细胞与分子免疫学杂志
Chinese Journal of Cellular and Molecular Immunology 세포여분자면역학잡지
- 主管单位: 中国免疫学会;第四军医大学
- 主办单位: 陕西省免疫学会,中国免疫学会
- 影响因子: 0.81
- 审稿时间: 1-3个月
- 国际刊号: 1007-8738
- 国内刊号: 61-1304/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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鸡IL-2基因的扩增、表达及生物学活性鉴定
目的:扩增鸡IL-2基因,并在大肠杆菌中表达及活性鉴定.方法:从ConA激活的AA肉鸡脾淋巴细胞中提取mRNA,以RT-PCR法扩增鸡IL-2 cDNA,将其克隆到原核表达载体pGEX-6P-1中,构建重组质粒pGEX-IL-2.以重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)进行表达.并用淋巴细胞增殖试验及Western blot检测表达产物的生物学活性.结果:以重组质粒转化大肠杆菌经IPTG诱导后,经SDS-PAGE后薄层扫描分析证实,融合表达产物GST-IL-2表达量占表达菌菌体总蛋白的30.8%.Western blot分析表明,在相对分子质量(Mr)为42 000处有一条特异性的带.经淋巴细胞增殖试验证实,该表达产物可明显增强淋巴细胞增殖.结论:鸡IL-2基因在大肠杆菌中获得了高效表达,表达产物具有良好的生物学活性.
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以报告基因荧光素酶研究HPRE功能元件与IFN-α应答的关系
目的:以荧光素酶(luciferase,LUC)基因为报告基因,探讨HBV转录后调节序列(HPRE)的功能元件(α、β1和β2)对IFN-α作用的影响.方法:用PCR法从载体pGEM-luc中扩增LUC基因,并克隆入真核表达载体pcDNA3.0中.以含乙肝病毒(HBV)基因组的质粒A01为模板,扩增HPRE(完整的HPRE)、 HPREαβ1及HPREβ1β2片段,并分别插入LUC基因的下游.利用脂质体介导的转染法,将重组质粒分别导入人肝癌细胞株HepG2中,用LUC检测系统检测IFN-α作用前后LUC表达活性的变化.结果:经测序证实,重组质粒pcDNA3.0-luc、 pcDNA3.0-luc-HPRE、 pcDNA3.0-luc-HPREαβ1及pcDNA3.0-luc-HPREβ1β2构建成功.检测结果显示,IFN-α作用前,HPRE、 HPREαβ1和HPREβ1β2 均能提高LUC的活性,IFN-α作用后,HPRE和HPREβ1β2能明显降低LUC的活性,而HPREαβ1对其表达则没有显著影响.结论:HPRE的功能元件β2与IFN-α作用的关系为密切,而功能元件α和β1在IFN-α应答中作用甚小,提示IFN-α诱导产生的HPRE抑制性结合蛋白很可能是与β2结合的,为进一步研究IFN-α在治疗HBV感染和慢性肝炎中的作用机制,以及HPRE抑制性结合蛋白的作用提供了一定的实验依据.
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美法仑体内的抗肿瘤作用与IFN-γ的关系
目的:探讨单一剂量的美法仑对荷瘤野生型C57BL/6小鼠的疗效与IFN-γ的关系.方法:以3种遗传背景相同、基因型不同的IFN-γ+/+、 IFN-γ+/-和IFN-γ-/- C57BL/6小鼠为模型,皮下接种数量相同的小鼠淋巴瘤EL4细胞.接种瘤细胞后12 d,给基因型不同的各组荷瘤小鼠腹腔内单次注射7.5 mg/kg的美法仑.以野生型C57BL/6荷瘤小鼠(IFN-γ+/+)为对照,观察美法仑对IFN-γ+/- C57BL/6荷瘤小鼠和IFN-γ-/- C57BL/6荷瘤小鼠的治疗效应.结果:7.5 mg/kg 的美法仑单次腹腔内注射治疗后,可使IFN-γ+/+和IFN-γ+/- C57BL/6小鼠的肿瘤完全消退并治愈,而对IFN-γ-/-荷瘤C57BL/6小鼠无治疗作用.结论:IFN-γ与美法仑化疗的效果密切相关,即美法仑的抗肿瘤作用需要IFN-γ参与.
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野生型及突变型人白细胞介素13的原核表达及活性分析
目的:在大肠杆菌中表达野生型和突变型重组人IL-13,经纯化复性获得具有有活性的蛋白.方法:用PCR扩增IL-13基因片段,用定点突变PCR获得其突变体(IL-13' )基因.将IL-13和IL-13'基因分别克隆至原核表达载体pET30a(+)中,构建重组体pET30a(+)IL-13和pET30a(+)IL-13',分别命名为pETIL-13和pETIL-13'.以重组体转化E.coli BL21(DE3)在IPTG诱导下进行表达.表达产物用Ni-NTA层析柱进行纯化.纯化产物用氧化还原谷胱甘肽系统透析复性后,检测其生物学活性.结果:在E.coli BL21(DE3)中表达了IL-13/IL-13' -His6融合蛋白.经 SDS-PAGE显示,融合蛋白的Mr约17 000,经Western blot证实为人IL-13.表达的融合蛋白以包涵体的形式存在,纯化后得到较高纯度的重组蛋白.复性后的包涵体检测具有生物学活性.结论:成功地获得具有生物学活性的野生型和突变型人IL-13重组蛋白,为下一步研究奠定了基础.
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mCD1.1分子的真核表达及其对NKT细胞的刺激作用
目的:获得稳定表达mCD1.1分子的细胞系,研究其对肝脏和肠系膜淋巴结淋巴细胞的刺激作用.方法:分离C57小鼠的小肠上皮细胞,制备总RNA,通过RT-PCR扩增mCD1.1编码区基因,将其克隆至真核表达载体pcDNA3.1.将所得重组质粒pcDNA3.1-mCD1.1通过电穿孔法转至CHO细胞中,在含G418的的选择性培养基中筛选抗性克隆,利用RT-PCR和流式细胞术对挑取的克隆进行mCD1.1表达的鉴定.将表达mCD1.1的细胞与新分离的肝脏和肠系膜淋巴结(MLN)的淋巴细胞进行共培养,并用丝裂霉素C抑制CHO细胞的增殖,然后利用MTT法检测淋巴细胞的增殖情况;另外将表达mCD1.1的CHO细胞与淋巴细胞共培养后,分离淋巴细胞,然后用PE-anti-NK1.1和Cychrome-anti-CD3对其进行标记,利用流式细胞术检测CD3细胞中NK1.1阳性细胞的比例.结果:通过RT-PCR,得到mCD1.1的编码区基因,序列与预期相符;通过多次鉴定,证明筛选得到的细胞克隆可稳定表达mCD1.1;CHO-mCD1.1细胞与新分离的淋巴细胞共培养,在有无LPS存在的情况下,均能刺激淋巴细胞发生增殖,并使CD3+细胞中NK1.1阳性细胞的比例增加.结论:表达mCD1.1的CHO细胞能够刺激NKT细胞增殖.
