细胞与分子免疫学杂志
Chinese Journal of Cellular and Molecular Immunology 세포여분자면역학잡지
- 主管单位: 中国免疫学会;第四军医大学
- 主办单位: 陕西省免疫学会,中国免疫学会
- 影响因子: 0.81
- 审稿时间: 1-3个月
- 国际刊号: 1007-8738
- 国内刊号: 61-1304/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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重组HBcAg激活p38MAPK信号通路增加髓源性树突状细胞IL-15的分泌
目的 探讨重组人乙型肝炎病毒核心抗原(rhHBcAg)诱导髓源性树突状细胞(mDC)分泌白细胞介素15(IL-15)的机制.方法 采用人单核细胞磁珠负分选试剂盒分选外周血单核细胞,采用粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、IL-4和肿瘤坏死因子α(TNF-α)诱导分化为mDC,10 μg/mL rhHBcAg刺激mDC 1~6 d;分别用25 μmol/L磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B(PI3 K/Akt)信号通路抑制剂LY294002、1.μmol/L p38丝裂原激活蛋白激酶(p38MAPK)信号通路抑制剂SB203580、100 nmol/Lc-Jun N末端激酶(JNK)信号通路抑制剂SP600125和150 nmol/L胞外信号调节激酶(ERK)信号通路抑制剂U0126预处理1h,再给予10 μg/mL rhHBcAg刺激48 h.之后收集细胞和细胞培养上清,实时定量PCR检测IL-15 mRNA水平,ELISA检测IL-15蛋白水平,Western Mot法检测PI3K/Akt和MAPK信号通路分子磷酸化水平.结果 与rhHBcAg未刺激组比较,rhHBcAg刺激组IL-15 mRNA和蛋白水平显著升高;与rhHBcAg刺激组比较,p38抑制剂预处理组IL-15水平明显降低,但PI3K/Akt、JNK和ERK抑制剂预处理组IL-15水平未见显著性改变.结论 rhHBcAg通过p38MAPK信号通路上调外周血mDC IL-15的分泌.
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外源性HBx在昆明小鼠体内促进肝前体细胞上皮间质转化
目的 构建靶向作用于小鼠肝前体细胞的动物模型,研究乙型肝炎病毒X蛋白(HBx)对肝前体细胞上皮间质转化(E MT)的影响.方法 每周2次给予昆明小鼠2mL/L四氯化碳灌胃,4周后行经门静脉注射稳定表达HBx的肝前体细胞和稳定表达空载体的肝前体细胞同时切除部分肝脏.术后继续每周2次进行灌胃,并分别于术后3、5、7、14、21、28 d,处死小鼠取肝脏标本;实时定量PCR检测小鼠肝组织HBx的mRNA水平、免疫组织化学染色检测肝组织中外源性细胞的存活.实时荧光定量PCR检测上皮钙黏素(E-cadherin)、神经钙黏素(N-cadherin)、波形蛋白(vimentin)和细胞角蛋白18(CK18) mRNA水平,Western blot法检测E-cadherin、N-cadherin、vimentin、CK18蛋白水平.结果 免疫组织化学染色结果显示,术后肝脏组织明显有外源性细胞存活.随注射时间延长,肝组织HBx的含量增加,表达区域增大;实时荧光定量PCR和Western blot结果均显示过表达HBx能够使小鼠肝组织中E-cadherin、CK18水平降低,而N-cadherin、vimentin的水平增加.结论 动物模型证实HBx在肝前体细胞EMT过程中起着重要的调控作用.
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牙龈卟啉单胞菌脂多糖促进牙龈成纤维细胞的自噬
目的 研究牙龈卟啉单胞菌脂多糖(Pg-LPS)对人牙龈成纤维细胞(HGF)自噬功能的影响.方法 以10μg/mLPs-LPS刺激HGF 12 h或24h,采用雷帕霉素作为阳性对照,Western blot法检测微管相关蛋白1轻链3B(LC3B)的表达,间接免疫荧光技术检测自噬体的分布;同时使用MitoSOX Red荧光探针标记线粒体活性氧(mtROS)、间接免疫荧光法检测自噬体,观察Pg-LPS处理后HGF mtROS与线粒体自噬水平;分别以叔丁基-4-羟基茴香醚(BHA)、N-乙酰半胱氨酸(NAC)以及辅酶Q10(CoQ10)阻断ROS,Western blot法检测Pg-LPS刺激后LC3B的表达量.结果 Pg-LPS处理后LC3BⅡ/LC3B Ⅰ的比值与自噬体数量均显著升高,并且24h处理组高于12 h处理组,同时mtROS生成量与线粒体自噬均明显增加.此外CoQ10可有效降低Pg-LPS诱导的HGF自噬.结论 Pg-LPS在HGF中通过触发mtROS活化自噬,并且自噬参与受损线粒体的降解以维持细胞内环境稳态.
