细胞与分子免疫学杂志
Chinese Journal of Cellular and Molecular Immunology 세포여분자면역학잡지
- 主管单位： 中国免疫学会；第四军医大学
- 主办单位： 陕西省免疫学会,中国免疫学会
- 影响因子： 0.81
- 审稿时间： 1-3个月
- 国际刊号： 1007-8738
- 国内刊号： 61-1304/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
-
多肽类结核杆菌抗原激活的γδ T细胞表达抗原提呈细胞表型和功能
目的:观察用多肽类结核杆菌耐热抗原(Mtb-HAg)激活的人外周血γδ T细胞是否具有抗原提呈细胞的表型和抗原提呈作用.方法:外周血单个核细胞(PBMC)经贴壁法获取单核细胞, 加GM-CSF, IL-4和LPS培养诱导为成熟DC.PBMC用Mtb-HAg优势扩增γδT细胞后用流式分选纯化γδ T(Vδ2+)细胞.PBMC经尼龙毛柱法获得纯化T细胞, 用CFSE标记后单独加Mtb分泌性抗原(Mtb-SAg), 或加单核细胞和Mtb-SAg共同培养, 或与经Mtb-SAg预处理的成熟DC或活化γδT细胞共同培养.第11天时用流式细胞术检测CD4+T细胞的增殖.Mtb-HAg活化的γδ T细胞与FITC标记的Mtb-SAg孵育不同时间后用流式细胞术和激光共聚焦显微镜检测摄入情况.结果:Mtb-HAg活化的γδ T细胞CD80, CD86和MHC-Ⅱ类分子的表达显著增加.Mtb-SAg预处理活化的γδ T细胞诱导初始T 细胞增殖数和CD4+T细胞增殖指数的活性与成熟DC相似.Mtb-HAg活化的γδ T细胞能摄入FITC标记的Mtb-SAg.结论:用多肽类 Mtb-HAg激活的γδ T细胞具有抗原提呈细胞的表型, 并具有摄入和提呈可溶性抗原给初始T淋巴细胞的能力.
-
IL-18对HK-2细胞E-钙黏蛋白表达的作用及其可能的胞内信号途径
目的:探讨白细胞介素-18(IL-18)是否通过核因子-κB(NF-κB)细胞内信号转导途径诱导近端肾小管上皮细胞转分化.方法:实验分单纯IL-18刺激组和SN50预孵育组, 单纯IL-18 刺激组采用终浓度分别为0、 1、 10、 100 μg/L的IL-18处理人肾小管上皮细胞株(HK-2细胞)72 h, SN50预孵育组在此基础上预先应用终浓度为100 mg/L的NF-κB特异性抑制剂 SN50预处理细胞0.5 h.然后应用免疫细胞化学法检测HK-2细胞E-cadherin的表达百分数;采用RT-PCR法检测HK-2细胞E-cadherin mRNA的表达.结果:NF-κB特异性抑制剂SN50可拮抗IL-18对HK-2细胞E-cadherin mRNA和蛋白表达的抑制作用.结论:IL-18可通过核因子-κB(NF-κB)细胞内信号转导途径诱导近端肾小管上皮细胞转分化.
-
超抗原SEB 活化的NKT 细胞亚群形态和分化途径的研究
目的:以NKT细胞形态和分化途径为焦点, 研究超抗原SEB活化的NKT 细胞亚群的特征.方法:C57BL/J小鼠脾细胞分别经SEB或者ConA诱导, 收集体外扩增10 d 和5 d的淋巴细胞以及获取正常黏附性巨噬细胞.用荧光抗体染色, 流式细胞仪测定淋巴细胞和大淋巴细胞群表面CD69的表达、 NKT细胞亚群百分数和不同NKT 细胞亚群的分化途径.倒置显微镜400倍下比较大淋巴细胞的形态.结果:SEB活化的淋巴细胞和大淋巴细胞表面CD69分子表达由正常值的0.11%分别提高到55.00%和68.95%.大细胞群中CD8+ 和TCRVB8+NKT 细胞亚群的百分数由原始的0.36%和0.81%分别提高到30.29%和31.48%.这些细胞位于流式细胞图的上部, 是大体积细胞群.显微镜下显示SEB活化的大淋巴细胞体积不仅大于ConA活化的T淋巴细胞, 而且比正常巨噬细胞大5倍以上, 是非黏附性细胞.胞内质粒松散、胞质与核之比＞1.SEB活化的CD8+ 和TCRVβ8+NKT细胞亚群均由T细胞直接分化而来.结论:SEB活化10 d的NKT细胞亚群主要是CD8+ NK1.1+和TCRVβ8+ NK1.1+的NKT细胞.这些细胞是大体积淋巴细胞, 应属于T细胞的亚群.
