细胞与分子免疫学杂志
Chinese Journal of Cellular and Molecular Immunology 세포여분자면역학잡지
- 主管单位： 中国免疫学会；第四军医大学
- 主办单位： 陕西省免疫学会,中国免疫学会
- 影响因子： 0.81
- 审稿时间： 1-3个月
- 国际刊号： 1007-8738
- 国内刊号： 61-1304/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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白藜芦醇上调人肺泡上皮细胞SIRT1表达抑制高氧诱导的细胞凋亡
目的 探讨去乙酰化酶SIRT1激动剂白黎芦醇(Res)对高氧诱导人肺泡上皮细胞(HPAEC)凋亡的保护作用.方法 体外培养HPAEC,随机分为对照组、高氧组、Res组.培养24h,采用免疫细胞化学SP法检测caspase-9、X联锁凋亡抑制蛋白(XIAP)、SIRT1蛋白的表达,采用MitoSOXTM、JC-1标记结合激光共聚焦显微镜分别检测HPAEC线粒体内活性氧(ROS)及其膜电位的变化,Western blot法检测SIRT1蛋白的表达,annexin V-FITC/碘化丙啶(PI)双标记结合流式细胞术检测HPAEC细胞凋亡率的变化.结果 对照组相比,高氧组HPAEC中caspase-9蛋白表达增强、线粒体内ROS增加、细胞凋亡率增加,而XIAP、SIRT1蛋白的表达减少、膜电位降低;与高氧组相比,Res组HPAEC中caspase-9的表达减弱、线粒体内ROS产生减少、细胞凋亡率降低,XIAP、SIRT1蛋白表达增强、膜电位增高.结论 Res通过上调HPAEC中SIRT1的表达,减少ROS的产生从而维持细胞膜电位抑制肺泡上皮细胞凋亡,减轻高氧所致肺损伤.
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myc-p62融合蛋白的表达及其对ERK磷酸化的抑制
目的 构建带myc标签的自噬标志蛋白P62基因真核表达载体,获得myc-p62融合表达蛋白,并对其功能进行初步检测.方法 利用聚合酶链式反应从乳腺文库中体外扩增人P62基因编码序列,将其与空pXJ-40-myc载体正确连接,重组质粒myc-p62转染HEK293T细胞,用Western blot法检测该融合蛋白的表达情况,并检测该蛋白对细胞外信号调节激酶(ERK)磷酸化的影响.结果 构建得到myc-P62基因的真核表达载体,双酶切鉴定得到与预期片段大小相符的外源性基因插入片段,经测序与目的序列完全一致;经Western blot法检测,融合蛋白成功表达,并能够抑制ERK磷酸化.结论 成功表达了myc-p62融合蛋白并能抑制ERK磷酸化.
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载脂蛋白E基因敲除小鼠脑部TNF-α和IL-1β及IL-8的水平升高
目的 探讨载脂蛋白E基因敲除(ApoE--)后小鼠脑部海马区和皮质区肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1 β)及IL-8表达变化.方法 4周龄野生型和ApoE-/-雄性小鼠各10只,饲养12周后断颈处死.采集血液样本进行血脂水平检测;将脑组织固定后切片,HE染色观察形态学改变;免疫组织化学染色检测TNF-α、IL-1β、IL-8蛋白表达.结果 IL-1β和IL-8在ApoE-/-小鼠海马区和皮质区表达的阳性细胞数均显著高于野生型小鼠.TNF-α在ApoE-/-小鼠皮质区表达的阳性细胞数显著高于野生型小鼠,ApoE-/-小鼠海马区TNF-α的表达强度高于野生型小鼠.结论 ApoE-/-小鼠脑部TNF-α、IL-1β、IL-8表达增加.
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大黄素加重蛋氨酸-胆碱缺乏饲料诱导的小鼠非酒精性脂肪肝
目的 研究大黄素(emodin)对蛋氨酸-胆碱缺乏(MCD)饲料诱导的小鼠非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)的影响.方法 C57BL/6J小鼠随机分为3组,分别为添加蛋氨酸-胆碱饲料组(MCS)、MCD饲料联合DMSO注射组(MCD)、MCD饲料联合emodin注射组(MCD-emodin).三组小鼠喂养相应饲料,10 d后,每天腹腔分别注射DMSO或emodin,连续注射20 d.HE染色观察肝脏病理改变;全自动生化分析仪检测血清谷氨酸氨基转移酶(ATL)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白(HDL)、低密度脂蛋白(LDL)、碱性磷酸酶(ALP)和葡萄糖(GLU)水平;实时定量PCR技术检测肝脏白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)的水平.结果 HE染色显示,与MCS组相比,MCD饲料组引起明显的脂肪变性和炎性细胞浸润,且注射emodin后脂肪变性及炎性细胞浸润明显增加;与单纯MCD饲料组相比,emodin注射后,血清ALT和AST水平显著升高,IL-1β和IL-6的mRNA水平明显上升.结论 Emodin加重MCD饲料诱导的NAFLD.
