细胞与分子免疫学杂志
Chinese Journal of Cellular and Molecular Immunology 세포여분자면역학잡지
- 主管单位: 中国免疫学会;第四军医大学
- 主办单位: 陕西省免疫学会,中国免疫学会
- 影响因子: 0.81
- 审稿时间: 1-3个月
- 国际刊号: 1007-8738
- 国内刊号: 61-1304/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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基于生物信息学方法预测hsa-miR-181a在脑卒中发病中的分子调控网络
目的 运用生物信息学方法预测固有免疫信号分子hsa-miR-181a与脑卒中相关的分子调控网络.方法 运用UCSC基因组浏览器、人类miRNA疾病数据库、TF-miRNA调控数据库、miRNA靶基因预测验证数据库、Genecards数据库、长链非编码RNA (LncRNA)疾病数据库、DLANALAB-LncBase数据库、转录因子结合谱数据库,研究hsa-miR-181a的上游转录因子,下游靶基因及与其相互作用的LncRNA间的多个调控途径,绘制hsa-miR-181a的核心调控网络图.采用脂多糖(LPS)刺激慢病毒感染的BV2小胶质细胞,采用实时定量PCR检测Toll样受体4(TLR4)、肿瘤蛋白63(p63)、miR-181a和核因子κB p65(NF-κBp65)的水平变化,对hsa-miR-181a调控网络进行验证.结果 UCSC数据库中显示hsa-miR-181a有2个亚型,在多个物种中具有高度保守性.通过疾病分析及文献调研发现hsa-miR-181a与多种疾病密切相关,尤其是缺血性疾病.信息学分析显示hsa-miR-181a受转录因子p63调控的同时,又调控着下游靶基因,脑源性神经营养因子(BDNF)、TLR4等58个基因.此外,Lnc RNA CDKN2B-AS1的转录和其锌指转录因子Snml、n-MYC也可能与hsa-miR-181a存在相互作用.所有基因构成一个以hsa-miR-181a为核心的调控网络,在脑卒中的发生与发展中起着重要作用.在LPS刺激的BV2细胞中,TLR4、p63、miR-181a水平升高,而RNA慢病毒技术干扰小胶质细胞中的p63的表达后,p63表达降低,miR-181a水平也降低,下游NF-κB p65水平被抑制,表明p63是TLR4调节miR-181a表达的关键信号分子.结论 生物信息学方法预测并初步验证了hsa-miR-181a分子在脑卒中疾病中的调控网络,为深入研究提供了理论支持.
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支气管哮喘小鼠肺组织Th9细胞数量及相关细胞因子水平增加
目的 观察支气管哮喘小鼠肺组织Th9细胞数量及其相关细胞因子水平,了解它们与支气管哮喘发病的关系.方法 16只SPF级雌性BALB/c小鼠按随机数字表法分为正常对照组和哮喘组,每组8只.建立哮喘模型后,2组小鼠分别用小动物无创肺功能仪行气道反应性检测;ELISA检测支气管肺泡灌洗液(BALF)中白细胞介素9(IL-9)、IL-10、IL-13水平;HE染色及PAS染色观察肺组织病变情况;流式细胞术检测肺脏IL-9+、IL-10+、IL-13+淋巴细胞占CD3+淋巴细胞百分数.结果 哮喘组气道反应性明显高于正常组,气道炎症明显;BALF中IL-9、IL-13水平较正常组明显升高,IL-10明显降低;肺脏IL-9+、IL-13+淋巴细胞占CD3+淋巴细胞百分数明显高于正常组,IL-10+淋巴细胞占CD3+淋巴细胞百分数明显低于正常组.结论 支气管哮喘小鼠肺内IL-9+细胞数量增加、IL-9水平升高,IL-10表达减少,Th9细胞可能在哮喘发病中发挥一定作用.
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佐剂关节炎大鼠滑膜组织HIF-1α和VEGF及CD34表达上调促进血管新生
目的 观察佐剂关节炎大鼠滑膜组织缺氧诱导因子1α(HIF-1α)、血管内皮细胞生长因子(VE GF)及CD34的表达,探讨类风湿性关节炎血管新生的机制.方法 30只大鼠随机均分为正常对照组和模型对照组,模型对照组采用Freund完全佐剂建立佐剂关节炎大鼠模型.造模成功后19 d,采用反转录PCR检测滑膜组织HIF-1 α、VEGF的mRNA表达,Western blot法检测HIF-1α、VEGF的蛋白表达,免疫组织化学染色检测大鼠肺组织HIF-1α、VEGF、CD34表达.结果 与正常对照组比较,模型对照组关节炎症明显,滑膜组织CD34表达增加,VEGF、HIF-1α mRNA和蛋白表达显著增加;滑膜组织VEGF mRNA表达与足趾肿胀度呈正相关,HIF-1α蛋白表达与关节炎指数呈正相关,VEGF mRNA、HIF-1α蛋白表达量与CD34呈正相关.结论 佐剂关节炎大鼠滑膜组织VEGF、HIF-1α、CD34过表达与滑膜血管新生有关.