-
克隆的BKCa通道介导AngⅡ诱导的HEK293细胞增殖
目的:探讨BKCa通道在AngⅡ诱导细胞增殖过程中的调控作用.方法:以脂质体转染法将人源性BKCa通道α亚基(hSloα)转染到HEK293细胞中(HEK293-hSloα), 用MTT法测定AngⅡ诱导细胞增殖的量效曲线, 用免疫细胞化学方法、流式细胞术分别观察AngⅡ、 IBTX及AngⅡ+IBTX对HEK293-hSloα细胞增殖细胞核抗原(PCNA)表达和细胞周期的影响.结果:AngⅡ可剂量依赖性诱导HEK293-hSloα细胞增殖, AngⅡ促进HEK293-hSloα细胞PCNA表达, 并使S期细胞比率增加.但此作用能被BKCa通道特异性抑制剂IbTX所阻断.结论:BKCa通道可介导调节AngⅡ诱导的HEK293-hSloα细胞增殖过程.
-
IL-12调节蛋白酶激活受体在肥大细胞的表达
目的:探讨IL-12对肥大细胞蛋白酶激活受体(PARs)表达的影响.方法:不同浓度IL-12刺激肥大细胞后, 在不同时间点, 用实时定量逆转录聚合酶链式反应(q-RT-PCR)和流式细胞术(FCM), 在mRNA水平和蛋白水平检测PAR-1、 PAR-2、 PAR-3和PAR-4在肥大细胞P815表面和胞内的表达情况.结果:IL-12下调肥大细胞膜表面PAR-2蛋白的表达, 上调肥大细胞膜表面和胞质内PAR-4蛋白的表达, IL-12抗体的应用可阻断IL-12对肥大细胞PARs蛋白表达的影响;IL-12上调肥大细胞PAR-1、 3、 4 mRNA的表达, 下调PAR-2 mRNA的表达.结论:IL-12在过敏性炎症反应中的调节作用可能与IL-12调节肥大细胞PARs表达有关.
-
人endostatin、 K5及endostatin-K5重组腺病毒载体的构建及其表达
目的:人endostatin、 K5及endostatin-K5基因克隆, 重组腺病毒载体的构建及其表达产物体外活性检测.方法:采用PCR方法扩增基因, 通过酶切连接方法将3种基因片段克隆到腺病毒shuttle载体pAd5-CMV-H1H2-MCS-6His中;用磷酸钙沉淀法分别将经Pac I酶切的表达人endostatin、 K5及endostatin-K5的腺病毒shuttle载体与Pac I酶切的腺病毒骨架共转染HEK 293细胞;用CsCl密度梯度离心法纯化制备病毒;用重组腺病毒感染HeLa细胞并在不同时间点收获蛋白, Western blot检测24 h、 48 h和72 h的蛋白表达量;通过MTT方法检测蛋白对ECV-304生长抑制作用.结果:成功制备表达人endostatin、 K5及endostatin-K5重组腺病毒载体;Western blot可以检测到蛋白表达, 蛋白表达量随病毒感染HeLa细胞的时间延长而逐渐增高;由重组腺病毒所表达的3种蛋白对ECV304细胞均有明显的生长抑制作用.结论:由含有人endostatin、 K5及endostatin-K5基因的重组腺病毒载体所表达的蛋白对ECV-304生长具有明显的抑制作用.
-
雷公藤内酯醇对类风湿关节炎滑膜成纤维细胞IL-18及其受体表达的影响
目的:研究雷公藤内酯醇(TP)对佛波酯(PMA)刺激的关节滑膜成纤维细胞(RASF) 白细胞介素18(IL-18)及其受体(IL-18R)表达的影响, 并对其机制进行探讨.方法:RASF先用TP(0～100 μg/L) 预处理2 h, 再用PMA (50 μg/L)刺激.收集上清用 ELISA 法检测上清IL-18水平.利用人IL-18能特异诱导人髓系单核细胞KG-1产生IFN-γ的特性检测上清中IL-18生物学活性.收集处理的RASF, 用Western blot 和荧光定量RT-PCR检测IL-18和IL-18R的蛋白和mRNA表达.NF-κB的活性用类ELISA法检测. 结果:TP能有效抑制PMA刺激的RASF的IL-18生物学活性.TP能够抑制PMA刺激的RASF的IL-18和IL-18R的蛋白和mRNA表达.TP还抑制PMA刺激的RASF 的NF-κB 活性.TP对PMA刺激的RASF 的抑制效应呈剂量相关性.结论:TP能有效抑制PMA刺激的RASF 的IL-18和IL-18R的表达.这些结果说明了TP对RA治疗作用的机制.