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稳定表达hSPRY/Luc的人膀胱癌细胞株裸鼠皮下移植瘤模型的建立
目的 建立稳定共表达人sprouty2(hSPRY2)基因和萤光素酶报告基因(luciferase,Luc)的J82人膀胱癌细胞株,并建立其裸鼠皮下移植瘤模型.方法 通过PCR扩增hSPRY2及Luc全长基因,并分别构建慢病毒表达载体pCDH-hSPRY2和pLVX-Luc,包装慢病毒.用两种病毒上清同时感染人膀胱癌J82细胞,经嘌呤霉素、G418筛选出单克隆细胞株;采用细胞活体成像、免疫荧光细胞化学染色、Western blot法检测hSPRY2和Luc基因在单克隆细胞株中的表达.J82-hSPRY2/Luc细胞皮下接种BALB/c裸鼠建立移植瘤模型,通过活体成像检测肿瘤生长情况.结果 筛选出J82-hSPRY2/Luc人膀胱癌细胞株,并通过活体成像、免疫荧光染色和Western blot验证了hSPRY2和Luc基因的共表达;通过活体成像动态观察到裸鼠皮下移植瘤的生长情况.结论 成功建立了稳定共表达hSPRY2和Luc基因的J82-hSPRY2/Luc人膀胱癌细胞株以及可用于活体成像检测的裸鼠皮下移植瘤模型.
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斑蝥素酸镁阻断MAPK信号通路抑制SMMC-7721人肝癌细胞增殖
目的 观察斑蝥素酸镁对SMMC-7721肝癌细胞丝裂原激活蛋白激酶(MAPK)信号通路的影响,探讨斑蝥素酸镁的抗癌机制.方法 使用蛋白磷酸酶2A(PP2A)活性检测试剂盒分别检测斑蝥素酸镁和冈田酸(OA)对PP2A活性的影响.实时定量PCR检测斑蝥素酸镁、OA对SMMC-7721人肝癌细胞胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)、p38MAPK、c-Jun N末端激酶1/2(JNK1/2) mRNA表达水平的影响;Western blot法检测斑蝥素酸镁、OA对SMMC-7721细胞ERK1/2、p38MAPK、JNK蛋白表达以及蛋白磷酸化水平的影响.结果 0.283 μmol/L斑蝥素酸镁对PP2A活性无明显抑制作用,0.567μmol/L斑蝥素酸镁能显著抑制PP2A活性,且随着药物浓度的增加,抑制作用愈趋明显;同时0.059 nmol/L OA对PP2A活性也有显著抑制作用.与空白对照组比较,0.283 μmol/L斑蝥素酸镁组ERK1、ERK2mRNA表达量无明显变化,当浓度为0.567 μmol/L时,ERK1、ERK2mRNA表达量显著下降,且随着药物浓度的增加下降更明显;而0.059 nmol/L OA组ERK1、ERK2mRNA表达量却显著升高.0.059 nmol/L OA和不同浓度斑蝥素酸镁组的p38MAPK、JNK1、JNK2 mRNA表达量均显著升高.与空白对照组比较,0.283μmol/L斑蝥素酸镁组ERK1/2磷酸化水平无明显变化,高于0.567 μmol/L斑蝥素酸镁处理显著下调ERK1/2磷酸化水平,其下调程度具有浓度依赖效应;而0.059 nmol/L OA组ERK1/2磷酸化水平却显著上调.0.059 nmol/L OA和不同浓度斑蝥素酸镁组的p38MAPK、JNK磷酸化水平均显著上调.结论 斑蝥素酸镁可能是通过抑制PP2A活性进而抑制ERK1/2通路来实现对SMMC-7721肝癌细胞增殖的抑制作用.
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槲皮素通过核因子E2相关因子/抗氧化应答元件(Nrf2/ARE)信号通路发挥对免疫性肝损伤的保护作用
目的 研究槲皮素对雷公藤甲素致小鼠免疫性肝损伤的保护作用,并探索该作用与核因子E2相关因子/抗氧化应答元件(Nrf2/ARE)信号通路的相关性.方法 50只C57BL/6J小鼠随机分为对照组、模型组、(20、50、80) mg/kg槲皮素预处理组,每组10只,槲皮素预处理组每日上述不同剂量的槲皮素1次,连续10 d.实验末期,除正常组外其余各组小鼠灌胃给予雷公藤甲素(500 μg/kg)建立免疫性肝损伤模型,22h后测定小鼠血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)表达水平、肝组织谷胱甘肽(GSH)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)水平、HE染色观察肝脏组织病理改变、实时定量PCR检测血红素加氧酶1(HO-1)、醌氧化还原酶1(NQO1)、谷氨酰半脱氨酸连接酶催化亚单位(GCLC)表达量、Western blot法检测细胞核内Nrf2表达水平.结果 与模型组相比,槲皮素高剂量组可以明显降低小鼠血清ALT、AST水平,下调肝组织MDA表达水平并提高GSH、SOD含量,明显改善肝组织病理损伤情况,且高剂量槲皮素组可显著诱导Nrf2转位入核,其下游相关基因HO-1、NQO1、GCLC的表达量也显著上升.中剂量槲皮素组具有一定的保护作用,低剂量槲皮素组效果不明显.结论 高剂量槲皮素可保护雷公藤甲素引起的免疫性肝损伤,并且该保护作用与激活抗氧化应激Nrf2/ARE信号通路有关.