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人细胞间黏附分子1基因慢病毒干扰载体感染MCF-7细胞下调靶基因表达
目的 构建人细胞间黏附分子1(ICAM-1)慢病毒干扰载体,包装病毒后,感染人乳腺癌细胞MCF-7并检测干扰效果.方法 针对人ICAM-1基因设计并合成3条靶向短发夹RNA (shRNA)干扰序列(ICAM-1 shRNA1、ICAM-1 shRNA2和ICAM-1 shRNA3)以及一个阴性对照序列(NS),将其克隆入载体pLKO.1-SP6-PGK-GFP中,测序正确后利用3个质粒病毒包装系统(干扰质粒载体-psPAX2-pMD2.G)转染HEK293T细胞并包装慢病毒.收获病毒上清并测定病毒滴度.将所获病毒感染MCF-7细胞,实时荧光定量PCR (qRT-PCR)和Western blot法检测干扰效率.结果 菌落PCR结果显示目的片段成功插入pLKO.1-SP6-PGK-GFP载体中,DNA测序证实无误.将所制备之慢病毒感染MCF-7细胞,qRT-PCR和Western blot结果证实ICAM-1 shRNA3组ICAM-1 mRNA和蛋白水平有明显下降.结论 成功构建了人ICAM-1基因shRNA慢病毒干扰载体,包装慢病毒后,感染MCF-7细胞可引起ICAM-1表达下调.
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促炎分子盘状结构域受体2在泛素化修饰过程中与泛素分子的偶联方式
目的 研究泛素分子中哪些位点的赖氨酸(Lys)残基参与了具有促炎效应的膜受体盘状结构域受体2(DDR2)的多聚泛素化修饰.方法 将DDR2、Cbl-b及泛素分子不同位点Lys的突变体共转染HEK293T细胞,以胶原蛋白刺激细胞诱导DDR2发生活化.利用免疫沉淀方法分离细胞中的DDR2,Western blot法检测DDR2与不同泛素分子的偶联情况.结果 仅保留27位Lys的泛素分子偶联到DDR2分子上的能力与野生型泛素分子相接近,保留33位Lys的泛素分子有较微弱与DDR2偶联的能力.27位Lys突变可使泛素分子彻底丧失与DDR2相偶联的能力,而33位Lys突变使得泛素分子偶联DDR2的能力部分丧失.结论 Cbl-b介导的DDR2的多泛素化修饰主要是通过泛素分子的Lys27偶联的,Lys33可能也部分参与了DDR2的泛素化修饰.
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小鼠主要组织相容性复合物移植抗原肽的提取与验证
目的 建立主要组织相容性复合物(MHC)移植抗原肽提取方法.方法 以供体C57BL/6小鼠脾细胞为移植抗原免疫BALB/c受体小鼠,用pH3.3柠檬酸缓冲液洗脱受体小鼠脾细胞MHC结合抗原肽,用BCA蛋白测定法和高效液相色谱串联质谱法(HPLC-MS/MS)检测洗脱液中多肽成分,以小鼠异位心脏移植验证洗脱液内多肽的移植免疫抗原性.结果 弱酸洗脱获得了微量多肽50 μg/108脾细胞,其中含有混杂短多肽.与同系移植组相比,HPLC-MS/MS检测发现同种异体移植组洗脱液中出现差异多肽.同系MHC移植抗原肽预致敏受体心脏移植物中位存活时间为8d,同种异体MHC移植抗原肽预致敏受体心脏移植物中位存活时间仅4d.用同种异体来源的MHC移植抗原肽预致敏受体,使小鼠心脏移植物中位存活时间显著缩短.结论 通过供体脾细胞免疫,弱酸洗脱受体脾细胞可获得MHC移植抗原肽,可用于进一步筛选移植抗原决定簇.
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畸形表皮自调节因子1相关功能蛋白的筛选
目的 获得畸形表皮自调节因子1(DEAF1)稳定高表达的HEK293T细胞株,通过免疫共沉淀(Co-IP)和质谱分析技术筛选能与DEAF1相互作用的蛋白质因子.方法 用TurboFect转染试剂将pEGFP-mDEAF1和pEGFP-N1质粒分别转染HEK293T细胞和2F-2B细胞、荧光显微镜观察DEAF1在2种细胞中的定位.将质粒p3×FLAG-mDEAF1分别转染HEK293T和2F-2B细胞株,同时设置相应未转染的空白对照组;通过反转录PCR法和实时定量PCR(qRT-PCR)检测DEAF1在2种细胞中mRNA表达水平,通过Western blot法检测DEAF1在2种细胞中蛋白表达水平.p3×FLAG-mDEAF1质粒转染HEK293T细胞,G418筛选阳性克隆,Western blot法、免疫荧光染色和流式细胞术鉴定DEAF1稳定表达的HEK293T-DEAF1细胞株.抽提HEK293T-DEAF1细胞和正常HEK293T细胞的核蛋白,用EZviewTM Red ANTI-FLAG M2亲和珠子进行Co-IP,SDS-PAGE分离, 挑选明显富集和对照泳道没有的条带进行质谱分析,明确DEAF1的相关功能蛋白.结果 荧光显微镜下可见DEAF1定位于细胞核;反转录PCR、qRT-PCR检测发现转染组DEAF1的mRNA表达水平明显高于未转染组;Westernrn blot法检测发现转染组有融合蛋白mDEAF1-FLAG表达,成功获得稳定高表达DEAF1的HEK293T-DEAF1细胞.经Co-IP筛选和质谱分析,得到一些DEAF1的相关功能蛋白,如前mRNA处理所需的因子及酶,参与起始后RNA聚合酶,参与肽键断裂、蛋白空间结构形成的分子和其他转录因子等.结论 成功获得稳定高表达DEAF1的HEK293T-DEAF1细胞,经Co-IP筛选和质谱分析获得了一些DEAF1相关的功能蛋白.
