细胞与分子免疫学杂志
Chinese Journal of Cellular and Molecular Immunology 세포여분자면역학잡지
- 主管单位： 中国免疫学会；第四军医大学
- 主办单位： 陕西省免疫学会,中国免疫学会
- 影响因子： 0.81
- 审稿时间： 1-3个月
- 国际刊号： 1007-8738
- 国内刊号： 61-1304/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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赖型钩端螺旋体外膜蛋白LipL32基因真核表达载体的构建及表达的初步研究
目的:构建赖型钩端螺旋体外膜蛋白LipL32基因真核表达载体并在COS-7细胞中表达,为钩端螺旋体DNA疫苗的研究和开发奠定基础.方法:从赖型钩端螺旋体017株全基因组中PCR扩增出目的基因,双酶切构建重组质粒pcDNA3.1-LipL32.脂质体转染法将重组质粒转染COS-7细胞,通过RT-PCR、Western blot检测目的基因的表达.结果:成功构建了LipL32基因的真核表达载体,并在COS-7细胞中获得瞬时和稳定表达.结论:赖型钩端螺旋体外膜蛋白LipL32基因真核表达载体能在哺乳动物细胞内表达,为钩端螺旋体DNA疫苗的应用提供了实验依据.
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HPV18型E2蛋白高表达对巨噬细胞凋亡及其分泌功能的影响
目的:研究HPV18 E2及其N端(TAD)、C端(DBD)与GFP融合蛋白瞬时高表达对巨噬细胞(MΦ)凋亡及分泌活性的影响,为进一步研究E2蛋白在HPV18致癌机制中的作用奠定实验基础.方法:通过PCR从现有真核表达载体pEGFP-C1/E2上分别扩增出TAD、DBD基因片段,并构建真核表达载体pEGFP-C1/TAD、pEGFP-C1/DBD.将3种真核表达载体及pEGFP-C1分别转染MΦ,用倒置荧光显微镜观察它们的表达与定位,并以抗GFP抗体为一抗作Western blot检测它们的表达.通过3种融合蛋白在MФ内的瞬时高表达,在转染48 h后分别检测各组细胞培养基中TNF-α和IL-1β的含量,并收集MΦ经染色以及流式细胞术(FCM)观察检测其凋亡.结果:GFP-E2融合蛋白主要表达于细胞核,细胞质内也有表达,而GFP-DBD融合蛋白仅表达于细胞核内,GFP-TAD仅表达于细胞质.GFP-E2、GFP-TAD融合蛋白在MΦ内高表达后MΦ凋亡率上升,细胞因子TNF-α和IL-1β分泌量增加,且GFP-TAD作用强于GFP-E2.而EGFP-DBD无此作用.结论:HPV18 E2及其TAD与EGFP融合蛋白瞬时高表达可诱导MΦ凋亡并上调其分泌细胞因子TNF-α和IL-1β.
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mOX40-Ig的表达及其生物学活性的初步研究
目的:构建pcDNA3.1-mOX40-Ig真核表达载体,转染CHO细胞进行稳定表达,获得有生物学活性的mOX40-Ig融合蛋白.方法:RT-PCR法扩增获得hIgG1Fc段基因,构建pcDNA3.1-hIgG1Fc重组质粒并经测序证实.从本室保存的pIRES2-EGFP-mOX40重组质粒中PCR扩增mOX40胞外段,将其插入pcDNA3.1-hIgG1Fc重组质粒中构建pcDNA3.1-mOX40-Ig真核表达载体.脂质体法转染CHO细胞获得稳定表达,用RT-PCR与ELISA法检测其表达,蛋白A亲和纯化后,SDS-PAGE进行鉴定.3H-TdR掺入法研究OX40信号对B细胞的体外促增殖作用.结果:测序证实hIgG1Fc段、mOX40胞外段及mOX40-Ig基因序列正确,RT-PCR与ELISA证实mOX40-Ig的表达,SDS-PAGE证实其为mOX40-Ig融合蛋白,3H-TdR掺入法显示mOX40-Ig在体外能有效地促进B细胞增殖.结论:成功地构建pcDNA3.1-mOX40-Ig真核表达载体,并获得有生物学活性的mOX40-Ig融合蛋白的稳定表达,为进一步开展OX40相关领域的横向应用研究奠定了基础.
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肝癌抗原肽(EPVTKAEML)与人HSP70融合基因的构建及原核表达
目的:构建及原核表达肝癌抗原肽(EPVTKAEML)与人热休克蛋白70(HSP70)的融合基因.方法:采用加端PCR方法,将EPVTKAEML的基因序列融合到人HSP70基因的3′端;将融合基因克隆入原核表达载体pET-28a(+)中,构建重组质粒pET-28a(+)/EPVTKAEML-HSP70.经限制性内切酶BamH I、Xho I双酶切鉴定及序列测定后,转化E.coli BL21(DE3),经IPTG诱导表达融合蛋白,SDS-PAGE检测表达结果.结果:应用加端PCR方法扩增出约2.0 kb的目的片段,序列测定结果证实,EPVTKAEML的基因序列成功地融合到人HSP70基因的3′端.经BamH I、Xho I酶切鉴定证实,融合基因成功地克隆到原核表达载体pET-28a(+)上;转入重组质粒的E.coli BL21(DE3)经IPTG诱导后,SDS-PAGE分析发现在相对分子质量(Mr)约72 000处有表达量明显增多的蛋白条带.结论:成功地构建并表达了肝癌抗原肽(EPVTKAEML)与人HSP70的融合基因.