-
恒河猴CD1d基因的克隆及其组织表达差异性分析
目的:克隆非人灵长类疾病动物模型-恒河猴的CD1d基因并检测其在不同组织中的表达差异情况.方法:提取恒河猴血液及各组织的RNA, 以反转录得到的cDNA为模板, 用特异性引物扩增CD1d;以管家基因GAPDH为内参, 用半定量RT-PCR的方法对CD1d的组织表达差异性进行分析.结果:成功扩增了恒河猴CD1d基因的编码区序列;首次用半定量RT-PCR的方法检测了CD1d mRNA在恒河猴部分组织中的表达情况, 发现其表达水平存在明显的组织差异性, 其中, 在肝脏、脾脏和心脏中的表达水平较高, 在血液、小肠和肺中次之, 在脑中表达少.结论:研究结果为今后表达恒河猴CD1d蛋白并制备其四聚体进而研究恒河猴NKT细胞在众多疾病中的作用奠定了基础;组织表达差异的研究结果提示其在相关疾病的发生发展过程中可能扮演着重要的角色, 具体作用还有待深入研究.
-
AFP启动子调控的小鼠IL-1β重组载体的构建及其在肝癌H22细胞中的表达
目的:构建小鼠甲胎蛋白(AFP)启动子调控的小鼠IL-1β(mIL-1β)重组真核表达载体pafpIRES2-EGFP-mIL-1β, 并检测其在真核细胞内的表达.方法:重叠延伸PCR技术(SOE-PCR)获得含小鼠AFP小启动子及巨细胞病毒(CMV)增强子区(ECMV)的嵌合基因, 将其克隆至pIRES2-EGFP载体, 构建肝癌细胞特异性表达载体pafpIRES2-EGFP.RT-PCR扩增小鼠IL-1β基因, 克隆至pafpIRES2-EGFP, 进行酶谱分析及DNA序列测定.利用jetPEI法将其分别转染H22细胞和YAC-1细胞, 倒置相差荧光显微镜下观察, RT-PCR分析mIL-1β表达水平的变化.结果:SOE-PCR方法获得长度为537 bp的AFP和ECMV嵌合基因, 克隆后经限制性酶切和DNA序列分析确认成功构建了小鼠肝癌细胞特异性表达载体pafpIRES2-EGFP.PCR扩增小鼠IL-1β基因后将其克隆至pafpIRES2-EGFP, 获得AFP启动子调控的小鼠IL-1β重组真核表达载体pafpIRES2-EGFP-mIL-1β, 细胞转染分析证实, 该载体能够在小鼠肝癌细胞中特异性高效表达, RT-PCR检测可见转染细胞中mIL-1β水平明显升高.结论:成功构建真核表达载体pafpIRES2-EGFP-mIL-1β, 该载体能够在小鼠肝癌细胞中特异性表达IL-1β.
-
肝型脂肪酸结合蛋白和脂肪酸合成酶在乳腺浸润性导管癌的表达变化及其意义
目的:探讨肝型脂肪酸结合蛋白(L-FABP)和脂肪酸合成酶(FAS)与乳腺浸润性导管癌发生发展的关系.方法:用半定量逆转录聚合酶链反应、免疫组织化学和Western blot等方法检测L-FABP、 FAS和血管内皮生长因子(VEGF)在86例乳腺浸润性导管癌中的表达变化.结果:L-FABP和FAS主要分布于浸润性导管癌的腺泡和导管上皮细胞, L-FABP的mRNA和蛋白质的表达量在Ⅲ级浸润性导管癌的较Ⅰ、Ⅱ级明显上调(P<0.05).相反, FAS的表达量在Ⅲ级浸润性导管癌的较Ⅰ、Ⅱ级明显下调, 两者的表达无明显相关性(P>0.05).但是, L-FABP的表达与VEGF呈明显相关性.结论:在Ⅲ级浸润性导管癌, 随着FAS表达下调, L-FABP和VEGF的表达上调.
