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成纤维细胞生长因子受体1配体精细结合位点的确定
目的确定人成纤维细胞生长因子受体1（FGFR1）的配体精细结合位点。方法合成肽文库筛选，定向点突变，原核细胞重组蛋白质表达及受体-配体结合实验。结果采用125I标记的酸性成纤维细胞生长因子(aFGF)，自合成肽文库中筛选到一个五肽序列（WGPGM），其序列及立体结构和FGFR1细胞外段的一个基序（WTSPEKM）相似。为了证明FGFR1的WTSPEKM基序是结合FGF的重要结构，采用定向突变技术将WTSPEKM基序中的P（CCA）突变成A（GCA），并在原核细胞中表达了野生型和突变型FGFR1细胞外段重组蛋白质，受体-配体结合实验显示突变的FGFR1细胞外段结合aFGF的能力明显降低。结论 FGFR1的 WTSPEKM基序是配体结合的一个重要部位。
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成纤维细胞生长因子受体1和血管内皮生长因子在肺鳞癌中的表达及与预后的关系
目的 观察成纤维细胞生长因子受体1(FGFR1)和血管内皮生长因子(VEGF)在肺鳞癌中的表达,并分析其与预后的相关性.方法 收集肺鳞癌组织标本135例和癌旁组织标本125例.采用免疫组织化学染色法检测不同肺组织中FGFR1和VEGF的表达水平,分析两者表达与临床病理参数的关系.肺鳞癌患者预后的影响因素采用Cox多因素分析.结果 肺鳞癌组织标本中FGFR1和VEGF的阳性表达率和表达水平均高于癌旁组织(P﹤0.05);在肺鳞癌组织中,FGFR1阳性表达与肿瘤分化程度、淋巴结转移、远处器官转移及TNM分期有关(P﹤0.05),VEGF阳性表达与肿瘤分化程度、淋巴结转移及TNM分期有关(P﹤0.05);Cox多因素分析结果显示,肿瘤分化程度、淋巴结转移、TNM分期、FGFR1及VEGF均为肺鳞癌预后的独立因素(P﹤0.05).结论 肺鳞癌患者的FGFR1和VEGF表达水平升高,并在肿瘤分化、淋巴结转移、TNM分期及预后中发挥重要作用.
关键词： 成纤维细胞生长因子受体1 血管内皮生长因子 肺鳞癌 预后 -
乳腺浸润性导管癌组织FGFR1和Survivin表达临床意义分析
目的:探讨成纤维细胞生长因子受体1(fibrobIast growth factor receptor 1,FGFR1)及Survivin蛋白在乳腺浸润性导管癌(invasive ductal carcinoma,IDC)中的表达、意义及两者的相关性.方法:采用免疫组织化学SP法检测81例乳腺IDC组织石蜡标本中FGFR1及Survivin的表达情况.结果:FGFR1及Survivin蛋白阳性表达率分别为29.63％％(24/81)和77.78％(63/81).它们的表达均与患者年龄无关(x2=0.919,P=0.338;x2 =1.442,P=0.233);但与细胞增殖指数(Ki-67)呈明显正相关(r=0.446,P＜0.001;r=0.269,P=0.015)；FGFR1的表达与雌激素受体(estrogen receptor,ER)呈正相关性(r=0.285,P=0.010),与孕激素受体(progesterone receptor,PR)、表皮生长因子受体2(human epidermal growth factor receptor 2,HER-2)呈负相关性(r=-0.371,P=0.001;r=-0.372,P=0.001),而与肿瘤大小(x2 =2.222,P=0.329)、腋淋巴结转移(x2=0.424,P=0.515)、TNM分期(x2=0.608,P=0.738)和病理组织学分级(x2 =4.514,P=0.105)差异无统计学意义；而Survivin表达与ER的表达(r=-0.145,P=0.195)和PR的表达(r=0.172,P=0.126)无关,与HER-2呈正相关性(r=0.275,P=0.013),并与肿瘤大小(x2=21.500,P＜0.001)、腋淋巴结转移(x2 =4.772,P=0.029)、TNM分期(x2=10.792,P=0.005)及病理组织学分级(x2=11.638,P=0.003)密切相关；FGFR1与Survivin表达呈显著正相关,r=0.347,P=0.006.结论:FGFR1和Survivin可能是乳腺IDC患者的不良预后因素；FGFR1及Survivin可能共同促进乳腺癌的细胞增殖、侵袭及转移,联合检测有助于更准确地判断乳腺IDC的预后.