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昆明种小鼠与C57BL/6J小鼠磷酸二酯酶β亚单位编码基因pde6b序列特点的比较分析
目的:分段克隆昆明种小鼠磷酸二酯酶(PDE) β亚单位编码基因pde6b CDS序列全长,分析比较昆明种小鼠与C57BL/6J小鼠PDE β亚单位编码基因pde6b序列的差异.方法:设计覆盖pde6b CDS区的引物序列,通过逆转录-聚合酶链式反应扩增并克隆入载体pMD18-T中,转化大肠杆菌,酶切鉴定后测序.通过生物信息检索、序列拼接并应用生物信息学相关软件进行序列分析.结果:克隆了野生型昆明种小鼠的pde6b CDS全长.昆明种小鼠与C57BL/6J小鼠pde6b CDS区(NM_008806)相比较存在如下不同:昆明种小鼠第706位碱基为A,而数据库中序列NM_008806为G;第1149位碱基前者为T,后者为C.昆明种小鼠与C57BL/6J小鼠pde6b编码的蛋白序列差异并不明显,仅有第236位氨基酸残基为甘氨酸(G)突变成丝氨酸(S),为相对保守性替换关系.结论:克隆了昆明种小鼠pde6b CDS 区全长序列;pde6b基因在不同种属小鼠之间编码序列存在差异,表现出多样性特点,但蛋白序列保守性较高.
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大鼠IgE依赖组胺释放因子基因的克隆表达及其功能研究
目的:获得原核表达的可溶性大鼠IgE依赖组胺释放因子(rHRF),并检测其诱发大鼠致敏肥大细胞释放组胺的功能.方法:克隆Wistar大鼠rHRF基因完整编码区序列并在BL21细胞中进行原核表达,纯化的可溶性重组rHRF刺激卵清蛋白变应原致敏的大鼠肺肥大细胞,利用荧光分光光度法测定组胺释放量.结果:测序证实克隆基因与GenBank中大鼠IgE依赖组胺释放因子(又称翻译控制肿瘤蛋白)mRNA序列的一致性为97%,推测的氨基酸序列一致性为95%.SDS-PAGE显示重组rHRF相对分子质量(Mr)约为24 000;重组rHRF诱发大鼠致敏肥大细胞释放组胺不依赖变应原,且呈剂量依赖关系. 结论:rHRF具有不依赖变应原诱发大鼠致敏肥大细胞释放组胺的功能,可能在Ⅰ型超敏反应过程中发挥重要作用,为进一步研究rHRF的免疫学功能打下基础.
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60 Coγ射线照射对肺泡II型细胞和肺泡隔间质细胞的生物效应
目的:探讨60Coγ射线照射对肺泡II型细胞和肺泡隔间质细胞的生物效应.方法:原代分离肺内II型上皮细胞(AT-Ⅱ)和间质细胞包括巨噬细胞和成纤维细胞,分别进行0、3、5、7 Gy的γ射线照射,用细胞核嗜银染色观察照射对AT-Ⅱ增殖的影响;用酶谱分析检测照射后AT-Ⅱ和间质细胞培养上清中基质金属蛋白酶-2、-9(MMP-2,-9)的活性;用ELISA检测间质细胞培养上清中TGF-β1和IV型胶原含量.结果:AT-Ⅱ的核仁数量随照射剂量增加而增多,其中7 Gy组高;AT-II培养上清中MMP-2、-9活性随照射剂量增加呈先增高后降低趋势,间质细胞上清中MMP-2、-9活性和TGF-β1水平逐渐升高,IV型胶原分泌水平呈先降低后升高趋势.结论:放射性肺损伤早期,AT-Ⅱ、巨噬细胞和成纤维细胞均参与肺组织无效性重建过程,与晚期肺纤维化启动有一定的内在联系.