-
强抗原决定簇hAFP542-550在真核细胞膜定位表达研究
目的:构建包含甲胎蛋白强抗原决定簇hAFP542-550、 EGFP 和GPI锚定蛋白GPC3三者组成的融合蛋白GPC3-hAFP542-550-EGFP表达质粒pGPC3-EGFP, 确定其定位表达在真核细胞膜上, 以强化靶细胞的免疫原性.方法:①采用RT-PCR方法从人胎盘组织总RNA中调取GPC3基因, 化学合成基因片段-KOZAK-GPCN+afp542-550-, 并从pEGFP-N1质粒中扩增EGFP基因, 三者嵌合构建融合蛋白的表达质粒pcDNA3.1(+)/GPCN+afp542-550-EGFP-GPCC(pGPC3-EGFP);②以Lipofectamine 2000转染质粒pGPC3-EGFP 入肝癌细胞株HepG2(GPC3+AFP+), 转染后24 h和48 h引物GPCN-F和EGFP-r RT-PCR及Western blot检测融合蛋白GPC3-hAFP542-550-EGFP表达;③对照质粒pEGFP-N1和pGPC3-EGFP转染HepG2, 荧光显微镜观察比较两种质粒EGFP蛋白表达的部位;pGPC3-EGFP转染人胚肾HEK293细胞(GPC3-AFP-), 提取细胞膜蛋白和可溶蛋白Western blot检测融合蛋白表达.结果:①成功构建pGPC3-EGFP质粒;②融合蛋白可在 HepG2中表达;③与pEGFP-N1不同, 融合蛋白主要在胞膜上出现荧光反应, 胞质内仅见散在零星荧光;转染后HEK293细胞的膜蛋白中检测到融合蛋白表达, 而可溶蛋白中未检出.结论:pGPC3-EGFP可以在真核细胞中表达, 表达的融合蛋白GPC3-hAFP542-550-EGFP仍然定位表达在细胞膜, 是一种新型GPI再锚定蛋白.
-
高容量血液滤过对重症腹腔感染术后MODS的治疗作用
目的:探讨高容量血液滤过(HVHF)在重症腹腔感染术后MODS患者治疗中的临床效果.方法:腹腔重症感染术后进行HVHF治疗的MODS患者(17例),观察治疗前后患者炎性介质(TNF-a、IL-6、IL-8)、氧合指数、APACHE-Ⅱ评分.结果:17例患者经HVHF首次治疗后APACHE-Ⅱ和TNF-a、IL-6、IL-8也有明显下降, 氧合指数改善, 差异均有统计学意义(P＜0.05).经多次治疗后, 终患者APACHE-Ⅱ评分明显下降(P＜0.05).结论: HVHF可以改善严重脓毒血症患者的呼吸功能及生命体征, 并能缓解病情.
-
脑梗死患者炎性细胞因子变化与神经功能缺损的关系
目的:探讨脑梗死患者血清中炎性细胞因子水平与病情严重程度的关系.方法:收集2006-01/2008-12脑梗死患者82例为研究组, 80例同期门诊体检的健康人为对照组, 检测其外周血清中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)和可溶性细胞间黏附分子1(sICAM-1)水平.结果:急性期、恢复期脑梗死患者血清IL-1β、 TNF-α及sICAM-1水平均较对照组显著增高(P ＜0.01或P＜0.05), 脑梗死组急性期较恢复期明显增高(P＜0.01);中度损伤组和重度损伤组患者血清IL-1β、 TNF-α及sICAM-1水平均较轻度损伤组显著增高(P＜0.01或P＜0.05), 重度损伤组患者TNF-α及sICAM-1水平较中度损伤组明显增高(P＜0.01);多元线性回归分析结果显示, IL-1β、 TNF-α及sICAM-1表达水平与脑梗死患者的神经功能缺损程度评分呈线性正相关, 标准回归系数依次为0.618、 0.613和0.606.结论:IL-1β、 TNF-α及sICAM-1互相作用参与了急性脑梗死的炎症反应和再灌流损伤.对它们的监测可为早期临床治疗及康复干预提供试验指标, 以便控制脑卒中的进展及复发.
-
低浓度HBsAg人群HBV DNA与HBV M定量结果的关系及评价
目的:比较高、低浓度HBsAg阳性人群乙型肝炎病毒核酸(HBV DNA)与乙型病毒肝炎标志物(HBV M)含量之间的差异, 揭示低浓度HBsAg人群HBV DNA与HBV M之间的特点.方法:对264例慢性HBV感染者的HBsAg浓度(高浓度HBsAg组、低浓度HBsAg组)及自然史(免疫耐受期、免疫清除期、非活动期)进行分组, 采用实时荧光聚合酶链反应(PCR)和微粒子酶免疫试验(MEIA)对147例低浓度HBsA组和117例高浓度HBsAg组的血清标本进行HBV DNA和HBV M的定量测定并进行比较.结果:低浓度HBsAg组免疫耐受期7例、免疫清除期4例血清标本HBV DNA、抗-HBs、 HBeAg、抗-HBe之间的差异存在统计学意义(t=2.531～9.181, P<0.01～0.05), 非活动期136例血清标本中有94.1%(128/136)HBV DNA处于105copies/L以下, 直接法PCR、浓缩法PCR对HBV DNA检出率分别为10.3%(14/136)、 10.3%(47/136), 且HBV DNA与HBV M各指标之间均不存在相关性(P>0.05);高浓度HBsAg组免疫耐受期25例HBV DNA与HBeAg、抗HBe存在相关性(r=0.744～0.772, tr=3.858～4.207, P<0.01), 免疫清除期46例和非活动期46例HBV DNA则仅与抗HBs存在负相关性(r=-0.693～-0.598, tr=-4.616～-3.936, P<0.01～0.05).结论:低浓度HBsAg人群具有特殊的血清学特点, 可能与机体免疫耐受及免疫系统个体化反应有关.
