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△Np73基因在食管癌中的表达及生物学意义
目的 探讨△Np73mRNA及其蛋白在食管癌组织中的表达与食管癌发生的关系.方法 采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)及流式细胞术(FCM)检测47例食管鳞状细胞癌组织及与其相对应的癌旁组织和正常食管组织中△Np73mRNA及其蛋白的表达水平.结果 △Np73mRNA及其蛋白在食管癌组织中的表达水平明显高于癌旁组织和正常食管组织(P＜0.01);且△Np73mRNA及其蛋白的表达水平与肿瘤的浸润深度呈负相关(P＜0.05).结论 △Np73基因的表达可能与食管癌的发生发展有关.
关键词： 食管癌 △Np73基因 RT-PCR 流式细胞术(FCM) -
流式细胞术和肿瘤标志物在妇科肿瘤早期诊断中的研究进展
目前,妇科肿瘤的发病率呈上升趋势,且出现年轻化趋势[1] .其中卵巢癌、宫颈癌、子宫内膜癌是常见的三大妇科恶性肿瘤,已成为严重威胁妇女生命的主要顽症,其主要原因是早期诊断困难及高复发率,特别是卵巢癌在妇科恶性肿瘤中的病死率高,其发病隐匿,约70%～80%的患者发现时已为晚期,5年存活率仅为20%～30%,而早期卵巢癌患者的生存率可达90%.因此,提高肿瘤的早期诊断水平、争取有利的治疗时机、对改善预后尤为重要.
关键词： 流式细胞术(FCM) 肿瘤标志物 妇科肿瘤 -
子宫内膜病变DNA含量和细胞增殖水平的研究
目的:探讨子宫内膜组织细胞DNA含量及细胞增殖水平与临床病理特征的关系.方法:应用流式细胞术(FCM)测定90例石蜡包埋的子宫内膜组织细胞DNA含量及细胞增殖水平.结果:正常子宫内膜对照组20例均为二倍体,22例子宫内膜增殖症患者异倍体率与对照组无明显差别(P＞0.05),但DNA指数(DI)、S期细胞百分率(SPF)与对照组相比明显增高,两者有显著性差别(P<0.05),48例子宫内膜癌其异倍体率达58.3%,高于正常及增殖症(P<0.05),DI及SPF亦明显高于其它两组(P<0.05).此外,高分化子宫内膜癌与低分化子宫内膜癌间异倍体率及DI值有极显著性差异(P<0.05).结论:DNA异倍体及高数值SPF与子宫内膜癌的恶性生物学行为有关.可作为评估肿瘤细胞的恶性潜能及预后判断的可靠指标.
关键词： 子宫内膜 DNA含量 S期 流式细胞术(FCM) -
ΔNp73基因蛋白在食管鳞癌中的表达及其临床意义
目的 应用流式细胞术(flow cytometry,FCM)检测食管鳞癌组织中ΔNp73蛋白的表达,以探讨它与食管鳞癌的临床病理特征的关系.方法 选取2005年1月至2006年12月在我院胸外科住院手术的食管癌患者47例,制备单细胞悬液,采用间接免疫荧光标记法用ΔNp73多克隆抗体对细胞进行染色,应用FACS-420型流式细胞仪进行分析.结果 食管癌组织中ΔNp73表达阳性率明显高于癌旁组织、正常组织(P均<0.01).ΔNp73蛋白表达与食管癌浸润深度相关(P＜0.05,P＜0.01),而与肿瘤大小、组织分化程度、有无淋巴结转移及TNM分期等因素无关(P均>0.05).结论 ΔNp73基因的表达变化可能与食管癌的发生发展有关.
关键词： 食管癌 ΔNp73蛋白 流式细胞术(FCM) -
乌头碱对KBV200细胞Pgp蛋白表达影响的研究
乌头碱是温阳散寒代表中药附子、乌头的主要成分之一[1].现代研究表明,乌头碱具有抑制肿瘤与抗肿瘤转移、缓解癌性疼痛、增强巨噬细胞的吞噬等作用[2～5].研究中发现,乌头碱能够增加长春新碱对KBv2f00细胞敏感性,推测机制与乌头碱能够抗耐药有关[6].KBv200细胞株具有Pgp蛋白高表达的生物学特征.为进一步证实乌头碱逆转肿瘤多药耐药效应,我们在体外细胞培养过程中,采用流式细胞仪检测了经乌头碱作用后的KBv200细胞Pgp蛋白表达.