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在顺铂耐药的A549/DDP人肺腺癌细胞中乙醛脱氢酶表达增加
目的 观察乙醛脱氢酶(ALDH)在A549/DDP人肺腺癌耐顺铂细胞中的表达及在顺铂耐药性中的功能.方法 流式细胞术检测肿瘤干细胞标志分子CD44、CD90、CD73、CD105、上皮细胞黏附分子(EpCAM)、ATP结合盒式超家族G成员2(ABCG2)以及ALDH在A549细胞和A549/DDP细胞表达的阳性率;MTT法检测100 μmol/L二乙氨基苯甲醛(DEAB)处理前后A549/DDP细胞的增殖能力和对顺铂的敏感性;实时定量PCR检测ALDH各亚型在A549细胞与A549/DDP细胞中的mRNA水平的表达;Western blot法检测实时定量PCR有明显差异结果的ALDH的亚型ALDH1A3和ALDH1B1在A549细胞与A549/DDP细胞中的蛋白水平的表达.结果 与A549细胞相比,ABCG2和ALDH在A549/DDP细胞的阳性率增加,ALDH阳性率达97.7％,在A549细胞中仅仅为4.3％;CD44、CD90、CD73、CD105在二者间阳性率无明显差异,而EpCAM在A549/DDP细胞阳性率降低;经100 μmol/L DEAB处理后,A549/DDP细胞对顺铂的耐药性显著低于未处理前;与A549细胞相比,ALDH1 A3和ALDH1B1的mRNA在A549/DDP细胞中表达水平增高;ALDH1B1蛋白表达升高,ALDH1A3表达降低.结论 ALDH可作为顺铂耐药人肺腺癌细胞的标志分子之一,其中ALDH1B1在顺铂耐药性中可能发挥一定作用,为临床上治疗肺腺癌耐药患者提供新的治疗靶点和策略.
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香烟烟雾提取物通过氧化应激下调组蛋白去乙酰化酶2诱导小鼠骨骼肌细胞早衰
目的 探讨香烟烟雾提取物(CSE)是否通过氧化应激减少抗衰老分子组蛋白去乙酰化酶2(HDAC2)的表达而诱导骨骼肌细胞早衰.方法 诱导C2C12成肌细胞分化成骨骼肌细胞,观察CSE处理对骨骼肌细胞氧化应激、衰老和HDAC2表达的影响,应用氧化剂H2O2和抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸(NAC)为工具药,检测细胞中丙二醛(MDA)含量、活性氧(ROS)、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性的变化,应用β半乳糖苷酶染色检测衰老细胞百分率,采用实时荧光定量PCR检测HDAC2 mRNA水平,Western blot法检测HDAC2蛋白水平.结果 与对照组相比,CSE和H2O2可增加小鼠骨骼肌细胞MDA含量和ROS水平,而降低SOD、GSH-Px的活性,同时伴有β半乳糖苷酶的水平增加和抗衰老分子HDAC2 mRNA和蛋白水平的降低.NAC预处理后,可降低CSE诱导的MDA含量和ROS活性,提高SOD、GSH-Px的活性,同时β半乳糖苷酶表达降低,HDAC2的水平升高.结论 CSE可能是通过氧化应激降低HDAC2诱导小鼠骨骼肌细胞早衰.
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母体和胎儿来源的人胎盘间充质干细胞抑制小鼠皮肤移植免疫排斥作用的比较
目的 研究母体来源的人胎盘间充质干细胞(mPMSC)、胎儿来源的人胎盘间充质干细胞(fPMSC)抑制不同品系小鼠皮肤移植免疫排斥作用的差异及其机制.方法 分离两种来源的细胞;流式细胞术鉴定两种来源的细胞及其差异;MTT法检测其增殖能力;利用CD200抗体中和fPMSC的CD200受体;用携带CD200基因及其空载体的腺病毒感染mPMSC.将60只C57BL/6小鼠随机分为6组,每组10只:PBS组、mPMSC组、fPMSC组、fPMSC联合抗CD200抗体组、mPMSC联合CD200腺病毒组、mPMSC联合腺病毒空载体组.以ICR乳鼠为供体,C57BL/6小鼠为受体,建立异品系皮肤移植免疫排斥模型,并将上述细胞经尾静脉分别注入各组模型小鼠体内.观察小鼠状态及移植皮肤排斥情况.反转录PCR检测小鼠脾脏中白细胞介素17(IL-17)、γ干扰素(IFN-γ)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、IL-12的mRNA水平,ELISA检测小鼠血液中IL-17、IFN-γ、TNF-α、IL-12的水平.结果 fPMSC的CD200阳性率明显高于mPMSC.mPMSC、fPMSC组和PBS组比较,fPMSC组和mPMSC、fPMSC联合抗CD200抗体组比较,mPMSC联合CD200腺病毒组和mPMSC联合腺病毒空载体组比较,前者的移植皮肤的存活时间均明显延长.mPMSC和fPMSC组IL-17、IFN-γ和TNF-α的表达量和PBS组比较明显降低;与fPMSC联合抗CD200抗体组相比,fPMSC组IL-17、IFN-γ、TNF-α和IL-12的表达量明显降低;与mPMSC联合腺病毒空载体组相比,mPMSC联合CD200腺病毒组IL-17、IFN-γ和TNF-α的表达量明显降低.结论 fPMSC抑制小鼠皮肤移植免疫排斥的作用优于mPMSC;fPMSC高表达CD200可更强的抑制免疫细胞的增殖、分化以及成熟等,从而更有效的抑制IL-17、IFN-γ、TNF-α等细胞因子的分泌;fPMSC更适于作为临床上抑制皮肤移植免疫排斥作用的种子细胞.
