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全反式维甲酸诱导急性早幼粒细胞白血病细胞分化为树突状细胞的实验研究
全反式维甲酸(ATRA)诱导APL细胞分化为成熟树突状细胞(dendritic cell,DC),目前国内外鲜见报道.本研究探讨全反式维甲酸与经典细胞因子共同作用诱导急性早幼粒细胞白血病(APL)细胞分化为DC的可能性,为研制APL-DC疫苗提供新的方法.对初治APL患者骨髓单个核细胞及HL-60细胞株分别在完全培养液中培养,用经典细胞因子组合(GM-CSF、IL-4、TNF-α)共处理,ATRA只在实验组加用.观测细胞形态,检测DC免疫表型,测定上清液IL-12水平,观察MLR反应及CTL效应.结果表明:实验组所得细胞有较明显树突状突起,有APL遗传学特征,其CD1a、CD83、CD80、CD86、HLA-DR和CD1d表达及IL-12分泌水平明显增高,并具有明显的MLR反应及CTL效应,但在HL60-DC中,CD1a增加无统计学差异.结论:利用ATRA可以成功诱导APL细胞为成熟功能性DC,其介导的MLR及CTL效应明显.经ATRA组合诱导的树突状细胞CD1d表达明显增高,推测可能参与NKT细胞激活,具体机制需进一步研究.
关键词： 全反式维甲酸 急性早幼粒细胞白血病细胞 HL-60细胞 树突状细胞 CD1d -
NKT细胞及其在眼科中的研究进展
NKT细胞是T细胞中一类独立的细胞,它既表达T淋巴细胞的表面标志,又表达NK细胞的表面标志,因此具有不同于传统T淋巴细胞的特点.NKT细胞不仅与自身免疫系统疾病,肿瘤排斥反应及抗细菌感染等全身性疾病有关,而且在眼部免疫赦免的形成、角膜移植片存活等方面也起着重要作用.本文主要就NKT细胞及其在眼科的研究进展综述了有关资料,并对其研究进行了展望.
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自然杀伤T细胞配基的研究进展
自然杀伤T细胞(NKT)在抗感染、抗肿瘤及自身免疫病中起保护作用,NKT细胞配基对NKT细胞的激活起关键作用.近年来NKT细胞配基的分离、鉴定、结构与功能研究取得了较大进展,本文就已鉴定的内源性和外源性NKT细胞配基的结构及其生物学功能研究进展予以综述.
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小鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎模型中CD4+ T细胞表面CD1d分子对多发性硬化疾病进展的影响
目的 探讨CD4 +T细胞表面CD1d分子对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)小鼠模型疾病进展的影响.方法 建立C57BL/6小鼠的EAE模型,在疾病进展的不同时期分离小鼠脾细胞,用流式细胞术检测活化与非活化CD4 +T细胞表面的CD1d+细胞比例.结果 对照组(正常组和CFA组)、EAE组发病高峰期以及疾病恢复期相比较,对照组表达CD1d分子的CD4 +T细胞数量百分率为(8.98 ±0.36)%,EAE组高峰期及恢复期表达CD1d分子的CD4 +T细胞数量百分率分别为(2.14 ±0.15)%、(13.80 ±0.84)%,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 验证了EAE发病过程中表达CD1d分子的CD4 +T细胞数量的变化趋势,为进一步研究EAE模型病程进展中CD4+T细胞和NKT细胞之间的相互作用奠定基础.
关键词： 实验性自身免疫性脑脊髓炎 CD1d CD4+T细胞 -
自然杀伤T细胞在抗感染免疫中的作用研究进展
自然杀伤T细胞(NKT)是一类同时表达T细胞受体(TCR)αβ和NK细胞表面标志的T细胞亚群,能识别由抗原提呈细胞(APC)表面CD1d分子提呈的脂类抗原.NKT细胞经抗原刺激后能迅速分泌大量的细胞因子(如IFN-γ和IL-4),调节固有免疫和适应性免疫,还能直接杀伤靶细胞,具有效应细胞的功能,在机体抗感染、肿瘤和自身免疫病方面发挥重要作用.