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稳定过表达幼虫巨大致死基因2(LLGL2)的食管鳞癌细胞系的建立
目的 构建人幼虫巨大致死基因2(LLGL2)慢病毒表达载体,并建立稳定表达的人食管鳞癌KYSE450细胞系和TE-1细胞系.方法 PCR扩增人LLGL2全长基因序列,连接插入至pCDH-CMV-IRES-GFP-EF1-Puro慢病毒载体中,并对重组质粒进行双酶切及测序验证.将重组质粒pCDH-CMV-LLGL2-IRES-GFP-EF1-Puro和PHR、水疱性口炎病毒G蛋白(VSVG)共转染HEK293T细胞进行病毒包装,利用该病毒液感染KYSE450细胞和TE-1细胞.经嘌呤霉素筛选建立LLGL2稳定过表达的KYSE450细胞系和TE-1细胞系,用Western blot法检测LLGL2的表达情况.结果 双酶切和测序分析,成功构建pCDH-CMV-LLGL2-IRES-GFP-EF1-Puro慢病毒表达载体质粒.Western blot法检测结果显示,与对照组相比,感染病毒液的细胞LLGL2蛋白水平明显增高.结论 成功建立了稳定过表达LLGL2基因的KYSE450细胞系和TE-1细胞系.
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抗β2GPI抗体促进载脂蛋白E缺陷小鼠血管炎症及血栓相关分子的表达
目的 探讨抗β2糖蛋白Ⅰ(β2GPI)抗体在载脂蛋白E缺陷(ApoE-/-)小鼠表达动脉粥样硬化相关炎症因子和血栓相关分子过程中的作用.方法 将ApoE-/-小鼠实施颈动脉套环手术后,随机分为生理盐水组、100 μg抗β2GPI抗体组、100 μg同源对照抗体(兔IgG)组以及100 μg β2GPI/抗β2GPI抗体复合物组.各组均给以高脂饮食,且每7d腹腔注射1次相应刺激剂,6周后处死小鼠.采用HE染色观察套环侧颈动脉阻塞情况,并以免疫组织化学染色检测套环侧颈动脉TLR4、组织因子(TF)和冯·维勒布兰德因子(vWF)的表达.采用实时荧光定量PCR检测主动脉的白细胞介素1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的mRNA水平.结果 HE染色结果显示抗体组阻塞为明显,免疫组织化学染色结果显示抗体组套环侧颈动脉TLR4、TF和vWF表达上调,抗体组主动脉IL-1 β和TNF-α的mRNA水平明显高于其他3组.结论 抗β2GPI抗体通过上调小鼠动脉血管表达炎症因子IL-1β和TNF-α,血栓相关分子TF和vWF以及TLR4的表达,促进动脉粥样斑块形成.
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6kD早期分泌型抗原靶点(ESAT6)抑制巨噬细胞的自噬并促进BCG的增殖
目的 6 kD早期分泌型抗原靶点(ESAT6)能够促进卡介苗(BCG)的增殖,巨噬细胞的自噬功能能有效杀伤BCG,研究ESAT6与自噬的相互作用,为揭示ESAT6介导的免疫逃逸提供实验依据.方法 分别观察对照质粒pCMV-HA和重组质粒pCMV-HA-ESAT6转染以及Earle平衡盐溶液(EBSS)处理的小鼠RAW264.7巨噬细胞中BCG的生长情况,Western blot法检测转染pCMV-HA-ESAT6的RAW264.7细胞0、8、12、24、32 h后,微管相关蛋白1轻链3(LC3)蛋白水平.转染pCMV-HA、pCMV-HA-ESAT6、氯喹(CQ)单独处理和CQ与pCMV-HA-ESAT6转染联合处理条件下,Western blot法检测LC3的水平,LysoTracker Red染料法计数溶酶体数量,观察罗琴培养基上BCG的情况.结果 pCMV-HA-ESAT6转染的RAW264.7细胞中BCG的生长旺盛,而EBSS处理组生长受抑制;在0、8、12、24、32 h,pCMV-HA-ESAT6转染的RAW264.7细胞中LC3 Ⅰ向LC3Ⅱ转换逐渐增强;与对照组相比,溶酶体荧光探针LysoTrackerRed染色法显示pCMV-HA-ESAT6、CQ以及CQ与pCMV-HA-ESAT6转染处理组的溶酶体较多且体积大,但后三组间均无显著性差异;pCMV-HA-ESAT6、CQ以及CQ与pCMV-HA-ESAT6转染处理组的BCG生长旺盛.结论 ESAT6抑制RAW264.7细胞内的自噬水平,并且能够促进RAW264.7细胞中感染BCG的生长.
