细胞与分子免疫学杂志
Chinese Journal of Cellular and Molecular Immunology 세포여분자면역학잡지
- 主管单位： 中国免疫学会；第四军医大学
- 主办单位： 陕西省免疫学会,中国免疫学会
- 影响因子： 0.81
- 审稿时间： 1-3个月
- 国际刊号： 1007-8738
- 国内刊号： 61-1304/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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迁移和侵袭抑制蛋白(MIIP)荧光素酶报告基因稳定共表达HCT116MIIP-Luc结肠癌细胞系的建立
目的 建立迁移和侵袭抑制蛋白(MIIP)荧光素酶报告基因稳定过表达的结肠癌HCT116细胞系,为MIIP基因的在体功能研究提供细胞模型.方法 将MIIP基因插入慢病毒载体pLEX-MCS-HA中获得重组慢病毒载体pLEX-MCS-HA-MIIP.利用该重组载体pLEX-MCS-HA-MIIP及包装载体VSVG、△8.9,共转染HEK293T细胞,包装表达MIIP的慢病毒,将其感染HCT116细胞后,采用适宜浓度的嘌呤霉素筛选,建立MIIP稳定过表达的HCT116细胞.利用表达荧光素酶报告基因的慢病毒进行二次感染,建立MIIP和荧光素酶报告基因稳定共表达的HCT116 MIIP-Luc细胞和仅表达荧光素酶报告基因的HCT116Luc细胞.利用实时荧光定量PCR检测MIIP的mRNA水平,Westem blot法检测MIIP蛋白水平,小动物活体成像技术观察HCT116MIIP-Luc细胞和HCT116Luc细胞的荧光强弱.结果 成功建立了MIIP荧光素酶报告基因稳定共表达的HCT116MIIP-Luc细胞和仅表达荧光素酶报告基因的HCT116Luc细胞,在HCT116MIIP-Luc细胞中实现了MIIP过表达,生物发光成像结果显示HCT116MIIP-Luc细胞和HCT116Luc细胞均可产生较强的荧光.结论 分别建立了可传代的MIIP过表达及荧光素酶报告基因稳定共表达的结肠癌HCT116细胞株.
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敲低肝癌细胞STAT3抑制IFN1诱导的HepG2肝癌细胞增殖和迁移
目的 筛选并制备信号转导子与转录激活子3短发夹RNA(STAT3 shRNA)慢病毒,感染HepG2肝癌细胞抑制其STAT3表达,观察对1型干扰素(IFN1)诱导的肝癌细胞增殖和迁移的影响及机制.方法 设计并合成4段人STAT3基因的干扰序列(STAT3 shRNA 1～STAT3 shRNA 4)以及对照序列(Ctrl shRNA),与pLKO.1-sp6-pgk-GFP连接构建慢病毒表达载体,随后与骨架质粒psPAX2、pMD2.G共转染HEK293T细胞制备慢病毒并感染HepG2细胞.Western blot法检测STAT3的蛋白水平,筛选有效序列.敲低STAT3水平后,CCK-8法检测HepG2细胞的增殖,TranswellTM迁移和划痕实验检测HepG2细胞的迁移.同时观察2000 U/mL重组人IFNα2b诱导的肝癌细胞增殖、迁移能力的变化,Western blot法检测IFN相关STAT1信号的磷酸化水平.结果 筛选对STAT3敲低效果显著的STAT3 shRNA1和STAT3 shRNA2,敲低STAT3水平后,肝癌细胞增殖和迁移降低.2000 U/mL IFNα2b对细胞的增殖抑制作用更显著,迁移细胞的数量显著下降.敲低STAT3水平后,肝癌细胞STAT1的磷酸化水平升高,在IFNα2b处理后STAT1磷酸化水平进一步升高.结论 敲低肝癌细胞STAT3通过上调STAT1信号通路活化,抑制细胞的迁移、增殖,恢复IFN在肝癌细胞中的应答.
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多重间接免疫荧光技术的建立及其在肝癌样本多种抗原检测中的应用
目的 建立一种适合在肝癌组织同一冰冻切片上同时检测多种蛋白的多重间接免疫荧光染色法.方法 用间接免疫荧光法联合激光扫描共聚焦显微镜技术对肝癌组织第一组4种蛋白进行染色和图像采集;用同源种属IgG Fab抗体封闭;联合化学试剂(β巯基乙醇/十二烷基苯磺酸钠/盐酸胍/氢硼酸钠)清除法洗脱染料和抗体;再次对第二组4种蛋白进行染色和成像;用软件叠加两轮图像染色结果.结果 激光光谱分离技术可以实现多达8种蛋白的共染结果;IgG Fab抗体可以封闭非特异性染色;联合化学合剂清除第一轮抗体后,可在同一切片中进行第二轮染色.结论 成功建立了在同一肿瘤组织标本同时检测多重标志物的方法.