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结核分枝杆菌联合DNA疫苗初免-BCG加强的免疫效果观察
目的:研究并比较结核分枝杆菌免疫保护性抗原DNA(Ag85A和ESAT-6)疫苗联合免疫,BCG免疫以及联合DNA疫苗初免-BCG加强免疫等不同的免疫策略,诱导免疫应答效果观察.方法:健康雌性BALB/c小鼠24只,随机分成PBS 阴性对照组,DNA初免-BCG异源加强组,DNA(Ag85A和ESAT-6)初免DNA同源加强组和BCG阳性对照组,共进行3次免疫,初免2次,后1次加强,间隔2周1次.PBS组3次均注射PBS 溶液;DNA/BCG组以质粒DNA免疫2次,后1次以BCG加强免疫;DNA/DNA组3次均以质粒DNA进行免疫;BCG组则注射PBS溶液2次后以BCG免疫.末次免疫后4、6、8周分别分离血清测定总IgG水平,同时分离小鼠脾细胞,体外经TB-PPD刺激后进行淋巴细胞增殖实验(XTT法)并测定脾细胞培养上清中IFN-γ和IL-4水平.结果:DNA/BCG、DNA/DNA、BCG组体外经TB-PPD刺激后均检测到特异性IgG抗体产生,3组平均效价为1:120、1:160、1:80,DNA/DNA组的抗体效价高于另外2组;小鼠脾细胞体外经TB-PPD刺激后,均能产生特异性淋巴细胞增殖并诱生较强的IFN-γ反应,其中DNA/BCG组IFN-γ的分泌水平高于DNA/DNA组和BCG组(P<0.05).结论:联合DNA疫苗初免-BCG加强的免疫策略能在小鼠体内诱导较强的特异性细胞免疫反应,产生高水平的IFN-γ.
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Apoptin基因/壳聚糖缓释微球的制备及其对A375细胞的凋亡诱导作用
目的:以羧甲基壳聚糖为基质材料,制备apoptin基因缓释微球.方法:采用复凝聚法制备apoptin/壳聚糖微球,分别用光镜观察微球形态、内切酶研究其稳定性、DNA电泳阻滞分析apoptin/壳聚糖佳比例、PCR测定apoptin基因作为复制摸板能力、用MTT法检测其抗肿瘤活性.结果:壳聚糖与apoptin基因可形成稳定的微球,其直径在200～300 nm之间,成球性较好、apoptin/壳聚糖微球P/N佳质量比为5.5:1、微球能够有效防止DNA酶的降解作用、apoptin/微球载体中的基因仍具有DNA复制模板功能,并能有效地转染A375细胞,诱导A375细胞发生凋亡,从而抑制瘤细胞生长.结论:apoptin基因与羧甲基壳聚糖可形成稳定的缓释微球,并能有效地转染肿瘤细胞,诱导肿瘤细胞发生凋亡.
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shRNA表达载体pWH1的构建及用于HIF1基因的沉默
目的:构建用于RNAi的shRNA(small hairpin RNA)表达载体及检测其对低氧诱导因子-1(Hypoxia-inducible Factor-1,HIF1)基因的沉默效果.方法:从人血基因组中PCR扩增出H1基因启动子,克隆入酶切处理后的pEGFP-C1载体片段中,此载体命名为pWH1.以人HIF1 cDNA基因为靶标设计引物,退火后克隆入pWH1.新的载体转染SGC7901细胞,然后用RT-PCR和Western blot检测HIF1基因的表达改变.结果:构建的pWH1载体能很好地表达针对HIF1基因的shRNA,RT-PCR和Western blot的结果显示HIF1基因的mRNA和蛋白表达水平均明显下降.结论:成功构建了shRNA表达载体pWH1,这对于基因的功能研究具有重要的意义.
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γδT细胞在变应原雾化吸入减敏防治过敏性支气管哮喘中的作用
目的:探讨γδT细胞在过敏性支气管哮喘发病机制中的作用.方法:来自门诊的40例粉尘螨和屋尘螨点刺阳性、部分控制过敏性支气管哮喘患者随机分为常规治疗组(A组)和吸入减敏组(B组),每组各20例.所有患者接受相同的基础治疗,常规治疗组雾化吸入生理盐水5 mL、吸入减敏组雾化吸入特异性变应原,每周2次,持续6个月.治疗前后用流式细胞术(FCM)检测外周血及诱导痰中γδT细胞占淋巴细胞百分比;IL-4+、IFN-γ+γδT细胞占淋巴细胞百分比.结果:治疗后B组外周血、诱导痰中γδT细胞占淋巴细胞百分比低于治疗前;B组外周血和诱导痰中IFN-γ+γδT细胞占淋巴细胞百分比增高.结论:特异性变应原雾化吸入减敏疗法有效防治哮喘可能与γδT细胞有关;γδT细胞可能参与哮喘发病机制.
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疣状皮肤结核1例
1 临床资料患者, 女性, 11岁.右膝斑块7年就诊.7年前无诱因患者右膝部出现豆粒大小红色丘疹, 圆形, 边界清楚, 表面无鳞屑, 无水疱、 大疱, 无出血、渗出、溃破, 自觉微痒, 当时未介意.此后皮损渐增至鸡蛋大小, 偶感瘙痒, 无其他任何不适, 按"湿疹"在多家医院诊治, 皮损从未消退.