-
胃癌术后早期营养支持的初步研究
目的:探讨胃癌术后早期进食的优点和可行性.方法:69例胃癌手术患者随机分成两组, 实验组(n=33)术后早期进食, 对照组(n=36)术后常规营养支持, 观察术后的临床表现, 检测细胞及体液免疫指标.结果:实验组胃肠功能恢复较对照组快, 住院时间和费用都较对照组少, 细胞免疫指标优于对照组, 体液免疫指标两组无明显区别.结论:胃癌术后早期进食有利于加快患者术后恢复, 而不会增加并发症的机会.
-
SU11248干预白血病细胞HL-60对P27KIP1和cyclin G蛋白表达的影响
目的:探讨SU11248对人髓系白血病细胞株HL-60的效应及其对HL-60细胞表达P27KIP1和cyclin G蛋白改变的影响.方法:应用MTT法检测SU11248对HL-60细胞增殖能力的影响;采用Western blot检测SU11248干预HL-60细胞前后P27KIP1和cyclinG蛋白表达水平的变化及其相关性.结果:不同浓度(0.5、 1.0、 2.0、 4.0、 8.0 mg/L)SU11248作用HL-60细胞24 h、 48 h、 72 h、 96 h后, SU11248可抑制HL-60细胞增殖, 抑制作用呈现剂量和时间依赖性, 半数抑制浓度(IC50)约为2.0 mg/L.2.0 mg/L SU11248作用HL-60细胞72 h时抑制率达到高.2.0 mg/L SU11248作用HL-60细胞后cyclinG蛋白表达呈时间依赖性降低, 而P27KIP1蛋白表达呈时间依赖性升高.两蛋白各时间组的改变与对照组相比差异均有统计学意义(P<0.05).结论:SU11248具有抑制HL-60细胞增殖的生物效应, 在HL-60细胞及SU11248干预HL-60细胞过程中, P27KIP1 基因可能对cyclinG基因及细胞周期发挥负性调控作用.SU11248通过上P27KIP1、下调cyclin G而干扰细胞周期可能是其发挥抑制肿瘤细胞分裂的环节之一.
-
人脑胶质瘤组织中骨形成蛋白-2的表达及其临床病理学意义
目的:探讨骨形成蛋白-2(BMP-2)在人脑胶质瘤中的表达和临床意义.方法:随机选取脑胶质瘤患者88例, 采用SABC免疫组化方法和RT-PCR技术, 检测脑胶质瘤组织和正常脑组织中BMP-2蛋白及其mRNA的表达.并分析其与脑胶质瘤组织临床分级之间的关系.结果:BMP-2蛋白在脑胶质瘤组织中的阳性表达率为78.40% (69/88), 明显高于(P<0.01)其在正常脑组织中的阳性表达率[3% (6/20)].BMP-2蛋白与mRNA 在脑胶质瘤高级别组(Ⅲ～Ⅳ级) 中的表达均明显高于低级别组(Ⅰ～Ⅱ级), 说明随着肿瘤级别的升高BMP-2表达也增强.结论:BMP-2蛋白及其mRNA的异常表达可能与脑胶质瘤的恶性程度有关, 可以作为一个肿瘤标志物在临床中应用.
-
鼠抗人c-Kit单克隆抗体的制备及其特性鉴定
目的:鼠抗人c-Kit单克隆抗体(mAb)的研制及其生物学特性的鉴定.方法:利用PCR技术获得人c-Kit的胞外免疫球蛋白区编码序列, 并将其亚克隆至原核表达载体pQE30, 构建出重组表达质粒pQE30-hKitD4-5.测序鉴定正确后转化M15, 经IPTG37℃诱导4 h后, SDS-PAGE显示融合蛋白(表达产物)以包涵体形式存在.用镍柱对融合蛋白进行纯化, 将纯化的蛋白免疫BALB/c小鼠, 采用B淋巴细胞杂交瘤技术进行细胞融合, 经流式细胞术(FCM)分析和多次克隆化培养, 筛选出特异分泌鼠抗人c-Kit分子mAb的杂交瘤细胞株.采用Western blot、 Ig亚型快速定性试纸法、 FCM等对mAb的生物学特性进行鉴定.结果:成功表达及纯化了人c-Kit重组蛋白, 并获得1株持续、稳定分泌鼠抗人c-Kit mAb的杂交瘤细胞株, 命名为SRJ1.ELISA和Western blot、 FCM结果显示了该株mAb 能够识别Kasumi白血病细胞株表面表达的天然的c-Kit分子, 并与人正常外周血细胞无交叉反应.值得注意的是, Kasumi细胞含有一个不被SRJ1识别的亚群, 虽然其表达c-Kit(Ab81 mAb的结合正常).结论:成功构建了原核表达载体pQE30-Kit4-5, 并获得高纯度的人pQE30-Kit4-5重组蛋白;成功制备了1株特异性的鼠抗人c-Kit mAb杂交瘤.其所分泌的抗体能特异地识别人c-Kit分子, 并且可能成为区分细胞表面表达不同c-Kit分子的潜在检测工具.