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低压电脉冲对黑素瘤荷瘤小鼠的抑瘤效应
目的 研究低压电脉冲刺激对荷黑素瘤小鼠的抑瘤效应.方法 建立BALB/c小鼠皮下B16F10黑素瘤小鼠模型,随机分为对照组与10、20、30 Hz电刺激组,电刺激组接受30 min/d、连续20 d电刺激.每日测量肿瘤体积,HE染色观察肿瘤组织学变化,分别采用实时荧光定量聚合酶链式反应检测肿瘤组织caspase-3和基质金属蛋白酶9(MMP-9)的mRNA水平,免疫组织化学法检测肿瘤组织caspase-3和MMP-9的蛋白表达.结果 与对照组相比,7d时电刺激30 Hz组肿瘤体积减小,20 d时,各电刺激组肿瘤体积减小,随时间延长抑瘤率增加;电刺激组肿瘤细胞核固缩、坏死较多;各电刺激组caspase-3 mRNA及蛋白质表达增加;MMP-9 mRNA及蛋白表达降低,caspase-3、MMP-9表达强度变化随着频率增大而增强.结论 低压电刺激可上调caspase-3表达,抑制MMP-9表达,抑制肿瘤生长.
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慢病毒介导的shRNA沉默溶酶体相关膜蛋白2A表达可抑制多发性骨髓瘤细胞增殖
目的 研究短发夹RNA(shRNA)慢病毒载体下调多发性骨髓瘤细胞中溶酶体相关膜蛋白2A (LAMP2A)表达对多发性骨髓瘤细胞增殖的影响.方法 将构建的shRNA慢病毒表达载体感染人MM.1S多发性骨髓瘤细胞,嘌呤霉素筛选获得稳定细胞株,Western blot法验证LAMP2A蛋白表达抑制效果;MTT法观察LAMP2A对MM.1S细胞增殖的影响及其对辛二酰苯胺异羟肟酸(SAHA)抗MM.1S细胞的影响,乳酸检测观察LAMP2A对糖酵解的影响.结果 在构建人LAMP2A-shRNA重组慢病毒载体的基础上,获得稳定低表达LAMP2A的多发性骨髓瘤细胞株;下调LAMP2A表达明显抑制MM.1S细胞的增殖并增强SAHA抗骨髓瘤细胞的作用,下调LAMP2A表达抑制MM.1S细胞乳酸分泌.结论 下调多发性骨髓瘤细胞LAMP2A的表达可抑制多发性骨髓瘤细胞增殖.
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4T1乳腺癌细胞培养上清液促进ANA-1巨噬细胞精氨酸酶1分泌
目的 通过模拟体内乳腺癌微环境,探讨4T1小鼠乳腺癌细胞培养上清液在体外对ANA-1巨噬细胞中精氨酸酶1(Arg-1)含量的影响.方法 用添加或不添加4T1培养上清液培养ANA-1巨噬细胞,分别在6、8、10、24h用光学显微镜观察ANA-1细胞形态变化.实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、Arg-1 mRNA水平,免疫荧光染色、Western blot法检测iNOS、Arg-1蛋白水平.结果 实时荧光定量PCR结果显示,添加4T1上清液的巨噬细胞iNOS mRNA表达水平较对照组减少,Arg-1 mRNA水平较对照组显著升高,且在8h显著.与对照组相比,免疫荧光染色和Western blot实验也发现Arg-1表达增强,但添加或不添加4T1培养上清液的细胞iNOS的表达差异不明显.结论 4T1乳腺癌细胞培养上清液诱导ANA-1细胞Arg-1分泌增加.
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肿瘤高表达细胞周期相关蛋白在非小细胞肺癌中的表达及临床意义
目的 研究肿瘤高表达细胞周期相关蛋白(CREPT)在非小细胞肺癌(NSCLC)组织及相应癌旁组织中的表达,探讨其在肺癌中的作用及临床意义.方法 收集271例NSCLC组织,采用免疫组织化学方法检测NSCLC组织以及癌旁组织中CREPT的表达.结果 CREPT在NSCLC组织中表达阳性率为96.1％,明显高于在癌旁组织的表达率(30.4％);CREPT表达与年龄、肿瘤大小无关,CREPT在低分化肿瘤组织表达增强;CREPT在总NSCLC样本的不同临床分期间表达有显著性差异;在总NSCLC、有淋巴结转移的腺癌组织中,CREPT表达明显增强;鳞癌CREPT的表达与淋巴结转移无明显关联.结论 CREPT在NSCLC不同病理分级间表达存在差异,有淋巴结转移的腺癌组织CREPT表达增强.