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血管内皮生长因子基因转染的人脂肪干细胞具有较强的增殖和分化能力
目的 研究过表达血管内皮生长因子(VEGF)对人脂肪干细胞(hADSC)的细胞表型、增殖能力和多向分化潜能的影响.方法 利用脂质体法将pIRES2-EGFP-VEGF质粒转染第2代hADSC,对照组为脂质体空载体.免疫荧光染色验证转染成功,流式细胞术检测两组细胞表型的差异,MTT法检测细胞增殖能力,诱导其成脂和成骨分化并进行油红O和茜素红染色.结果 转染组可见EGFP和VEGF的表达,对照组无EGFP表达.两组细胞均高表达CD29、CD44、CD90,低表达CD31、CD45.转染组hADSC的增殖能力显著强于对照组,且诱导分化后的脂滴和钙结节的数量和面积均显著高于对照组.结论 过表达VEGF可增强hADSC的增殖能力,促进其成脂和成骨分化,但并未显著改变细胞表型.
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甘草酸调节MRL/lpr狼疮小鼠的免疫功能及机制
目的 探讨甘草酸对MRL/lpr狼疮小鼠免疫功能的影响及其机制.方法 MRL/lpr狼疮小鼠随机分为狼疮对照组、1.5 mg/kg地塞米松处理组、20 mg/kg甘草酸处理组、40 mg/kg甘草酸处理组,每组10只;野生型正常对照组C57BL/6小鼠10只.采用ELISA检测小鼠血清中炎症因子白细胞介素4(IL-4)、y干扰素(IFN-γ)含量;流式细胞术检测各组小鼠脾脏组织中Th1细胞/Th2细胞比例;Western blot法检测各组小鼠脾脏相关蛋白GATA结合蛋白3(GATA3)、T细胞表达的T盒(T-bet)、磷酸化Janus激酶3(p-JAK3)、JAK3、磷酸化的信号转导子与转录激活子3(p-STAT3)、STAT3、磷酸化核因子κBp65(p-NF-κBp65)、NF-κBp65、磷酸化NF-κB抑制蛋白α(p-IκBα)、IκBα蛋白的表达.结果 甘草酸能显著降低MRL/lpr狼疮小鼠血清IL-4、增加IFN-y含量;减少Th2细胞、增加Th1细胞,Th1细胞/Th2细胞比值显著升高;并能显著抑制GATA3、p-JAK3、p-STAT3、p-NF-κB、p-IκBα表达,增加T-bet表达.结论 甘草酸调节MRL/lpr狼疮小鼠免疫功能.
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miR-590-5p通过靶向抑制YAP1的表达抑制A375恶性黑素瘤细胞侵袭和迁移
目的 探索miR-590-5p在A375恶性黑素瘤细胞中的表达及其对A375细胞侵袭和迁移能力的影响和机制.方法 应用实时定量PCR技术检测A375细胞与人正常黑素细胞中miR-590-5p的表达水平;应用TranswellTM实验和划痕实验检测miR-590-5p对A375细胞侵袭和迁移的影响;应用荧光素酶报告基因实验明确yes相关蛋白(YAP1)是否为miR-590-5p的直接靶分子;应用实时定量PCR及Western blot法检测miR-590-5p对YAP1表达水平的影响.结果 miR-590-5p在A375细胞中的表达水平显著低于正常黑素细胞;与对照(miR-590-5p-NC)组相比,miR-590-5p mimcs组细胞侵袭和迁移能力均受到显著抑制;YAP1为miR-590-5p的直接靶分子;与miR-590-5p-NC组相比,miR-590-5p mimcs组细胞中YAP1 mRNA及蛋白的表达均受到抑制.结论 miR-590-5p在A375细胞中低表达,并通过靶向抑制YAP1的表达调控A375细胞的侵袭和迁移能力.
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人精浆中人鹅型溶菌酶2(HLysG2)的纯化及其酶学活性分析
目的 从人精浆中分离纯化天然人鹅型溶菌酶2 (HLysG2)并对其酶活性进行分析.方法 通过Western blot法检测HLysG2在精液中的分布;分别使用阳离子交换层析、甲壳素亲和层析和分子筛层析技术从精浆中分离目的蛋白并利用Westernblot法及质谱分析对其进行鉴定;使用高效液相色谱(HPLC)法分析纯化产物的纯度;使用比浊法测定HLysG2的适pH值、适离子浓度、适温度和标准酶活性;使用克隆形成单位法测定HLysG2的杀菌活性.结果 利用Western blot法在精浆中检测到HLysG2的存在;从人精浆中分离到相对分子质量(Mr)约21 500的目的蛋白并通过Western blot法及质谱分析鉴定其为HLysG2.纯化产物纯度达到99.0%以上.在pH6.4,30℃,Na+浓度为0.09 mol/L的条件下,HLysG2高酶活性达到13 800 U/mg.体外检测显示HLysG2对溶壁微球菌、枯草芽孢杆菌和金黄色葡萄球菌具有杀菌作用,但对铜绿假单胞杆菌和大肠埃希菌的杀菌作用不显著.结论 使用层析方法可以从人精浆中成功分离纯化到天然HLysG,其在体外具有对Gram阳性菌的杀菌活性,提示其可能在男性生殖系统的先天免疫中发挥作用.