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环磷酰胺和环孢素A对SLE患者外周血Th细胞亚群免疫调节的作用
目的:探讨环磷酰胺(CY)和环孢素A(CsA)对SLE患者外周血Th细胞亚群的免疫调节作用.方法:以10例重度活动的SLE患者和6例正常对照的PBMC为研究对象,将细胞悬液分为空白组、植物血凝素(PHA)刺激组、PHA+CY组、PHA+CsA组、CY组和CsA组分别给药,体外细胞培养24 h后,利用三色流式细胞术检测CD4+IL-10+T细胞、CD4+IFN-γ+T细胞比例和CD8+ IL-10+ T细胞、CD8+IFN-γ+T细胞等比例,同时记录相应细胞的荧光强度.结果:CsA促进静息和活化状态下PBMC培养中表达CD4+IL-10+T细胞比例增加,同时CD4+T细胞表达IL-10荧光强度增强.CY虽然促进SLE PBMC培养中表达CD4+IL-10+T细胞比例增加,但对CD4+T细胞表达IL-10的荧光强度无明显增强.CsA抑制PBMC培养中表达CD8+IL-10+T细胞的比例,同时CD8+T细胞表达IL-10的荧光强度减弱.而CY虽然抑制SLE PBMC培养中表达CD8+IL-10+T细胞的比例,但CD8+T细胞表达IL-10的荧光强度却是减弱的.CsA对活化状态下正常对照和SLE PBMC培养中表达CD4+IFN-γ+T细胞比例的抑制作用优于CY,且CY对SLE患者PBMC培养中CD4+T细胞表达IFN-γ荧光强度抑制作用也是减弱的.CsA和CY均可抑制活化状态下,正常对照PBMC和静息状态下SLE PBMC培养中表达CD8+IFN-γ+T亚群细胞的比例,且CY的抑制作用优于CsA.但CY对SLE PBMC培养中CD8+T细胞表达IFN-γ荧光强度的增强作用不如CsA.结论:CsA和CY均能使CD4+T细胞受抑,CD8+T细胞上升.但CsA对T细胞活化,炎症相关细胞因子表达启动的反应更为敏感,免疫调节作用更为显著.
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三联疗法治疗幽门螺杆菌相关慢性荨麻疹的疗效观察
荨麻疹是指皮肤、黏膜小血管反应性扩张和通透性增高而产生的一种局限性水肿反应, 主要表现在每天或几乎每天出现的皮肤风团及瘙痒, 分为急性荨麻疹和慢性荨麻疹(chronic urticaria, CU), 以CU发病率为高.CU病情大多反复发作, 并持续超过6周, 多数病因不易查出, 故迁延不愈, 给患者身体及心理造成了很大的负担.近来许多研究发现CU的发病与幽门螺杆菌(Helicobacter pylori, Hp)的感染关系密切, 现对近半年来我院就诊的58例CU患者的临床资料进行回顾性分析.
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罗丹明123分离的肝癌细胞系MHCC97亚群AFP的表达
目的:应用罗丹明123(Rho123)结合流式细胞术(FCM)对人肝癌细胞MHCC97进行分选,检测甲胎蛋白(AFP)在不同肝癌细胞亚群中的表达差异.方法:应用罗丹明123(Rho123)结合FCM将人肝癌细胞株MHCC97分为Rholow和Rhohigh组,采用免疫细胞化学方法观察AFP表达和含量.结果:Rholow组和Rhohigh组比较,AFP表达率有显著性差异(P<0.01).结论:AFP在肝癌细胞亚群中表达有差异,Rho123结合FCM可以进一步证实肿瘤的异质性.
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类风湿性关节炎RF阳性与阴性患者外周血CD4+细胞基因表达的差异
目的:研究RF因子阳性及阴性RA患者之间是否存在基因组学的差异,探询差异存在的基因表达基础.方法:应用基因表达谱方法来检测上述两型患者CD4+淋巴细胞基因表达情况.结果:RF因子阳性与阴性患者之间有55条基因表达差异有统计学意义.结论:RF因子阳性与阴性RA患者之间存在差异表达基因,这些差异基因多与免疫应答相关.
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新基因NOR1对肝癌细胞系HepG2蛋白质表达谱的影响
目的:研究NOR1基因对肝癌细胞系HepG2蛋白质表达谱的影响.方法:将pcDNA3.1(+)/ NOR1的表达质粒经脂质体导入HepG2 细胞,Northern blot筛选出阳性克隆,通过双向电泳分离过表达NOR1的HepG2细胞内蛋白质,筛选出差异表达的蛋白质点,并进行质谱分析鉴定.结果:鉴定出6种表达上调的蛋白质点,包括锌指蛋白、肿瘤坏死因子受体、酪氨酸蛋白磷酸化受体等,这些蛋白质涉及基因转录、信号转导等肿瘤发生相关事件.结论:NOR1基因可能通过上调这些蛋白参与多种途径影响肝癌的发生发展.
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肝硬化患者外周血IP-10及其mRNA表达与血清转氨酶水平关系
目的:探讨肝硬化患者外周血IP-10、IP-10 mRNA的表达及其与转氨酶水平的关系.方法:筛选典型HBV感染后肝硬化患者,以ELISA法检测患者血清IP-10水平;Real-time PCR检测IP-10 mRNA含量,以lg cDNA/lg GAPDH代表其mRNA水平.结果:肝硬化患者血清IP-10及PBMC中IP-10 mRNA水平分别为(299.3±77.2) ng/L、0.7479±0.1495,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01);ALT、AST升高组外周血IP-10及其mRNA升高,与转氨酶正常组相比差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01).升高组中 IP-10 与ALT、AST及ALT/AST比值存在相关(r=0.6284,0.7162,0.6970,P<0.01).结论:肝硬化患者外周血IP-10及其mRNA表达增高,与肝细胞损伤程度密切相关,在介导肝炎后肝硬化进展中起重要作用.