-
口蹄疫病毒非结构蛋白3D单克隆抗体的制备及鉴定
目的:制备并鉴定口蹄疫病毒(FMDV)非结构蛋白3D的单克隆抗体(mAb).方法:以纯化的原核表达3D蛋白免疫BALB/c小鼠, 取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合, 杂交瘤细胞经间接ELISA法筛选, 有限稀释法克隆, 直至所克隆的细胞能够100%的分泌抗体, 用Western blot以及间接免疫荧光法对mAbs的特异性等进行鉴定.结果:免疫的BALB/c小鼠经过多次融合筛选, 共获得5株抗pET28a-3D的mAb, 其亚类鉴定3株为IgG1 , 2株为IgG2b, 初步判定所得5株mAb识别2个不同表位.Western blot显示这些mAbs与重组3D蛋白和FMDV O/China99感染的BHK-21细胞中的3D抗原均特异性结合, 免疫荧光结果显示这5株mAb能够特异结合FMDV感染细胞中的3D蛋白.结论:成功获得了能识别自然3D蛋白的特异性mAb , 为进一步研究3D蛋白的结构和功能以及诊断方法奠定基础.
-
CD80人-鼠嵌合抗体对B淋巴瘤细胞株Raji与Daudi的生长抑制及杀伤作用
目的:研究CD80人-鼠嵌合抗体(命名为ch-4E5)对天然高表达CD80分子的人恶性B淋巴瘤细胞株Raji与Daudi的生长抑制及杀伤作用.方法:采用免疫荧光及流式细胞术(FCM)分析ch-4E5对Raji及Daudi细胞膜型CD80分子的识别;将ch-4E5分别加入到Raji及Daudi中共培养, 终浓度为10 mg/L.在培养的第0、 4、 10、 16、 24及48 h, 采用FCM检测细胞表面Fas及FasL的表达;培养至72 h, MTT法检测细胞的增殖;以人外周血PBMC为效应细胞, Raji与Daudi为靶细胞, 效靶比为20∶ 1, 加入ch-4E5, 终浓度为10 mg/L.培养至24 h, MTT法分析ADCC效应.结果:ch-4E5与Raji及Daudi的阳性结合率分别为98.6%和96.4%.ch-4E5分别与Raji及Daudi共培养至4 h, Raji细胞表面FasL的表达开始上调, 16 h的阳性表达率为16.8%, 与人IgG1对照组1.5%比较明显升高(P<0.01);Fas的表达从10 h起逐渐增高, 24 h达高峰, 阳性表达率为15.6%, 与人IgG1对照组4.5%比较具有统计学意义(P<0.01).Daudi的FasL及Fas的变化趋势与Raji一致.ch-4E5分别与Raji及Daudi共培养至72 h, 细胞增殖的抑制率分别为34.60%和32.64%(P<0.01);ch-4E5介导PBMC对Raji及Daudi的杀伤率分别为55.61%及54.42%(P<0.01).结论:CD80人-鼠嵌合抗体能够通过其Fab段及Fc段发挥双重的抗肿瘤效应.
-
EV71病毒特异性单克隆抗体的筛选及鉴定
目的:筛选高亲和力和高中和活性的抗EV71病毒的单克隆抗体(mAb), 并对其特异性和抗原表位进行鉴定.方法:采用葡萄球菌A蛋白亲和层析法纯化mAb, 并进行抗体的中和效价、交叉反应性以及表位进行分析.结果:筛选出1株抗EV71病毒的mAb, 纯度大于95%, 抗体滴度达到10-7, 对EV71病毒具有广谱中和特性, 与CA16无交叉反应, 为VP1特异性, 并识别EV71的构象型表位.结论:筛选出1株具有高亲和力和中和活性的EV71病毒的mAb, 为研制EV71病毒感染性疾病的诊断试剂提供了重要工具, 并为研制治疗性mAb提供了条件.
-
免疫老化与T淋巴细胞功能性分子的改变
免疫老化(senescence)是机体代谢过程中的一个必然阶段, 免疫系统参与机体正常的老化过程, 是机体衰老的主要调节系统之一.随着年龄的增长, 免疫细胞发生增龄性改变.T淋巴细胞是机体重要的介导细胞免疫的效应性细胞, 其在免疫老化过程中, 诸多功能性分子如免疫突触形成所涉及的分子、 T细胞活化所需的协同刺激分子及凋亡相关分子等均发生增龄性改变, 从而导致机体正常的免疫应答功能下降或出现异常, 致使老年人易罹患肿瘤、感染及自身免疫性疾病等.