关键词： 乌头碱 KB与KBv200 P-糖蛋白(Pgp) 流式细胞术(FCM) -
253例恶性肿瘤患者外周血T细胞亚群的检测及其临床意义分析
目的 检测分析恶性肿瘤患者的细胞免疫功能状况,并探讨其临床意义.方法 流式细胞技术比较分析253例恶性肿瘤患者及28例健康正常人的外周血T淋巴细胞亚群.结果 与正常人比较,恶性肿瘤患者外周血CD3+,CD3+CD4+细胞百分率降低,CD3+CD8+细胞百分率升高,CD3+CD4+/CD3+CD8+比值降低,统计学差异均显著(P<0.05),性别、年龄阶段不影响T细胞亚群水平的表达,差异无统计学意义(P>0.05).结论 恶性肿瘤患者细胞免疫功能紊乱,监测其T细胞亚群水平对评估患者的细胞免疫功能及疾病的诊断和预后判断具有积极的临床意义.
关键词： 恶性肿瘤 T淋巴细胞 流式细胞术(FCM) -
CD4单抗选择对于流式细胞术分析Th1/Th2极化的有效性评价
选择13B8.2和S3.5两株商品化的CD4单克隆抗体用于Th1/Th2极化的流式细胞术评价,分析PMA、Ionomycin和BFA单独或联合作用于外周血CD4抗原表达水平的变化,以确定Th1/Th2极化评价时有效的CD4设门单抗,并试图揭示CD4抗原降调的机制.结果表明,13B8.2可作为CD4的设门单抗. PMA和Ionomycin联合刺激会导致外周血CD4抗原的明显降低,而PMA单独刺激不能,且BFA与PMA和Iononmycin同时加入外周血中可部分抑制PMA和Ionomycin刺激引起的CD4抗原内吞和降解.
关键词： 流式细胞术(FCM) Th1/Th2极化 CD4抗原 -
人参皂甙Rb1对耐长春新碱的急性早幼粒白血病(HL60/VCR)细胞多药耐药逆转的实验研究
目的:研究中药人参皂甙Rb1在多药耐药(MDR)逆转中的作用.方法:培养细胞,将细胞分为对照组和实验组,阳性对照组给异搏定,阴性对照组不给药,实验组给人参皂甙Rb1.通过细胞毒试验、药敏试验、RT-PCR方法和流式细胞术了解中药人参皂甙Rb1的毒性、细胞对药物的敏感性及在细胞水平和分子水平对多药耐药的逆转作用.结果:Rb1 80μM时,细胞存活95.47%,100μM时存活81.43%,对照组96.9%,因此选择80μM为实验剂量.在药敏实验中,80μM人参皂甙Rb1组IC50约在0.49μg/ml,不加药组IC50约在1.3μg/ml,用药前细胞耐药倍数为335.8倍,用药后耐药倍数为126倍,人参皂甙Rb1的逆转倍数为2.65倍,小于其耐药倍数,为部分逆转.RT-PCR结果显示,对照组和给药组均有明显的扩增片段区带,流式结果显示,破膜前给药组细胞膜表面的Pgp含量明显低于对照组,而破膜后由于细胞内的Pgp释放出来,则二组的表达差异不大.结论:总之本文通过一定的检测技术,主要说明可以通过人参皂甙Rb1抑制Pgp的功能,从而提高肿瘤细胞对化疗药物的敏感性,这对于今后研究和发展肿瘤治疗来说都有着十分重要的意义.
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流式细胞术检测国人外周血6种细胞因子水平
目的检测国人血清中6种细胞因子水平可作为研究疾病状态下6种细胞因子变化的对照.方法以流式细胞术和CBA试剂盒同时分别检测6种细胞因子(IFN-γ、TNF-α、IL-10、IL-5、IL-4及IL-2)水平.结果70例正常人血清中6种细胞因子水平分别为IFN-γ(12.06±5.19pg/ml)、TNF-α(10.64±11.02pg/ml)、IL-10(3.69±1.16pg/ml)、IL-5(1.76±0.44pg/ml)、IL-4(2.42±0.53pg/ml)及IL-2(2.59±1.01pg/ml).不同性别与年龄中的6种细胞因子的水平差别均无显著性意义.结论以流式细胞术同时检测6种细胞因子具有快速、简便、准确的特点.70例正常人数据可以作为在研究国人疾病状态下6种细胞因子水平变化的参考.
关键词： 细胞因子 正常人血清 流式细胞术(FCM) -
肺炎支原体感染患儿免疫功能检测及分析
目的 检测肺炎支原体感染患儿T淋巴细胞亚群、NK细胞、B细胞、辅助性T淋巴细胞(Th1、Th2)、细胞因子和免疫球蛋白的表达情况,探讨其发病机制.方法 应用流式细胞术(FCM)检测50例支原体肺炎患儿组在急性期其外周血中的T淋巴细胞亚群、NK细胞和B细胞以及Th1、Th2细胞的细胞表达率,同时检测患儿的免疫球蛋白、γ干扰素(IFN-γ)和白介素4(IL-4)并与50例健康儿童对照组进行比较.结果 肺炎支原体患儿CD3+、CD4+、Th1细胞表达率和Th1/Th2比值以及免疫球蛋白IgG和IgA含量较健康对照组明显降低(均P ＜0.05);CD8+、CD04+/CD8+、Th2、B细胞、免疫球蛋白IgM、C3、C4和IFN-γ较对照组无显著性差异(均P ＞0.05)；NK细胞与IL-4较对照组明显增高(P＜0.05).结论 肺炎支原体患儿在急性期外周血中淋巴细胞亚群中的多种细胞以及免疫球蛋白和细胞因子有不同程度的明显异常变化,存在免疫功能失调,检测肺炎支原体患儿的免疫功能状况对疾病监测及预后有重要临床意义.