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Fas-FasL和caspase-3信号通路在启动SLE患者T细胞亚群凋亡中的作用
目的:探讨SLE患者T细胞亚群的Fas-FasL信号传导通路与T细胞凋亡紊乱的关系.方法:应用流式细胞术测定T细胞亚群表面Fas、 FasL的表达率及细胞质中活化caspase-3的表达率.结果:与健康对照组相比较,活动期及稳定期SLE患者组CD4+ T细胞表面Fas的表达率均显著增加(P<0.05),CD8+ T细胞表面Fas的表达率略有增加但无统计学意义(P>0.05).稳定期和活动期SLE患者组T细胞亚群表面FasL的表达率均显著增加(P<0.05),但两疾病组间T细胞亚群表面Fas、 FasL的表达率无显著性差异(P>0.05).活动期SLE患者组T细胞亚群细胞质中活化caspase-3的表达率,明显高于稳定期SLE患者组和健康对照组(P<0.05).稳定期SLE患者组T细胞亚群细胞质中活化caspase-3的表达率略高于健康对照组,但无统计学意义.结论:SLE患者外周血T细胞亚群凋亡加速,CD4+ T细胞的凋亡活跃,其中Fas-FasL信号传导途径可能起重要的作用.T细胞凋亡紊乱的程度与SLE的活动程度密切相关.
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雷帕霉素和地塞米松对小鼠树突状细胞分化成熟的调控
目的:观察雷帕霉素(rapamycin,Rap)和地塞米松(dexamethasone,Dex)对培养的小鼠骨髓来源的树突状细胞(DC)分化发育的影响.方法:(1)用GM-CSF+IL- 4定向诱导C57BL/6小鼠骨髓细胞分化为DC,分别加入Rap或Dex,然后用脂多糖(LPS)刺激.在倒置显微镜和扫描电镜下,动态观察DC形态学上的变化.(2)通过流式细胞术(荧光抗体双标记法)测定CD11c+细胞的比例及CD86和MHC-Ⅱ类分子表达的变化.(3)通过单向混合淋巴细胞反应(MLR)观察,Rap和Dex处理的DC刺激BALB/c小鼠同种异基因T细胞增殖的情况.结果:(1)经Rap和Dex处理后,DC在形态学上呈现稳定不成熟状态.(2)Rap处理的细胞表面CD11c和MHC-Ⅱ类分子的表达仅有轻度降低,而CD86的表达明显降低.Dex处理的细胞表面CD11c的表达与Dex的剂量呈负相关,CD86和MHC-Ⅱ类分子的表达均明显降低.两种药物处理的DC均可抵抗LPS的促成熟作用.(3)MLR的结果显示,Rap和Dex处理的DC刺激同种异基因BALB/c小鼠T细胞增殖的能力均较低.结论:Rap和Dex均可使DC处于稳定的不成熟状态.与Dex相比,Rap对骨髓造血干细胞向DC分化的过程影响较小,而且在抑制DC表面协同刺激分子CD86表达的同时,对MHC-Ⅱ类分子的表达影响较小.
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T细胞免疫对小鼠星形胶质细胞巨细胞病毒感染的保护作用
目的:研究T细胞免疫对小鼠星形胶质细胞巨细胞病毒(CMV)感染时的免疫保护作用.方法:建立小鼠T细胞与感染巨细胞病毒的同系小鼠星形胶质细胞体外共培养的细胞模型.通过显微镜观察和绿色荧光染料CFSE标记后流式细胞术检测方法来判断T细胞克隆增殖情况;以ELISA检测共培养上清中IFN-γ和TNF-α的含量;通过观察星形胶质细胞感染CMV后特异性的细胞病变和PCR方法检测星形胶质细胞内CMV DNA的负荷量来了解T细胞针对CMV的免疫保护作用.结果:在共培养3 d后,可见到少量的T细胞克隆形成,CFSE标记的方法显示发生过增殖的T细胞占T细胞总数的(6.68±0.61)%,与未加CMV刺激的对照组有显著性差异(P<0.01).共培养上清中的IFN-γ浓度为(22.9±3.4) ng/L,而对照组为<8 ng/L (P<0.05).但在试剂盒检测范围内各组均未检出TNF-α.共培养的T细胞能够减少31.25%~75%的细胞病变产生,减少~75%的CMV DNA负荷量.共培养3 d的培养细胞上清也具有免疫保护作用.而将具有免疫保护作用的T细胞与感染CMV的星形胶质细胞继续培养3 d,发现T细胞的增殖明显减少(1.83±0.25)%,培养上清中未检出IFN-γ,CMV DNA的负荷量无减少,提示T细胞的免疫功能受到抑制.结论:小鼠星形胶质细胞在感染CMV后能够刺激T细胞增殖活化;T细胞免疫能够发挥一定程度的保护作用,这种保护作用有部分是由分泌性的细胞因子介导的;T细胞活化后功能很快受到抑制,其中的机制有待进一步研究.
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人睾丸精子结合蛋白-His6融合蛋白在真核细胞中的表达及亲和纯化
目的:构建含有人睾丸精子结合蛋白基因(testis sperm binding protein,tsbp)的真核表达载体pcDNA3.1/myc-His(-)B/tsbp,并进行表达和纯化.方法:以克隆有tsbp全长cDNA序列的原核表达载体pGEX-5X-1/tsbp为模板,用PCR扩增tsbp,并通过DNA重组构建真核表达载体pcDNA3.1/myc-His(-)B/tsbp.以重组体稳定转染HEK293细胞后,应用RT-PCR、 Western blot和细胞免疫荧光技术检测His6-tsbp融合蛋白的表达.选择高表达量的细胞克隆,扩增并用Ni2+-NTA金属亲和层析柱(IMAC)从细胞裂解液中纯化融合蛋白His6-tsbp,纯化产物的纯度用SDS-PAGE和Western blot进行鉴定.结果:成功地构建了真核表达载体pcDNA3.1/myc-His(-)B/tsbp.以重组体转染HEK293细胞后,用RT-PCR检测到tsbp mRNA的表达.细胞免疫荧光染色呈阳性反应,Western blot检测到培养细胞中有融合蛋白His6-tsbp的表达.经Ni2+-NTA金属亲和层析柱分离纯化,得到纯化的重组蛋白His6-tsbp.结论:构建了pcDNA3.1/myc-His(-)B/tsbp真核表达载体,并在HEK293细胞中表达和亲和层析纯化,为下一步的研究奠定了基础.