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低氧和高糖促进体外培养的人骨髓间充质干细胞的增殖和迁移
目的 建立人骨髓间充质干细胞(hMSC)低氧高糖培养的细胞模型,研究其增殖、凋亡和移行等生物学特征.方法 采用密度梯度离心法提取培养健康成人hMSC.取第3代细胞,根据培养氧浓度及葡萄糖浓度培养基类型分为4组:常氧常糖组(210 mL/L O2加5.56 mmol/L葡萄糖培养液)、常氧高糖组(210 mL/L O2加30 mmol/L葡萄糖培养液)、低氧常糖组(50 mL/L O2加5.56 mmol/L葡萄糖培养液)和低氧高糖组(50 mL/L O2加30 mmol/L葡萄糖培养液).CCK-8法检测细胞的增殖能力、TranswelTM法检测细胞在24h时的移行能力、流式细胞术检测细胞在24h时的凋亡情况.结果 与对照组相比,24h和48 h时,常氧高糖组、低氧常糖组、低氧高糖组中的hMSC增殖能力增强,低氧高糖联合作用组增殖能力强.在24h时,常氧高糖组、低氧常糖组、低氧高糖组hMSC的移行能力较对照组增强.结论 低氧及高糖促进hMSC增殖和移行,而对凋亡并无影响.
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上调小鼠骨髓来源树突状细胞FcγRⅡb表达可抑制其抗原提呈功能
目的 构建FcγRⅡb慢病毒载体,感染小鼠骨髓来源树突状细胞(BMDC),观察BMDC抗原提呈功能变化.方法 小鼠骨髓细胞中提取RNA,反转录后进行PCR扩增得到FcγRⅡb目的基因,将FcγRⅡb基因插入慢病毒表达载体TRE中构建FcγRⅡb重组慢病毒载体.HEK293T细胞包装慢病毒,体外进行小鼠BMDC的诱导培养及鉴定.将慢病毒感染BMDC后,实时定量PCR检测BMDC中FcγRⅡbmRNA水平,Western blot法检测BMDC中FcγRⅡb蛋白水平,流式细胞术分析BMDC表面分子CD80、CD86、CD40、MHCⅡ的变化.结果 成功构建FcγRⅡb重组慢病毒载体,经酶切、PCR鉴定及测序鉴定成功.体外诱导培养BMDC,可见细胞表面大量树枝样突起形成.包装慢病毒感染BMDC后,FcγRⅡb mRNA和蛋白水平均较未感染BMDC增高.流式细胞术分析感染后BMDC表面分子CD80、CD86、CD40、MHCⅡ的表达量均较未感染BMDC下降.结论 DC上FcγRⅡb的过表达能够下调其抗原提呈功能.
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新城疫病毒通过上调小鼠NK细胞TRAIL表达杀伤Novikoff小鼠肝癌细胞
目的 观察经腹腔注射的新城疫病毒(NDV)对小鼠脾脏NK细胞表达肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)及杀伤Novikoff小鼠肝癌细胞的影响,并探讨其与γ干扰素(IFN-γ)的关系.方法 给予BALB/c小鼠和IFN-γR-/-B6.129S7小鼠腹腔注射NDV,12 h后,用ELISA检测小鼠外周血IFN-γ浓度;分离小鼠脾脏NK细胞,用反转录PCR法检测NK细胞中TRAIL mRNA转录水平,Western blot法检测脾脏NK细胞中TRAIL蛋白水平,用乳酸脱氢酶(LDH)释放法检测NK细胞对Novikoff肝癌细胞的杀伤作用.结果 腹腔注射NDV可以提高BALB/c小鼠外周血IFN-γ浓度,上调小鼠脾脏NK细胞TRAILmRNA和蛋白表达水平,增强小鼠脾脏NK细胞体外条件下对Novikoff肝癌细胞的杀伤活性.TRAIL中和抗体能抑制NK细胞对Novikoff肝癌细胞的杀伤作用.IFN-γR-/-B6.129S7小鼠接受NDV注射后脾脏NK细胞的TRAIL表达无显著增加,NDV激活的NK细胞对Novikoff肝癌细胞的杀伤活性显著低于IFN-γ受体正常的BALB/c小鼠.结论 腹腔注射NDV可增强脾脏NK细胞的体外抗肿瘤活性,其机制之一是通过IFN-γ受体途径上调NK细胞表面TRAIL蛋白表达来发挥作用.