关键词： 成纤维细胞生长因子受体1 survivin 乳腺肿瘤 免疫组织化学 -
氟西汀对抑郁障碍大鼠海马区域FGF-2、FGFR1及5-HT1AR表达的影响
目的 通过建立慢性不可预知的温和刺激建立大鼠抑郁症模型,来观察氟西汀对抑郁障碍大鼠海马区域成纤维细胞生长因子-2(fibroblast growth factor-2,FGF-2)、成纤维细胞生长因子受体1(fibroblast growth factor receptor 1,FGFR1)和5-羟色胺1A受体(5-hydroxytryptamine 1A receptor,5-HT1AR)表达的影响.方法 利用敞箱实验进行行为学评分,选择得分相近的SD健康雄性大鼠32只,体重210～ 290 g.利用随机数字表法随机分为4组,每组8只,包括①抑郁模型组;②抑郁模型+氟西汀组;③空白对照组;④氟西汀组.采用慢性不可预知的温和刺激建立大鼠抑郁症模型,应激同时抑郁模型+氟西汀组、氟西汀组予氟西汀[5 mg/(kg·d)]灌胃,空白对照组、抑郁模型组每日给予等体积0.5％的羧甲基纤维素纳悬浮液灌胃处理,共21 d.21 d后,采用敞箱实验、糖水消耗实验指标评定大鼠行为学改变并检测模型是否成功建立.应用Western blot法检测各组大鼠海马区域的FGF-2、FGFR1和5-HT1AR蛋白表达水平,统计学分析采用单因素方差分析.结果 ①敞箱实验、糖水消耗实验显示抑郁模型建立成功.与模型组比较,模型+氟西汀组水平和垂直得分增高,排便粒数减少,糖水消耗增加(P＜0.05).②与空白对照组比较,抑郁模型组SD大鼠海马FGF-2 (22.21±7.23)、FGFR1(20.51±6.67)、5-HT1AR(22.61±5.49)蛋白表达显著下降(P＜0.05);而氟西汀组无明显差异(P＞0.05).与抑郁模型组比较,抑郁模型+氟西汀组FGF-2(42.44±8.01)、FGFR1 (42.50±9.30)、5-HT1AR(50.97±6.24)蛋白表达显著升高,差异有统计学意义(均P ＜0.05).结论 氟西汀可改善抑郁障碍大鼠的抑郁行为,其病理生理作用机制可能是与FGF-2、FGFR1、5-HT1AR在大鼠海马中的表达上调相关.
关键词： 氟西汀 抑郁障碍 大鼠海马 成纤维细胞生长因子-2 成纤维细胞生长因子受体1 -
以成纤维细胞生长因子受体1为靶点的姜黄素类似物的抗肿瘤活性研究
目的 寻找以成纤维细胞生长因子受体1 (FGFRl)为靶点,并具有良好抗肿瘤活性的小分子抑制剂.方法 通过改造单羰基姜黄素类似物3,5-双(2-氟苯亚甲基)哌啶-4-酮(EF24),合成了其类似物[3,5-双(2-溴苯亚甲基)哌啶-4-酮,B6];采用FGFR1酪氨酸激酶实验验证其靶向性;MTT法检测EF24和B6对正常人肝细胞HL7702、4种肿瘤细胞(人大细胞肺癌NCI-H460、人胃癌细胞SGC-7901、人小细胞肺癌A549、人星形胶质瘤细胞株U251)增殖的影响;Western blotting法检测B6 (2.5、5、10 μmol/L)对NCI-H460细胞bFGF/FGFR下游信号蛋白表达的影响;Caspase-3试剂盒检测Caspase-3因子的表达.结果 EF24类似物B6可以以FGFR1为靶点,抑制NCI-H460细胞FGFR1以及下游信号蛋白丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(AKT)和细胞外调节蛋白(ERK1/2)的磷酸化,抑制肿瘤细胞的增殖,促进细胞凋亡.结论 成功改造并获得靶向FGFR1的EF24类似物B6,其具有良好的体外抗肿瘤活性,为寻找FGFR1抑制剂候选抗肿瘤药物提供新思路.