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Mtb8.4/hIL12嵌合基因疫苗免疫原性
目的:构建克隆结核分枝杆菌Mtb8.4/hIL12嵌合基因疫苗,并在COS-7细胞中表达,研究该疫苗的免疫原性.方法:克隆Mtb8.4/hIL12嵌合基因,并导入真核表达载体pCI-neo中,构建pCI-neo-Mtb8.4/hIL12重组真核质粒.用限制性内切酶消化、 PCR及DNA序列测定等鉴定后,转染COS-7细胞,用RT-PCR和Western blot鉴定Mtb8.4/hIL12嵌合基因在转录水平的表达.用Mtb8.4/hIL-12嵌合基因疫苗免疫C57BL/6N小鼠,收集脾细胞培养上清检测细胞因子的水平,并用乳酸脱氢酶(LDH)释放法测定细胞毒性T细胞(CTL)的杀伤作用.结果:pCI-neo-Mtb8.4/hIL12重组质粒构建成功.以其转染COS-7细胞后,Mtb8.4/hIL12嵌合基因在转录水平获得表达.Mtb8.4/hIL-12嵌合基因疫苗能诱导较强的抗原特异性Th1型细胞免疫应答,IFN-γ和IL-2的分泌增加,IL- 4的分泌减少,特异性CTL的杀伤活性增强.结论:成功地构建pCI-neo-Mtb8.4/hIL12重组质粒,并在COS-7细胞中表达.构建的Mtb8.4/hIL12基因疫苗具有较强的免疫原性,可明显诱导CTL的杀伤活性.
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大鼠TCR Vβ8.2基因真核表达质粒的构建及表达
目的:构建含大鼠TCR Vβ 8.2基因的重组真核表达质粒,并检测其在体内外的表达.方法:以RT-PCR法分离Lewis大鼠脾淋巴细胞中的TCR Vβ 8.2基因片段,插入到真核表达载体pTARGET中,构建重组表达载体pTARGET-TCR Vβ 8.2,并转化E.coli JM109,经蓝白斑筛选阳性菌落,进行菌落PCR和测序鉴定.将重组质粒以肌注法免疫BALB/c小鼠,采集注射部位股四头肌处的肌肉,用RT-PCR及免疫组化染色法检测TCR Vβ 8.2基因在注射部位的转录和表达.通过脂质体介导,将重组质粒导入COS-7细胞中进行瞬时表达,用免疫细胞化学染色法检测靶基因在真核细胞内的表达.结果:测序鉴定证实,TCR Vβ 8.2基因已被正确插入到pTARGET载体中,并检测到在肌肉组织和COS-7细胞内重组蛋白的表达.结论:成功地构建重组真核表达质粒pTARGET-TCR Vβ 8.2,并在体内体外均可检测到其转录和表达,为进一步进行TCR VβDNA疫苗的研究奠定了基础.
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骨髓基质干细胞培养、鉴定及标记的初步研究
目的:对骨髓基质干细胞的培养方法、鉴定及标记技术进行初步研究.方法:采用贴壁法培养大鼠骨髓细胞,经反复传代细胞逐渐纯化,以流式细胞术检测细胞表面抗原.以BrdU标记骨髓基质干细胞,将骨髓基质干细胞注入大鼠脑内,2周后取脑作石蜡切片,进行免疫荧光染色.结果:通过贴壁法培养大鼠骨髓细胞可获得较纯化的细胞,并能在体外长期培养,流式细胞术检测显示CD34、 CD31、 CD45阴性,CD90、 CD44、 CD71阳性.BrdU可掺入DNA合成期的骨髓基质干细胞.结论:贴壁法可获得高纯度的骨髓基质干细胞,BrdU可作为骨髓基质干细胞体内示踪的理想标记物.
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不同HBsAg疫苗联合免疫后诱导小鼠细胞和体液免疫应答的研究
目的:了解HBsAg的蛋白疫苗(P)、痘苗病毒疫苗(V)、DNA疫苗(D)联合免疫小鼠诱导的特异性体液和细胞免疫应答.方法:以P 、V或D 疫苗中的一种疫苗初次免疫BALB/c小鼠后,于第2、5、8、11周再用另一种疫苗加强,共产生9种免疫组合:即PP、PV、PD、VP、VV、VD、DP DV及DD.于初免后第2、5、8、11周采血检测血清中抗HBsAg IgG的总滴度及其IgG1和IgG2a亚类,并于每次加强免疫后第7天,检测小鼠脾脏的CTL对P815S细胞的特异性杀伤率.结果:在P、V、D 3种疫苗中,V疫苗诱导产生抗HBsAg抗体的速度快,P疫苗诱导的体液免疫回忆反应强,D疫苗诱导产生的抗体弱.除PP 疫苗组合诱导的抗体明显倾向于IgG1外,其他均无明显的倾向性.各种免疫组合中,VD和DV疫苗组诱导的CTL应答强,对P815S的特异性杀伤率分别为71%和64%.结论:在各种联合免疫组合中,PV、PD、VP和VD疫苗组的抗体应答较好;而DV和VD疫苗组诱导的CTL杀伤效应强.
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IFN-α对宫颈癌细胞MHC-I类链相关蛋白A表达的上调作用
目的:观察IFN-α对宫颈癌细胞MHC-I类链相关蛋白A(MICA)表达及功能的影响.方法:以IFN-α诱导宫颈癌细胞系HeLa和Caski后,用半定量RT-PCR和免疫组化染色法观察诱导前后MICA mRNA和其蛋白表达的变化,用MTT比色法检测诱导前后宫颈癌细胞对外周血NK细胞杀伤敏感性的变化.结果:经IFN-α诱导后,HeLa和Caski细胞中MICA mRNA和其表面MICA蛋白的表达水平均明显上调,并呈一定的时间和剂量依赖关系.NK细胞对MICA表达较高的HeLa细胞的杀伤活性,明显高于对MICA弱表达的Caski细胞.经1×106U/L IFN-α诱导3 d后,两种细胞对NK细胞杀伤的敏感性均明显增强(P<0.01).结论:IFN-α可上调MICA在肿瘤细胞表面的表达,并可增强肿瘤细胞对NK细胞杀伤的敏感性.