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程氏蠲痹汤加减方降低佐剂性关节炎大鼠外周血T细胞cAMP水平和CD4+/CD8+T细胞比值
目的 探讨程氏蠲痹汤加减方(CJBD)对佐剂性关节炎(AA)大鼠T淋巴细胞中的环腺苷酸(cAMP)水平和CD4+/CD8+T细胞比值的影响.方法 将成年雄性SD大鼠分为正常对照组、AA组、CJBD组和雷公藤多苷片(TGT)组.用吹风冷水和Freund完全佐剂制备大鼠风寒湿痹AA模型,对照组给予生理盐水灌胃,其他组分别给予对应药品,持续7d.各组大鼠经眼眶取血,分离外周血单个核细胞(PBMC),利用免疫磁珠分选技术分选T淋巴细胞,应用cAMP检测试剂盒检测各组T淋巴细胞的cAMP水平,用流式细胞术检测各组大鼠外周血T细胞中的CD4+和CD8+T细胞数,计算CD4+/CD8+T细胞比值.结果 与正常对照组比较,CJBD组大鼠T淋巴细胞的cAMP表达水平显著降低,TGT组的cAMP含量与正常对照组无显著性差异;CJBD组的CD4 +/CD8+T细胞比值显著降低.结论 CJBD可降低AA大鼠T淋巴细胞cAMP的水平和CD4+/CD8+T细胞比值.
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不同铝佐剂明显增强布鲁菌外膜蛋白31(Omp31)的免疫接种效果
目的 探讨磷酸铝(AP)和氢氧化铝(AH)佐剂对布鲁菌外膜蛋白31(Omp31)诱导产生体液、细胞免疫反应以及免疫保护作用的影响.方法 制备AP佐剂以及AH佐剂,并与纯化的布鲁菌Omp31进行混合吸附,检测吸附率;将AP、AH吸附完成的Omp31蛋白分别于0、2、4周腹腔注射免疫BLAB/c小鼠,同时设立未吸附佐剂的Omp31蛋白免疫组与PBS免疫组作为对照.分别于0、2、4、6周ELISA检测小鼠血清IgG、IgG1、IgG2a水平以及生殖道分泌物分泌型IgA (sIgA)水平;于第6周取小鼠脾细胞体外培养,Omp31刺激细胞48 h后,ELISA检测培养细胞上清中γ干扰素(IFN-γ)、白细胞介素10(IL-10)水平,CCK-8法检测小鼠淋巴细胞增殖情况;小鼠于第6周用布鲁菌强毒株进行攻击,并分别于攻击后1周、2周检测小鼠脾脏组织菌体含量.结果 AP、AH佐剂对于不同浓度Omp31吸附率分别可达到70％与85％以上;ELISA结果显示AP组与AH组诱导产生的血清IgG、IgG1、IgG2a以及生殖道sIgA水平均在末次免疫2周后到峰值,其中AH组高于AP组,且均显著高于对照组;CCK-8实验结果显示AH组诱导的淋巴细胞增殖显著高于AP组,且均高于对照组,AH组脾细胞上清中的IFN-γ水平显著高于AP组,而IL-10水平无显著差异;强毒株16M攻击后2周,AH组小鼠脾脏菌体载量显著低于AP组.结论 AP佐剂以及AH佐剂均能有效增强布鲁菌Omp31的免疫原性及其抗感染保护作用,且AH佐剂效果好于AP佐剂.
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秦皮乙素增强小鼠腹腔巨噬细胞的趋化和吞噬及一氧化氮生成
目的 观察秦皮乙素(esculetin)对脂多糖(LPS)诱导的小鼠腹腔巨噬细胞趋化、吞噬及一氧化氮(NO)释放功能的影响.方法 用淀粉肉汤液加秦皮乙素注射小鼠腹腔,以台盼蓝鉴别巨噬细胞并计数判定秦皮乙素对巨噬细胞趋化作用的影响;用流式细胞仪检测秦皮乙素对LPS诱导的巨噬细胞吞噬肠出血性大肠杆菌(EHEC):0157能力的调节作用;用Griess试剂检测秦皮乙素和LPS作用于巨噬细胞后对其NO生成量的影响.结果 秦皮乙素能显著增强淀粉肉汤液诱导的巨噬细胞趋化能力,对LPS诱导的巨噬细胞吞噬EHEC:0157发挥明显的正向调节作用,也能使LPS诱导的巨噬细胞NO生成量显著提高,并呈显著的剂量依赖性.结论 秦皮乙素增强LPS诱导的小鼠腹腔巨噬细胞趋化、吞噬和NO生成量.