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X射线辐照引起GC1小鼠精原细胞凋亡诱导因子核转位并诱导其凋亡
目的 研究X射线辐照后GC1小鼠精原细胞凋亡诱导因子(AIF)细胞定位的变化.方法 GC1细胞分别给予0、3、6、9GyX射线辐照,溴脱氧尿苷(BrdU)掺入实验检测辐照对细胞增殖速率的影响;辐照后48 h,4',6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)染色观察细胞核凝集情况,免疫荧光细胞化学染色检测胞质及胞核中AIF蛋白定位的变化,Western blot法分析细胞总蛋白、胞质蛋白及核提取物中AIF蛋白的水平.结果 随着辐照剂量的增加,GC1细胞增殖速率显著减慢,细胞活性降低.6GyX射线辐照后全细胞提取物中AIF蛋白总量变化不大,但细胞核提取物中AIF显著增多,即AIF出现核转位的现象.结论 X射线辐照能够诱导小鼠精原细胞发生凋亡,该过程中伴有AIF入核的现象.
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早期梅毒患者血浆Th1细胞和Th2细胞趋化因子水平增加
目的 研究早期梅毒患者血浆1型辅助T(Th1)细胞和Th2细胞趋化因子水平变化,分析Th1细胞/Th2细胞趋化因子在早期梅毒免疫应答和发病中的作用.方法 采集56例早期梅毒患者(一期梅毒22例和二期梅毒34例)和20例健康体检者外周肝素抗凝血,ELISA检测血浆中Th1细胞趋化因子γ干扰素诱导的单核因子(MIG)、γ干扰素诱导蛋白10 (IP-10)、干扰素诱导的T细胞α趋化蛋白(I-TAC)和Th2细胞趋化因子胸腺及活化调节的趋化因子(TARC)、单核细胞来源的趋化因子(MDC)含量;同时检测血浆中γ干扰素(IFN-γ)、白细胞介素4(IL-4)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和C反应蛋白(CRP)的含量.结果 一期和二期梅毒患者血浆MIG、IP-10和TRAC、MDC含量均显著高于对照组;二期梅毒患者血浆I-TAC显著高于健康对照组.尤其是,二期梅毒患者血浆Th1细胞趋化因子MIG、IP-10和I-TAC水平均显著高于一期梅毒,而一期和二期梅毒患者血浆Th2细胞趋化因子MDC、TARC水平无显著差异.相关分析显示,早期梅毒患者血浆IP-10与MIG、I-TAC、IFN-γ及TNF-α之间均呈显著正相关.而且,早期梅毒患者血浆MIG、IP-10与CRP水平之间均呈显著正相关.结论 Th1细胞趋化因子和Th2细胞趋化因子参与早期梅毒免疫应答.
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TRGV及预后相关趋化因子/受体基因在T细胞淋巴瘤中的表达变化
目的 分析非γδ T细胞型的T细胞淋巴瘤患者外周血中T细胞受体γ(TCR γ)亚家族可变区Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ(TRGV Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ)基因和预后相关趋化因子及其受体基因(CCL20、CCR6、CCL17、CCL22以及CCR4)的表达情况,探讨γδ T细胞与趋化因子/受体表达的相关性及其与疾病转归的相关性.方法 收集27例非γδ T细胞型的T细胞淋巴瘤患者外周血样本,同时收集9例健康志愿者外周血样本作为对照.采用荧光实时定量PCR检测T细胞淋巴瘤患者以及正常人外周血中TRGV Ⅰ~Ⅲ亚家族基因以及CCL20/CCR6、CCL17/CCL22/CCR4基因的表达水平.结果 初发组、难治复发组和缓解组的TRGV Ⅰ~Ⅲ亚家族的表达水平与正常组相比均有不同程度的增高,且TRGV亚家族表达模式发生改变.初发组和难治复发组的CCL22和CCR4的表达水平显著高于正常组,而CCL17表达水平显著低于正常组.初发、缓解和难治复发组的患者外周血中TRGV各亚家族基因与各趋化因子及受体基因表达水平的相关性模式也发生改变.初发组和难治复发组存在低表达的TRGVⅡ亚家族,治疗缓解后TRGV Ⅱ亚家族的表达升高.结论 TRGV Ⅱ亚家族可能是抗T细胞淋巴瘤的T细胞功能亚群,可能与疾病的发病和转归相关.T细胞淋巴瘤中高表达水平的CCL22/CCR4,可能与疾病的发病有关.