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自然杀伤 T细胞抗感染作用的研究进展
自然杀伤T细胞（NKT细胞）是一类与自然杀伤细胞具有共同表面标记的T细胞，可识别由CD1d呈递的糖脂类抗原。活化后的NKT细胞通过分泌多种细胞因子和趋化因子，增强树突细胞（DC）、T细胞、B细胞等多种免疫细胞的功能，在非特异与特异性免疫之间起桥梁作用。近年来研究发现，NKT细胞不仅在抗细菌感染中发挥重要作用，在抗病毒及抗寄生虫感染中也发挥一定作用。
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自然杀伤T细胞抗胞内菌感染的研究进展
自然杀伤T细胞(NKT细胞)是免疫细胞中一类具有特定标记的T细胞亚群,能特异性识别南抗原呈递细胞表面CD1d分子所呈递的糖脂类抗原.活化后的NKT细胞能分泌多种细胞因子,参与机体的天然免疫和获得性免疫反应,还能直接杀伤靶细胞,具有效应细胞的功能.研究发现,NKT细胞在抗胞内菌感染中发挥着重要作用.
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NKT细胞在母胎界面免疫调节中的作用
NKT细胞(natural killer T cell)是一类新型的免疫调节细胞,该类细胞同时表达T细胞表面受体(TCR)和NK细胞的抗原NK1.1.NKT细胞上的TCR通过限制性识别由CD1d分子提呈的脂类抗原,进一步被激活后可分泌多种细胞因子,从而调节机体的免疫反应.近年来逐渐认识到NKT细胞可能参与了母胎界面的免疫调节.
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恒定自然杀伤T细胞在过敏性哮喘中的调节机制
恒定自然杀伤T (invariant nature killer T,iNKT ) 细胞是T淋巴细胞中独特的亚群,也是经典的自然杀伤T(NKT)细胞,既表达T细胞的表面标志,又表达自然杀伤(NK)细胞的表面标志CD161(NK1.1) 分子和NK细胞受体P1C.活化iNKT的经典抗原是糖脂类抗原α-半乳糖神经酰胺(α-galactosylceramide,α-GalCer),该抗原由作用类似于主要组织相容性复合物(MHC)Ⅰ类分子的CD1d提呈给iNKT并使之活化.
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恒定型自然杀伤T细胞在1型糖尿病的免疫调节作用
1型糖尿病(type 1 diabete mellitus,T1DM)可能是免疫系统自我平衡破坏所导致的疾病,被认为是针对胰岛β细胞的致病性T细胞所介导.恒定型自然杀伤T( invariant nature killer T,iNKT)细胞是一种独特的调节性T细胞,在免疫调节中发挥关键作用,对T1 DM有保护作用.在脾和胰岛中iNKT细胞通过与糖脂配体、相应细胞表面CD1d复合物结合后,iNKT细胞释放出大量IL-4和IL-10分子,这是一种与辅助性T淋巴细胞2(T-helper lymphocyte 2,Th2)有关的保护作用.同时,iNKT细胞能够与其他多种细胞,包括CD4+ CD25+调节性T细胞、树突状细胞、产生TGF-β的T细胞和部分B细胞协同作用,抑制糖尿病的发生发展.这些研究结果表明,iNKT对T1 DM有预防和缓解功能.
关键词： 型糖尿病 恒定型自然杀伤T细胞 CD1d -
小鼠CD1d1编码区基因的克隆与鉴定
目的:克隆小鼠CD1d1编码区基因.方法:提取小鼠小肠组织总RNA,用RT-PCR技术扩增小鼠CD1d1编码基因,PCR产物连接pGEM-T载体,转化大肠杆菌,用限制性酶切和DNA序列测定对阳性克隆进行鉴定.结果:扩增出一务与预期片段大小相符的特异DNA条带,限制性酶切应显示目的基因片段插入T载体,序列测定表明所获取的基因大小为1011bp.结论:成功克隆了小鼠CD1d1编码基因,为进一步重组蛋白及其抗体的制备奠定了基础.