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FGF-1和FGFRl在津白Ⅱ小鼠自发性乳腺癌发生中的作用
目的:比较TA2小鼠正常乳腺、乳腺癌前病变和乳腺癌组织中FGF-1和FGFRl的表达水平,初步探讨FGF-1及其受体FGFR1在TA2小鼠自发性乳腺癌发生中的作用及其机制.方法:收集正常TA2成年雌鼠的乳腺组织和TA2自发性乳腺癌雌鼠未成瘤的乳腺组织和乳腺癌组织,正常雌鼠乳腺经苏木素-伊红染色证实不存在不典型增生或癌变组织为正常乳腺组,共12例,TA2自发性乳腺癌雌鼠的未成瘤乳腺经苏木素-伊红染色证实为不典型增生组织为癌前病变组,发瘤小鼠的瘤组织经苏木素-伊红染色证实为乳腺癌的归为乳腺癌组,各17例;利用免疫组织化学方法测定各组乳腺组织中FGF-1、PCNA、cyclin DI的表达量,并利用Real-time PCR方法测定各组织中FGF-1 mRNA和FGFRl mRNA的表达量.结果:FGF-1 mRNA和FGF-1蛋白在TA2自发性乳腺癌小鼠的癌前病变组织和乳腺癌组织中表达均高于正常乳腺(P均＜0.05),而癌前病变组与乳腺癌组比较差异不具有统计学意义(P>0.05);FGFR1 mRNA在TA2自发性乳腺癌小鼠的癌前痛变组织和乳腺癌组织中表达均高于正常乳腺(P均＜0.05),同时FGFR!在癌前病变组织中的表达高于乳腺癌组织(P=0.046);PCNA蛋白和cyclinDl蛋白在癌前病变组织和乳腺癌组织中表达也均高于正常乳腺(P均＜0.05),此外,cyclin D1在乳腺癌组织中的表达明显高于癌前病变组织(P=0.001).结论:FGF-1和FGFR1可能参与了TA2小鼠自发性乳腺癌的发生,其作用的发挥可能是通过调节细胞周期促进细胞增殖而完成的.
关键词： 津白Ⅱ小鼠 乳腺肿瘤 成纤维细胞生长因子-1 成纤维细胞生长因子受体1 -
非小细胞肺癌组织中YAP1和FGFR1蛋白表达水平及临床意义
目的 探讨非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)组织中Yes相关蛋白1(yes-associated protein 1,YAP1)和成纤维细胞生长因子受体1(fibroblast growth factor receptor 1,FGFR1)蛋白表达水平及临床意义.方法 选取确诊NSCLC患者120例,并选取其中的29例癌旁组织作为对照,用免疫组织化学法检测YAP1和FGFR1的表达水平,并分析其与NSCLC患者病理特征及预后的相关性.结果 YAP1和FGFR1在NSCLC组织中的阳性率分别为41.67％和43.33％,在癌旁正常组织中的阳性率均为13.79％,YAP1和FGFR1在NSCLC组织中的阳性率均高于癌旁正常组织,差异均有统计学意义(P＜0.05);YAP1和FGFR1表达水平与年龄和性别相关性不明显,差异均无统计学意义(P＞0.05);与吸烟、病理分型、TNM分期、T分期、N分期、M分期、肿瘤直径相关,差异均有统计学意义(P＜0.05);YAP1和FGFR1表达水平阴性组3年生存率及生存期均明显高于YAP1和FGFR1表达水平阳性组,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 YAP1和FGFR1蛋白表达水平在NSCLC组织中的表达量高于癌旁正常组织,与NSCLC的严重程度密切相关,YAP1和FGFR1蛋白表达水平在NSCLC的发生发展过程中起促进作用,阴性表达能获得较好的预后,二者的表达可为NSCLC的诊断及预后提供判断依据.
