首页 > 文献资料
-
系统性红斑狼疮患者外周血单核细胞来源的未成熟树突细胞活化状态检测及意义
目的 探讨系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)患者外周血单核细胞来源的未成熟树突细胞(monocyte-derived dendritic cells,MDDCs)活化状态及临床意义.方法 SLE患者35例(SLE组)和体检健康者16例(对照组),2组分别抽取外周血分离单核细胞,体外培育MDDCs.2组采用流式细胞术检测未成熟MDDCs表面CD86表达情况,采用ELISA法检测MDDCs细胞因子浓度.结果 SLE组未成熟MDDC数量((0.026±0.100)×106/mL)与对照组((0.043±0.010)×106/mL)比较差异无统计学意义(P＞0.05);SLE组未成熟MDDCs表面CD86表达率(87.2％)明显高于对照组(42.8％)(P＜0.05);SLE组未成熟MDDCs分泌的白细胞介素-10水平((200.7±81.5)ng/L)高于对照组((101.2±20.5)ng/L),白细胞介素-6水平((122.9±11.5)ng/L)与对照组((121.8±9.3) ng/L)比较差异无统计学意义(P＞0.05);SLE组未成熟MDDCs百分比与SLE疾病活动度评分(SLE disease activity index,SLEDAI)评分呈负相关(r=-0.340,P=0.031),MDDC浓度与血清补体C3水平呈负相关(r=-0.510,P=0.018),与SLEDAI评分呈负相关(r=-0.350,P=0.041);SLE组CD86表达与SLEDAI评分呈正相关(r=0.530,P=0.002),与血清补体水平C3水平(r=0.260,P=0.082)、抗双链DNA(r=0.190,P=0.061)、C反应蛋白水平(r=0.310,P=0.090)和血沉(r=0.200,P=0.098)均无相关性.结论 SLE患者未成熟MDDCs可能存在自发活化状态,即使无活化信号存在亦能有效递呈抗原,有效协同刺激T细胞,导致患者外周免疫耐受被打破.
关键词： 系统性红斑狼疮 单核细胞来源树突细胞 树突细胞 CD86 -
3-O-C12-HSL通过PPARγ介导Mo-DCs表达CD40
目的 研究铜绿假单胞菌信号分子N-3-氧化十二烷酰-L-同型丝氨酸内酯(3-O-C12-HSL)是否促进人单核细胞衍生树突细胞(Mo-DCs)表达CD40,该作用是否通过过氧化物酶增殖物激活受体γ(PPARγ)介导.方法 取健康人外周血,密度梯度离心法获得单个核细胞,免疫磁珠法分选CD14+单核细胞,经重组人粒-单核细胞集落刺激因子和重组人白细胞介素-4(IL-4)诱导,使其分化为Mo-DCs,Mo-DCs经脂多糖(LPS)和(或)3-O-C12-HSL刺激后,流式细胞术检测Mo-DCs表面CD40的表达量.使用PPARγ的抑制剂GW9662处理Mo-DCs后,再经LPS和(或)3-O-C12-HSL刺激,流式细胞术检测Mo-DCs表面CD40的表达量.结果 Mo-DCs经3-O-C12-HSL刺激后,表面分子CD40表达水平降低,与PBS组及LPS组差异有统计学意义(P<0.05);Mo-DCs经GW9662处理后,再加入3-O-C12-HSL,Mo-DCs表面CD40表达量明显增加(P<0.05).结论 3-O-C12-HSL通过PPARγ降低Mo-DCs表面CD40表达.
-
3-O-C12-HSL通过PPARγ介导Mo-DCs表面CD1d的表达
目的 研究N-3-氧化十二烷酰-L-同型丝氨酸内酯(3-O-C12-HSL)是否促进人单核细胞衍生树突状细胞(Mo-DCs)表达CD1d,该作用是否通过过氧化物酶增殖物激活受体γ(PPARγ)介导.方法 取健康人外周血80 mL,密度梯度离心法获得单个核细胞,免疫磁珠法分选CD14+单核细胞,重组人粒-单核细胞集落刺激因子和重组人白细胞介素-4诱导5 d,使其分化为Mo-DCs.将Mo-DCs细胞分为4组,阳性对照组加入终浓度为0.1μg/mL的脂多糖(LPS);阴性对照组加入相应体积的含0.1%DMSO的PBS;3-O-C12-HSL实验组分3个浓度水平,在加入LPS的基础上分别加入终浓度为10、20和40μmol/L的3-O-C12-HSL;GW9662实验组为GW9662预处理1 h后分别加入LPS和浓度为10、20、40μmol/L的3-O-C12-HSL.流式细胞术检测Mo-DCs表面CD1d的表达量;使用PPARγ的抑制剂GW9662处理Mo-DCs后,再经LPS和(或)3-O-C12-HSL刺激,流式细胞术检测Mo-DCs表面CD1d的表达量.结果 Mo-DCs经3-O-C12-HSL刺激后,表面分子CD1d表达水平增加,与阴性对照组及阳性对照组差异有统计学意义(P<0.05);Mo-DCs经GW9662处理1 h后,再加入3-O-C12-HSL,Mo-DCs表面CD1d表达量明显降低(P<0.05).结论 3-O-C12-HSL通过PPARγ促进Mo-DCs表面CD1d的表达.