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黄芩苷抑制沙眼衣原体宿主细胞MHCⅠ、CD1d下调的机制
目的:研究黄芩苷对沙眼衣原体体外生长的影响,并探究其对感染细胞MHC分子表达影响的可能机制.方法:用HeLa细胞培养沙眼衣原体Ct,选取不同的时间点及不同浓度的黄芩苷干预,免疫荧光检测包涵体数目及大小;Western blot检测空白组、对照组及不同黄芩苷浓度干预组CPAF、RFX5和USF-1蛋白表达水平;流式细胞术分别检测各组细胞表面MHCⅠ类分子(HeLa细胞)及CD1d分子(PURL原代细胞)表达情况.结果:黄芩苷明显抑制包涵体形成的数目及大小,降低活化的CPAF含量及抑制RFX5、USF-1的降解,抑制感染细胞表面MHCⅠ、CD1d表达下调.结论:黄芩苷能抑制沙眼衣原体体外生长,而CPAF很可能是黄芩苷抑制感染细胞表面MHC分子及CD1d分子下调的干预靶点.
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NKT细胞在自身免疫性疾病中的调节作用
NKT细胞是免疫细胞中的一类具有特定标志的亚群,既可以表达T细胞表面标志也可以表达NK细胞表面标志,识别由CD1d分子呈递的抗原,具有迅速分泌大量细胞因子的能力,能够调控一些免疫反应中辅助性T细胞的分化,在自身免疫性疾病中起重要的调节作用.
关键词： NKT细胞 CD1d 实验性自身免疫性脑脊髓炎 1型糖尿病 -
CD1D基因与B7-1基因共转染胰腺癌细胞及其抗癌作用的实验研究
目的 观察共转染小鼠B7-1和CD1D 基因对小鼠胰腺癌细胞的免疫应答.方法 将表达B7-1和CD1D 基因的逆转录病毒载体导入包装细胞系,然后转染入胰腺癌细胞.用PCR和Western方法鉴定细胞表达;用B7-1和CD1D 阳性的细胞在体内诱导抗肿瘤免疫反应.结果 B7-1和CD1D 阳性的细胞在同基因小鼠体内能诱导抗肿瘤免疫反应并抑制肿瘤生长.结论 B7-1基因和CD1D 基因共转染肿瘤细胞,能抑制肿瘤生长,可能为肿瘤的基因治疗开辟一条新途径.
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3-O-C12-HSL通过PPARγ介导Mo-DCs表面CD1d的表达
目的 研究N-3-氧化十二烷酰-L-同型丝氨酸内酯(3-O-C12-HSL)是否促进人单核细胞衍生树突状细胞(Mo-DCs)表达CD1d,该作用是否通过过氧化物酶增殖物激活受体γ(PPARγ)介导.方法 取健康人外周血80 mL,密度梯度离心法获得单个核细胞,免疫磁珠法分选CD14+单核细胞,重组人粒-单核细胞集落刺激因子和重组人白细胞介素-4诱导5 d,使其分化为Mo-DCs.将Mo-DCs细胞分为4组,阳性对照组加入终浓度为0.1μg/mL的脂多糖(LPS);阴性对照组加入相应体积的含0.1%DMSO的PBS;3-O-C12-HSL实验组分3个浓度水平,在加入LPS的基础上分别加入终浓度为10、20和40μmol/L的3-O-C12-HSL;GW9662实验组为GW9662预处理1 h后分别加入LPS和浓度为10、20、40μmol/L的3-O-C12-HSL.流式细胞术检测Mo-DCs表面CD1d的表达量;使用PPARγ的抑制剂GW9662处理Mo-DCs后,再经LPS和(或)3-O-C12-HSL刺激,流式细胞术检测Mo-DCs表面CD1d的表达量.结果 Mo-DCs经3-O-C12-HSL刺激后,表面分子CD1d表达水平增加,与阴性对照组及阳性对照组差异有统计学意义(P<0.05);Mo-DCs经GW9662处理1 h后,再加入3-O-C12-HSL,Mo-DCs表面CD1d表达量明显降低(P<0.05).结论 3-O-C12-HSL通过PPARγ促进Mo-DCs表面CD1d的表达.