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血液透析患者的自我护理及健康教育指导
维持性血液透析患者常因家庭自护不当引起透析意外.如患者因情绪激动加上疲劳引起脑血管意外, 因便秘时用力排便引起脑出血死亡, 因透析后忘记放松止血的绷带引起瘘闭, 因不注意控制饮食, 体重增加过多引起急性左心衰竭等[1].
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在大剂量5-氟尿嘧啶治愈荷瘤小鼠过程中外周血细胞的变化与肿瘤消退之间的相关性分析
目的:观察在单一剂量5-氟尿嘧啶(5-FU)治愈荷瘤小鼠过程中外周血细胞数量的变化与肿瘤结节缩小之间的关系,为进一步研究化疗治愈肿瘤的作用机制奠定基础.方法:利用单一剂量5-FU治愈荷瘤野生型C57BL/6小鼠模型,荷瘤小鼠腹腔内分别注入25、75、135 mg/kg的5-FU,等量生理盐水对照,确定5-FU治愈肿瘤的量效关系.然后,再取6只荷瘤小鼠,分别在75 mg/kg 5-FU治疗前3 d、治疗后第1、4、7、11、15、28天内眦静脉取血,进行血常规检测,分析外周血白细胞、血红蛋白和血小板的变化与荷瘤小鼠肿瘤结节缩小之间的相关性.结果:75、135 mg/kg的5-FU均可使荷瘤小鼠的肿瘤结节在治疗后1周内逐渐缩小、直至消退,因此5-FU治愈荷瘤小鼠的低有效量为75 mg/kg.75 mg/kg 5-FU治疗后第1天外周血白细胞降为(5.0±1.1)×109/L,并持续到化疗后第4天,与治疗前(9.5±1.58)×109/L比较差异有统计学意义(P<0.01);5-FU治疗后第7 ～15天外周血白细胞的数量升至化疗前水平,随后逐渐下降,在治疗后第28天降至(5.9±1.96)×109/L,低于化疗前水平(P<0.01).Hb含量在5-FU治疗后第1天也出现降低,由化疗前的(133±7) g/L降为(112±9) g/L,差异有统计学意义(P<0.01),随后Hb含量持续在低水平,治疗后15 d 逐渐恢复至化疗前水平.75 mg/kg的5-FU对荷瘤小鼠血小板的抑制作用不明显,反而在治疗后第1、11天出现2次血小板一过性增高(P<0.01).结论:75 mg/kg 5-FU可引起外周血白细胞数和血红蛋白浓度的降低,但对血小板的抑制作用不明显.5-FU发挥抗肿瘤作用使荷瘤小鼠的肿瘤结节缩小与化疗后外周血白细胞和Hb的降低无关,而与化疗后第1天血小板计数的增加有关.
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抗HBsAg人源抗体Fab片段原核表达的优化
目的:优化抗HBsAg人源抗体片段hFabHB1在大肠杆菌中功能性表达的条件.方法:通过测定宿主菌培养物A600值观察10 g/L的葡萄糖对宿主菌生长的影响;比较诱导前是否更换培养液的2种不同条件hFabHB1的表达产量;比较在37℃和25℃ 2种诱导温度下功能性hFabHB1分子的表达量以及Fd和轻链表达的平衡性.大量表达的功能性hFabHB1分子经亲和层析纯化后,用ELISA鉴定其生物活性.结果:在培养液中加入10 g/L的葡萄糖可有效抑制重组蛋白的本底表达,增加宿主菌的生长速度;在加入IPTG诱导前更换培养液可明显提高hFabHB1的表达产量;25℃的诱导温度比37℃能表达更多的功能性Fab分子,并且Fd和轻链表达量也更趋于平衡.经亲和层析纯化的hFabHB1分子可与HBsAg特异性结合.结论:实验结果为在原核系统中大量表达该抗体片段提供了技术储备.
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抗人DcR3单克隆抗体的研制及其鉴定
目的:制备抗人DcR3单克隆抗体(mAb),并鉴定其特异性.方法:纯化的His-DcR3融合蛋白免疫小鼠,应用淋巴细胞杂交瘤技术制备抗人DcR3 mAb并进行纯化,纯化后的抗体经Western blot和ELISA方法鉴定其特异性、Ig亚型和效价.结果:获得5株稳定分泌抗DcR3 mAb的杂交瘤细胞,均属IgG1亚型,其腹水抗体效价为1×10-5 ～1×10-7,Western blot显示5株细胞分泌的mAb均可识别DcR3蛋白,其中1株(1B1)可与SW480细胞成分反应.结论:成功建立稳定分泌抗人DcR3 mAb的杂交瘤细胞株,其分泌的抗体特异性强、效价高,为研究DcR3在组织中的表达、分布及研制ELISA试剂盒奠定基础.