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人自噬相关基因3原核表达及蛋白纯化和鉴定
自噬相关基因3(autophagy related gene 3,ATG3)及其对应的蛋白是一种泛素样缀合酶.研究发现,细胞自噬体的形成,离不开2个必需系统的参与:1个是对于ATG12与ATG5两种自噬蛋白结合形成微管相关蛋白-轻链3(microtubule-associated proteinlight chain 3,LC3)前体的调节系统,此阶段需要El样酶ATG7和E2样酶ATG10共同参与活化,1个是对于自噬体LC3蛋白的脂化系统[1],它们都属于泛素样蛋白结合系统,而ATG3作为泛素样缀合酶,在LC3蛋白的脂化系统中起到重要作用.这个系统是LC3前体形成LC3-Ⅰ和LC3-Ⅱ的过程,此过程需要El样酶ATG7和E2样酶ATG3,LC3-Ⅰ属于胞质可溶性形式,LC3-Ⅱ属于膜结合形式参与膜的延伸[2].
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Sirtuin 3减少心肌细胞钙超载时细胞色素C的释放并抑制细胞凋亡
目的 研究Sirtuin 3在心肌细胞钙超载时对细胞色素C(CytC)释放和caspase-3激活的影响.方法 将培养的H9c2心肌细胞随机分为4组,即对照组、Sirtuin 3组、离子霉素组(ionomycin组)和离子霉素联合Sirtuin 3组(ionomycin联合Sirtuin 3组).采用ionomycin诱导法构建心肌细胞钙超载模型,Western blot法检测心肌细胞线粒体及胞质细胞色素C(CytC)和caspase-3的水平,分光光度法检测caspase-3的活性,Annexin Ⅴ-FITC/PI双染色结合流式细胞术检测H9c2心肌细胞的凋亡比率.结果 成功构建钙超载模型.Western blot结果显示CytC在线粒体中的水平ionomycin组明显低于对照组,ionomycin联合Sirtuin 3组明显高于ionomycin组,CytC在胞质中的水平相反;Ionomycin组caspase-3的水平明显高于对照组,ionomycin联合Sirtuin 3组caspase-3的水平明显低于ionomycin组.分光光度法结果显示caspase-3的活性ionomycin组明显高于对照组,ionomycin联合Sirtuin 3组明显低于ionomycin组.双染色结合流式细胞术结果显示ionomycin组的凋亡比率明显高于对照组,ionomycin联合Sirtuin 3组的凋亡比率明显低于ionomycin组.结论 心肌细胞钙超载时,Sirtuin 3通过减少CytC释放和caspase-3的激活,抑制细胞凋亡.
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肝再生增强因子基因过表达促进LO2细胞增殖并减轻过氧化氢引起的细胞凋亡
目的 研究过表达23 kDa肝再生增强因子(ALR)对LO2人正常肝细胞增殖及凋亡的影响.方法 构建23 kDa ALR重组表达质粒pcDNA6/23 kDa ALR,采用MegaTran1.0转染LO2细胞,实时荧光定量PCR检测LO2细胞ALR mRNA水平,Western blot法检测ALR蛋白水平,MTS比色法检测细胞增殖能力,流式细胞术检测细胞周期改变及H2 O2诱导的细胞凋亡变化.结果 成功构建pcDNA6/23 kDa ALR质粒,转染组ALR表达显著增加.与pcDNA6-myc/HisA对照组相比,pcDNA6/23 kDaALR质粒转染促进LO2细胞增殖,抑制H2O2诱导的细胞凋亡;细胞周期检测G0期、S期未见明显影响.结论 23 kDa ALR过表达可促进LO2细胞增殖,并提高LO2细胞对H2O2的耐受性.
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过表达人SNX3改变SW620结直肠腺癌细胞的形态
目的 通过过表达人分选连接蛋白3基因(hSNX3),以探讨hSNX3对结直肠腺癌细胞形态和迁移能力的影响.方法 运用基因重组技术将hSNX3基因连接到含有GFP的慢病毒表达载体pEZ-Lv201(pEZ-SV40-eGFP-IRES-Puro)中,构建慢病毒载体pEZ-hSNX3-Lv201,感染结直肠腺癌SW620细胞,获得SNX3稳定过表达的结直肠腺癌细胞,并观察细胞形态和细胞迁移能力及相关蛋白分子的变化.结果 经测序鉴定后,成功构建了慢病毒载体pEZ-hSNX3-Lv201,包装后慢病毒滴度测定为2.12×109拷贝/mL,对照慢病毒滴度为7.9×1010拷贝/mL.重组慢病毒感染SW620细胞后,经克隆筛选和Western blot法鉴定,获得了稳定过表达hSNX3的SW620hSNX3细胞.88%的SW620hSNX3细胞呈椭圆形而不是SW620原来的梭形,但TransweⅡlTM实验和划痕试验显示,细胞迁移能力无显著变化,迁移相关蛋白上皮型钙黏素(E-cadherin)也无明显改变.结论 hSNX3可改变SW620结直肠腺癌细胞的形态,但可能与细胞的迁移能力无关.