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大黄酸增加2型糖尿病大鼠肾组织SIRT1的表达
目的 研究大黄酸对糖尿病大鼠肾组织沉默接合型信息调节因子2同源蛋白1(SIRT1)表达的影响,探讨大黄酸对糖尿病大鼠肾脏损伤的保护作用及可能机制.方法 采用高糖高脂饮食联合链脲佐菌素(35 mg/kg体质量)诱导2型糖尿病大鼠模型,分为正常组,糖尿病组,低、中、高剂量(50、100、150 mg/kg)大黄酸治疗组及10 mg/kg吡格列酮对照组.灌胃给药,每日1次.16周末检测大鼠空腹血糖(FPG)、空腹胰岛素(FINS)、甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、血肌酐(Scr)、24h尿蛋白(24 h U-PRO);计算肾质量指数(KM/BM)、胰岛素抵抗指数;PAS染色光镜观察肾组织病理形态学的改变;病理图像分析系统分析平均肾小球面积(MGA)及平均肾小球体积(MGV);实时荧光定量PCR检测肾组织SIRT1 mRNA表达;Western blot法检测肾组织SIRT1蛋白表达.结果 糖尿病大鼠肾组织SIRT1表达降低.与糖尿病组比较,各治疗组大鼠FPG、FINS、HOMA-IR、TG、TC、Scr、24 h U-PRO、肾质量指数、MGA、MGV显著降低,肾组织病理形态学明显改善;SIRT1 mRNA及蛋白表达显著增加;大黄酸高剂量组各指标改善较显著.相关性分析显示,SIRT1蛋白表达与24 h U-PRO、MGV呈显著负相关.结论 糖尿病大鼠肾组织SIRT1表达降低,大黄酸可通过改善胰岛素抵抗和血脂紊乱,增加SIRT1的表达,改善糖尿病大鼠肾脏损害.
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高迁移率族蛋白1促进小鼠心肌成纤维细胞增殖和迁移
目的 探讨高迁移率族蛋白1(HMGB1)对心肌成纤维细胞的增殖和迁移以及对胞内基质金属蛋白酶-1(MMP-1)、MMP-2、金属蛋白酶组织抑制物1(TIMP1)表达的影响.方法 HMGB1作用于分离培养的1～2周新生小鼠心肌成纤维细胞,24h后,采用MTT法检测细胞增殖.心肌成纤维细胞在HMGB1作用6、24、48 h后,反转录PCR检测MMP-1、MMP-2、TIMP1的mRNA水平、Western blot法检测MMP-1、MMP-2和TIMP1的蛋白水平.另外,TranswellTM实验检测HMGB1对心肌成纤维细胞迁移的影响.结果 与对照组相比,HMGB1作用于心肌成纤维细胞24h后,细胞增殖明显增加.心肌成纤维细胞在HMGB1作用后,MMP-1、MMP-2、TIMP1的mRNA和蛋白水平均明显升高.与对照组相比,Transwell“实验结果显示HMGB1促进心肌成纤维细胞迁移.结论 HMGB1可以促进心肌成纤维细胞的增殖和迁移,上调MMP-1、MMP-2、TIMP1的表达.
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青藤碱抑制体外培养DC2.4树突状细胞的生物学活性并减少炎症因子分泌
目的 观察青藤碱对DC2.4树突状细胞的生物学活性的影响.方法 培养DC2.4细胞,根据MTT方法确定药物佳给药浓度及给药时间,分为正常组、脂多糖(LPS)模型对照组、40 μg/mL青藤碱高浓度组、20 μg/mL青藤碱组、10μg/mL青藤碱组、25 ngmL甲氨蝶呤阳性对照组.5μg/mL LPS刺激DC2.4细胞24h,给予不同浓度的青藤碱,刺激24、48、72h,收集细胞上清液,ELISA检测细胞上清液中的γ干扰素(IFN-γ)、肿瘤坏死因子α(TNFF-α)、白细胞介素6(IL-6)、IL-10、IL-12、CD80的含量.结果 不同浓度青藤碱处理各组与甲氨蝶呤处理组均可降低TNF-α、CD80、IFN-γ、IL-6、IL-12的含量,而各处理组的IL-10含量均有所增加,且20 μg/mL终浓度青藤碱作用后的TNF-α、CD80、IFN-γ、IL-6、IL-10、IL-12的含量相比于其他浓度青藤碱更接近正常组的含量.结论 20 μg/mL青藤碱可抑制DC2.4细胞的生物学活性,减少DC的炎症因子分泌.
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稳定表达叶酸受体α的C26细胞株的建立
目的 建立稳定表达叶酸受体α(FRα)的C26细胞,用于FRα基因疫苗的后续研究.方法 采用脂质体转染法,将前期构建的重组真核表达质粒pcDNA3.1-FRα基因导入C26细胞,用G418加压进行筛选,并通过单克隆操作,建立稳定转染叶酸受体α基因的单克隆细胞株.利用反转录PCR及免疫荧光细胞化学染色检测稳定转染细胞中叶酸受体α基因的表达情况,并利用反转录PCR检测传代细胞中FRα基因表达的稳定性.结果 经转染、G418筛选以及单克隆化操作,得到单克隆FRα基因稳定转染细胞株,所得单克隆稳定转染细胞株可表达FRα mRNA及蛋白,并能够在多次传代后保持表达的稳定性.结论 成功构建了FRα稳定转染细胞株.