关键词： 支原体肺炎 T细胞亚群 流式细胞术(FCM) 细胞因子 免疫球蛋白 -
3种姜黄色素单体抑制人内皮细胞作用的实验研究
目的探讨姜黄素、脱甲氧基姜黄素和双脱甲氧基姜黄素等3种姜黄色素单体对人血管内皮细胞生长、增殖的抑制作用及其可能的作用机理.方法(1)采用噻唑兰还原实验(MTT)检测系列药物浓度和不同作用时间对两种血管内皮细胞增殖活性的影响;(2)采用流式细胞术(FCM)检测双脱甲氧基姜黄素作用24h后内皮细胞的增殖周期改变.结果(1)MTT实验表明.3种姜黄色素作用72h后对内皮细胞增殖抑制作用的IC50值分别为0.525μg/ml、0.399μg/ml和0.125μg/ml;在浓度为4μg/ml时,3种姜黄色素作用48h后均导致内皮细胞出现明显的增殖抑制(P＜0.05),作用72h时达高值;(2)FCM检测结果表明,浓度为4μg/ml时双脱甲氧基姜黄素可将内皮细胞阻止于S期(P＜0.05);浓度增至8μg/ml以上时不但可引起S期细胞阻滞(P＜0.01),同时又有明确的诱导凋亡作用.结论(1)3种姜黄色素均可明显抑制人内皮细胞的分裂与增殖;三者的生物学活性相差显著:双脱甲氧基姜黄素＞脱甲氧基姜黄素＞姜黄素(P＜0.05);(2)影响细胞增殖周期和诱导凋亡是姜黄色素抑制内皮细胞增殖的主要作用机理之一.
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"芪香"气雾剂对小鼠细胞免疫功能的影响
目的:观察中药配方"芪香"气雾剂对小鼠细胞免疫功能的影响,给临床用药提供新药.方法:将小鼠随机分成4组,灌胃给药7 d后,用流式细胞术检测"芪香"气雾剂对小鼠细胞免疫功能的影响,用酶联免疫吸附法检测"芪香"气雾剂对小鼠脾细胞诱生的IL-2细胞活性的影响.结果:"芪香"气雾剂能显著升高小鼠CD3+、CD4+T细胞的阳性细胞百分率(P＜0.05).而对于CD8+T细胞的阳性细胞百分率,药物组和药物+Cy组有降低趋势(P＜0.05)."芪香"气雾剂能促进白细胞介素-2(interleukin-2,IL-2)的生成作用(P＜0.05)结论:"芪香"气雾剂可能通过刺激Th细胞产生细胞因子来达到对病毒性疾病的防治.
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流式细胞术检测HIE后脑皮质细胞凋亡
目的:探讨脑皮质细胞凋亡在新生猪缺氧缺血性脑病(HIE)发生与发展.方法:应用流式细胞术(FCM)、DNA凝胶电泳对新生猪HIE脑皮质细胞凋亡进行定量分析.结果:缺氧缺血后72小时新生猪左额顶大脑皮质细胞凋亡率较对照组明显增加(n=15,12;main±s%=26.18±16.35,3.23±2.93;P＜0.0001);DNA凝胶电泳显示明显"DNA Ladder".结论:脑皮质细胞凋亡在患HIE新生动物的迟发性神经细胞损伤中占有重要地位.
关键词： 缺氧缺血性脑病(HIE) 细胞凋亡 流式细胞术(FCM) -
IL-12调节蛋白酶激活受体在肥大细胞的表达
目的:探讨IL-12对肥大细胞蛋白酶激活受体(PARs)表达的影响.方法:不同浓度IL-12刺激肥大细胞后, 在不同时间点, 用实时定量逆转录聚合酶链式反应(q-RT-PCR)和流式细胞术(FCM), 在mRNA水平和蛋白水平检测PAR-1、 PAR-2、 PAR-3和PAR-4在肥大细胞P815表面和胞内的表达情况.结果:IL-12下调肥大细胞膜表面PAR-2蛋白的表达, 上调肥大细胞膜表面和胞质内PAR-4蛋白的表达, IL-12抗体的应用可阻断IL-12对肥大细胞PARs蛋白表达的影响;IL-12上调肥大细胞PAR-1、 3、 4 mRNA的表达, 下调PAR-2 mRNA的表达.结论:IL-12在过敏性炎症反应中的调节作用可能与IL-12调节肥大细胞PARs表达有关.