-
3-O-C12-HSL通过PPARγ抑制Mo-DCs表达IL-6
目的 研究铜绿假单胞菌分泌的N-3-氧代十二烷酰-L-同型丝氨酸内酯(N-3-oxododecanoyl-L-homoserine lactone,3-O-C12-HSL)是否通过过氧化物酶增殖物激活受体γ(peroxisome proliferater-activated receptorγ,PPARγ)调节单核细胞来源的树突细胞(monocytes derived-dendritic cells,Mo-DCs)表达白细胞介素6(interleukin-6,IL-6).方法 PPARγ配体筛选实验体外检测3-O-C12-HSL是否与PPARγ结合.免疫磁珠法分选人CD14+单核细胞,人白细胞介素4(human Interleukin 4,hIL-4)及人粒单核细胞集落刺激因子(human granulocyte monocyte colony stimulating factor,hGM-CSF)诱导分化为Mo-DCs,不同浓度的3-O-C12-HSL处理Mo-DCs;PPARγ拮抗剂GW9662处理Mo-DCs后,3-O-C12-HSL处理Mo-DCs,电化学发光法检测Mo-DCs培养上清IL-6浓度.结果 配体筛选实验显示3-O-C12-HSL＞ 4.60 μmol/L时可竞争性结合PPARγ配体结合区.3-O-C12-HSL下调脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的Mo-DCs表达IL-6水平(P＜0.05),PPARγ特异性拮抗剂GW9662能部分逆转3-O-C12-HSL介导的IL-6表达下调(P＜0.05).结论 3-O-C12-HSL可与PPARγ相结合,并通过PPARγ调节Mo-DCs分泌表达IL-6.
-
3-O-C12-HSL阻碍Mo-DCs成熟过程中lncRNA表达谱的变化
目的:观察铜绿假单胞菌(Pseudomonas aerltginosa,PA)分泌的信号分子N-3-氧代十二烷酰-L-同型丝氨酸内酯(N-3-oxododecanoy1-L-homoserine lactone,3-O-C12-HSL)阻碍单核细胞来源的树突细胞(monocytes derived-dendritic cells,Mo-DCs)成熟过程中长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)表达谱的变化情况.方法:采用免疫磁珠法分选人外周血CD14+单核细胞,经重组人粒-单核细胞集落刺激因子和重组人白细胞介素-4诱导分化为Mo-DCs.不同因素处理Mo-DCs,实验组加入终浓度0.1 μg/mL的LPS和口终浓度为40 μmol/L的3-O-C12-HSL,对照组加入相应体积的含0.1％DMSO的PBS,模型组加入终浓度0.1 μg/mL的LPS.利用lncRNA芯片技术检测对照组、模型组和实验组间lncRNA表达谱的差异.对筛选数据进行分析处理,利用散点图分析2倍以上差异lncRNA在各处理因素间的总体变异情况,利用聚类分析研究表达差异5倍以上lncRNA的聚类情况.结果:与对照组和模型组相比较,实验组筛选出2倍以上表达差异的lncRNA为1 386条,其中上调表达的548条,下调表达的838条.筛选出具有5倍以上表达差异的lncRNA共153条,占2倍表达差异lncRNA的11.04％,其中上调表达的22条,下调表达的131条.散点图发现2倍表达差异的lncRNA总体分布呈集中趋势,存在特征性改变.聚类分析发现5倍表达差异的lncRNA能根据处理因素进行有效的分层聚类.结合GO分析和mRNA通路分析,差异lncRNA的相关基因可富集至PPAR信号通路、钙信号通路和NF-κB信号通路中.结论:3-O-C12-HSL作用于Mo-DCs后,lncRNA表达谱发生了特征性变化,表达差异的lncRNA可能参与了3-O-C12-HSL阻碍Mo-DCs成熟过程.