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槐定碱抑制脂多糖诱导的RAW264.7细胞炎症因子分泌及机制
目的 观察槐定碱对脂多糖(LPS)诱导RAW264.7细胞分泌肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)时,对Toll样受体4(TLR4)、c-Jun表达的影响,探讨槐定碱抗LPS分子机制.方法 培养RAW264.7细胞,实验分为4组:巨噬细胞对照组,以无血清DMEM孵育细胞;槐定碱处理组,以含31.25 mg/L槐定碱DMEM孵育细胞;LPS组及LPS刺激后槐定碱处理组,分别以浓度为100 μg/L LPS DMEM孵育细胞60 min后弃去LPS,而后分别加入无血清DMEM或31.25 mg/L槐定碱DMEM继续培养.以上4组分别于处理完毕后5、30、60、120 min收集细胞及培养液.采用反转录PCR检测RAW264.7细胞TLR4、c-Jun mRNA的表达,Western blot法及免疫细胞化学技术检测RAW264.7细胞c-Jun蛋白的表达;ELISA检测培养液中TNF-α、IL-1β分泌量.结果 槐定碱处理组与巨噬细胞对照组各指标间未见显著性差异;LPS组各时间点RAW264.7细胞的TLR4、c-Jun mRNA及c-Jun蛋白表达,培养液中TNF-α、IL-1β分泌量均显著高于巨噬细胞对照组,并维持至120 min未见下降;LPS刺激后槐定碱处理组显著抑制LPS刺激的RAW264.7细胞TLR4、c-Jun mRNA及c-Jun蛋白表达,并减少TNF-α、IL-1 β分泌.结论 槐定碱通过抑制TLR4及c-Jun表达,下调LPS诱导的RAW264.7细胞TNF-α、IL-1β的分泌.
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脓毒症大鼠心肌氧化应激损伤及心肌细胞超微结构变化
目的 探讨盲肠结扎穿孔致脓毒症大鼠心肌损伤的机制.方法 健康雄性SD大鼠54只,随机分为正常组、假手术组、脓毒症组.采用盲肠结扎加穿孔(CLP)法建立脓毒症模型,分别在术后3、6、12、24 h(每个时间点6只大鼠)测定各组血清肌钙蛋白I(cTnI)、一氧化氮(NO),以及心肌组织超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)水平,HE染色观察心肌病理学改变,透射电镜观察心肌细胞超微结构变化.结果 正常组、假手术组大鼠相比,脓毒症组大鼠血清cTnI、NO、心肌组织MDA水平显著升高,SOD显著降低,心肌细胞水肿,炎细胞浸润,间质血管扩张充血,并可见局灶性心肌坏死;电镜下肌原纤维排列紊乱,闰盘间隙增宽,线粒体空泡化.结论 脓毒症大鼠心肌损害与氧化应激损伤有关,随着病程的进展,心肌细胞超微结构的损害加重.
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化学发光法检测抗HEV IgG试剂盒的研制和评价
目的 研制化学发光法检测血清抗戊型肝炎病毒(HEV) IgG试剂盒,并评价其临床应用.方法 以HEV重组抗原包被化学发光微孔板,辣根过氧化物酶(HRP)标记的单克隆抗人IgG为二抗,鲁米诺化学发光反应体系作为底物.通过检测抗HEV抗体国家参考品评价其灵敏度、特异性、精密性等技术指标,并与已商品化的化学发光法抗HEV IgG检测试剂盒对比检测1012份临床血清样本.结果 3个批次的试剂盒的灵敏度、特异性、精密性、稳定性均达到国家标准.对1012例临床血清样本检测,两种试剂盒检测阳性符合率为97.4％,阴性符合率为99.4％,总符合率达98.4％.结论 成功研制出化学发光法检测抗HEV IgG试剂盒,该试剂盒敏感性高、特异性强、操作简便,适用于HEV感染的临床诊断及流行病学调查.
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重症继发性肺结核患者外周血单个核细胞c-Jun水平降低
目的 研究重症与轻症继发性肺结核患者c-Jun表达的差异,探讨其在重症继发性肺结核炎症反应和免疫损伤中的意义.方法 用Affymetrix基因表达谱芯片筛选重症、轻症肺结核患者和正常健康者差异表达基因,并对差异基因进行生物信息学分析;用实时定量PCR(qRT-PCR)测定重症、轻症肺结核患者和健康者c-Jun相对水平;ELISA测定c-Jun在重症、轻症肺结核患者和健康者外周血单个核细胞(PBMC)中的蛋白水平.结果 芯片筛选发现重症与轻症继发性肺结核患者存在大量差异表达基因,参与较多免疫反应和炎症反应通路,其中c-Jun表达下调2.27倍,参与61个信号通路;qRT-PCR结果显示,相比轻症继发性肺结核患者,c-Jun在重症继发性肺结核患者水平显著下调;ELISA检测也证实c-Jun表达在重症继发性肺结核患者有下调趋势,与芯片结果相符.结论 重症与轻症继发性肺结核患者相比,c-Jun表达下调,c-Jun参与广泛的免疫反应和炎症反应通路,其下调与重症患者的免疫损伤有相关性.
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维吾尔族系统性红斑狼疮患者血清抗核糖体P蛋白抗体的检测及其临床意义
抗核糖体P蛋白(ribosomal P protein,RPP)抗体是抗核抗体的一种,由核糖体60 S亚单位的3种蛋白组成,为P0[相对分子质量(Mr)38 000]、P1(Mr19 000)、P2(Mr17 000),为系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematousus,SLE)的特异性自身抗体之一,在其他疾病及正常人群中则少见,抗RPP抗体水平可反映SLE活动情况[1-4].