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人胎盘间充质干细胞移植降低急性肺损伤小鼠肺组织炎症因子水平
目的 探讨人胎盘间充质干细胞(hPMSC)对脂多糖(LPS)诱导的急性肺损伤(ALI)小鼠肺部炎症因子表达的影响.方法 选用6周龄健康C57BL/6雄性小鼠,随机分为对照组、ALI模型组和MSC治疗组,每组8只.ALI模型组经气管滴入LPS,MSC治疗组经气管滴入LPS,并于12 h后尾静脉注射hPMSC,对照组给予相应剂量的生理盐水.流式细胞术鉴定hPMSC,24 h后处死小鼠,HE染色检测hPMSC注射前后肺组织病变情况、计算肺组织湿干质量比(W/D)、髓过氧化物酶(MPO)试剂盒检测肺组织MPO活性、ELISA检测肺泡灌洗液(BALF)中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1(IL-1)、IL-6水平.结果 hPMSC表面高表达CD105、CD90、CD73,不表达CD45、CD34和CD14.与对照组比较,ALI模型组肺组织病理损伤严重,肺组织W/D比值增加、肺组织MPO活性增高、BALF中TNF-α、IL-1、IL-6含量均显著升高.与ALI模型组比较,MSC治疗组肺组织病理损伤减轻,肺组织W/D比值减少、BALF中TNF-α、IL-1和IL-6含量降低.结论 hPMSC处理降低肺组织炎症因子水平,减轻LPS诱导的ALI.
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miR-182通过靶向抑制腺瘤性息肉病基因(APC)促进宫颈癌细胞增殖
目的 探讨microRNA-182(miR-182)在官颈癌细胞增殖中的作用及其机制.方法 使用脂质体介导的瞬时转染法增加或降低宫颈癌细胞系HeLa和SiHa细胞中miR-182水平,利用CCK-8法和平板克隆形成实验观察miR-182对宫颈癌细胞增殖能力的影响,使用生物信息学预测、实时定量PCR和双荧光素酶报告基因等实验明确miR-182对腺瘤性息肉病基因(APC)的转录后基因表达调控的作用以及对Wnt下游经典信号分子c-Myc和细胞周期蛋白D1(cyclin D1)水平的影响.结果 过表达miR-182明显促进宫颈癌细胞的增殖,抑制miR-182的表达则显著抑制肿瘤细胞的增殖;过表达miR-182抑制官颈癌细胞中APC的表达,调控miR-182的表达水平影响肿瘤细胞中经典Wnt信号通路下游的表达.结论 miR-182通过抑制APC的表达激活经典Wnt信号通路的活性,提高官颈癌细胞增殖能力.
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β拉帕醌联合PI3K/mTOR抑制剂NVP-BEZ235抑制BGC-823细胞增殖和迁移
目的 研究β拉帕醌(β-1apachone)与磷脂酰肌醇3激酶/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(PI3K/mTOR)抑制剂NVP-BEZ235联合用药对人胃癌BGC-823细胞增殖与迁移的影响及机制.方法 将BGC-823细胞分为空白对照组、1μmol/Lβ-lapachone处理组、50 nmol/L NVP-BEZ235处理组及1μmol/L β-lapachone联合50 nmol/L NVP-BEZ235处理组.采用MTT法和平板克隆形成实验检测BGC-823细胞的增殖能力;Western blot法检测细胞增殖相关蛋白磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)、磷酸化核因子κB(p-NF-κB)、磷酸化的细胞外信号调节激酶(p-ERK)及细胞周期蛋白D1(cyclin D1)的蛋白水平;划痕实验及TranswellTM迁移实验检测细胞迁移能力;Western blot法检测上皮-间质转化(EMT)相关标志物上皮钙黏素(E-cadherin)、波形蛋白(vimentin)、锌指转录因子Snail及β联蛋白(β3-catenin)的蛋白水平.结果 与β-lapachone处理组或NVP-BEZ235处理组相比,β-lapachone联合NVP-BEZ235处理组能更显著地抑制细胞的增殖和克隆形成能力,p-AKT、p-NF-κB、p-ERK及cyclin D1的蛋白表达下调明显;在联合处理组对细胞迁移的抑制更明显,EMT相关标志物E-cadherin表达上调,vimentin、Snail及β-catenin表达下调明显.结论 β-lapachone联合NVP-BEZ235可有效抑制BGC-823胃癌细胞增殖,可能与p-AKT、p-NF-κB、p-ERK和cyclin D1表达降低有关;并通过调控EMT进程,抑制BGC-823细胞的迁移.