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携带miRNA质粒的新型聚乙烯亚胺纳米凝胶抑制大鼠Kupffer细胞核因子κB的表达
目的 用新型聚乙烯亚胺纳米凝胶(PEI-NP)携带小RNA(miRNA)质粒沉默大鼠Kupffer细胞(KC)核因子κB(NF-κB)的表达.方法 凝胶电泳检测PEI-NP装载miRNA质粒的容量;PEI-NP/miRNA质粒转染RAW264.7细胞后分别采用CCK-8法检测细胞毒性,annexin Ⅴ-FITC/PI双染色结合流式细胞术检测RAW264.7细胞凋亡和转染率,实时定量PCR(qRT-PCR)检测RAW264.7细胞NF-κB mRNA水平,Western blot法检测RAW264.7细胞NF-κB蛋白水平,透射电镜观察阳离子聚合物在RAW264.7细胞和肝组织KC内的分布;免疫组织化学技术检测KC内NF-κB的表达.结果 PEI-NP/miRNA质粒质量比为20∶1时载荷率接近100%,体外转染RAW264.7细胞48h,转染率为(33.63±1.94)%.与对照组相比,PEI-NP/miRNA转染的RAW264.7细胞NF-κB蛋白含量显著降低,透射电镜观察到RAW264.7细胞内有大量PEI-NP.肝脏组织透射电镜只在KC内观察到PEI-NP分布;与对照组相比,免疫组织化学染色结果显示,KC内NF-κB蛋白水平明显降低.结论 PEI-NP携带miRNA质粒能成功转染体外培养的巨噬细胞和体内肝脏KC并沉默NF-κB的表达.
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HIV衣壳蛋白P24与TRIM22在HEK293T细胞中的表达及共定位
目的 观察人类免疫缺陷病毒(HⅣ)衣壳蛋白P24与三基序蛋白22(TRIM22)在HEK293T细胞中的共定位情况.方法 以慢病毒载体pLP1为模板,通过PCR法扩增p24编码序列,克隆至pDsRed-Monomer-N1真核表达载体.经菌落PCR、双酶切及DNA测序进行鉴定.将pDsRed-Monomer-N1-p24与pEGFP-N3-TRIM22载体共同转染HEK293T细胞,用荧光显微镜观察p24-DsRed-Monomer和TRIM22-EGFP的表达及共定位情况.结果 经菌落PCR、双酶切及测序鉴定,成功构建pDsRed-Monomer-N1-p24真核表达载体.通过荧光显微镜检测发现,p24-DsRed-Monomer和TRIM22-EGFP在HEK293T细胞中存在共定位关系.结论 HIV衣壳蛋白P24与TRIM22存在共定位.
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姜黄素对糖尿病肾病大鼠肾脏的保护作用及机制
糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)是糖尿病常见的一种并发症,也是终末期肾功能衰竭的主要原因.姜黄素具有抗炎、抗肾纤维化等作用[1-列.本研究通过检测姜黄素对DN大鼠血清中白细胞介素17(interleukin 17,IL-17)、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、血清层黏连蛋白(laminin,LN)、Ⅳ型胶原蛋白(typeⅣcollagen,Col4)表达水平的影响,讨论其对肾脏损伤的保护作用以及可能的治疗机制,为DN的早期诊断提供实验依据.
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冬凌草甲素减轻实验性自身免疫性脑脊髓炎病变的免疫机制
目的 观察冬凌草甲素(ORI)对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)的预防作用,并探讨其可能机制.方法 EAE小鼠发病前给予ORI治疗,以PBS为阴性对照,观察各组小鼠发病情况.通过对EAE小鼠临床评分和脊髓病灶病理学检测判断ORI的预防效果;通过5,6-羧基荧光素二乙酸盐琥珀酰亚胺酯(CFSE)标记检测CD4+T细胞增殖,流式细胞术检测白细胞介素17(IL-17)阳性细胞占CD4+T细胞的百分比、γ干扰素(IFN-γ)阳性细胞占CD4+T细胞的百分比,ELISA检测IL-1β水平.结果 ORI能显著改善EAE的临床评分、减少脊髓病变部位炎性细胞浸润;ORI能抑制EAE小鼠髓鞘少突胶质细胞糖蛋白(MOG)反应性T细胞增殖;与PBS组相比,ORI组IFN-γ+ CD4+T细胞和IL-17+ CD4+T细胞减少;ORI抑制脾脏肿大、淋巴细胞增殖和IL-1β分泌.结论 ORI能减轻EAE严重程度,与减少IL-1β水平、抑制T细胞增殖及辅助T细胞分化有关.