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人β防御素4在大肠杆菌中的融合表达及其多克隆抗体的制备和鉴定
目的:构建人β防御素4(human β defensin 4,HBD4)基因的原核融合表达载体PGEX-4T-2/mHBD4,诱导GST-HBD4融合蛋白在大肠杆菌中表达,并制备其多克隆抗体.方法:从重组克隆载体PMD18-T/HBD4中扩增HBD4成熟肽编码基因,并克隆入PGEX-4T-2中,在IPTG诱导下,表达GST-HBD4融合蛋白.以表达的融合蛋白GST-HBD4作为免疫原免疫家兔制备抗GST-HBD4的抗血清,抗体效价及特异性分别用ELISA和Western blot法鉴定.结果:在大肠杆菌中成功表达Mr约为32 000的融合蛋白GST-HBD4.ELISA法检测抗血清的效价可达到1:128 000,Western blot分析抗血清可与原核表达的融合蛋白GST-HBD4特异结合.结论:在大肠杆菌中成功表达了GST-HBD4融合蛋白,并制备了GST-HBD4的抗血清,为进一步研究HBD4蛋白的结构和功能奠定了基础.
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小鼠Foxp3抗血清的制备及应用
目的:制备高效价的特异性小鼠Foxp3抗血清,并初步应用于正常小鼠组织的Foxp3表达的鉴定.方法:构建重组质粒pGEX-6p-2/Foxp3,并转化至E.coli BL21(DE3)中进行大量诱导表达,用纯化的重组融合蛋白免疫新西兰兔,制备抗血清.以制备的抗血清为一抗,Western blot检测小鼠组织的Foxp3蛋白的表达.结果:SDS-PAGE及Western blot鉴定,诱导表达及纯化的重组融合蛋白能被抗GST单克隆抗体(mAb)识别,在Mr 45 000附近有特异条带,与预期融合蛋白大小一致,获得的抗血清效价在1:12 800以上,该抗血清能特异性识别NIH3T3细胞中表达的Foxp3蛋白.Western blot鉴定结果显示在脾脏、胸腺、淋巴结中Foxp3蛋白有较高表达,胃也有少量的表达,而骨骼肌、脂肪组织未见表达.结论:制备了高效价的特异性小鼠Foxp3抗血清,并可用于正常小鼠组织的Foxp3蛋白的表达鉴定,为进一步研究Foxp3奠定了实验基础.
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血管内皮生长因子(VEGF)单克隆抗体的制备及鉴定
目的:制备血管内皮生长因子(VEGF)单克隆抗体(mAb),并对其特性进行鉴定.方法:以重组His-Trx-VEGF1-165蛋白为抗原,通过免疫、融合、克隆和筛选等方法制备VEGF mAb,制备小鼠腹水并测定其效价、染色体数目及免疫球蛋白亚类,用Western blot方法分析其特异性.结果:成功筛选出能稳定分泌的VEGF mAb杂交瘤细胞株4E4-H5,制备腹水的ELISA效价为1:106;染色体数目为105条;抗体分型为IgG1亚型,κ轻链;Western blot证实所获得的mAb可与VEGF全长蛋白发生特异性反应,但是与融合蛋白的标签蛋白His-Trx不发生反应.结论:制备的杂交瘤细胞株能稳定分泌高滴度和高特异性的VEGF mAb,为建立能够用于肝癌诊断的血清VEGF检测技术提供了参考.
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抗人转铁蛋白受体单克隆抗体体外抗瘤效应研究
目的:探讨抗人转铁蛋白受体(TfR)单克隆抗体(mAb)体外抗瘤效应.方法:采用CFSE染色、PI-Annexin Ⅴ染色和PI染色,通过流式细胞术分析抗人TfR mAb对高表达的人肝癌细胞系HepG2和人乳腺癌细胞系MCF-7增殖、凋亡和周期的影响;通过MTT法检测抗人TfR mAb联合化疗药物对HepG2和MCF-7细胞增殖的抑制作用.结果:抗人TfR mAb能抑制HepG2和MCF-7细胞的增殖,并诱导其凋亡和S期阻滞;与化疗药物联用可增强其对肿瘤细胞增殖的抑制作用.结论:抗人TfR mAb具有良好的体外抗瘤效应.
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NKT细胞研究进展
NKT细胞(CD1d-dependent natural killer-like T cells)作为一类新型的免疫调节细胞, 其主要特征为T细胞受体(TCR)基因表达的恒定性、 CD1d的限制性以及细胞因子产生的迅速、高水平性.NKT细胞既能增强免疫反应又能抑制免疫反应, 从而在抗肿瘤、抗感染、抑制自身免疫性疾病及移植耐受中发挥重要的作用.现就近年来有关NKT细胞的研究进展综述如下.
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肿瘤干细胞的自我更新机制
多种肿瘤均起源于已恶性转化的单个细胞, 这种转化是由于基因突变的累积所致.肿瘤干细胞(cancer stem cells, CSC)是肿瘤的起始细胞这一观点已被广泛接受, 它既可诱导肿瘤的发生, 也可用于防治肿瘤.有多种人肿瘤的CSC已被分离鉴定, 如白血病以及一些实体瘤如乳腺癌、黑色素瘤、肺癌和脑肿瘤等.CSC与正常干细胞具有一些相同的特点, 但CSC并非完全起源于正常干细胞, 也可能来源于相应组织的定向祖细胞或间充质干细胞(mesenchymal stem cells, MSC), 甚至是干细胞与体细胞的融合细胞.