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硫氧还蛋白与β-联蛋白在宫颈鳞状细胞癌组织高表达且与恶性程度相关
目的 探讨硫氧还蛋白(Srx)和β-联蛋白(p-catenin)在宫颈鳞状细胞癌(CSCC)组织中的表达及临床意义.方法 免疫组织化学法检测正常宫颈上皮、宫颈上皮内瘤变(CIN)以及CSCC组织中Srx与β-catenin的表达,分析与CSCC临床病理指标的关系,探讨Srx与β-catenin表达的相关性.结果 Srx与β-catenin的表达在CIN组织、宫颈癌中均显著高于正常宫颈组织,并且Srx与β-catenin表达呈正相关.Srx的表达与淋巴结转移、脉管浸润、浸润深度有关;β-catenin的表达与肿瘤转移、组织分级、FIGO分期密切相关.结论 Srx和β-catenin在CSCC中高表达且与恶性程度相关.
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抑制肾癌细胞自噬可增强癌细胞对舒尼替尼的敏感性
目的 检测肾癌中自噬的表达水平及其对舒尼替尼耐药性的影响.方法 采用免疫组织化学法检测自噬相关基因5(ATG5)与微管相关蛋白1轻链3(LC3)在99例肾透明细胞癌组织中的表达,并进行临床病理及生存分析;通过慢病毒感染技术构建ATG5低表达的A-498肾癌细胞株,Western blot法检测干扰效果;流式细胞术检测ATG5正常表达与低表达的A-498细胞增殖的变化;经舒尼替尼刺激后,MTF法检测A-498细胞存活率.结果 ATG5与LC3在肾癌组织中的表达显著高于癌旁组织,且ATG5与LC3的表达与肾癌的分型、分化程度、TNM分期、术后生存率具有相关性,而与性别、年龄、部位、大小无关;与对照组相比,ATG5低表达的A-498细胞ATG5与LC3蛋白表达明显降低、细胞增殖率(G2/M期百分比)明显降低;且对舒尼替尼敏感性增加,与舒尼替尼呈剂量依赖性.结论 肾癌组织中自噬活跃,抑制自噬ATG5表达后,明显增强人肾癌细胞对舒尼替尼的敏感性.
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MMP-2、MMP-9在JAK2 V617F阳性的骨髓增殖性肿瘤中表达增强
目的 探讨基质金属蛋白酶2(MMP-2)、MMP-9在Janus激酶2 V617F(JAK2V617F)阳性骨髓增殖性肿瘤(MPN)中的表达及意义.方法 选取58例JAK2 V617F突变阳性的MPN患者,女24例及男34例,中位年龄57岁.其中包括原发性骨髓纤维化21例、血小板增多症19例、真性红细胞增多症18例.所有58例患者中包括初治组40例(再分为肝或脾肿大组28例及无肝或脾肿大组12例),治疗组18例.对照组为15例健康志愿者.应用免疫组织化学染色法检测各组骨髓组织中磷酸化JAK2 (p-JAK2)、MMP-2、MMP-9的表达水平.实时荧光定量PCR方法检测JAK2 V617F与JAK2比值,计算突变量.流式细胞术检测骨髓CD34+细胞计数.TranswellTM小室检测细胞迁移力.结果 JAK2 V617F/JAK2突变量在初治组高于治疗组,p-JAK2、MMP-2、MMP-9蛋白阳性率在初治组均显著高于治疗组和对照组.Spearman相关分析显示在初治组、治疗组JAK2V617F突变量分别与MMP-2、MMP-9蛋白阳性率正相关.0.5万U/L干扰素α2b(IFN-α2b)能够抑制MPN原代细胞迁移.肝脾肿大组患者JAK2 V617F/JAK2、MMP-2、MMP-9、CD34+细胞表达水平明显高于无肝脾肿大组.结论 MMP-2、MMP-9在JAK2 V617F阳性MPN中的表达异常升高,并与JAK2 V617F突变量密切相关.
