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  • Yes相关蛋白1对胆囊癌细胞增殖及迁移的影响

    作者:何睿;汪洋;黄颖滨;杜军;焦兴元

    目的 探讨正常胆囊黏膜上皮、胆囊黏膜单纯性增生、不典型增生及胆囊癌黏膜上皮中Yes相关蛋白1(YAP1)的表达及其在胆囊癌病程发展中的作用和机制.方法 应用免疫组化法检测50例正常胆囊、101例慢性胆囊炎/胆囊结石及100例原发性胆囊癌患者的胆囊活检标本石蜡切片中胆囊黏膜上皮细胞类型及YAP1蛋白的表达与分布情况.原代培养胆囊黏膜上皮细胞,应用实时PCR (RT-PCR)法和蛋白印迹检测(Western blot)法比较正常黏膜上皮细胞、慢性胆囊炎上皮细胞与胆囊癌SGC996细胞YAP1 mRNA及蛋白表达差异情况.使用siRNA干扰胆囊癌SGC996细胞中YAP1的表达,并采用RT-PCR法和Western blot法检测EMT相关蛋白表达,MTT法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞周期.结果 免疫组化显示YAP1在胆囊癌、胆囊炎/胆囊结石组和正常对照组胆囊黏膜中的表达率分别为87.0% (87/100)、56.4% (57/101)和5.0% (1/20) (P <0.01).蛋白印迹显示YAP1蛋白在胆囊癌组织及细胞中表达明显高于正常组织及细胞,RT-PCR显示胆囊癌细胞YAP1 mRNA水平为正常胆囊黏膜上皮细胞的(12.5±1.2)倍(P<0.05).siRNA干扰SGC996细胞中YAP1表达后EMT相关蛋白E-cad、β-catenin、MMP2、FN、Vimentin等表达下降,细胞活力下降,细胞周期被阻滞在S期.结论 YAP1与胆囊癌细胞增殖及迁移密切相关,可能通过EMT途径促进肿瘤进展.

  • 特异性siRNA沉默YAP1基因表达对胰腺癌细胞恶性生物学行为的影响

    作者:朱世凯;周玉;汪旭东;刘兴超;陈凯;陈云飞;赵冀;张宇;邓小凡

    目的 利用特异性siRNA沉默YAP1基因表达,探讨YAP1的表达对体外胰腺癌细胞增殖、凋亡和侵袭作用的影响.方法 利用脂质体转染法将含有YAP1特异性siRNA的真核表达质粒稳定转染至人胰腺癌PANC-1细胞株;实时定量PCR和Western blot法检测PANC-1细胞中YAP1基因的表达情况;CCK-8法、流式细胞及Transwells侵袭实验分别检测调控YAP1的表达对体外胰腺癌细胞增殖、凋亡和侵袭作用的影响.结果 我们成功建立YAP1 siRNA稳定转染的胰腺癌PANC-1细胞株.经实时定量PCR和Western blot证实siRNA组较空载体组胰腺癌细胞YAP1 mRNA转录和蛋白表达水平明显降低.CCK-8检测发现siRNA组较空载体组胰腺癌细胞增殖能力显著下降(P<0.05);流式细胞检测提示siRNA组较空载体组胰腺癌细胞凋亡率明显增加(P<0.05);Transwells侵袭实验显示siRNA组的穿膜胰腺癌细胞数显著多于空载体组(P<0.05). 结论 特异性siRNA沉默YAP1基因表达能显著抑制胰腺癌细胞的增殖和促进凋亡,同时明显抑制胰腺癌细胞的体外侵袭能力.