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槲皮素抑制人胃癌MGC-803细胞增殖并诱导其凋亡的研究
目的:研究槲皮素抑制人胃癌MGC-803细胞增殖和诱导凋亡的作用.方法:采用MTT比色法检测不同终浓度的槲皮素对MGC-803细胞增殖的影响及其细胞毒活性.应用TUNEL(TdT-mediated dUTP nick end labeling)染色法检测槲皮素诱导MGC-803细胞凋亡的作用.用免疫组化法测定P16、 P53和C-myc的表达率.结果:在40~100 μmol/L范围内,槲皮素可显著抑制MGC-803细胞增殖(P<0.01),且呈剂量、时间依赖性.TUNEL染色显示,槲皮素诱导48 h后,MGC-803细胞的凋亡率明显高于对照组(P<0.01).免疫组化检测表明,用药组P53及C-myc蛋白的表达下降,P16蛋白的表达率增强,与对照组相比较均有显著性差异(P<0.01).结论:槲皮素可抑制人胃癌MGC-803细胞增殖,并能诱导其凋亡,其作用机制可能与下调P53及C-myc蛋白的表达、上调P16蛋白的表达有关.
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家族聚集性慢性乙型病毒性肝炎患者PBMC免疫相关的基因表达谱
目的:应用寡核苷酸基因芯片技术,研究家族聚集性HBV感染者外周血单个核细胞(PBMC)免疫相关基因的表达谱.方法:在一聚集性HBV感染家族中,选取患者5例和患者的正常配偶4例,提取PBMC中的 RNA,与涵盖2.2万个EST的寡核苷酸表达谱基因芯片U133A 2.0杂交,通过Affymetrix扫描仪和DNT分析软件比较患病组与对照组PBMC免疫相关基因的的表达谱,获得基因的相对表达比值.结果:在2.2万个EST中,初筛出24个免疫相关差异表达基因,7个基因表达上调,17个表达下调.上调的主要是与适应性免疫相关的基因,下调的主要是与固有免疫相关的基因.结论:宿主感染HBV后,可改变其免疫基因表达,固有免疫功能的障碍可能是HBV感染慢性化的主要原因.
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SDF-1/CXCR4在滋养层细胞中的表达及其在母-胎免疫耐受中的作用
目的:研究趋化因子SDF-1及其配体CXCR4在滋养层细胞中的表达及其在母-胎免疫耐受中的作用.方法:取早孕期的绒毛,分离纯化培养绒毛外滋层养细胞(extra villous trophoblast,EVT),用免疫细胞化学染色法检测SDF-1与 CXCR4在绒毛中的表达.用流式细胞术筛选源于滋养层细胞高表达CXCR4的绒癌细胞株用于体外微孔隔离室迁移实验,以分析SDF-1的趋化活性.用免疫组织化学染色法检测早孕期绒毛及足月妊娠胎盘中SDF-1及CXCR4的表达.结果:在EVT中可检出SDF-1和CXCR4的表达,在一定范围内,SDF-1的趋化活性与其浓度呈正相关(r=0.68,P<0.01). 10 μg/L的SDF-1趋化作用强,大趋化指数CI为1.62±0.12.在早孕期的绒毛及足月胎盘中,滋养层细胞的胞膜和细胞质中均检出SDF-1和CXCR4的表达,但在足月胎盘中的表达强度明显低于早孕期的绒毛组织(P<0.01).结论:SDF-1/CXCR4在妊娠中发挥着重要作用,对维系母-胎免疫耐受具有重要意义.
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双歧杆菌完整肽聚糖对重组乙肝表面抗原细胞免疫应答的影响
目的:探讨双歧杆菌完整肽聚糖(BWPG)对重组乙肝表面抗原(rHBsAg)诱导细胞免疫应答的影响.方法:以BWPG作为rHBsAg的佐剂免疫BALB/c小鼠,观察免疫小鼠的生长状态及中枢淋巴器官的发育情况,检测NK细胞和CTL杀伤活性的变化,脾淋巴细胞的增殖和细胞因子的产生.结果:免疫小鼠未出现可见的毒副反应,胸腺和脾脏组织呈增生状态,脾脏NK细胞和CTL的杀伤活性增强,脾淋巴细胞体外增殖活跃,细胞因子产生增多.结论:BWPG能促进中枢淋巴器官增生,增强机体对rHBsAg的细胞免疫应答.
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不同刺激剂诱导肺癌患者引流淋巴结细胞分泌细胞因子的研究
目的:探讨多种刺激剂对肿瘤引流淋巴结(TDLN)细胞分泌细胞因子的影响及其抗肿瘤效应和机制.方法:采用ELISA和Griess法测定不同刺激组(分别为IL-2、 IL-2+自身肺癌细胞抗原、 IL-2+GM-CSF+IL- 4+自身肺癌细胞抗原和IL-2+GM-CSF+IL- 4+LPS)刺激TDLN后第7、 14、 21天,分泌IL-12 p70、 IFN-γ、 TNF-α和NO的水平.结果:IL-2+GM-CSF+IL- 4+自身肺癌细胞抗原和IL-2+GM-CSF+IL- 4+LPS组刺激的TDLN细胞中,CD83+细胞的比率明显增多,分泌IL-12 p70、 IFN-γ及TNF-α的水平也明显高于IL-2和IL-2+自身肺癌细胞抗原刺激组,IL-2+GM-CSF+IL- 4+LPS组刺激的TDLN细胞分泌NO的水平明显高于其他3组.各种刺激剂刺激TDLN细胞后,分泌IL-12 p70、 IFN-γ和NO的水平在第14天时达到高峰.结论:不同刺激剂诱导TDLN细胞中的CD83+细胞数量不同,故具有不同的抗肿瘤活性.
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Hsp701A基因的RNA干涉对HepG2细胞化疗敏感性的影响
目的:研究Hsp701A基因靶向siRNA表达载体对肿瘤细胞化疗药物敏感性的影响.方法:构建Hsp701A靶向小干涉RNA(siRNA)的真核表达载体,并转染HepG2细胞,以证实siRNA真核表达载体RNAi的有效性.用四唑蓝(MTT)比色法检测HepG2细胞对白藜芦醇、顺铂的敏感性.结果:以构建的Hsp701A基因靶向siRNA的真核表达载体稳定转染HepG2细胞后,两种RNAi组细胞中Hsp701A RNA和蛋白的表达水平均明显下降.Hsp701A基因靶向siRNA真核表达载体转染后,HepG2细胞对不同化疗药物的敏感性有不同程度的增加(P<0.05).结论:Hsp701A基因的RNA干涉可增强HepG2细胞对化疗药物的敏感性.
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免疫相关基因在同一膀胱癌亚克隆细胞株中的差异表达
目的:筛选和鉴定同一膀胱癌亚克隆细胞株中差异表达的与BCG免疫相关的基因.方法:以已建立的两株同一来源、不同生物学表型的膀胱移行细胞癌细胞系BLX和BLS-211为材料,采用抑制性削减杂交技术(SSH)筛选差异表达的基因片段.结果:在BLX细胞中获得9个高表达的基因,在BLS-211细胞中获得15个高表达的基因.BLX细胞中有3个基因,即与卡介苗(BCG)免疫治疗相关的基因BCG诱导的膜蛋白(BIGM103)基因、纤维连接蛋白(FN)基因和补体因子B(BF)基因;BLS-211细胞中有8个基因均为新的表达序列标签(EST),已被GenBank登录(登录号为DY505708-13,DY230447-8).结论:SSH技术筛选表明,BIGM103等免疫相关基因的不同,可能与不同膀胱癌细胞对BCG免疫治疗的差异性有关;新的EST的获得,为进一步克隆全长、研究基因的功能创造了条件.