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NKT细胞亚群研究进展及其在移植免疫中的作用
自然杀伤 T 细胞（NKT 细胞）是一类共表达 NK 细胞受体及恒定 T 细胞受体（TCR）的特殊细胞亚群［1］，既不同于 T 、B 淋巴细胞，亦区别于自然杀伤（NK ）细胞，该 TCR 与高度偏向的 Vs 链（主要为 Vβ8．2）相关，由 Vα14和 Jα281基因节段所编码［2］。 TCRVα24片段通常和 Vβ11片段相结合，NKT 细胞活化后能迅速分泌大量白细胞介素4（IL-4）等细胞因子促进Th2型应答，NKT 细胞可识别 CD1d 提呈的糖脂类抗原，且具CD1d 识别限制的特殊性质［3］。因此，NKT 细胞作为先天免疫性淋巴细胞，在移植免疫和机体免疫调节研究中发挥重要作用。本文对 NKT 细胞亚群在移植免疫研究做一综述。
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恒河猴CD1d基因的克隆及其组织表达差异性分析
目的:克隆非人灵长类疾病动物模型-恒河猴的CD1d基因并检测其在不同组织中的表达差异情况.方法:提取恒河猴血液及各组织的RNA, 以反转录得到的cDNA为模板, 用特异性引物扩增CD1d;以管家基因GAPDH为内参, 用半定量RT-PCR的方法对CD1d的组织表达差异性进行分析.结果:成功扩增了恒河猴CD1d基因的编码区序列;首次用半定量RT-PCR的方法检测了CD1d mRNA在恒河猴部分组织中的表达情况, 发现其表达水平存在明显的组织差异性, 其中, 在肝脏、脾脏和心脏中的表达水平较高, 在血液、小肠和肺中次之, 在脑中表达少.结论:研究结果为今后表达恒河猴CD1d蛋白并制备其四聚体进而研究恒河猴NKT细胞在众多疾病中的作用奠定了基础;组织表达差异的研究结果提示其在相关疾病的发生发展过程中可能扮演着重要的角色, 具体作用还有待深入研究.
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人CD1d分子胞外区的原核表达及其多克隆抗体的制备
目的:原核细胞表达人CD1d分子胞外区及制备其多克隆抗体.方法:用RT-PCR法扩增人CD1d分子胞外区基因,将其克隆入原核表达载体pET28中,转化大肠杆菌BL21(DE3),用IPTG诱导重组蛋白的表达,用亲和层析法纯化重组蛋白,以之为免疫原免疫小鼠制备多克隆抗体,并以ELISA、Western blot及免疫组织化学法检测抗体.结果:在原核细胞中高效表达和纯化了人CD1d分子胞外区蛋白,用其免疫小鼠,获得了效价高、特异性较好的多克隆抗体,免疫组织化学检测显示该抗体可识别人小肠组织中的天然CD1d分子.结论:成功制备了人CD1d分子胞外区重组蛋白及鼠抗人CD1d分子胞外区抗体,为进一步建立人CD1d分子的免疫学检测方法及其生物学功能的深入研究奠定了基础.
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兔抗人CD1d分子α3结构域抗体的制备与鉴定
目的: 制备兔抗人CD1d分子α3结构域(hCD1d-α3)多克隆抗体.方法: PCR法扩增出人hCD1d-α3编码区基因, 将其克隆入原核表达载体pET28中, 转化大肠杆菌BL21(DE3), 用IPTG诱导重组蛋白的表达, 用Ni2+-NTA Agarose亲和层析法纯化重组蛋白, 以之为免疫原免疫家兔, 制备多克隆抗体, 并用ELISA、 Western blot及免疫组织化学法检测抗体.结果: 成功构建了hCD1d-α3原核表达载体pET28/hCD1d-α3, 高效表达并纯化hCD1d-α3蛋白, 间接ELISA检测所制备抗体的效价为1∶6 400, Western blot显示该抗体能与hCD1d特异结合, 免疫组织化学法检测结果表明该抗体识别人小肠组织中的天然hCD1d.结论: 通过制备重组hCD1d-α3蛋白为免疫原, 免疫家兔, 成功地制备了效价高、特异性好的抗hCD1d-α3多克隆抗体.
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抗CD1d单克隆抗体的制备及其识别结构域的鉴定
目的:制备抗人CD1d单克隆抗体(mAb)并研究其结合特性.方法:应用淋巴细胞杂交瘤技术制备鼠源性抗人CD1d mAb.用免疫荧光染色和流式细胞术鉴定其识别位点.结果:获得1株分泌抗CD1d mAb的杂交瘤细胞株.mAb的腹水ELISA效价达10-6,为IgG1亚类,可识别293T细胞转染的CD1d分子的α1结构域.结论:获得1株可特异性识别CD1d α1结构域的mAb,为进一步研究CD1d的结构及功能提供了手段.