关键词： 非小细胞肺癌 Yes相关蛋白1 成纤维细胞生长因子受体1 -
FGF10及其受体FGFR1、FGFR2在昆明小鼠输卵管和子宫内的分布
目的 观察成纤维细胞生长因子10(FGF10)、成纤维细胞生长因子受体(FGFR1、FGFR2)在昆明小鼠输卵管和子宫内的定位与分布. 方法应用免疫组织化学法进行蛋白质定位观察.结果 FGF10和FGFR1免疫阳性反应定位于昆明小鼠输卵管上皮细胞,FGFR2的免疫阳性反应见于肌层平滑肌.FGF10和FGFR1免疫阳性反应分布于昆明小鼠子宫内膜上皮、子宫腺上皮和肌层平滑肌,而FGFR2免疫阳性反应见于肌层平滑肌.结论 FGF10及其受体在输卵管和子宫的分布可能参与输卵管和子宫的重要功能.
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颈总动脉损伤大鼠成纤维细胞生长因子受体1、p21ras表达与辛伐他汀的抑制效应
背景:辛伐他汀可通过抑制血管平滑肌细胞增殖发挥抗血管狭窄作用,但其作用机制尚不完全清楚.目的:观察辛伐他汀对血管损伤后狭窄时成纤维细胞生长因子受体1、p21ras 蛋白表达的影响.方法:建立SD 大鼠颈总动脉损伤模型,随机分为假手术组、模型组、低剂量和高剂量辛伐他汀组,后2 组分别于术前3 d灌胃辛伐他汀5,10 mg/(kg·d)直至术后14 d.结果与结论:大鼠颈总动脉损伤后:①苏木精-伊红染色显示,血管中膜血管平滑肌增殖显著,排列紊乱,管腔严重狭窄;应用辛伐他汀后血管内膜相对光滑,中膜血管平滑肌细胞排列趋于规整,管腔狭窄程度有不同程度减轻.②Western blot检测显示,颈总动脉成纤维细胞生长因子受体1、p21ras 表达明显升高(P < 0.05),低剂量辛伐他汀干预后两种蛋白表达无明显变化,应用高剂量辛伐他汀干预后两种蛋白表达明显下降(P < 0.05).表明辛伐他汀可能通过抑制成纤维细胞生长因子受体1、p21ras 蛋白的表达抑制血管平滑肌细胞增殖,减轻血管损伤后狭窄.
关键词： 辛伐他汀 颈总动脉损伤 狭窄 成纤维细胞生长因子受体1 p21rasS -
人重组FGFR1在昆虫细胞膜上的表达
目的：将人重组成纤维细胞生长因子受体1(FGFR1)表达在昆虫细胞膜表面，用作筛选成纤维细胞生长因子(FGFs)拮抗肽探针。方法：将人FGFR1 cDNA克隆人昆虫病毒的转递质粒pFastBac I上，然后转座到昆虫病毒Bacmid上。以重组Bacmid转染昆虫细胞Sf9并表达人FGFR1，以Western印迹和ELISA对表达出的蛋白质进行鉴定。结果：FGFR1 cDNA片段2 100 bp，重组FGFR1表达产物分子量78 kD。ELISA结果显示，人重组FGFR1高效地在昆虫细胞Sf9膜表达。结论：这个表达系统能很好地表达出人重组FGFR1，并能准确地将其定位到昆虫细胞膜的表面。
关键词： 成纤维细胞生长因子受体1 昆虫细胞 表达 -
不同种属间成纤维细胞生长因子受体1限制片段多态性的初步研究
目的:研究成纤维细胞生长因子受体1(FGFR1)基因在不同种属间的限制片段多态性.方法:提取小鼠、鸡、家兔的基因组DNA,以FGFR1 cDNA片断为探针进行Southern杂交分析.结果:各种属的组织分别得到不同形态的带条,即不同种属间的FGFR1限制片段多态性不同.结论:在物种进化过程中FGFR1在基因组水平上发生了变化,其限制性片段多态性的分析可能作为研究物种起源与种间亲源关系的辅助手段.
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渐进性咬合紊乱对髁突软骨成纤维细胞生长因子受体1表达的影响
目的:探讨渐进性咬合紊乱对大鼠髁突软骨中成纤维细胞生长因子受体1(Fibroblast growth factor receptor 1,FGFR1)表达的影响.方法:建立大鼠渐进性咬合紊乱模型,采用免疫组化方法检测髁突软骨中FGFR1的表达,并通过比较阳性细胞密度,分析FGFR1的表达变化规律.采用SPSS 11.0软件包进行统计学分析.结果:FGFR1主要表达在大鼠髁突软骨过渡层和肥大层,增殖层很少;正常组大鼠髁突软骨从6周龄到10周龄FGFR1表达逐渐增强,10周龄后降低,并保持在一个稳定水平;成年组和幼年组实验4、6周时FGFR1的表达均显著低于对照组,实验8周时的表达高于对照组(P＜0.05),幼年组尤为明显,实验2周组与对照组无显著差异.结论:FGFR1参与了大鼠渐进性咬合紊乱所致髁突软骨的改建活动.