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敲低圆柱瘤病(CYLD)基因抑制人脐静脉内皮细胞的增殖及迁移
目的 通过短发夹RNA(shRNA)敲低圆柱瘤病(CYLD)基因,观察抑制CYLD表达后对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)生物学行为的影响并研究其参与的信号通路.方法 将HUVEC分别感染CYLD shRNA腺病毒(实验组)及绿色荧光蛋白(GFP)空载腺病毒(对照组).分别用CCK-8法检测细胞增殖,细胞划痕实验检测细胞迁移能力,Western blot法检测相关信号通路分子的水平.结果 CCK-8法结果显示,CYLD shRNA组在第1、2、3、4、5天5个时间点,细胞增殖降低;划痕实验结果显示划痕48 h,CYLD shRNA组细胞迁移速率明显降低;与GFP组相比,Western blot结果显示CYLDshRNA组的蛋白激酶B(AKT)、糖原合成激酶3α/β(GSK3α/β)磷酸化水平均降低.结论 抑制CYLD基因表达,可抑制HUVEC的增殖能力及细胞迁移能力,是通过抑制AKT/GSK3α/β信号通路完成的.
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紫草素诱导淋巴系白血病细胞凋亡及其机制
目的 观察紫草素体外对Jurkat T细胞和Raji B细胞白血病细胞增殖及凋亡的影响,探讨其可能分子机制.方法 体外培养的Jurkat T细胞和Raji B细胞用(0.5、1.0、2.0、4.0、8.0) μmol/L紫草素处理,MTT比色法检测紫草素对2株细胞的生长抑制率;异硫氰酸荧光素标记的膜联素V/碘化丙啶(annexin Ⅴ-FITC/PI)双标记结合流式细胞术检测细胞凋亡率;2',7'-二氯二氢荧光黄二乙酸酯(H2 DCFDA)染色检测细胞中活性氧(ROS)的产生;Western blot法检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2蛋白的表达差异.结果 紫草素对Jurkat T细胞和Raji B细胞均表现出较强的增殖抑制和凋亡诱导作用,且该效应呈一定的剂量依赖性和时间依赖性.紫草素可明显上调Jurkat T细胞和Rji B细胞Bax的表达,下调Bcl-2的表达,并能促进胞内ROS的产生.结论 紫草素能通过诱导体外培养的Jurkat T细胞和Raji B细胞凋亡抑制其增殖,与降低Bcl-2/Bax比率及促进ROS的生成有关.
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喜炎平与头孢唑啉联合应用增强小鼠中性粒细胞的呼吸爆发但不影响其趋化功能
目的 研究喜炎平与头孢唑啉联合应用对小鼠外周血中性粒细胞的趋化功能和呼吸爆发能力的影响.方法 将10只正常小鼠作为空白组;将金黄色葡萄球菌感染后的40只小鼠分为模型组、喜炎平组、头孢唑啉组及喜炎平联合头孢唑啉组(联合处理组).空白组与模型组经腹腔给予生理盐水,其他组经腹腔依次给予喜炎平、头孢唑啉、喜炎平联合头孢唑啉.采用TranswenTM小室法检测小鼠外周血中性粒细胞趋化功能;将小鼠外周血中性粒细胞与二氢罗丹明共同孵育,再用佛波酯刺激中性粒细胞,诱导其活化,产生活性氧,活性氧将胞质中的二氢罗丹明氧化为罗丹明,用流式细胞仪检测细胞的荧光强度,判定中性粒细胞呼吸爆发能力.结果 经喜炎平、头孢唑啉和喜炎平联合头孢唑啉处理后,各组小鼠外周血中性粒细胞的趋化指数无显著性差异.空白组、喜炎平组、联合处理组小鼠外周血中性粒细胞的细胞活化率均明显高于模型组和头孢唑啉组;空白组和联合处理组细胞活化率无显著性差异,但明显高于喜炎平组;空白组、喜炎平组、联合处理组小鼠外周血中性粒细胞的刺激指数均明显高于模型组和头孢唑啉组,且3个处理之间无显著性差异;模型组和头孢唑啉组2个指标之间均无显著性差异.结论 喜炎平与头孢唑啉联合应用可通过增强中性粒细胞的呼吸爆发能力,提高机体的抗菌功能,但对中性粒细胞的趋化作用无明显影响.
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黄芪多糖对过氧化氢诱导的MRC-5细胞氧化损伤的保护作用
目的 研究黄芪多糖(APS)在过氧化氢(H2 O2)诱导的MRC-5人胚肺成纤维细胞氧化损伤细胞模型中,对无嘌呤/无嘧啶核酸内切酶/氧化还原因子1(APE/Ref-1)和硫氧还蛋白(TRX)水平的影响,分析APS在氧化损伤过程中对MRC-5细胞的保护机制.方法 将培养的MRC-5细胞随机分组:空白对照组、不同浓度H2O2组、(200、400、800) ms/LAPS处理组.通过H2O2作用于MRC-5细胞建立细胞氧化损伤模型,使用MTT法检测H2O2对MRC-5细胞的增殖抑制率,待H2O2作用的MRC-5细胞氧化损伤模型建立后,用佳H2O2浓度与不同浓度的APS共同作用于MRC-5细胞,确定APS对氧化损伤MRC-5细胞的佳作用浓度;采用免疫荧0光检测8-羟脱氧鸟苷(8-OHdG)含量反映MRC-5细胞DNA氧化损伤情况;应用流式细胞术检测MRC-5细胞的凋亡;采用反转录PCR分析TRX和APE/Ref-1 mRNA的水平;Western blot法检测TRX和APE/Ref-1蛋白水平的变化.结果 实验表明,H2 O2孵育MRC-5细胞24h,可诱导细胞损伤,使细胞存活力下降,且具有浓度依赖性.800 μmol/L H2O2浓度时建立细胞氧化损伤模型.与H2 O2引起氧化损伤的模型组相比,200 mg/L的APS明显抑制H2 O2引起的APE/Ref-1、TRX蛋白表达下调,降低8-OHdG含量,抑制MRC-5细胞凋亡,细胞存活率明显升高.结论 H2 O2引起MRC-5细胞氧化损伤,APS促进氧化损伤的MRC-5细胞APE/Ref-1和TRX的表达,APS减轻MRC-5细胞的氧化损伤并抑制其凋亡.