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类风湿性关节炎患者外周血CD4+T细胞存在凋亡缺陷
目的 探讨CD4+T细胞凋亡在类风湿性关节炎(RA)发病机制中的作用.方法 30例RA患者和12例健康对照者分为2组,应用annexin V-FITC/PI双标记结合流式细胞术分析RA患者及对照者CD4+T细胞凋亡水平,实时定量PCR (qRT-PCR)检测凋亡相关蛋白Fas、FasL、caspase-8、caspase-3、Bcl-2、Bax mRNA相对表达水平,Western blot法测定细胞凋亡蛋白Fas、FasL及caspase-8、caspase-3的表达;分析RA组凋亡蛋白表达水平与临床活动指标的相关性.结果 与健康对照组相比,RA患者CD4+T细胞凋亡减少;与血沉(ESR)、类风湿因子(RF)呈负相关;qRT-PCR结果表明,RA患者CD4+T细胞Fas、caspase-8、caspase-3、Bax mRNA的表达量显著降低、Bcl-2 mRNA表达量增加.Fas表达与中医症状积分呈负相关,Bcl-2与环瓜氨酸肽(CCP)水平呈正相关.Western blot结果显示,RA患者CD4+T细胞Fas、FasL、caspase-8、caspase-3的表达量较正常组明显降低,Fas与CRP呈正相关、FasL与晨僵时间呈负相关.结论 RA患者外周血CD4+T淋巴细胞凋亡减少,与多数相关凋亡蛋白的表达降低、Bcl-2表达增强有关.提示RA存在凋亡缺陷,Fas介导的细胞凋亡在RA过程中有一定作用.
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FOXA2在胃腺癌中的表达降低
目的 研究FOXA2在胃腺癌中的表达及其与胃癌细胞侵袭迁移能力的相关性.方法 收集56例胃腺癌组织及对应的癌旁组织,运用免疫组织化学技术检测FOXA2和上皮型钙黏素(E-cadherin)在胃腺癌及对应癌旁组织中的表达;Western blot 法检测FOXA2和E-cadherin蛋白在不同胃癌细胞株中的表达水平;在MKN-45胃癌细胞中过表达FOXA2,TranswellTM法检测胃癌细胞迁移和侵袭能力.采用Spearman法进行相关性分析.结果 FOXA2和E-cadherin蛋白在胃腺癌组织中表达水平显著低于对应癌旁组织;胃腺癌组织中FOXA2与E-cadherin蛋白表达呈显著正相关;FOXA2蛋白表达与肿瘤分化、浸润深度、淋巴结转移和TNM分期具有显著的相关性;高侵袭性MKN-45胃癌细胞中FOXA2和E-cadherin表达低,而低侵袭性N-87胃癌细胞中两者表达高;FOXA2过表达显著上调E-cadherin蛋白表达,且明显抑制MKN-45细胞迁移和侵袭能力.结论 FOXA2在胃腺癌组织中表达降低,其低表达与胃腺癌的恶性临床病理特征相关.FOXA2过表达上调E-cadherin表达并抑制胃癌细胞侵袭、迁移能力.
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甘露聚糖结合凝集素相关丝氨酸蛋白酶2(MASP-2)的CUB1、CUB2片段多克隆抗体的制备及鉴定
目的 原核表达甘露聚糖结合凝集素相关丝氨酸蛋白酶2(MASP-2)的CUB1、CUB2功能区蛋白,制备其功能区蛋白的多克隆抗体并进行鉴定.方法 利用带有CUB1、CUB2基因片段的pGEX-6P-2原核载体诱导表达GST-CUB1和GST-CUB2融合蛋白并进行纯化,将纯化后的融合蛋白作为抗原,与Freund佐剂充分混合后免疫5周龄BALB/c雌性小鼠,制备多克隆抗体;应用Western blot法检测多克隆抗体特异性,应用ELISA检测多克隆抗体效价.结果 成功表达并纯化GST-CUB1和GST-CUB2蛋白;应用其作为抗原对小鼠进行免疫后,成功制备出与其相应的多克隆抗体,且特异性强,与其他蛋白无交叉反应;间接ELISA测得CUB1抗体效价大于1:32 000,CUB2抗体效价大于1:16000.结论 成功制备了特异性强,效价高的GST-CUB1和GST-CUB2蛋白多克隆抗体.
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microRNA在免疫细胞中作用的研究进展
microRNA(miRNA)是一种非编码性单链小分子RNA,广泛存在于生物中,可与靶基因mRNA的3'非编码区(3'-UTR)结合,再通过形成沉默复合体而调控靶基因的表达.miRNA参与多种生物学过程,与细胞增殖、分化、器官形成以及免疫应答过程等都息息相关.miRNA在各种免疫细胞的产生、增殖、发育以及免疫应答过程中,通过调节相关靶基因的表达发挥着重要的调控作用.本文综述了主要免疫细胞miRNA功能调控研究,横向比较突出miRNA的网络调控作用,有助于多角度理解免疫平衡和发现免疫应答新靶点,为相关免疫疾病的防治提供新思路.