关键词： 咬合 髁突软骨 成纤维细胞生长因子受体1 -
si-RNA介导FGFR1基因沉默对胃癌细胞生长及凋亡的影响
目的 探索靶向沉默成纤维细胞生长因子受体1(FGFR1)表达对胃癌细胞SGC-7901生长及凋亡的影响.方法 通过Western blotting法研究FGFR1蛋白在胃癌细胞SGC-7901以及人正常胃黏膜上皮细胞GES-1的表达情况;设计合成特异性针对FGFR1基因的小干扰RNA(siRNA)及阴性对照-siRNA(NC-siRNA);采用瞬时转染法将siRNA转入胃癌细胞SGC-7901中,Western blotting法检测转染siRNA-FGFR1后对SGC-7901细胞中FGFR1蛋白表达的影响.通过MTT法检测siRNA-FGFR1对SGC-7901细胞增殖抑制的时间-效应关系,以及克隆集落形成实验检测siRNA-FGFR1对SGC-7901细胞克隆集落形成的影响;采用Hoechst染色法和流式细胞术检测siRNA-FGFR1对胃癌细胞凋亡的影响.结果 与人正常胃黏膜上皮细胞GES-1相比,胃癌细胞SGC-7901的FGFR1蛋白表达水平明显增高(P＜0.05);siRNA-FGFR1转染SGC-7901细胞后,FGFR1蛋白表达水平明显下调(P＜0.05);胃癌细胞增殖生长曲线提示,用siRNA技术沉默胃癌细胞中FGFR1的表达后,相较于空白组和NC-siRNA组,siRNA-FGFR1组细胞增殖明显受抑制,另外胃癌细胞SGC-7901克隆集落形成明显受抑制;流式细胞术结果表明,正常组与NC-siRNA组中胃癌SGC-7901细胞早期凋亡百分比差异无统计学意义(P＞0.05),而siRNA-FGFR1组细胞早期凋亡百分比显著升高(P＜0.01).结论 siRNA-FGFR1可抑制FGFR1蛋白在人胃癌细胞SGC-7901中的表达,并抑制胃癌细胞的生长,促进其凋亡.以FGFR1为靶点的小RNA干扰技术有望成为胃癌靶向治疗的新方法.
关键词： 胃癌 增殖 凋亡 成纤维细胞生长因子受体1 -
成纤维细胞生长因子受体1在大鼠各组织中的表达
目的 研究成纤维细胞生长因子受体1(FGFR1) mRNA及蛋白在大鼠各组织中的表达.方法 采用实时定量荧光聚合酶链式反应测大鼠脂肪、肝脏、心脏、血管、肾脏、肌肉等组织中FGFR1 mRNA表达;采用酶联免疫吸附法及免疫组织化学法检测各组织中FGFR1蛋白的表达.结果 FGFR1 mRNA和蛋白在大鼠脂旨肪、肝脏、心脏、血管、肾脏、肌肉中均有表达,主要分布于细胞膜.FGFR1 mRNA在大鼠脂肪、肝脏、心脏、血管、肾脏、肌肉中表达量分别为2.623 0±0.524 9、1.003 0±0.077 2、6.755 0±0.278 4、1.613 0±0.320 1、4.833 0±0.421 5、6.123 0±0.348 7,FGFR1蛋白在以上各组织中的表达量分别为(10.6700±1.197 0)、(0.356 0±0.105 5)、(0.860 0±0.163 9)、(5.152 0±0.801 4)、(0.186 0±0.046 7)、(2.110 0±0.161 9) μg·g-1,FGFR1 mRNA在各组织中的表达从高至低依次为心脏、肌肉、肾脏、脂肪、血管和肝脏;FGFR1蛋白在各组织中的表达量从高至低依次为脂肪、血管、肌肉、心脏、肝脏、肾脏.FGFR1 mRNA和蛋白在各组织中的表达量比较差异均有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01).结论 FG-FR1在大鼠各主要组织器官中均有表达,主要分布于细胞膜,且在各组织中的表达存在一定差异.