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侧脑室注射miR-7通过EGFR/STAT3途径抑制大鼠脑出血后脑损伤
目的 观察微小RNA-7(miR-7)对大鼠脑出血后脑损伤的影响,并探讨其分子机制.方法 选取75只SD大鼠,以Ⅶ型胶原酶注入苍白球构建脑出血模型,随机分为对照组、miR-7激动剂(miR-7 agomir)组、miR-7激动剂对照(agomir control)组、miR-7拮抗剂(miR-7 antagomir)组和miR-7拮抗剂对照(antagomir control)组,每组15只.造模后第2天通过侧脑室分别注射10 μL的生理盐水、miR-7 agomir、agomir control、miR-7 antagomir、antagomir control,造模后第7天进行神经功能评分,然后处死动物,取出脑组织,HE染色观察脑组织病理改变,干湿重法测定脑组织含水量,荧光实时定量PCR检测血肿周围脑组织中miR-7、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和表皮生长因子受体(EGFR)表达,Western blot法分析血肿周围脑组织中GFAP、EGFR、信号转导子和转录激活子3 (STAT3)、磷酸化STAT3(p-STAT3)水平.生物信息学预测miR-7与EGFR的靶向结合情况,构建野生型荧光素酶报告基因载体及相应的突变载体,与miR-7模拟物(mimic)共转染REK293T细胞,检测荧光素酶活性.结果 与对照组相比,miR-7 agomir明显增加血肿周围脑组织miR-7水平,减轻脑组织病理损害,减少神经功能评分和脑组织含水量,并降低血肿周围脑组织GFAP、EGFR表达水平及p-STAT3/STAT3比值;miR-7 antagomir的作用则相反.相应阴性对照物对上述指标无影响.生物信息学分析发现EGFR的3'-非翻译区存在miR-7结合位点,而且miR-7 mimic明显降低野生型EGFR荧光素酶活性,但对突变型无影响.结论 miR-7通过抑制EGFR/STAT3信号通路拮抗星形胶质细胞活化,从而减轻大鼠脑出血后脑损伤.
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163例Rh血型系统以外不规则抗体的检测及其临床意义
目的 探讨Rh血型系统以外不规则抗体的特异性分布及其临床意义.方法 采用生理盐水法、微胶凝柱法及经典抗人球蛋白法对患者血标本进行不规则抗体筛选试验及特异性鉴定,然后根据与谱细胞反应格局再确定抗体的特异性,并采用定型血清检测患者红细胞上相应抗原为阴性,确定特异性后再进行免疫球蛋白分类及抗体效价测定.结果 在163例Rh血型系统以外不规则抗体中,男59例(36.2％),女104例(63.8％).MNSs血型系统67例(41.1％),Lewis血型系统67例(41.1％),Kidd血型系统15例(9.2％),Duffy血型系统11例(6.7％),P血型系统3例(1.8％).免疫球蛋白分类:IgM型120例(73.6％),IgG型23例(14.1％),IgM+ IgG型20例(12.3％).凝集强度1+w～3+,抗体效价1∶1～ 1∶32.结论 不规则抗体既可影响输血相容性检测结果,又能引起溶血性输血反应和新生儿溶血病.对其进行检测有助于预防输血不良反应和减少新生儿溶血病的发生率.
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生物钟昼夜节律调节基因(CLOCK)在肝癌中高表达且与预后不良相关
目的 明确生物钟昼夜节律调节基因(CLOCK)在肝细胞肝癌(HCC)中的表达及对细胞生长的作用.方法 采用免疫组织化学染色法检测CLOCK在158例HCC组织及对应癌旁组织中的表达,利用HCC公共数据(共356例)验证CLOCK在HCC组织中的表达变化.单因素统计分析CLOCK表达与HCC患者临床病理特征间的关系,并且采用生存分析法比较CLOCK表达水平高低对HCC患者生存的影响.敲低肝癌HepG2细胞中CLOCK水平,采用MTS法检测CLOCK对细胞生长的影响.结果 CLOCK在HCC组织高表达,而在356例HCC公共数据中,癌组织中CLOCK表达同样显著上调.按照CLOCK的表达水平,将158例HCC患者分为低表达组和高表达组,单因素分析结果显示,CLOCK在HCC中的表达与肿瘤直径、TNM分期、门脉侵袭有关.CLOCK低表达组HCC患者的总生存时间和无复发生存时间均显著长于高表达组患者.在肝癌HepG2细胞中,敲低肝癌细胞CLOCK后细胞增殖能力显著降低.结论 CLOCK在HCC中呈高表达趋势,与HCC的恶性程度相关,其表达上调提示HCC患者预后不良,敲低CLOCK显著抑制肝癌细胞生长.
