.05),但显著优于HBsAg; preS1+ S2-Ag和HBsAg特异性细胞免疫和体液免疫应答有着较好的一致性,但HBcAg特异性细胞免疫和体液免疫无明确关联(P>0.05).结论:自然状态下献血者对乙型病毒性肝炎不同抗原成份均有较好的体液、细胞免疫应答,preS1+S2的体液免疫应答水平优于表面及核心抗原提示人HBV疫苗的侯选对象.

  • 超抗原葡萄球菌肠毒素与抗人大肠癌单链抗体ND-1scFv融合基因的构建、表达及活性分析

    作者:陈航;李莉;方瑾

    目的:构建并表达超抗原葡萄(SEA)和鼠抗人大肠癌单链抗体ND-lscFv的融合蛋白,以提高SEA的靶向杀伤作用.方法:构建超抗原SEA和鼠抗人大肠癌单链抗ND-1 scFv的融合基因ND-1 scFv/SEA的表达载体,转化到大肠杆菌E.coli M15中进行诱导表达.Ni-NTA亲和层析对表达产物进行分离、纯化.间接免疫荧光法检测融合蛋白的靶向结合活性,MTT法检测靶向杀伤效率.结果:成功构建了融合基因ND-1 scFv/SEA,实现功能性表达,纯化的ND-1 scFv/SEA融合蛋白与表达有ND-1相应抗原的大肠癌细胞CCL-187有高度亲和活性,通过激活外周血单核细胞,可特异性杀伤靶细胞,在4 μg/mL浓度下对CCL-187的杀伤率达到91%,明显优于SEA的杀伤活性.结论:融合蛋白ND-1 scFv/SEA对大肠癌细胞CCL-187具有靶向结合和杀伤活性,为SEA用于靶向性的大肠癌治疗奠定了基础.

  • 杂交瘤细胞(10株)染色体形态、数目与抗体分泌的关系

    作者:杜春红;马顺高;毕佳训;唐雪;尹家祥;王鹏;宋志忠

    目的:探讨杂交瘤细胞染色体形态、数目与抗体分泌能力及稳定性的关系.方法:对我室融合成功的10株杂交瘤细胞,采用秋水仙素法制备染色体,分别计数100个完整的中期分裂相细胞,并观察其形态.制备腹水和收集细胞培养上清液,间接ELISA法检测抗体效价.结果:经染色体计数与分析,10株杂交瘤细胞中,7株瘤株细胞间染色体形态一致,分散好,既有端着丝点染色体,也见中间着丝点染色体,染色体数目的标准差小于5.0,腹水和细胞培养上清抗体效价高,分泌稳定性好;3株染色体数差异大、标准差大的瘤株中,2株抗体效价低,分泌不稳定.结论:杂交瘤细胞染色体形态、数目与其分泌单克隆抗体的能力和稳定性有关,进行染色体分析有利于了解瘤株特性,可作为筛选高效、稳定瘤株的参考依据.

  • Ⅰ型调节性T细胞(Tr1)的研究进展及其应用前景

    作者:姚烨;郝思国

    调节性T细胞(regulatoryT cells,Treg)在体内担负着重要的免疫调节作用,是诱导针对自身以及外来抗原产生外周免疫耐受的关键调节细胞.大量研究结果表明,Treg在自身免疫性疾病、慢性炎症性疾病、肿瘤以及移植免疫等免疫调节方面发挥非常重要的作用.近年来,愈来愈受到广泛地关注.

  • Cbl-b调控T细胞的免疫耐受

    作者:张梦瑶;孙晓莉;唐丽;贺福初

    免疫系统是一个复杂的有机整体,作为调控免疫耐受的分子之一,Cbl-b主要通过诱导T细胞无能与调控性T细胞来负调控免疫作用.本综述旨在阐述Cbl-b负调控免疫作用的具体机制,以及其自身的表达调控机制,以此找到一个新颖且重要的疾病治疗方向.

  • NLRP3炎性复合体在抗感染免疫中的作用

    作者:李翔;田湉;张艳

    NLRP3炎性复合体(inflammasome)在抗感染免疫和疾病发生过程中发挥着非常重要的作用.NLRP3炎性复合体能被多种激活剂所激活,对于其激活途径目前较公认的有三种:K+通道模型、溶酶体破坏模型和活性氧模型.现就NLRP3炎性复合体的组成、活化途径以及其进展做一简要介绍,并将其在抗感染免疫中的作用进行描述.

  • 我国地方品种姜曲海猪TLR5基因的克隆、表达及鉴定

    作者:孙小林;潘志明;方强;刘仲义;焦新安

    目的:克隆我国地方品种姜曲海猪TLR5基因,构建该基因的原核表达质粒,获得融合表达蛋白并鉴定其免疫特性,为进一步研制TLR5单克隆抗体(mAb)提供免疫原.方法:从全血中提取姜曲海猪的基因组,设计特异性引物,利用PCR方法扩增得到TLR5基因片段,PCR产物克隆到原核表达载体pET30a(+)中,构建重组表达质粒pET-TLR5,将重组表达质粒转化E.coli BL21,0.5 mmol/L IPTG诱导表达目的蛋白,应用SDS-PAGE和Western blot分析鉴定蛋白活性.结果:成功扩增出猪TLR5基因片段,大小为2571 bp.酶切鉴定结果表明,猪的TLR5基因成功克隆入原核表达载体pET30a(+)中,重组质粒pET-TLR5在大肠杆菌中获得表达,SDS-PAGE结果显示出相对分子质量(Mr)大小约95 200;Western blot结果表明,表达产物与兔抗小鼠TLR5 mAb具有良好的反应性.结论:成功克隆并表达具有较好免疫原性的猪TLR5分子,为其mAb的制备提供生物材料.

    关键词: TLR5 克隆 原核表达
  • 人B淋巴细胞刺激因子融合蛋白的表达与功能鉴定

    作者:王婷婷;王焱冰;游思维;王璇;王东辉

    目的:构建人B淋巴细胞刺激因子(hBAFF)的真核表达质粒,表达具有生物学功能的Fc-hBAFF融合蛋白.方法:PCR扩增hbaff胞外区编码基因,加入HA信号肽与hIgG1 Fc后,连入pTT3真核表达载体,采用磷酸钙法转染293T细胞.培养上清经蛋白G纯化后,SDS-PAGE与Western blot鉴定目的蛋白的表达.流式细胞术检测Fc-hBAFF对人B细胞的增殖情况.结果:成功构建pTT3-HA-hIgG1 Fc-hBAFF 融合表达质粒,体外大量表达纯化的Fc-hBAFF蛋白经SDSPAGE与Western blot鉴定正确,并发现Fc-hBAFF蛋白对人外周血B细胞有明显促增殖作用.同时通过尾静脉高压注射的方式证实该质粒能在体内持续表达7d.结论:体外表达并获得了具有生物学功能的Fc-hBAFF融合蛋白.

细胞与分子免疫学分期目录
期数
2018 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12
2017 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12
2016 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12
2015 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12
2014 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12
2013 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12
2012 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12
2011 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12
2010 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12
2009 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12
2008 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12
2007 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12
2006 01 02 03 04 05 06
2005 01 02 03 04 05 06 z1
2004 01 02 03 04 05 06
2003 01 02 03 04 05 06
2002 01 02 03 04 05 06
2001 01 02 03 04 05 06
2000 01 02 03 04 05 06
1999 01 02
1995 01 02 03
1994 01 02
1993 01 02 03 04
1992 01 02 03 04
1991 01 02 03 04
1990 01 02
1989 01 02 03 04

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