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T细胞活化接头蛋白棕榈酰化位点突变抑制CD59 GPI介导的T淋巴细胞活化信号转导
目的 构建T细胞活化接头蛋白(LAT)棕榈酰化位点突变的慢病毒,感染Jurkat细胞,建立稳定转染的细胞株,观察LAT棕榈酰化位点突变对CD59介导的T淋巴细胞活化信号转导的影响.方法 构建阴性对照(neg-EGFP)、LAT-M-EGFP融合蛋白基因载体,包装成慢病毒,分别感染Jurkat细胞,建立稳定感染的细胞株.激光共聚焦显微镜观察病毒感染效率及融合蛋白在细胞上的定位;CCK-8法检测CD59单克隆抗体交联前后各组细胞的增殖活性,流式细胞术检测细胞凋亡情况,Westernblot法检测磷脂酶Cγ1(PLC-γ1)、淋巴细胞特异性蛋白酪氨酸激酶(LCK)蛋白的表达.结果 共聚焦显微镜观察发现LAT-M组细胞的LAT分子在细胞膜上散在分布,CD59抗体交联刺激后,未出现明显的点簇状聚集区.与阴性对照细胞相比,LAT-M细胞增殖活性明显降低,中晚期凋亡细胞明显增加;Western blot结果显示,LAT-M组的PLC-γ1、LCK蛋白表达水平和阴性对照组大致相同,经抗体活化后无明显变化,而阴性对照细胞的PLC-γ1、LCK蛋白表达量下降.结论 LAT棕榈酰化位点突变的Jurkat细胞脂筏定位功能缺失,细胞处于抑制状态,对CD59糖基磷脂酰肌醇(GPI)介导的T淋巴细胞活化信号转导有抑制作用.
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上调巨噬细胞FcγRⅡB的表达可抑制其吞噬和趋化功能
目的 构建大鼠FcγRⅡB慢病毒诱导表达载体,观察其对巨噬细胞的作用.方法 以大鼠肝脏mRNA为模板逆转录获得FcγRⅡB基因片段,并将其克隆入慢病毒表达质粒四环素(Tet)顺式应答元件(TRE),构建TRE-FcγRⅡB慢病毒表达重组质粒.将慢病毒表达重组质粒TRE-FcγRⅡB、慢病毒调节质粒Tet分别与慢病毒包装质粒共转染HEK293T细胞,分别包装表达病毒和调节病毒,测定表达病毒和可诱导病毒感染滴度.表达病毒和调节病毒共感染巨噬细胞,经梯度浓度强力霉素(DOX)诱导,免疫荧光技术检测巨噬细胞FcγRⅡB表达,实时定量PCR检测FcγRⅡB mRNA表达,Western blot法检测FcγRⅡB蛋白表达.经不同浓度DOX诱导后的腹腔巨噬细胞分别检测吞噬和趋化功能.结果 重组质粒经PCR、酶切及测序鉴定正确.表达和调节病毒滴度均达到106转导单位/mL.巨噬细胞被病毒感染后经DOX诱导表达FcγRⅡB,免疫荧光染色结果显示,FcγRⅡB能够在巨噬细胞表达;实时荧光定量PCR和Western blot结果显示FcγRⅡB表达水平与DOX浓度呈正相关.巨噬细胞的吞噬和趋化功能与FcγRⅡB表达呈负相关.结论 调节巨噬细胞FcγRⅡB的表达可抑制其吞噬和趋化功能.
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CEACAM6和FOXP3对胰腺癌肿瘤浸润淋巴细胞及预后的影响
目的 探讨胰腺癌组织中癌胚抗原相关黏附分子6(CEACAM6)和叉头盒P3(FOXP3)的表达对患者免疫功能及预后的影响.方法 采用免疫组织化学法检测40例胰腺癌组织中CEACAM6、FOXP3和CD3、CD8、CD45RO的表达,并分析其与临床病理特征及预后的关系.结果 胰腺癌CEACAM6的强阳性率为50%,FOXP3的强阳性率为60%.Ⅲ、Ⅳ期胰腺癌组织中CEACAM6和FOXP3的强阳性率较高,CEACAM6的高表达与CD8和CD45RO细胞的阳性率呈负相关.FOXP3在病理为低分化胰腺癌中强阳性率较高.FOXP3的表达与CD3、CD8、CD45RO阳性T细胞的浸润呈负相关.高表达CEACAM6和FOXP3患者的生存期较短.结论 CEACAM6和FOXP3与胰腺癌的恶性程度有关,其表达对胰腺癌中的肿瘤浸润T细胞具有抑制作用.