-
与HIV感染相关的宿主细胞蛋白
HIV是获得性免疫缺陷综合征(AIDS)的病原体, 它主要有1型和2型.大多数AIDS是因为感染HIV-1而引起的.HIV是有包膜的逆转录病毒, 以芽生方式从细胞获得病毒包膜[1].
-
PTA1/CD226亚家族的研究进展
免疫球蛋白超家族(IgSF)成员占细胞黏附分子(CAM)的一大部分, 通过识别细胞表面相应的配体或受体, 发挥多方面的免疫学功能.现就一组同源IgSF新成员, 包括血小板/T细胞活化抗原1(PTA1/DNAM-1/CD226)和CD96(Tactile)两个受体及其两个配体脊髓灰质炎病毒受体(PVR/CD155)和单纯疱疹病毒受体(nectin-2/CD112)的结构、相互作用、免疫学功能以及与临床的关系作一综述.
-
小鼠CXCR4基因启动子的克隆和报告基因载体构建
目的:克隆小鼠CXCR4基因启动子, 并建立CXCR4报告基因系统.方法:设计合成PCR引物, 从小鼠基因组DNA中扩增并克隆小鼠CXCR4基因的启动子区.序列测定确认后, 用克隆的启动子片段构建CXCR4荧光素酶报告基因载体pGL-CXCR4.转染细胞, 用双报告基因系统检测报告基因载体的活性.结果:成功扩增了小鼠CXCR4基因的启动子区.克隆入质粒载体后经DNA序列测定证实了其序列.通过转染细胞和荧光素酶分析, 证实所构建的报告基因可以反映CXCR4启动子的活性.结论:成功扩增、克隆了小鼠CXCR4基因启动子, 并成功建立起其报告基因系统, 为后续的研究奠定了基础.
-
TRBP及其截短体真核表达载体的构建与表达
目的:构建TRBP及其截短体真核表达载体, 并检测其在HeLa细胞中的表达.方法:设计引物扩增TRBP全长及其截短体TAB、 TAC、 TBC基因序列, 然后将各基因片段克隆入真核表达载体pFlag-CMV4.用脂质体法转染HeLa细胞, 经 Western blot方法检测目的基因在转染细胞中的表达.结果:经过酶切鉴定与测序证实, TRBP全长及其截短体TAB、 TBC、 TAC基因真核表达载体构建成功, 经Western blot可检测转染细胞中各基因的表达.结论:成功构建了TRBP全长基因及其截短体TAB、 TAC和TBC基因真核表达载体, 在转染细胞中可以检测到目的基因的表达.
-
大鼠海马脑区脑源性神经营养因子慢病毒注射与表达的检测
目的:建立成年大鼠海马脑区注射脑源性神经营养因子(BDNF)慢病毒表达载体的方法,并检测BDNF慢病毒载体体内表达目的基因的能力.方法:健康雄性SD大鼠随机分为假手术组(SH)、生理盐水组(NS)、GFP慢病毒注射组(GFP)和BDNF慢病毒注射组(BDNF),每组15只.所有实验大鼠在脑立体定位仪下定位海马组织.NS、GFP和BDNF组分别给予盐水(2μL)、GFP慢病毒(2μL)和BDNF慢病毒(2μL),SH组只实行手术操作.注射手术7d、14d和30d后,分别处死大鼠并进行在冰上取各组大鼠海马组织,分别提取海马总RNA和总蛋白质通过RT-PCR和Westernblot检测各组大鼠海马组织BDNFmRNA和蛋白表达水平的变化.同时通过原位杂交方法检测BDNF的表达水平和脑区分布.结果: BDNF慢病毒注射成年大鼠7d、14d和30d后,均可以成功检测到BDNF在mRNA和蛋白水平在海马脑区都有明显的表达,同假手术组相比具有显著性差异;原位杂交检测显示BDNF慢病毒注射成年大鼠海马脑区7d、14d和30d的BDNF表达水平和脑区分布均保持稳定.结论:成功地建立了BDNF慢病毒注射成年大鼠海马脑区的方法,并可在注射后不同时间段检测到BDNF高水平的表达和均匀的海马脑区分布,为进一步将其应用于神经系统损伤性疾病的治疗奠定了基础.