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SARS病毒Spike蛋白具有中和活性的抗原表位预测和初步鉴定
目的:预测并合成SARS病毒Spike蛋白中具有中和活性的抗原表位,鉴定其在免疫检测和疫苗设计中的作用.方法:使用二级结构以及基因组对比预测方法,预测Spike蛋白中具有较高抗原活性的肽段序列并人工合成.用直接ELISA法检测在SARS确诊阳性患者血清和健康人血清之间相应抗体的检出差别,确定预测肽段是否为SARS的抗原肽段.结果:预测并人工合成了具有抗原活性的GEVFNATKFPSVYAW多肽,在ELISA检测中,可检测出SARS阳性血清中的针对性抗体,阳性符合率为71.4%,在健康人血清中不能检测出对应的抗体,阴性符合率为92%.结论:预测并合成了具有SARS病毒Spike蛋白的中和表位抗原,其特异性高于全病毒抗原,为SARS的诊断及疫苗的设计奠定了基础.
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乙肝病毒前S2抗原与乙肝血清标志物的相关性及其临床意义
目的:探讨前S2抗原(Pre-S2抗原)与乙型肝炎病毒(HBV)隐、显性感染的关系及其临床意义.方法:采用ELISA法同时检测HBV隐性感染者(为主)及适量显性感染者的Pre-S2抗原和乙肝血清标志物,然后进行各类、群感染者之间的比较和分析.结果:在HBV隐性感染的人群中,e抗原阳性者和e抗体阳性者Pre-S2抗原的阳性率分别为93.10%和60.00%;"乙肝大三阳"者和"小三阳"者Pre-S2抗原的阳性率分别为92.31%和62.50%.在乙肝病毒显性感染者(急、慢性乙肝患者)人群中,Pre-S2抗原的阳性率分别为90.91%和61.54%.结论:Pre-S2抗原在判断感染者尤其是隐性感染者血清的传染性、以及隐性感染者的发展转化和显性感染者的临床转归方面,具有较大的参考价值.
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肝癌靶向性SEA-CD80基因共表达重组腺病毒载体的构建及表达鉴定
目的:构建肝癌靶向性葡萄球菌肠毒素A(SEA)和CD80基因共表达重组腺病毒载体.方法:首先利用现有的腺病毒穿梭质粒pShuttle和pShuttle-CMV,构建新的不带CMV增强子/启动子而带有polyA加尾信号穿梭质粒,命名为pShuttle2.将AFP增强子、启动子、 SEA及CD80基因分别从已构建的pKS-EP载体和pMD18-T-BIS载体上,分别亚克隆至pShuttle2中,再与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1共转化E.coli BJ5183.以获得的重组子转染HEK293细胞后制备重组腺病毒,然后感染高表达AFP的肝癌细胞系Hepa1-6和不表达AFP的黑色素瘤细胞系B16、成纤维细胞系NIH3T3.采用间接免疫荧光法,激光共聚焦显微镜观察和流式细胞术检测SEA和CD80在细胞膜表面的表达.采用 3H掺入法检测膜表达的SEA诱导淋巴细胞增殖的活性.结果:以制备的重组腺病毒感染肿瘤细胞后,SEA和CD80能够靶向性地共表达在高表达AFP的Hepa1-6细胞膜上,而在不表达AFP的B16、 NIH3T3细胞膜上不表达.结论:成功地构建肝癌靶向性SEA和CD80基因共表达重组腺病毒载体,为进一步研究SEA和CD80在肝癌靶向基因治疗中的联合应用及其抗肿瘤免疫机制奠定了基础.
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自身免疫甲状腺病患者血清中IL-12和IL-18水平的分析
目的:提供自身免疫甲状腺病(AITD)患者体内Th1/Th2平衡紊乱的依据.方法:应用酶联免疫吸附法(ELISA)测定27例Graves病(GD)、 24例甲状腺功能正常的桥本甲状腺炎(HT)、 25例甲状腺功能低下的HT患者及20例正常对照者血清中IL-12和IL-18的浓度,并检测GD患者的甲状腺刺激性抗体.结果:GD患者与甲状腺功能正常的HT患者血中IL-12、 IL-18水平无明显差异,但均高于正常对照者的相应水平.甲状腺功能低下的HT患者血中IL-12和IL-18的水平与正常对照者无差异.在GD和甲功正常的HT,IL-18与IL-12呈明显正相关.在GD,IL-12和IL-18均与其甲状腺刺激性抗体(TSAb)活性呈正相关.在甲状腺功能正常的HT还存在IL-12和IL-18二者与甲状腺球蛋白抗体(TgAb)的显著性正相关.结论:提示 Th1型细胞在GD和HT两种AITD的发病中均起重要作用.通过抑制Th2型免疫反应,促进向Th1型的转变来治疗GD时,有可能导致病情恶化.
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抗果蝇Dnop5蛋白抗体的制备及其特性鉴定
目的:制备兔抗果蝇Dnop5蛋白的抗体,并进行特性鉴定.方法:以RT-PCR扩增Dnop5的全长cDNA并克隆入pET28a(+)表达载体中,表达并纯化Dnop5-His融合蛋白.用纯化的Dnop5-His融合蛋白免疫家兔,制备抗Dnop5的抗体,并用His亲和层析法进行纯化.采用Western blot法和免疫组化染色法鉴定该抗体的特异性及生物学活性.结果:表达的Dnop5-His蛋白以包涵体的形式存在,用His亲和层析法分离纯化后得到较纯的Dnop5-His融合蛋白,以纯化的Dnop5-His免疫家兔制备的兔抗Dnop5的抗体,经Western blot分析显示:该抗体可与果蝇的胚胎、幼虫、蛹及成虫组织中表达的Dnop5特异性结合.结论:获得具有良好特异性的兔抗dnop5抗体,为进一步研究Dnop5的功能奠定了基础.