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白三烯B4在结核性脑膜炎患者脑脊液中的水平及临床意义
目的 观察结核性脑膜炎患者脑脊液白三烯B4(LTB4)的表达,脑脊液白细胞总数、中性粒细胞数及其与病情严重程度之间的关系.方法 选取临床确诊的结核性脑膜炎、隐球菌性脑膜炎、中枢神经系统白血病和非炎症性中枢神经系统疾病患者,ELISA检测患者脑脊液LTB4水平,计数患者脑脊液白细胞总数及中性粒细胞数,通过改良Rankin评分评估患者病情严重程度.比较不同疾病组脑脊液LTB4水平的差异,计算LTB4和脑脊液白细胞总数、中性粒细胞数和疾病严重程度之间的相关性.结果 结核性脑膜炎患者脑脊液LTB4较隐球菌性脑膜炎、中枢神经系统白血病及非炎症性神经系统疾病组显著增高.结核性脑膜炎患者脑脊液LTB4水平和白细胞总数无相关性,和脑脊液中性粒细胞百分比及绝对数均相关.结核性脑膜炎患者病情严重程度和脑脊液LTB4水平无简单线性关系.结论 结核性脑膜炎患者脑脊液LTB4水平可以作为患者脑脊液炎症反应程度的指标,但是和患者病情严重程度及预后的关系需要进一步探讨.
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PD-L1和PD-L2在食管鳞状细胞癌表达增强并与浸润和转移有关
目的 研究协同刺激分子程序性死亡蛋白配体1(PD-L1)、PD-L2在食管鳞状细胞癌(ESCC)中的表达及意义.方法 制作组织芯片并结合免疫组织化学技术检测92例ESCC及30例癌旁组织中PD-L1、PD-L2的表达,分析与临床病理特征之间的关系.结果 PD-LI、PD-L2在ESCC中的阳性率分别为63% (58/92)、67% (62/92),癌旁食管黏膜鳞状上皮中的阳性率分别为30% (9/30)、37%(11/30),PD-L1、PD-L2在ESCC组织的表达明显高于癌旁组织.PD-L1的表达与ESCC的淋巴结转移及TNM分期相关,PD-L2的表达与ESCC的浸润深度及淋巴结转移相关.结论 PD-L1、PD-L2在ESCC中表达升高,且与ESCC的浸润和转移密切相关.
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吗啡诱导Th2细胞偏移的分子机制研究进展
Th1/Th2细胞平衡维持免疫系统功能,影响细胞因子间的平衡,与许多疾病的发生、发展、转归有密切关系.吗啡是常见的镇痛药,长期使用可以导致Th1/Th2细胞平衡失调,可通过阿片受体的直接作用或中枢神经系统的间接作用,致使Th1/Th2细胞平衡向Th2细胞偏移.吗啡所致Th2细胞偏向的机制与白细胞介素2(IL-2)、IL-4、IL-10、γ干扰素(IFN-γ)等多种细胞因子及GATA结合蛋白3(GATA3)、信号转导子及转录激活子6(STAT6)、T-bet、STAT4等转录基因表达的变化有关,同时与Fas/Fas配体及腺苷酸环化酶途径密切相关.本文综述了吗啡诱导Th2细胞偏移的作用机制.
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输血前血型血清学检测的影响因素及其质量控制研究进展
输血前血型血清学检测的影响因素包括:医护技术人员操作因素、试剂器材因素、被检血清与红细胞因素、生理与疾病及使用药物因素等.输血前血型血清学检测关键环节的质量控制包括医护技术人员的质量控制、血标本采集的质量控制、血型与配血等检测试剂及试验操作技术的质量控制.本文简述了输血前血型血清学检测的影响因素及其关键环节质量控制措施的研究进展.
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Toll样受体调控适应性免疫应答的研究进展
Toll样受体(TLR)属于天然免疫受体,可通过模式识别受体识别病原相关分子模式的识别分子激活固有免疫应答.TLR在适应性免疫应答调控过程中也发挥重要作用,是连接固有免疫和适应性免疫的桥梁.TLR信号通路不仅可通过调控树突状细胞的发育和成熟影响抗原提呈,还可调控抗原提呈细胞表面共刺激分子的表达来调控适应性免疫应答;而且,TLR信号通路可调控多种细胞因子的分泌,从而影响T细胞发育和成熟,调控适应性免疫应答.本文将就TLR信号通路调控适应性免疫应答的研究进展进行综述.
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系统性红斑狼疮相关生物标志物的研究进展
系统性红斑狼疮(SLE)是一种临床表现多样、病情变化快的自身免疫性疾病.如不及时治疗,常可导致患者死亡.研究SLE生物标志物,无论对于早期诊断、病情活动监测、器官损害的可能性和损害程度的评估以及发现新的治疗靶点均至关重要.一些实验室中筛查出的标志物有可能成为SLE疾病易感性、病情监测、器官特异性受累的潜在生物学标志,包括补体C4和Fcγ受体基因的多态性及拷贝数,多种信号转录因子,多种补体活化产物,CD27high浆细胞、B细胞刺激因子、抗C1q抗体、抗NR2抗体等.本文综述了这些潜在生物学标志物及其可能临床意义.