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丙型肝炎疫苗研制的免疫学挑战与机遇
HCV高度的遗传变异性和宿主对HCV较弱的免疫反应能力,严重影响机体产生高效、广泛和持久的免疫反应清除病毒,而且目前缺乏有效的HCV的细胞培养模型和动物模型,从而阻碍了HCV疫苗的研制进程.目前的HCV疫苗类型包括合成肽疫苗、蛋白疫苗、DNA疫苗、载体疫苗和基于病毒样颗粒的疫苗,分别进入了不同的研制阶段.本文总结了HCV感染的免疫学进展,并主要对各种候选HCV疫苗,如重组蛋白疫苗、合成肽(抗原表位)疫苗、DNA疫苗、病毒载体疫苗和HCV病毒样颗粒疫苗以及佐剂的研究进展进行综述,总结了HCV疫苗研制过程中面临的免疫学挑战,并提出了HCV疫苗研制的参考思路.
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树突状细胞在自身免疫性疾病中的作用
树突状细胞(DC)是效力强的抗原提呈细胞,在固有免疫和适应性免疫中发挥关键调控作用.DC在大多数自身免疫性疾病中参与的方方面面已经通过患者及各种动物模型得到数据支持.各种关于自身免疫性疾病的研究成果显示,DC主要在维持免疫耐受和激活免疫反应并促进炎症反应过程中发挥重要调控作用.本文主要从以下几个方面综述了DC在自身免疫性疾病的新进展:DC对免疫耐受的调控、DC信号通路的异常激活,DC的不同亚群及数量在自身免疫的作用,以及DC在患者和动物模型中的调节作用.
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PD-1/PD-L信号通路在免疫细胞中的作用及其阻断抗体在肿瘤治疗中的应用
程序性死亡蛋白1(PD-1)为负性共刺激分子,有2个配体,即PD-L1和PD-L2.PD-1与其配体作用时,可起到调节机体免疫反应的作用.随着对PD-1/PD-L通路的深入研究,其在树突状细胞(DC)、T淋巴细胞、B淋巴细胞等中的作用逐渐被揭示,应用抗体阻断PD-1/PD-L信号通路对肿瘤及慢性病毒感染等疾病进行生物治疗已成为近年研究的热点.本文将对PD-1/PD-L信号通路在DC、T细胞、B细胞中所起的作用及其抗体的临床应用进行综述.
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CD40/CD40L系统对B淋巴细胞的作用研究进展
B细胞的CD40/CD40配体(CD40/CD40L)系统在机体体液免疫中发挥重要作用,主要是通过影响B细胞的存活、增殖、分化、免疫球蛋白类别转换等B细胞的功能,进而影响体液免疫的平衡.B细胞CD40信号的活化能加强B细胞存活并促进B细胞增殖,CD40/CD40L系统亦能影响B细胞向浆细胞分化,CD40L缺陷导致的CD40/CD40L系统异常,使B细胞不能发生正常的免疫球蛋白类别转换而积累大量IgM.本文总结了CD40/CD40L系统对B细胞功能的影响.
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T淋巴细胞离子通道及其在自身免疫性疾病治疗中的研究进展
T淋巴细胞在人类适应性免疫应答中发挥着举足轻重的作用,而T淋巴细胞的活化和生理功能的发挥则与其细胞膜上表达的各种离子通道的活动密切相关.近年实验研究使得人们对于T淋巴细胞上离子通道网络的认知日趋完善.了解T淋巴细胞上离子通道的生理结构及功能,为开发以离子通道为治疗靶标的新型免疫抑制剂提供了新的契机.本文归纳了T淋巴细胞离子通道的生理学特征、T淋巴细胞活化与离子通道关系的主要研究进展,在此基础上,对选择性Kv1.3通道阻滞剂治疗自身免疫性疾病的研究前景进行了展望.
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炎症性肠病免疫抑制剂治疗与淋巴瘤发生的研究进展
炎症性肠病(IBD)是一种终身性的反复发作的肠道炎症性疾病,包括溃疡性结肠炎(UC)与Crohn病(CD).IBD的传统治疗方法之一是免疫抑制剂治疗,该疗法可使许多IBD患者病情达到长期缓解效果,因此,被临床广泛应用.免疫抑制剂包括硫唑嘌呤、6-巯基嘌呤、环孢霉素A、氨甲蝶呤等.随着免疫抑制剂的广泛使用,其毒副作用日渐暴露,免疫抑制剂相关淋巴瘤的案例越来越多.本文综述了免疫抑制剂治疗IBD与淋巴瘤发生关系、可能机制及免疫抑制剂临床治疗参考.
| 年 | 期数 |
| 2018 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2017 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2016 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2015 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2014 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2013 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2012 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2011 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2010 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2009 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2008 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2007 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2006 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2005 | 01 02 03 04 05 06 z1 |
| 2004 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2003 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2002 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2001 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2000 | 01 02 03 04 05 06 |
| 1999 | 01 02 |
| 1995 | 01 02 03 |
| 1994 | 01 02 |
| 1993 | 01 02 03 04 |
| 1992 | 01 02 03 04 |
| 1991 | 01 02 03 04 |
| 1990 | 01 02 |
| 1989 | 01 02 03 04 |