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miR-9在TGF-β诱导的人肾小管上皮细胞纤维化中的作用
目的 探讨miR-9对转化生长因子β(TGF-β)诱导的HK-2肾小管上皮细胞纤维化过程中的作用.方法 永生化的HK-2细胞给予5 ng/mL TGF-β刺激0、72 h,应用实时荧光定量PCR检测上皮钙黏素(E-cadherin)、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、1型胶原蛋白(Col1)、3型胶原蛋白(Col3)、纤连蛋白(fibronectin)、结缔组织生长因子(CTGF)的mRNA和miR-9水平;Western blot法检测E-cadherin、α-SMA、Col1、Col3、fibronectin、CTGF的表达变化;给予5 ng/mL TGF-β刺激或不用TGF-β刺激的HK-2细胞,培养48 h,转染miR-9的模拟物、模拟物阴性对照,采用实时定量PCR及Western blot法检测上述指标的变化.生物信息学方法预测miR-9的靶基因,荧光素酶报告基因法进行验证.结果 TGF-β刺激72 h后,HK-2细胞中的miR-9、α-SMA、Col1、Col3、fibronectin、CTGF的水平增加,而E-cadherin水平下降;给予HK-2细胞转染miR-9模拟物后,miR-9、α-SMA、Col1、Col3、fibronectin、CTGF含量增加,E-cadherin含量下降;给予HK-2细胞TGF-β刺激48 h并转染miR-9抑制剂后,miR-9、α-SMA、Col1、Col3、fibronectin、CTGF含量下降,E-cadherin含量增加.通过TargetScan进行生物学信息预测,结果显示E-cadherin可能为miR-9的靶基因,并通过荧光素酶报告基因确证.结论 miR-9在人HK-2细胞转分化中起重要作用,并且通过抑制E-cadherin的表达而促进HK-2细胞转分化及纤维化.miR-9抑制剂可逆转TGF-β刺激HK-2细胞转分化及纤维化.
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4-戊基苯酚单克隆抗体的制备及其可变区的同源建模
目的 制备4-戊基苯酚(4-AP)单克隆抗体(mAb),通过分子生物学方法对其可变区cDNA克隆和同源建模,为4-AP单链抗体制备及抗体分子层面改造奠定基础,同时为4-AP的免疫学检测提供一种新方法.方法 将免疫小鼠脾脏细胞与Sp2/0细胞融合,筛选出F10阳性单抗细胞株.通过其mRNA的抽提,克隆出可变区cDNA序列,利用生物软件进行同源建模和分子对接.结果 在适条件下,其间接竞争ELISA (ic-ELISA)公式为y=A2+(A1-A2)/(1+(x/x0)p)(A1=1.28;A2=-0.07;x0=12 560.75;p =0.74),相关系数(R2)为0.997,其低检测限为0.65 μg/mL.mAb重链和轻链分别属于IgG1型和Kappa型,其与4-AP的结合力为氢键和疏水作用.结论 成功制备出1株稳定分泌的4-AP mAb的杂交瘤细胞株.通过同源建模对抗体可变区空间结构进行深入研究,为单链抗体及抗体改造提供参考,同时为4-AP含量检测提供新方法.
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可溶型AXL检测试剂盒的建立及初步应用
目的 制备酪氨酸激酶受体anexelekto (AXL)单克隆抗体(mAb),建立可溶型AXL (sAXL)的ELISA试剂盒并对肾综合征出血热患者血浆sAXL含量进行检测.方法 采用商品化的AXL抗原作为免疫原,常规方法制备小鼠源性mAb,间接ELISA检测小鼠腹水效价,阵距法配对建立sAXL夹心ELISA试剂盒.结果 成功制备了检测sAXL的ELISA试剂盒,肾综合征出血热患者血浆中sAXL水平明显高于正常人水平.结论 制备了酪氨酸激酶受体AXL的mAb并成功制备了sAXL的ELISA试剂盒,适用于人血浆中sAXL的定量检测.
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GARP+调节性T细胞及其与部分疾病关系的研究进展
调节性T细胞(Treg)抑制免疫反应,诱导并维持免疫耐受.糖蛋白A为主的重复序列(GARP)是一种富含亮氨酸重复序列的跨膜蛋白,在免疫细胞中特异表达于活化的天然调节性T细胞(nTreg)表面.GARP与Treg表面的潜在转化生长因子β(L-TGF-β)结合,促进TGF-β的活化和分泌,与FOXP3形成正反馈环调节,增强Treg免疫抑制功能.GARP+ Treg在动脉粥样硬化、急性冠脉综合征、肠道炎症、肿瘤等多种疾病中发挥免疫调节功能,具有潜在临床应用价值.
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IgA缺乏型输血过敏反应研究进展
IgA缺乏型输血过敏反应是指当患者血清IgA含量低于0.05 mg/dL且存在抗IgA抗体时,输血后1h内发生的过敏反应;是病因明确的一种输血类过敏反应,也是临床工作中常见的一类原发性免疫缺陷疾病.它是由抗原抗体反应激活补体、释放致敏物质C3a、C5a等引起的一系列类过敏反应,严重者可引起休克,如果不及时抢救会导致死亡.补体C5a、脑源性嗜神经组织因子和趋化因子CC趋化因子配体5(CCL5)等可能与IgA缺乏型输血过敏反应有关.本文就IgA缺乏引起的输血过敏反应及其相关研究进展进行综述.