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抗CEA抗体C2-45重链恒定区的置换与活性鉴定
目的:将抗癌胚抗原(CEA)单克隆抗体(mAb0C2-45(IgG4)转变成IgG1,增强其在抗肿瘤免疫中的作用.方法:采用PCR从C2-45(IgG4)基因中克隆VH和Vk基因,并插入到含有人IgG1恒定区(CH)基因的杆状病毒表达载体pAc-k-CH3中.用构建的重组基因感染Sf9昆虫细胞,将获得的高滴度重组病毒用于终表达重组蛋白.应用免疫亲和层析法,纯化培养上清中表达的重组蛋白C2-45(IgG1),并鉴定其与CEA结合的能力和CH的生物学功能CDC及ADCC.结果:经CH置换形成的重组蛋白C2-45(IgG1),既保留了对于表达CEA的肿瘤细胞的结合,又比原抗体C2-45(IgG4)的补体依赖的细胞毒作用(CDC)和抗体依赖的淋巴细胞的细胞毒作用(ADCC)强得多.结论:成功地应用基因工程的方法制备了置换CH的抗CEA的人抗体C2-45(IgG1),使其在肿瘤的免疫治疗中具有更广泛的应用价值.
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兔抗Nogo-66受体(NgR)LRR片段抗体的制备和鉴定
目的:制备兔抗Nogo-66受体(NgR)片段LRR的抗体,并进行特性鉴定.方法:采用原核系统表达大鼠NgR的LRR片段,经纯化后免疫新西兰兔制备抗LRR的抗体,分别用Western blot、免疫组化染色法检测抗体的效价和特异性.结果:获得高效价的兔抗大鼠LRR的抗体,该抗体能够识别大鼠脑和脊髓组织中的NgR分子.脊髓切片的免疫组化染色结果显示,NgR分子在神经元中广泛表达.结论:制备出能特异性识别天然NgR分子的抗体,为检测NgR分子并进一步研究其功能奠定了基础.
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豚鼠气单胞菌抗独特型单克隆抗体的制备和初步鉴定
目的:制备豚鼠气单胞菌(Aeromonas caviae)抗独特型单克隆抗体(AId mAb)并进行鉴定.方法:以具有中和作用的抗豚鼠气单胞菌mAb 1F1免疫BALB/c小鼠,采用常规杂交瘤技术制备豚鼠气单胞菌AId mAb.用ELISA法对mAb的效价及其模拟豚鼠气单胞菌的特性进行鉴定.结果:获得4株能稳定分泌豚鼠气单胞菌AId mAb的杂交瘤细胞株,分别命名为1E12、4F6、6G6、7C1.经测定杂交瘤细胞腹水mAb效价为10-3~10-4.竞争抑制实验结果表明4株AId mAb均能不同程度地抑制豚鼠气单胞菌与兔抗豚鼠气单胞菌多克隆抗体的结合.制备杂交瘤细胞腹水的BALB/c小鼠血清均能与豚鼠气单胞菌反应,其效价为1∶50~1∶800.结论:成功地制备了豚鼠气单胞菌抗独特型mAb的杂交瘤细胞株,为该菌的抗独特型疫苗制备研究奠定了基础.
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抗转铁蛋白受体抗体的筛选和鉴定
目的:从全人源噬菌体抗体库中筛选抗转铁蛋白受体(TfR)的抗体.方法:从HeLa细胞中提取总RNA,分两段反转录TfR胞外区cDNA,经两轮PCR后,获得胞外区基因.测序正确后,将其插入表达载体pPROEXTMHTa中,并在E.coli BL21(DE3)中表达.目的蛋白通过Ni-NTA金属螯合层析柱进行纯化、复性.用复性的TfR包被免疫管,从库容为1013 cfu/L的全合成人源噬菌体单链抗体库中,筛选抗TfR的抗体.结果:得到约1.9 kb的TfR胞外区基因,该基因以包涵体的形式在大肠杆菌中表达;利用纯化、复性的TfR从抗体库中筛选到了8个可与人TfR特异性结合的单链抗体.结论:利用TfR在大肠杆菌表达的复性产物,可以筛选到与天然TfR特异性结合的单链抗体.
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抗HIV-1 p24 单克隆抗体的制备、特性鉴定及初步应用
目的:制备抗HIV-1p24单克隆抗体(mAb)及特性鉴定.方法:采用细胞融合技术制备可稳定分泌抗HIV-1 p24 mAb的杂交瘤细胞.选择高效价、识别不同抗原表位的mAb纯化后,分别包被ELISA板及作为酶标记mAb,建立双mAb夹心ELISA法,检测400份正常人血浆,20份抗HIV抗体阳性(p24抗原阴性)的血浆,20份HIV-1感染的细胞培养上清及HIV-1 p24抗原国家参考品,并同时用进口p24抗原检测试剂盒进行对比检测.结果:经细胞融合、筛选、克隆化,共获得10株可分泌高效价mAb的杂交瘤细胞.纯化的腹水mAb经配对试验,选A值≥2.50的2株mAb建立的双mAb夹心ELISA法,敏感性可达2.5 ng/L,且与进口试剂盒检测结果的一致性良好.结论:建立了具有高度敏感性和特异性的双mAb夹心ELISA法,为研制可用于检测HIV-1 p24抗原的试剂盒奠定了基础.
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抗RIP3抗体的制备及其亚细胞定位
目的:制备兔抗受体相互作用蛋白-3(RIP3)的抗体,并探讨其在鼠源NIH3T3细胞株中的定位.方法:用RT-PCR技术从NIH3T3细胞株中克隆鼠rip3基因,进行原核表达及电洗脱纯化.以高纯度的RIP3抗原免疫新西兰兔制备抗血清并纯化.用Western blot检测该抗体的特异性,以免疫荧光法确定RIP3在NIH3T3细胞株中的定位,以及TNF-α和z-VAD.fmk对其定位的影响.结果:获得特异性的兔抗RIP3蛋白的抗体.免疫荧光的结果显示,RIP3定位于细胞质中.单用TNF-α或z-VAD.fmk处理NIH3T3细胞后,RIP3的定位均无明显变化;而用z-VAD.fmk和TNF-α共同处理细胞后,在核内外均有RIP3分布.结论:成功地克隆rip3基因并制备高特异性的兔抗RIP3抗体.RIP3在NIH3T3细胞株中定位于细胞质中,为进一步研究RIP3在TNF-α诱导的caspase非依赖的细胞凋亡途径中的作用奠定了基础.
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抗人DR5单克隆抗体对人肝细胞系HL7702的凋亡作用
目的:探讨抗人DR5单克隆抗体(mDRA-6)对人肝细胞系HL7702致凋亡的作用.方法:流式细胞术检测HL7702细胞表面DR5的表达.在荧光显微镜下观察mDRA-6对HL7702细胞形态变化的影响;MTT法检测mDRA-6的细胞毒性作用;Annexin V-FITC/PI 双染法流式细胞术检测细胞凋亡率.结果:mDRA-6导致HL7702细胞呈现典型细胞凋亡的形态特征;MTT法检测显示在40 mg/L浓度下可杀伤39%的细胞;经流式细胞术检测显示,3 mg/L的mDRA-6作用HL7702细胞6 h导致25.5% 的细胞发生凋亡.结论:mDRA-6能够诱导人肝细胞系HL7702凋亡,mDRA-6 具有诱导细胞凋亡的活性.