关键词： 成纤维细胞生长因子受体1 成纤维细胞生长因子 大鼠 组织特异性 -
成纤维细胞生长因子受体1和细胞核增殖抗原在乳腺癌组织中的表达及其相关性
目的 探讨乳腺癌组织中成纤维细胞生长因子受体1(FGFR1)的表达和细胞核增殖抗原(Ki-67)指数与乳腺癌临床病理特征的相关性.方法 收集203例女性乳腺癌患者的临床病理资料,采用免疫组织化学链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶(SP)法检测203例乳腺癌组织石蜡标本中FGFR1的表达和Ki-67指数,分析FGFR1和Ki-67与临床病理特征的关系及两者的相关性.结果 FGFR1在乳腺癌组织中的阳性表达率为36.94％ (75/203),其阳性表达与腋窝淋巴结转移与否(52.44％比26.45％)和病理组织学分级(Ⅰ级0％,Ⅱ级31.19％,Ⅲ级56.16％)有关,差异均有统计学意义(P ＜0.05);203例乳腺癌组织中Ki-67指数为0.8％ ～ 97.0％,平均为30.54％,与患者年龄、腋窝淋巴结转移与否、组织学分级有关,差异有统计学意义(P＜0.05);多因素Logistic回归分析显示,组织学分级是影响FGFR1阳性表达和Ki-67指数的主要因素(P＜0.05).乳腺癌中FGFR1阳性表达和Ki-67指数呈正相关(r=0.463,P＜0.05).结论 FGFR1阳性表达和Ki-67指数与乳腺癌局部淋巴结转移与否、组织学分级均有关,且两者呈正相关.
关键词： 乳腺癌 成纤维细胞生长因子受体1 细胞核增殖抗原 -
敲减FGFR1基因表达对婴幼儿血管瘤 内皮细胞生物学特性的影响
目的:研究敲减成纤维细胞生长因子受体1(FGFR1)基因的表达对婴幼儿血管瘤内皮细胞(HemECs)活力、凋亡、侵袭和迁移的影响.方法:经转染FGFR1小干扰RNA(si-FGFR1)下调FGFR1表达,研究FGFR1对HemECs生物学特性的影响,以CCK-8法检测细胞活力的变化,流式细胞术检测细胞的凋亡水平,Tran-swell实验检测细胞侵袭和迁移能力的改变;Western blot法检测磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、蛋白激酶B(AKT)和磷酸化AKT(p-AKT)的蛋白水平.结果:转染si-FGFR1进入HemECs能够显著抑制细胞的活力(P<0.05),促进其凋亡(P<0.05),降低细胞的侵袭和迁移能力(P<0.05);Western blot结果显示,下调细胞中FGFR1基因的表达可降低PI3K和p-AKT的蛋白水平(P<0.05),但对AKT蛋白水平无显著影响.结论:敲减HemECs细胞内FGFR1的表达可通过影响PI3K/AKT信号通路调节婴幼儿血管瘤内皮细胞的生物学特性.
关键词： 血管瘤 成纤维细胞生长因子受体1 PI3K/Akt信号通路 细胞凋亡 侵袭 -
成纤维细胞生长因子1型受体-显性失活作用对骨诱导培养骨髓基质干细胞矿化的影响
目的 探讨成纤维细胞生长因子1型受体-显性失活作用(FGFR1DN)对骨诱导培养骨髓基质干细胞(BMSCs)成骨矿化的影响. 方法 取第3代BMSCs转染,根据细胞转染方法不同分为4组(n=24):FGFR1-DN组[采用真核表达质粒pcDNA3.1(+)-FGFR1DN转染]、FGFR1组[采用pcDNA3.1(+)-FRFR1转染]、空载体转染组和未转染组.证实转染成功后,待细胞处于对数生长期时进行成骨诱导培养,连续培养21 d,观察矿化结节形成情况并行茜素红染色,然后根据茜素红浓度标准曲线计算矿化物质的量. 结果 连续成骨诱导21d后,肉眼可见孔底圆形不透明钙化结节,经茜素红染色后呈红色,FGFR1-DN组BMSCs在对数生长期经成骨诱导培养,其成骨能力明显增加,而FGFR1组成骨能力减弱.茜素红浓度含量FGFR1-DN组高(1.33±0.19),FGFR1组低(1.00±1.17),空载体转染组(1.20±0.16)和未转染组(1.17 ±0.17)介于二者之间,组间比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论 FGFR1-DN在BMSCs分化的早期可以促进细胞增殖,于对数生长期进行骨诱导培养后实现了其在成骨细胞中促进矿化的作用,这为局部基因治疗骨折骨缺损提供了理论依据.