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抗RecQ解旋酶单克隆抗体的制备、鉴定及应用
目的 制备抗RecQ解旋酶单克隆抗体(mAb),鉴定其生物学特性并开展其对肿瘤细胞中RecQ解旋酶的检测.方法 以纯化鉴定后的重组大肠杆菌RecQ解旋酶免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备抗RecQ解旋酶mAb.用秋水仙素阻断法对杂交瘤细胞进行染色体核型分析,用间接ELISA检测mAb的免疫球蛋白(Ig)亚型与效价,用Western blot法和荧光偏振技术鉴定mAb的生物学特性,使用间接免疫荧光技术检测mAb与MDA-MB-231乳腺癌细胞中BLM、RecQ4和RecQ5的作用.使用免疫组织化学染色法分析该mAb与K562肿瘤细胞及其干细胞中RecQ解旋酶的结合.结果 获得能稳定分泌抗RecQ解旋酶mAb的杂交瘤细胞株6H5,染色体数目在94 ～ 104,抗体亚型为IgG1型,腹水效价为1×l0-7.该mAb能特异性结合大肠杆菌RecQ解旋酶,抑制其与DNA的结合,并能识别BLM、RecQ4和RecQ5解旋酶,还可敏锐检测K562肿瘤细胞与肿瘤干细胞中RecQ解旋酶的表达.结论 成功制备获得效价高、特异性强的抗RecQ解旋酶mAb.
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多药耐药相关蛋白基因多态性与类风湿性关节炎关系的研究进展
类风湿性关节炎(RA)是一种慢性多关节对称性受累,以手小关节为主,伴多系统受累的全身性免疫系统疾病,发病率与致残率高,目前临床治疗主要以缓解病情抗风湿药(DMARD)控制病情进展为主,延缓关节的破坏.长期应用DMARD过程中发现其疗效逐渐下降,即产生耐药,然而DMARD耐药机制研究甚少.药物疗效和毒副作用的个体差异主要是由遗传因素决定的.我们总结了多药耐药相关蛋白基因多态性与RA传统药物治疗的相关性,分析了不同的基因型患者对药物的疗效及毒副作用,为个体化用药提供依据,从而实现精准医疗,RA的个体化用药.
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T细胞衰老与慢性肝炎病毒感染相关研究进展
机体年龄的增长和病毒感染都会引起免疫衰老,主要表现在T淋巴细胞数量、细胞亚群数量、细胞膜表面分子及功能发生变化,导致T细胞免疫功能下降和异常.T淋巴细胞衰老的主要原因是端粒长度缩短或者端粒酶功能受损而导致.而影响端粒长度和端粒酶功能的是活性氧的产生以及细胞应激通路引起的DNA损伤.当乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒感染机体后,机体的CD4+T淋巴细胞和CD8+T淋巴细胞功能会受到影响,表达衰老相关蛋白.我们总结了引起T细胞衰老的原因,T细胞衰老后特征和相关的信号通路,以及T细胞衰老在慢性肝炎感染免疫失调中的作用机制.
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肠道菌群调控机体免疫功能的研究进展
人体肠道作为机体大的免疫器官,产生全身近80％的抗体,所以肠道免疫是抵御病原的一道重要防线.肠道菌群在与宿主长期的共同进化中形成了互利共生的复杂关系,其数量、相对丰度、定植时间的早晚等多种因素均能破坏肠道菌群的相对平衡,进而对免疫系统,尤其是免疫细胞和相关炎症细胞因子造成不同程度的刺激.近年肠道菌群在免疫相关疾病的发病机制和治疗的研究中都有许多新见解,我们主要总结了肠道菌群对机体免疫功能影响的相关研究进展,旨在为寻找疾病的治疗靶点提供一些新思路.
| 年 | 期数 |
| 2018 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2017 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2016 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2015 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2014 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2013 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2012 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2011 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2010 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2009 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2008 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2007 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2006 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2005 | 01 02 03 04 05 06 z1 |
| 2004 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2003 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2002 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2001 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2000 | 01 02 03 04 05 06 |
| 1999 | 01 02 |
| 1995 | 01 02 03 |
| 1994 | 01 02 |
| 1993 | 01 02 03 04 |
| 1992 | 01 02 03 04 |
| 1991 | 01 02 03 04 |
| 1990 | 01 02 |
| 1989 | 01 02 03 04 |