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人精子蛋白17单克隆抗体的制备及特性鉴定
目的:制备抗精子蛋白17(Sp17)的单克隆抗体(mAb)并鉴定其特性.方法:克隆人Sp17 cDNA,表达带有6-His标记的重组Sp17,用纯化的重组Sp17免疫BALB/c小鼠制备mAb.用ELISA筛选抗体阳性的细胞克隆.用免疫组化染色法及阻断试验鉴定mAb的特异性.结果:获得2株杂交瘤细胞系3C12和3D6,其分泌的mAb的Ig亚类(型)分别为IgG1和IgM(κ),杂交瘤细胞培养上清的ELISA效价分别为1∶ 64和1∶ 32;腹水mAb的效价分别为1∶ 1×105和1∶ 5×104.用人和大鼠睾丸组织以及人精液精子免疫组化染色及阻断试验证明,抗Sp17 mAb具有良好的特异性.抗Sp17 mAb也可识别卵巢癌组织中异常表达的Sp17.结论:成功地制备特异性的抗Sp17 mAb,为研究该蛋白的功能、天然分布及异常表达奠定了基础.
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禽流感病毒核蛋白单克隆抗体的制备及部分特性鉴定
目的:制备抗禽流感病毒(AIV)核蛋白(NP)的单克隆抗体(mAb)并进行特性鉴定.方法:分别用甲醛灭活的和Triton X-100裂解的AIV H9N2及AIV NP基因的原核表达产物免疫BALB/c小鼠.经细胞融合、间接ELISA筛选及克隆化,建立能稳定分泌抗AIV NP mAb的杂交瘤细胞株.mAb的效价采用间接ELISA测定,用交叉反应试验及间接免疫荧光染色法检测mAb的特异性.结果:经细胞融合、筛选及克隆化,间接ELISA法测定,mAb共得到6株能稳定分泌抗禽流感病毒NP mAb的杂交瘤细胞株,分别命名为4F4、1C3、1G11、1C2、1D10及2E7.1G11、1D10腹水的ELISA效价高,分别为2-13和2-14.交叉反应试验及间接免疫荧光染色检测表明,两株mAb的特异性良好.结论:共获得6株抗AIV NP的mAb,其中2株mAb 1C11和1D10的效价高,特异性良好,为AIV的研究及快速诊断方法的建立奠定了基础.
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兔抗重组穿孔素抗体的制备及特性鉴定
目的:制备兔抗重组穿孔素的抗体,检测其免疫反应性,并用于穿孔素的体外功能定位分析.方法:以纯化的全长穿孔素融合蛋白DsbA-full length免疫新西兰大白兔制备抗血清,用免疫双扩法检测抗血清的效价,Western blot检测抗血清与5个穿孔素侯选活性区域重组融合蛋白的免疫反应性.将活性重组穿孔素体外作用HIV-1SF33感染的MT4细胞后,用免疫组化染色法显示穿孔素作用的部位.结果:用免疫双扩法检测表明,兔抗穿孔素融合蛋白抗血清的效价为1∶ 32;Western blot显示,抗血清可与穿孔素各重组融合蛋白发生特异性结合;免疫组化显示,穿孔素作用的部位位于靶细胞的胞质和胞膜.结论:制备的兔抗重组穿孔素融合蛋白的抗体具有较好的免疫反应性和特异性,为穿孔素的深入研究提供了有力的工具.
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PTEN与特异性免疫的研究进展
PTEN是迄今为止发现的第一个具磷酸酶活性的抑癌基因,已知其在细胞分化、细胞衰老、细胞凋亡、细胞黏附和迁移等多种生理活动中具有重要作用,并因其有高效的抗癌作用而备受肿瘤生物学家的重视.近年来还发现其参与免疫细胞的发育、信号传递过程以及维持正常的免疫反应,因此PTEN在免疫中的作用逐渐受到免疫学家的关注,我们就近几年PTEN与免疫的研究进展作一简要概述.
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天然免疫分子TRIM5α限制HIV-1感染作用机制的研究进展
逆转录病毒的侵染能造成严重的人和动物的疾病,包括获得性免疫缺陷综合征(AIDS,艾滋病)、白血病、淋巴瘤、癌症和肉瘤.哺乳动物在长期的进化过程中,已经产生了各种机制来抑制逆转录病毒的感染和复制[1].
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树突状细胞在抗HIV-1感染免疫预防与治疗中的应用
树突状细胞(DC)不仅是已知惟一能够激活初始T淋巴细胞的抗原提呈细胞,而且也是已知强的抗原提呈细胞(APC),其对抗原的提呈能力远大于巨噬细胞.经抗原刺激的DC回输到体内后,能够迁移到淋巴结,释放多种细胞因子,同时激活T淋巴细胞的分化和分裂,产生抗原特异性的细胞毒性T淋巴细胞(CTL),这些细胞因子和特异性CTL能够有效地促进或直接杀伤表达该抗原的细胞.
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染料木黄酮的免疫调节作用及其在器官移植中的应用
染料木黄酮(genistein,Gen)是从大豆中提取的异黄酮类化合物,其化学名为4’,5,7-三羟基异黄酮.Akiyama等[1]于1987年发现Gen是表皮生长因子受体(EGFR)酪氨酸蛋白激酶(PTK)抑制剂,且具有抗肿瘤、抑制血管生成、抗氧化、抑制细胞免疫和体液免疫以及调节细胞凋亡等作用.其作用机制涉及抑制酪氨酸蛋白激酶(protein tyrosine kinases,PTKs)及DNA拓扑异构酶Ⅱ活性、激活抗氧化酶、消除氧自由基形成及具有植物雌激素的作用等.由于染料木黄酮具有免疫抑制作用以及可有效地抑制多种慢性疾病,故在器官移植中具有广阔的应用前景.
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人类CD分子及其单克隆抗体命名的新动态
国际人类细胞分化分子(HCDM)执行委员会会议于2006年5月下旬在加拿大魁北克市举行.同时在国际第23届分析细胞学学会(ISAC)期间召开了HCDM专题讨论会.笔者参加了这两个会议,现将有关人类CD命名和研究的新动态简介如下.