  • Yes相关蛋白1和胶原三股螺旋重复蛋白1在三阴性乳腺癌中的表达及其与E-钙黏蛋白表达的相关性

    作者:薄剑波;邵志翔;蔺广荣

    目的 探讨Yes相关蛋白1(YAP1)和胶原三股螺旋重复蛋白1(CTHRC1)在三阴性乳腺癌(TNBC)中表达的临床意义及与E-钙黏蛋白表达的相关性.方法 采用免疫组织化学SABC法检测2006年1月至2017年12月丹东市第一医院73例TNBC患者肿瘤组织和相应癌旁组织中YAP1、CTHRC1的表达,采用χ2检验和Spearman法分别分析其与患者临床病理特征的关系及其与E-钙黏蛋白表达的相关性.结果 YAP1和CTHRC1在TNBC中的表达率分别为71.23%(52/73)、79.45%(58/73),在癌旁组织中的表达率分别为13.70%(10/73)、27.40%(20/73),二者在两组间差异均有统计学意义(χ2值分别为49.452、39.748,均P<0.01).YAP1、CTHRC1的表达均与肿瘤分级、临床分期及淋巴结转移相关(YAP1:χ2值分别为10.244、8.754、6.914,均P<0.05;CTHRC1:χ2值分别为12.582、13.172、6.400,均P<0.05),与患者年龄、 肿瘤直径及绝经状况无关(均P>0.05).TNBC中YAP1、CTHRC1和E-钙黏蛋白表达均呈负相关(r=-0.371,P=0.001;r=-0.323,P=0.005).结论 YAP1、CTHRC1与TNBC的发生、发展密切相关,可能是通过上皮-间质转化过程参与了TNBC的侵袭.

  • B细胞非霍奇金淋巴瘤组织中YAP1和P53的表达及意义

    作者:沈艳;何新明;林喜娜;杨通;陈贵东;古婉仪;顾霞

    目的 探讨YAP1和P53蛋白在B细胞非霍奇金淋巴瘤(B cell non-Hodgkin's lymphoma,B-NHL)组织中的表达意义及相互关系.方法 应用组织芯片和免疫组织化学染色法检测广州医科大学附属第一医院2012年1月-2017年12月经病理科确诊的60例B-NHL(病例组)与25例反应性淋巴组织增生(对照组)中YAP1和P53蛋白的表达,60例B-NHL包括弥漫大B细胞淋巴瘤(diffuse large B cell lymphoma,DLBCL) 49例,小淋巴细胞淋巴瘤7例,套细胞淋巴瘤4例,后两者归为惰性组B-NHL.结果 YAP1在B-NHL中的总体表达阳性率为68.3%,其中在DLBCL中的表达率为61.2%,惰性组B-NHL和对照组的阳性率均为100%,YAP1蛋白在DLBCL表达阳性率低于惰性组B-NHL和对照组(P均<0.05).P53在B-NHL中的总体表达阳性率为16.7%,其中在DLBCL和惰性组B-NHL的表达阳性率分别为18.4%和9.1%,在对照组中未见表达.P53在B-NHL和对照组中表达差异有统计学意义(P<0.05).YAP1和P53在B-NHL中的表达无明显相关性(P>0.05).结论 YAP1可能作为肿瘤抑制因子参与了部分B-NHL的发生发展,但与P53蛋白表达无关.

  • Yes相关蛋白1与肿瘤相关性的研究进展

    作者:张宁;王玉;王智勇

    转录辅激活因子Yes相关蛋白1(YAP1)作为Hippo信号通路下游的主要效应因子,在调控器官大小、促进组织再生和维持干细胞自我更新等方面发挥着重要作用.随着对YAP1研究的深入,发现YAP1在多种肿瘤组织中呈高表达状态,并可促进肿瘤的增殖、侵袭和转移.因此,YAP1有望成为肿瘤早期诊断的分子标志物及肿瘤治疗的潜在靶点.本文就YAP1的结构、生物学功能及其与肿瘤的相关性予以综述.