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瘦素在哮喘发病中作用的研究进展
哮喘的发病机制极为复杂, 许多机制目前尚不很清楚.近年研究发现, 脂肪细胞具有免疫功能, 其与T淋巴细胞、巨噬细胞的功能明显重叠, 脂肪细胞不仅参与炎性细胞因子的网络调节, 而且可分泌许多促炎因子, 瘦素(leptin)则是由脂肪细胞分泌的一种蛋白质, 其受体在肺组织中有广泛表达, 具有促炎和免疫调控作用.
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siRNA设计研究进展及在线设计
研究基因功能的方法之一是减少或消除其在细胞中的表达.RNA干扰 (RNA interference, RNAi) 技术可以研究一个单独基因的作用, 其效应因子为小干扰RNA(small interfering RNAs, siRNA)分子[1].
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光动力免疫疗法在肿瘤治疗中的研究进展
光动力疗法(photodynamic therapy,PDT)是近年来颇受各国学者重视的一种癌症新疗法.这种疗法是利用某些染料类光敏物质在癌组织中积聚的浓度高于周围的正常组织, 在激光等照射下可产生对细胞有破坏作用的单线态氧(singlet oxygen)及自由基的特性, 从而干扰肿瘤细胞的生长并导致死亡.
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CCL20在胸腺CD4+CD25+T细胞发育过程中的作用及其意义
目的:研究趋化因子CCL20对小鼠胸腺CD4+CD25+双阳性T细胞发育的影响,为天然调节性T细胞调控的研究提供基础数据.方法:采用14.5 d龄胚鼠胸腺进行体外培养,以流式细胞术(FCM)检测不同时间点胸腺CD4+CD25+细胞的变化,同时计数每个胸腺小叶的细胞数变化.结果:体外胸腺培养的第1 ～6天胸腺细胞比例,细胞数量趋势变化与胸腺体内发育的第14.5、15、16、17、18、19天CD4+CD25+双阳性T细胞的比例,细胞数量的趋势变化相似;在胸腺体外培养的第1 ～6天,CD4+CD25+T细胞占CD4+T细胞的比例分别为58.29%、12.14%、6.08%、17.78%、9.06%、4.04%,占CD25+T细胞的比例分别为3.75%、10.81%、17.20%、51.93%、61.64%、80.06%,这一发育趋势与体内结果具有一致性.在4 mg/L的CCL20干预下,胸腺体外培养的第3、6天CD4+CD25+胸腺细胞分别从3.24±0.18、3.96±0.24下降至1.27±0.11、1.76±0.22(P<0.001).结论:体外培养的CD4+CD25+双阳性胸腺细胞数量和比例变化与体内发育变化趋势一致,CCL20明显下调胸腺CD4+CD25+的表达,这将为天然调节性T细胞的调控研究提供有效的参考依据.
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人类基因XAPC7真核表达载体的构建及其在SMMC-7721细胞中的表达
目的:构建pcDNA3.1(-)/XAPC7真核表达载体并检测其在人肝癌细胞系SMMC-7721中的表达.方法:采用PCR法从pET28b/XAPC7重组质粒中克隆得到XAPC7 cDNA全长序列,将之与pMD18-T载体连接、测序后将该片段亚克隆到真核表达载体pcDNA3.1(-)中.构建好的pcDNA3.1(-)/XAPC7真核表达质粒经酶切鉴定后,采用脂质体法将该重组质粒转染人肝癌细胞系SMMC-7721,经G418筛选,得到阳性克隆细胞株,再应用半定量RT-PCR技术检测转染前后该细胞株XAPC7基因的mRNA表达水平.结果:pcDNA3.1(-)/XAPC7经酶切鉴定及DNA测序证实,目的基因XAPC7的序列完全正确,真核表达载体构建成功;经RT-PCR检测,重组质粒转染株的XAPC7基因mRNA表达水平高于对照组,证实XAPC7基因已经稳定转染到SMMC-7721细胞中并得到表达.结论:成功地建立了人基因XAPC7的稳定转染细胞株,为进一步研究XAPC7的功能奠定了实验基础.
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促甲状腺素化学发光免疫定量检测试剂盒的研制
目的:研制人血清中促甲状腺素(TSH)的化学发光免疫检测试剂盒.方法:采用辣根过氧化物酶标记的抗TSHβ亚单位特异性单克隆抗体(mAb),与固相包被的抗TSHα亚单位的另一mAb配对,以鲁米诺作为底物,采用两步法建立了双位点夹心法人血清TSH的化学发光免疫定量分析法.结果:该方法灵敏度为0.0788 mIU/L,批内CV平均为4.7%,批间CV平均为8.4%,平均回收率为93.05%.该检测与LH、FSH和HCG无交叉反应.部分实验样品的测试结果显示该试剂与国外同类试剂(雅培architect i2000)的测定结果明显相关(r＝0.984).结论:该方法具有较高的灵敏度、重复性和准确度,与其他同类产品相比简便、快捷、成本低,适于临床检测和科研应用.