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噬菌体抗体库固相筛选条件的初步研究
目的:探讨噬菌体抗体库的固相筛选条件,为筛选方案的设计提供实验依据.方法:利用多种针对HEV NE2蛋白的特异性噬菌体人源抗体和非特异性噬菌体人源抗体,对噬菌体抗体与抗原的结合时间、抗原包被的浓度、洗涤强度和洗脱方式等多种筛选的条件进行初步探索.结果:阳性噬菌体抗体与抗原反应1 min,就可较好结合,洗涤次数为20~30次、洗涤液的pH为5时,筛选得到的阳性率高.包被抗原的浓度对筛选的阳性率没有明显影响,用10 mg/L抗原竞争洗脱60 min,可得到较高的阳性率.结论:噬菌体抗体库的筛选是一个非常复杂的过程,其中的各个条件之间有着密切的联系,应该根据具体情况进行调整.
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RNA干扰体外抑制HBeAg的表达
目的:构建乙型肝炎病毒前C/C基因小发夹RNA(shRNA)表达载体,探索shRNA表达载体对HBeAg表达的抑制作用.方法:用基因重组技术构建shRNA表达载体,经酶切、测序鉴定后,与HBeAg表达载体pcDNA3.1-preC/C按7:1的比例,共转染HeLa细胞,采用半定量PCR和微粒子酶免疫试验(MEIA)分析shRNA表达载体对HBeAg表达的抑制情况.结果:经限制性内切酶、测序证实成功构建shRNA表达载体;筛选到psiHBV2载体对HBeAg表达有一定抑制作用,对mRNA的抑制率为75%,对蛋白质的抑制率为53%,其余两序列无明显抑制作用.结论:RNAi技术可以有效抑制载体pcDNA3.1-preC/C表达 HBeAg.
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红细胞直接黏附细菌的实验研究
根据红细胞上的CR3可直接与细菌脂多糖(LPS)以非补体依赖的形式介导微生物与血细胞黏附而增强吞噬功能,以及CR1可与肺炎支原体等致病微生物黏附的原理的报道[1],我们探讨了健康献血员、癌症患者及严重感染者的红细胞对不同细菌的直接黏附作用.结果表明,肿瘤患者的黏附率比正常人明显低下,为测定癌症患者红细胞的天然免疫功能变化提供了一种更加简便的方法.
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妊娠高血压综合征患者蜕膜组织微环境免疫功能变化的分析
目的:探讨妊娠高血压综合征(妊高征)患者蜕膜组织微环境免疫功能的变化.方法:检测55例不同程度妊高征患者及正常孕妇胎盘蜕膜组织中淋巴细胞的增殖、 T细胞及单核细胞分泌的细胞因子,以及他们血清免疫球蛋白及补体的水平.结果:妊高征患者蜕膜组织中,淋巴细胞增殖反应程度(cpm值为1 802±89),明显高于正常孕妇组(cpm值为430±56,P<0.01).T细胞分泌的IL-2和IFN-γ的水平明显升高(P<0.05),IL- 4的水平有所下降但没有统计学意义(P>0.05).与正常孕妇相比,妊高征患者蜕膜组织中单核细胞产生的TNF-α和IL-1的量明显增多(P<0.01);但患者血清免疫球蛋白及补体的水平却显著降低(P<0.01).结论:妊高征患者蜕膜组织的免疫微环境发生明显变化:Th1型细胞因子的水平异常升高,T细胞处于免疫激活状态,体液免疫功能降低,可能与妊高征的免疫学发病机制有关.
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妊娠特异性β1糖蛋白免疫调节作用的研究
目的:探讨妊娠特异性β1糖蛋白(PSβ1G)免疫调节作用.方法:用L929细胞系作为靶细胞检测巨噬细胞的细胞毒作用.用硝酸还原酶法检测巨噬细胞分泌NO的水平.用MTT比色法检测T细胞的增殖反应.用流式细胞术分析细胞凋亡及细胞周期的变化.结果:PSβ1G能抑制单核-巨噬细胞的细胞毒作用,抑制其分泌NO.部分抑制ConA刺激的T细胞增殖反应,使其受阻于G0/G1期.结论:PSβ1G抑制巨噬细胞和T细胞的免疫.
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慢性活动性肝炎患者外周血CD56+细胞及其CD69表达的检测
目的:检测慢性活动性乙型肝炎(CAHB)患者外周血 CD56+细胞及CD56+ CD69+活化细胞,探讨他们在乙型肝炎发病中的作用.方法:以31例正常人作为对照,采用免疫荧光三色标记流式细胞术,检测30例CAHB患者外周血CD56+细胞及其CD69抗原的表达;同时用荧光定量PCR检测CAHB患者的血清病毒DNA载量.结果:CAHB患者外周血CD56+细胞的百分率(21.24%±6.28%)与正常人对照(18.24%±6.96%)相比较差异显著(P<0.05);CD56+细胞上CD69的表达(4.02%±1.57%)与正常人对照组(1.26%±0.62%)相比较差异也显著(P<0.01).CD56+细胞数与CD56+ CD69+细胞数之间呈正相关;CD56+细胞数与血清病毒DNA载量之间呈负相关.结论:CAHB患者外周血存在CD56+细胞的异常激活,提示其在抗病毒感染中起重要作用.CD56+细胞数的改变可能与患者病情的严重程度有关.
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酶联免疫发光法检测金葡菌肠毒素(SE)B和SEC1方法的建立
目的:比较酶联免疫测定法(ELISA)和酶联免疫化学发光法(CLIA)在检测SEB、SEC1中的敏感性及稳定性.方法:常规法制备、纯化抗SEB和SEC1单克隆抗体(mAb),以碱性磷酸酶(AP)标记的FMMU-SEB.D6和FMMU-SEC1.C4 mAb为检测抗体,FMMU-SEB.B4和FMMU-SEC1.G8 mAb为包被抗体,以单磷酸酚酞(PMP)为显色底物,以Lumigen APS-5为发光底物.结果:成功地建立了敏感、特异检测SEB、 SEC1的ELISA和CLIA方法,CLIA较传统ELISA具有灵敏度高、线性范围宽和省时等优点.结论:CLIA法是一种比传统ELISA更优越的免疫学检测方法,在可疑SE污染标本检测、流行病学调查等领域具有良好的应用前景.
年 | 期数 |
2018 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2017 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2016 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2015 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2014 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2013 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2012 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2011 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2010 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2009 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2008 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2007 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2006 | 01 02 03 04 05 06 |
2005 | 01 02 03 04 05 06 z1 |
2004 | 01 02 03 04 05 06 |
2003 | 01 02 03 04 05 06 |
2002 | 01 02 03 04 05 06 |
2001 | 01 02 03 04 05 06 |
2000 | 01 02 03 04 05 06 |
1999 | 01 02 |
1995 | 01 02 03 |
1994 | 01 02 |
1993 | 01 02 03 04 |
1992 | 01 02 03 04 |
1991 | 01 02 03 04 |
1990 | 01 02 |
1989 | 01 02 03 04 |