  • Yes相关蛋白1在血管紧张素Ⅱ诱导的大鼠肺纤维化中的作用及其机制

    作者:潘妙霞;郑伯俊;孙娜娜;郑泽茂;阳倩捷;孟莹

    目的 探讨Yes相关蛋白1(Yap1)在血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导大鼠肺纤维化中的作用及其机制.方法 体内实验将18只Wistar大鼠按随机数字表法分成对照组、博来霉素(BLM)组、BLM+ AngⅡ组各6只;造模后28 d后取肺组织行HE、Masson染色及Yap1免疫组化评价.体外分离培养原代肺成纤维细胞,予10-7 mmol/L AngⅡ或AngⅡ拮抗剂伊贝沙坦作用后,PCR及Western印迹法检测不同时间段Yap1、PDZ结合相关性转录共激活因子(TAZ)、Ⅰ型胶原的mRNA、蛋白相对表达量及Yap1、TAZ核质转位情况.随后设置空载质粒(vector)、vector+AngⅡ、Yap1 RNA干扰(shRNA)、Yap1 shRNA+ AngⅡ四个组,Western印迹法检测Yap1、TAZ、Smad3、Ⅰ型胶原等蛋白相对表达量,CCK-8及EdU实验检测细胞增殖力.结果 BLM组肺纤维化明显,Yap1免疫组化表达增加,BLM+ AngⅡ组肺纤维化程度和Yap1表达均高于BLM组(均P<0.05).体外实验中,AngⅡ不同刺激时间组Yap1、TAZ及Ⅰ型胶原的mRNA及蛋白相对表达量均显著高于0h(均P<0.05);其中,磷酸化Yap1蛋白相对表达量在2h时达峰值.核质转位方面,24h时AngⅡ组胞核中Yap1、TAZ相对表达量显著高于空白组(0.382±0.007比0.031±0.001,1.097±0.030比0.357±0.015),胞质中相对表达量显著低于空白组(0.323±0.058比0.418±0.044,0.858±0.059比1.201±0.015),AngⅡ+伊贝沙坦组胞核中Yap1、TAZ相对表达量显著低于AngⅡ组(0.323±0.058比0.418±0.044,0.858±0.059比1.201 ±0.015),胞质中相对表达量显著高于AngⅡ组(0.598±0.060比0.323±0.058,1.495±0.052比0.858±0.059)(均P<0.05).Yap1 shRNA+ AngⅡ组Yap1、TAZ、Smad3及Ⅰ型胶原蛋白相对表达量均显著低于vector+ AngⅡ组(均P<0.05).vector+ AngⅡ组吸光度、EdU阳性细胞百分比均显著高于vector组,Yap1 shRNA+ AngⅡ组吸光度、EdU阳性细胞百分比均显著低于vector+ AngⅡ组(均P<0.05).结论 AngⅡ通过活化Yap1促进原代肺成纤维细胞增殖及Ⅰ型胶原合成,进而诱导大鼠肺纤维化.

  • Yap1在非小细胞肺癌发生发展及治疗中的作用

    作者:关勇

    Yes相关蛋白1(yes-associated protein,Yap1)是Hippo通路的主要效应因子,在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer, NSCLC)中,其与高分级、淋巴结转移、病理分期晚、预后差等密切相关.Yap1促进NSCLC的增殖、侵袭及转移,促进了NSCLC肿瘤干细胞的更新及血管拟态,降低了NSCLC对化疗、放疗、表皮生长因子受体-酪氨酸激酶抑制剂(epidermal grouth factor recep-tor-tyrosine kinase inhibitors,EGFR-TKIs)的敏感性.同时,Yap1与抗程序性细胞死亡因子1(programmed cell death 1,PD-1)的关系提示了其在NSCLC免疫治疗中发挥一定作用.临床前研究显示,应用Yap1抑制剂可抑制NSCLC细胞增殖,减少干细胞活性,恢复药物敏感性.本文对上述问题进行综述,并探讨Yap1作为治疗靶点的重要性和必要性.