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低分子量透明质酸增强HAV抗原诱导的小鼠体液免疫应答的研究
目的:研究内源性危险信号分子低分子量透明质酸作为天然佐剂对HAV抗原诱导小鼠体液免疫应答的影响.方法:将ICR小鼠分成9组,分别设生理盐水对照组、HAV抗原组、HAV抗原+铝佐剂组、HAV抗原+低分子量透明质酸50 μg组、HAV抗原+低分子量透明质酸100 μg、HAV抗原+低分子量透明质酸200 μg、HAV抗原+低分子量透明质酸300 μg、HAV抗原+低分子量透明质酸500 μg、HAV抗原+低分子量透明质酸1 mg组,皮下免疫小鼠.分别在4、8、12 、16周用ELISA法检测小鼠血清抗HAV IgG水平.结果:(1)空白对照组在4、8、12 和16周未见抗HAV IgG产生;各实验组抗HAV IgG水平在8周时达到高;12周和16周时各免疫组的抗HAV IgG水平逐渐下降,尤以铝佐剂组下降明显;(2)与HAV抗原组相比,低分子量透明质酸各免疫组小鼠血清抗HAV IgG水平明显升高(P<0.05);与铝佐剂组相比,低分子量透明质酸免疫组明显增强特异性抗HAV IgG水平(P<0.05或P>0.05);(3)低分子量透明质酸安全无毒,无过敏反应.结论:低分子量透明质酸能够明显增强灭活HAV抗原的体液免疫应答,具有强的免疫佐剂作用.其免疫佐剂效应优于铝佐剂.
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可溶性Jagged1/Fc对DC-T细胞共培养中细胞因子表达的影响
目的:研究可溶性Jagged1/Fc对DC-T细胞共培养体系中TGF-β1、IL-10、IL-4、IL-2、IFN-γ及TNF-α表达水平的影响.方法:应用IL-4和GM-CSF诱导培养小鼠骨髓细胞,流式细胞术检测髓系树突状细胞(DC)分化标志CD11c;将等量的淋巴细胞与之共培养,ELISA检测共培养上清TGF-β1的含量,Luminex100检测IL-10、IL-4、IL-2、IFN-γ和TNF-α的含量.结果:可溶性Jagged1/Fc处理组TGF-β1和IL-10的水平与DAPT对照组之间无统计学意义(P>0.05),而IL-4、IL-2、IFN-γ和TNF-α的水平升高(P<0.05).结论:Jagged1/Fc能促进DC-T细胞相互作用导致IL-4、IL-2、IFN-γ和TNF-α的水平上调.
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牛IgG2Fc受体(boFcγ2R)胞外区基因原核表达载体的构建及其表达
目的:构建牛Fcγ2R胞外区基因的原核表达载体,并在E.coli BL21(DE3)中表达.方法:提取健康成年牛的白细胞总RNA,经RT-PCR扩增牛Fcγ2R胞外区基因片段,并将其克隆到载体pGEM-T Easy,经限制性内切酶EcoR I和 Not I双酶切鉴定及序列测定后,再将其亚克隆入原核表达载体pET28a中,构建重组质粒pET-2R,转化E.coli BL21(DE3)经IPTG诱导表达组氨酸融合蛋白.结果:获得682 bp的编码牛Fcγ2R胞外区基因片段.以构建的重组质粒pET-2R转化E.coli BL21(DE3)后,经IPTG诱导,表达出相对分子质量(Mr)约为30 000的重组蛋白.SDS-PAGE分析显示,表达的蛋白主要以不溶性包涵体的形式存在于E.coli BL21(DE3)的胞质中,Western blot检测表明该蛋白能和牛IgG2结合.结论:成功地构建了原核表达载体pET-2R,并表达出重组蛋白.为研究牛IgG和受体的相互作用机制及其介导的免疫反应打下了基础.
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生物医学论文中统计结果的表达及解释
统计学是生物医学研究所必需的重要手段,生物医学研究的实验设计、资料收集、数据处理分析以及结论都离不开统计学应用.生物医学研究论文主要由摘要、引言、材料与方法、结果和讨论5个部分组成,各个部分都涉及统计结果的表达和解释,统计学是专业结论成立与否的重要依据.统计学应用不当不仅影响论文的科学性,还有可能得出错误的专业结论.
| 年 | 期数 |
| 2018 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2017 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2016 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2015 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2014 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2013 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2012 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2011 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2010 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2009 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2008 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2007 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2006 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2005 | 01 02 03 04 05 06 z1 |
| 2004 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2003 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2002 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2001 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2000 | 01 02 03 04 05 06 |
| 1999 | 01 02 |
| 1995 | 01 02 03 |
| 1994 | 01 02 |
| 1993 | 01 02 03 04 |
| 1992 | 01 02 03 04 |
| 1991 | 01 02 03 04 |
| 1990 | 01 02 |
| 1989 | 01 02 03 04 |
