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肺炎嗜衣原体CPAF诱导THP-1细胞产生前炎症细胞因子和凋亡
目的 研究肺炎嗜衣原体(Chlamydophila pneumoniae,Cpn)衣原体蛋白酶样活性因子(Chlamydial protease-like activity factor,CPAF)能否在体外诱导人单核细胞THP-1产生前炎症细胞因子和凋亡,为进一步探索Cpn感染宿主致病的分子机制提供实验依据.方法 将Cpn CPAF全基因克隆于pGEX6p-2载体上,在大肠杆菌(E coli)中诱导表达重组蛋白,经去内毒素纯化柱和琼脂糖凝胶FF获得纯化且无脂多糖(LPS)污染的重组蛋白GST-CPAF.以不同浓度的该蛋白作用于THP-1,ELISA检测TNF-α吨和IL-6水平.MTT法检测经该蛋白处理后THP-1的增生或抑制作用,用Hoechst33258荧光染色、DNA片段化分析、Armexin V-FITC-PI染色法检测细胞凋亡情况.结果 制备的莺组蛋白GST-CPAF以时间和剂量依赖方式刺激THP-1分泌TNF-α和IL-6,并以剂量依赖方式抑制THP-1增殖;当GST-CPAF刺激THP-1细胞24 h后,能诱导细胞调亡.结论 制备的Cpn重组蛋白GST-CPAF能诱导THP-1产生前炎症细胞因子和凋亡,可能是Cpn致病机制中的一个因素.
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沙眼衣原体分子流行病学与致病性及部分免疫损伤机制研究进展
沙眼衣原体是常见的性传播疾病病原体之一.生殖道沙眼表原体持续性感染可引起男性附睾炎、前列腺炎,女性尿道炎、宫颈炎、盆腔炎、异位妊娠和不孕等严重后遗症.但亦可呈隐匿性、持续性感染,而且不同地区不同人群优势流行菌株分布有所不同,本文就沙眼衣原体基因分型、分子流行病学、与临床的相关性及对机体的部分免疫损伤机制进行综述,以期进一步阐明不同型别的优势流行或较易引起严重疾病并发症的菌株是否与其特定的致病性或毒力有关.
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黄芩苷抑制沙眼衣原体宿主细胞MHCⅠ、CD1d下调的机制
目的:研究黄芩苷对沙眼衣原体体外生长的影响,并探究其对感染细胞MHC分子表达影响的可能机制.方法:用HeLa细胞培养沙眼衣原体Ct,选取不同的时间点及不同浓度的黄芩苷干预,免疫荧光检测包涵体数目及大小;Western blot检测空白组、对照组及不同黄芩苷浓度干预组CPAF、RFX5和USF-1蛋白表达水平;流式细胞术分别检测各组细胞表面MHCⅠ类分子(HeLa细胞)及CD1d分子(PURL原代细胞)表达情况.结果:黄芩苷明显抑制包涵体形成的数目及大小,降低活化的CPAF含量及抑制RFX5、USF-1的降解,抑制感染细胞表面MHCⅠ、CD1d表达下调.结论:黄芩苷能抑制沙眼衣原体体外生长,而CPAF很可能是黄芩苷抑制感染细胞表面MHC分子及CD1d分子下调的干预靶点.
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黄芩苷对沙眼衣原体宿主细胞抗凋亡活性的抑制作用
目的:探讨黄芩苷对沙眼衣原体感染诱导宿主细胞抗凋亡效应的影响,并分析其可能的作用机制.方法:沙眼衣原体D型菌株感染HeLa229细胞并予以黄芩苷干预后,Hoechst33258染色和AnnexinV/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡率,流式细胞术检测活化Caspase3表达水平,Western blot检测CPAFc及唯BH3域前凋亡蛋白(Bim、Bik、Puma)的表达水平.结果:黄芩苷干预能显著提高沙眼衣原体感染宿主细胞凋亡百分比及感染细胞内活化Caspase-3水平,抑制CPAF表达并阻碍Bim、Bik、puma的降解.结论:黄芩苷明显抑制沙眼衣原体宿主细胞的抗凋亡活性,而阻碍CPAF对唯BH3域前凋亡蛋白的降解可能是其重要机制.
关键词： 黄芩苷 沙眼衣原体 CPAF 唯BH3域前凋亡蛋白 -
衣原体分泌性蛋白研究进展
衣原体分泌性蛋白是由衣原体基因编码并分泌到宿主细胞胞浆中的具有酶活性蛋白,研究多的是蛋白酶体样活性因子即CPAF.CPAF能抑制IFN-λ诱导的MHC分子的表达、裂解角蛋白-8并通过裂解宿主细胞唯BH3域蛋白参与抗凋亡作用.2005年又发现两种肺炎嗜衣原体的分泌性蛋白CPn0796和CPn0797,但对其研究不多.