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固有免疫的表观遗传学调控研究进展
固有免疫细胞与病原体的相互作用会导致基因表达的变化,从而触发机体的第一道免疫防线活化来抵抗感染.虽然信号通路和转录因子在固有免疫应答中发挥中心作用,但是人们越来越清楚地看到表观遗传因素,包括DNA或组蛋白修饰以及非编码RNA对不同类型的固有免疫细胞的谱系分化和基因表达的调控都至关重要.大部分表观遗传型是在细胞分化过程中建立起来的,但是病原体和其他环境刺激因素也能诱导表观遗传修饰的改变,这种改变可以提高固有免疫的耐受性或者使固有免疫细胞发挥更强大的应答能力.本文就表观遗传学因素对固有免疫应答的启动、维持和调节的重要贡献进行回顾.
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NK细胞的免疫监视作用及肿瘤免疫逃逸
自然杀伤(NK)细胞在机体抗肿瘤及抗感染免疫中发挥着重要的免疫监视作用,在杀伤肿瘤细胞的过程中,不需要肿瘤特异性抗原的识别便可以直接发挥杀伤效应,故NK细胞对肿瘤细胞的杀伤作用更直接、更迅速,在肿瘤免疫治疗方面具有显著优势.NK细胞的免疫监视功能主要与其表面不同类型受体的表达有关,如NKG2D、自然杀伤细胞毒性受体(NCR)、CD226等.而肿瘤细胞则可以利用肿瘤微环境中多种因素逃逸NK细胞的免疫监视,如血小板、腺苷酸、细胞因子、吲哚胺2,3双加氧酶(IDO)等,进而形成肿瘤并发生转移.因此肿瘤微环境中诱导肿瘤逃逸NK细胞免疫监视的这些因素,有可能成为今后提高NK细胞免疫治疗疗效的候选靶点之一.
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针对抗肿瘤血管生成的分子靶向治疗进展
血管生成是肿瘤转移和致癌作用的关键.这种依赖毛细血管的增殖为肿瘤细胞提供营养和氧气的血管生成机制,成为目前研究的热点.利用现代分子生物学手段合成或者寻找天然化合物抑制剂能阻断肿瘤血管的生成.许多血管生成抑制剂不仅有效,发挥抑制作用,减少治疗时间,但同时也导致一些严重的副作用;单一化合物发挥抗血管生成的作用非常局限,联合两种以上的天然化合物,能发挥有效的抗血管生成作用.另外,微小RNA (miRNA)是一组高度保守的、单链、短的非编码RNA,是转录后水平调控基因表达的阻遏蛋白,能直接针对血管生成因子和蛋白激酶发挥重要的抗血管生成作用.对于机体而言,肿瘤血管生成,还促进肿瘤逃避免疫反应,抗肿瘤免疫可能会为增强抗血管新生带来好处.本文总结了血管生成的概念、分子途径、血管生成抑制剂及其进展.
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增强自然杀伤细胞杀伤活性方法的研究进展
自然杀伤(NK)细胞是固有免疫系统的重要组成部分,在人体免疫应答中具有重要作用.与适应性免疫系统的T、B细胞相比,其大特点是不需要预先致敏即可直接杀伤肿瘤、病毒感染等靶细胞.基于NK细胞的抗肿瘤过继免疫治疗具有广阔的应用前景,提高NK细胞杀伤活性的途径与方法,是促进其临床应用的重要环节.本文结合国内外的研究进展与目前临床的治疗方法,分别从提高NK细胞自身杀伤活性和增强肿瘤细胞敏感性两个角度切入,总结促进NK细胞免疫治疗的途径与方法,以期为NK抗肿瘤的基础和临床应用研究提供较为清晰的研究思路与理论参考.
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调节性B细胞亚群及其相关表面标志
B细胞能够分泌抗体、递呈抗原,在免疫应答中发挥重要作用.部分B细胞还具有抑制免疫炎症反应的功能,被称为调节性B细胞(Breg).Breg在多种自体免疫性疾病、感染和肿瘤等的发生发展过程中起着重要的调节作用;对其研究将有助于深入阐述多种临床相关疾病的发病和治疗.Breg亚群众多,它们多数具有与调节性T细胞(Treg)类似的功能,激活后发挥免疫调节作用.本文主要总结了已报道的人与鼠的Breg亚群及其相关表面标志,并探讨了其未来的研究方向.
年 | 期数 |
2018 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2017 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2016 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2015 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2014 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2013 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2012 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2011 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2010 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2009 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2008 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2007 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2006 | 01 02 03 04 05 06 |
2005 | 01 02 03 04 05 06 z1 |
2004 | 01 02 03 04 05 06 |
2003 | 01 02 03 04 05 06 |
2002 | 01 02 03 04 05 06 |
2001 | 01 02 03 04 05 06 |
2000 | 01 02 03 04 05 06 |
1999 | 01 02 |
1995 | 01 02 03 |
1994 | 01 02 |
1993 | 01 02 03 04 |
1992 | 01 02 03 04 |
1991 | 01 02 03 04 |
1990 | 01 02 |
1989 | 01 02 03 04 |