-
一种高效扩增人T细胞受体β链可变区基因的方法建立
目的:建立一种高效扩增人T细胞受体(TCR)β链可变区(Vβ)基因的方法.方法:根据TCR Vβ26个亚家族基因序列特点设计扩增Vβ基因的上游内引物34条、上游外引物37条, 并将内、外上游引物各分为8个简并组.在恒定区(C区)设计下游内、外和测序引物各1条以及扩增Cβ基因的上游引物1条.提取细胞RNA, 用PolyA介导反转录后, 采用巢式PCR扩增正常人CD8 T细胞TCR Vβ26个亚家族基因, 并用Jurkat T淋巴瘤细胞作为对照.用T-easy载体克隆RT-PCR 产物, 对克隆基因进行测序.结果:从正常人的CD8 T细胞中扩增到所有TCR Vβ亚家族基因, 克隆后测序与相应的参考序列同源.从Jurkat细胞扩增出TCR Vβ8基因, 经测序验证与文献报道一致, 且少可从10个细胞提取的RNA模板中扩增成功.结论:建立的巢式RT-PCR方法可以高效、广谱地扩增人TCR Vβ基因, 为进一步进行抗原特异性细胞毒T淋巴细胞的TCR克隆和功能研究打下了良好基础.
-
小鼠CXCR4基因的克隆和慢病毒介导的表达
目的:克隆小鼠CXCR4基因并建立其慢病毒表达系统.方法:设计合成PCR引物, 从小鼠骨髓有核细胞来源的cDNA中扩增并克隆小鼠CXCR4基因的编码区.构建CXCR4-IRES-GFP表达单元后通过转染细胞, 观察GFP的表达证实其表达效能.然后建立慢病毒表达载体, 包装慢病毒后感染培养的细胞, 用流式细胞术分析其在被感染的细胞中的表达.结果:成功扩增了小鼠CXCR4基因的编码区.克隆入质粒载体后经DNA序列测定证实了其序列.通过转染细胞和流式细胞术以及荧光显微镜观察证实了CXCR4-IRES-GFP的表达效能.成功构建了CXCR4慢病毒表达载体, 感染细胞后经流式细胞术分析, 证实被感染的细胞可以表达小鼠CXCR4.结论:成功扩增、克隆了小鼠CXCR4基因, 并成功建立起其慢病毒表达系统, 为后续的基础和应用研究奠定了基础.
-
小鼠sST2基因真核表达及其对LPS活化RAW264.7巨噬细胞的调节作用
目的:克隆并构建含小鼠sST2和人IgG Fc 融合基因的真核表达质粒, 初步探讨其表达产物sST2-Fc融合蛋白对LPS刺激小鼠巨噬细胞生物学活性的影响.方法:借助RT-PCR技术, 从小鼠脾脏总RNA中扩增全长sST2 cDNA, 构建sST2与hIgG Fc段融合基因的真核表达载体(psST2-Fc).应用脂质体将重组质粒psST2-Fc转染CHO细胞, 经G418筛选, 获得稳定表达sST2-Fc融合蛋白的CHO细胞株.细胞培养上清经蛋白A亲和层析纯化后, 采用Western blot进行鉴定, 应用FACS检测sST2-Fc与RAW264.7巨噬细胞表面相应受体结合情况;ELISA法检测sST2-Fc对LPS刺激RAW264.7巨噬细胞分泌TNF-α和IL-6的影响.结果:测序证实克隆和构建的小鼠sST2-Fc cDNA阅读框序列正确, Western blot 证实sST2-Fc融合蛋白的表达, sST2-Fc抑制LPS诱导巨噬细胞分泌的炎性细胞因子TNF-α和IL-6.结论:成功构建sST2-Fc融合基因并获得稳定表达, sST2-Fc通过与其特异性受体结合可抑制巨噬细胞介导的炎性反应.
-
诱导性多能干细胞的研究进展
诱导性多能干细胞(induced pluripotent stem cells, iPS)是通过基因转染技术(gene transfection)将某些转录因子导入动物或人的体细胞, 使体细胞直接重构成为胚胎干细胞(embryonic stem cell, ES)细胞样的多潜能细胞.iPS细胞不仅在细胞形态、生长特性、干细胞标志物表达等方面与ES细胞非常相似, 而且在DNA甲基化方式、基因表达谱、染色质状态、形成嵌合体动物等方面也与ES细胞几乎完全相同.
| 年 | 期数 |
| 2018 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2017 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2016 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2015 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2014 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2013 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2012 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2011 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2010 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2009 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2008 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2007 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2006 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2005 | 01 02 03 04 05 06 z1 |
| 2004 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2003 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2002 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2001 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2000 | 01 02 03 04 05 06 |
| 1999 | 01 02 |
| 1995 | 01 02 03 |
| 1994 | 01 02 |
| 1993 | 01 02 03 04 |
| 1992 | 01 02 03 04 |
| 1991 | 01 02 03 04 |
| 1990 | 01 02 |
| 1989 | 01 02 03 04 |