关键词： 骨髓细胞 成纤维细胞生长因子受体1 显性失活 矿化 -
成纤维细胞生长因子1型受体-显性负性作用对骨髓基质干细胞成骨诱导培养后碱性磷酸酶活性的影响
目的 探讨成纤维细胞生长因子1型受体-显性负性作用(FGFR1-DN)对骨髓基质干细胞(BMSCs)成骨诱导培养后碱性磷酸酶(ALP)活性的影响. 方法 真核表达质粒pcDNA3.1(+)-DNFGFR1、pcDNA3.1(+)-FGFR1转染BMSCs,实验分为FGFR1-DN转染组、FGFR1转染组、空载体转染组和未转染组.细胞对数生长期进行成骨诱导培养后检测ALP的活性,定性检测采用免疫组化方法,定量检测采用细胞内ALP(cALP)试剂盒.比较4组细胞诱导培养7、14d的ALP活性. 结果 与诱导培养7d比较,4组14 d后ALP活性评分均明显增高,但FGFR1-DN转染组评分增高明显,差异有统计学意义(P＜0.05).7、14 d FGFR1-DN转染组ALP活性评分高,FGFR1转染组低,差异均有统计学意义(P＜0.05). 结论 FGFR1-DN可促进BMSCs成骨期ALP的活性,为实现局部基因治疗与组织工程的联合应用及构建生物相容性更理想的组织工程骨提供了实验理论依据.
关键词： 骨髓细胞 成纤维细胞生长因子 成纤维细胞生长因子受体1 显性负性作用 -
小鼠FGFR1/MIP3a-Fc融合基因真核表达载体的构建及表达
目的 构建小鼠成纤维细胞生长因子受体1/巨噬细胞炎性蛋白3a-Fc融合基因(FGFR1/MIP3a-Fc)的真核表达质粒,并在293T细胞中的表达.方法 设计合成FGFR1/MIP3a融合基因引物,用PCR方法扩增获得FGFR1/MIP3a基因片段,用内切酶消化后插入pcDNA3.1(+)/Fc(Mouse IgG2a)质粒中,构建FGFR 1/MIP3a-Fc融合基因表达质粒;经PCR鉴定、酶切鉴定以及测序鉴定后,将该融合基因表达质粒瞬时转染293T细胞,用ELISA法检测其在293T细胞的表达.结果 经PCR、酶切鉴定以及测序证实,FGFR1/MIP3a-Fc融合基因表达质粒构建成功;ELISA检测FGFR 1/MIP3a-Fc融合基因表达质粒能够在293T细胞中表达.结论 FGFR 1/MIP3a-Fc融合基因表达质粒构建成功,该质粒能够在293T细胞中表达.
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成纤维细胞生长因子受体1在小鼠肾发育中的表达
目的:观察成纤维细胞生长因子受体1(Fibroblast growthfactor receptors 1,FGFR1)在小鼠肾发育中的时空性表达,探讨FGFR1与肾发育的关系.方法:应用免疫组织化学技术结合体视学方法和免疫印迹法,测定不同胚龄(E)11.5、13.5、15.5 d和17.5 d及生后日龄(P)1、7、14、21d和40d小鼠肾组织内FGFR1的表达及其含量变化.结果:免疫组织化学结果显示FGFR1在各期肾小体、远端小管及集合管内均有表达,但在各期远端小管和集合管表达较强,而在各期肾小体表达较弱.体视学测量和免疫印迹结果均显示随着胚日龄的增加,FGFR1在各期肾小体、远端小管及集合管的表达量逐渐增加.结论:FGFR1可能对肾各结构的发育以及成熟肾的形态维持起重要作用.
关键词： 成纤维细胞生长因子受体1 肾 发育 小鼠