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一种快速、简便的CRl检测法
目的:建立一种快速、简便、准确的C3bR的检测法.方法:采用流式细胞术,以单克隆抗体分子作探针,检测68例正常成人红细胞膜CD 3 5(C3bR)的表达量并与传统C3bR花环率比较.结果:FCM检测正常成人红细胞膜C3bR的表达量为16.8%±5.2%与花环率法16.3%±6.1%无显著性差异(P>0.05).结论:FCM检测红细胞膜C3bR的表达量不仅准确度高、特异性强,且操作简便、快速,易于向临床推广使用.
关键词： 流式细胞术(FCM) 红细胞膜C3bR -
应用流式细胞仪对176例急性白血病进行免疫表型分析
目的:研究急性白血病(AL)免疫分型特征及诊断价值.方法:选用三色荧光抗体直接标记AL患者骨髓,应用流式细胞术CD45/SSC设门,进行免疫分型.结果:176例AL患者免疫分型,其中未分化型1例,占0.7%;单纯型101例,占57.3%;变异型74例,占42.0%.变异型参照欧洲协作组EGIL积分标准分型,对伴有淋系抗原的急性髓细胞白血病(Ly+-AML)、伴有髓系抗原的急性淋巴细胞白血病(My+-ALL)、混合型白血病(MAL)可进行鉴别诊断.结论:应用免疫分型可以较好地分析每一例白血病,尤其对于抗原交叉表达者及MAL更有意义.
关键词： 流式细胞术(FCM) 急性白血病(AL) 免疫分型 -
记忆滤泡性辅助T细胞细胞与原因不明复发性流产的关联研究
目的 探讨原因不明复发性流产(unexplained recurrent spontaneous abortion,URSA)的发生与记忆滤泡性辅助T(memory Tfh)细胞表达异常是否存在关联.方法 收集15例染色体正常的URSA为流产组,并以15例正常人工流产患者为正常对照组.分离所有患者外周血单个核细胞及蜕膜组织免疫细胞,用流式细胞术(FCM)检测上述细胞中CD4+CXCR5+memory Tfh以及CD4+CXCR5+PD-1 +memory Tfh细胞水平.结果 流产组蜕膜局部CD4+CXCR5+memory Tfh以及CD4+CXCR5+PD-1 +memory Tfh细胞水平显著高于正常对照组(P＜0.05).流产组外周血CD4+CXCR5+memory Tfh以及CD4+CXCR5+PD-1 +memory Tfh细胞水平与正常对照组无明显差异(P＞0.05).结论 早孕妇女蜕膜局部memory Tfh细胞数量增多可能与URSA发生有关,母-胎界面的免疫异常可能导致URSA的发生.
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流式细胞术在外用避孕药精子功能评估中的应用
流式细胞术(flow cytometry,FCM)是一种单细胞快速定量分析技术,为精子功能研究提供了一种高通量、多参数的检测手段.FCM在外用避孕药对精子功能评估中的应用,主要包括精子质膜完整性、DNA完整性、顶体反应、线粒体功能、氧化应激和精子凋亡等方面.表明FCM是精子功能研究的有效工具,有助于阐明新型外用避孕药的药效和作用机制.
关键词： 流式细胞术(FCM) 外用避孕药 精子功能 评价 -
人体死后肝细胞DNA含量与死亡时间关系的研究
目的 研究人体死后肝脏细胞DNA含量变化与死亡时间的关系及影响因素.方法 选取46例已知死亡时间的人体肝脏,根据离体肝脏所处的环境温度分为12～19℃(A组)和20～27℃(B组)两组,每组23例.在死后24～72h内每隔4h穿刺取肝组织1次,制成细胞悬液,经RNA酶消化,PI染色后,用流式细胞仪测定被检测细胞中含不完整DNA的细胞数所占百分比,所得数据经Expo32 V1.2软件计算N值.结果 死后24～72h肝细胞N平均值,A组从10.91%增至49.72%,B组从16.22%增至69.63%.两组N平均值随死亡时间的延长均逐渐增高,与死亡时间有相关性,A组r值为:0.598,B组r值为0.77357.并且建立了不同环境温度对应的同归方程.结论 在不同环境温度下,死后24～72h内人体肝脏细胞DNA降解均随死亡时间的延长和环境温度的升高而逐渐加快,相关数据可望为死亡时间推断提供一定参考依据.
关键词： 法医病理学 死亡时间(PMI) DNA降解 肝细胞 流式细胞术(FCM)