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腺苷受体信号通路和免疫细胞上腺苷受体的调节
自从腺苷及其衍生物应用于临床后,腺苷通路一直是药物研究的重要靶点,腺苷可以通过4种G蛋白偶联的腺苷受体(AR)启动其调节功能.在炎症环境中,表达这些AR的免疫细胞,能够受到腺苷的调节.腺苷在炎症和免疫系统领域的应用,让人们更加重视以AR为基础的治疗.本文综述了腺苷的代谢、AR信号通路和各种免疫细胞上AR的调节功能,期望在感染、自身免疫、缺血和退行性疾病中,腺苷及其衍生物能够发挥治疗作用.
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女性生殖道黏膜免疫的激素调节
女性生殖道黏膜免疫系统作为生殖道局部和外界环境之间的第一道保护屏障,在抗性传播病原菌感染以及保护同种异体胚胎发育过程中发挥着举足轻重的免疫作用.由于长时间周期性的暴露于性激素,并受性激素的影响,女性生殖道黏膜免疫系统相较于胃肠道、呼吸道等黏膜免疫系统更加精细和复杂.雌孕激素可直接或间接地精确调控生殖道上皮细胞、免疫细胞以及细胞因子等,以维持黏膜局部免疫防御和免疫耐受的动态平衡.周期性的激素水平差异调控保护性免疫的同时,也可能增加性传播病原菌易感性,形成性传播感染易感性时间窗.本文旨在从多角度阐述雌孕激素对女性生殖道黏膜免疫的调控机制.
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不明原因反复性自发流产与免疫细胞失衡的关系
不明原因反复性自发流产(URSA)是近年来生殖医学的研究热点,同时与之相关的免疫因素也引起了研究者的广泛关注,但是其具体机制尚不清楚.URSA的发生可能与不同的免疫细胞有关,尤其是T细胞亚群的改变如Th1细胞/Th2细胞、调节性T细胞/Th17细胞的失衡;URSA患者的蜕膜组织中NK细胞表达的变化及母胎界面免疫耐受的打破等一直是生殖免疫学研究的重点.本文主要对这些免疫细胞在URSA发生机制中的研究进展及临床免疫疗法在生殖医学中的应用状况进行简要综述.
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Ras相关C3肉毒毒素底物1(Rac1)多克隆抗体的制备及应用
目的 制备抗Ras相关C3肉毒毒素底物1(Rac1)兔多克隆抗体并进行初步应用.方法 以人宫颈癌细胞系HeLa细胞cDNA为模板,构建重组表达质粒pET-32a-Rac1.His-Rac1融合蛋白在大肠杆菌中成功表达,将纯化后的融合蛋白作为免疫原免疫家兔制备兔多克隆抗体.分别采用ELISA、Western blot法和免疫组织化学技术对抗Rac1抗血清的效价及特异性进行鉴定.结果 His-Rac1融合蛋白成功构建并高效表达.制备的抗Rac1兔多克隆抗体可以检测到HeLa细胞、MCF-7细胞的Rac1蛋白,并能识别人肾组织中的Rac1蛋白.结论 成功制备了兔抗人Rac1多克隆抗体,该抗体可以识别多种天然样本中的Rac1蛋白.
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抗人肌红蛋白单克隆抗体的制备及应用
目的 制备高效价、高特异性的抗人肌红蛋白(MYO)单克隆抗体(mAb),建立ELISA双抗体夹心法检测人血清中MYO.方法 用天然的MYO进行免疫,用杂交瘤技术获得稳定分泌抗人MYO mAb的细胞株;制备腹水型mAb,经亲和纯化后进行抗体特性鉴定;确定佳配对组合并建立双抗体夹心ELISA一步法,对血清样本进行检测,并与进口试剂盒进行比较.结果 共筛选出9株能稳定分泌mAb的细胞株,其中2M1、3M4、5M7、10M4亲和纯化后效价达到(1.0~2.6) ×106(A.约为1.0时的抗体稀释倍数).抗体配对共筛选出3对能进行夹心配对的抗体(2M1/HRP-3M4、5M7/HRP-3M4、10M4/HRP-5M7),其中5M7/HRP-3M4这个配对有较高的灵敏度和较大的线性范围;利用佳配对组合5M7/HRP-3M4建立标准曲线,其线性范围为(25 ~ 1000) ng/mL,优于进口试剂盒的线性范围(25 ~ 500) ng/mL;样本检测结果显示,自制试剂盒的阳性检出率为95%(19/20),阴性检出率为100% (40/40).结论 获得了2株高特异性,高亲和力的抗人MYO mAb,建立了双抗体夹心ELISA一步法,为ELISA试剂盒的研制奠定了基础.
年 | 期数 |
2018 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2017 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2016 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2015 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2014 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2013 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2012 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2011 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2010 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2009 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2008 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2007 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2006 | 01 02 03 04 05 06 |
2005 | 01 02 03 04 05 06 z1 |
2004 | 01 02 03 04 05 06 |
2003 | 01 02 03 04 05 06 |
2002 | 01 02 03 04 05 06 |
2001 | 01 02 03 04 05 06 |
2000 | 01 02 03 04 05 06 |
1999 | 01 02 |
1995 | 01 02 03 |
1994 | 01 02 |
1993 | 01 02 03 04 |
1992 | 01 02 03 04 |
1991 | 01 02 03 04 |
1990 | 01 02 |
1989 | 01 02 03 04 |