  • 非小细胞肺癌组织中YAP1和FGFR1蛋白表达水平及临床意义

    作者:李炯;苏立;李航

    目的 探讨非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)组织中Yes相关蛋白1(yes-associated protein 1,YAP1)和成纤维细胞生长因子受体1(fibroblast growth factor receptor 1,FGFR1)蛋白表达水平及临床意义.方法 选取确诊NSCLC患者120例,并选取其中的29例癌旁组织作为对照,用免疫组织化学法检测YAP1和FGFR1的表达水平,并分析其与NSCLC患者病理特征及预后的相关性.结果 YAP1和FGFR1在NSCLC组织中的阳性率分别为41.67%和43.33%,在癌旁正常组织中的阳性率均为13.79%,YAP1和FGFR1在NSCLC组织中的阳性率均高于癌旁正常组织,差异均有统计学意义(P<0.05);YAP1和FGFR1表达水平与年龄和性别相关性不明显,差异均无统计学意义(P>0.05);与吸烟、病理分型、TNM分期、T分期、N分期、M分期、肿瘤直径相关,差异均有统计学意义(P<0.05);YAP1和FGFR1表达水平阴性组3年生存率及生存期均明显高于YAP1和FGFR1表达水平阳性组,差异均有统计学意义(P<0.05).结论 YAP1和FGFR1蛋白表达水平在NSCLC组织中的表达量高于癌旁正常组织,与NSCLC的严重程度密切相关,YAP1和FGFR1蛋白表达水平在NSCLC的发生发展过程中起促进作用,阴性表达能获得较好的预后,二者的表达可为NSCLC的诊断及预后提供判断依据.

  • DNA损伤关卡蛋白1和Yes相关蛋白1在卵巢癌患者中的表达及与卵巢癌患者预后的相关性

    作者:高洁凡

    目的 探讨DNA损伤关卡蛋白1(MDC1)和Yes (YAP1)相关蛋白1在卵巢癌患者中的表达水平及与卵巢癌患者预后的相关性.方法 选取2011年5月-2016年9月于沧州市中心医院妇产科确诊为卵巢癌的351例患者为研究对象.对351例卵巢癌患者石蜡组织切片进行免疫组化检测,分析MDC1与YAP1免疫组化结果和卵巢癌患者临床病理学因素的相关性及与患者预后的关系.结果 MDC1和YAP1在卵巢癌细胞的细胞核和细胞浆中均有表达,但主要集中在细胞核中.MDC1核表达水平与年龄、血清CA125水平相关,与其他临床病理学因素无关;YAP1核表达水平与临床病理学因素均无关.Kaplan-Meier生存曲线显示:MDC1核高表达组较MDC1核低表达组预后差(P=0.000).YAH核高表达组较YAH核低表达组预后差(P=0.000).结论 MDC1与YAP1的表达水平与卵巢癌预后相关,MDC1与YAP1高表达提示预后较差.

  • 沉默Yes相关蛋白1对人非小细胞肺癌细胞增殖和侵袭的影响

    作者:蒋庚西;李春光;赵铁军;李白翎;张冠鑫;陈和忠

    目的 研究Yes相关蛋白1(YAP1)在非小细胞肺癌细胞增殖、细胞周期、迁移、侵袭中的作用.方法 通过慢病毒介导的小干扰RNA靶向抑制人非小细胞肺癌细胞株A549中YAP1基因的表达,采用CCK-8法、流式细胞术分别检测沉默YAP1对A549细胞增殖及凋亡周期的影响,Transwell实验观察沉默YAP1对A549细胞迁移、侵袭能力的影响.结果 沉默YAP1后,A549细胞YAP1 mRNA和蛋白表达均下调(P<0.01),CCK-8实验结果显示沉默YAP1抑制A549的增殖、增加G0/G期的细胞比例(P<0.01),Transwell实验结果示沉默YAP1抑制A549细胞的迁移、侵袭(P<0.01).结论 沉默YAP1基因对非小细胞肺癌细胞的恶性生物学特征具有抑制作用,YAP1可能成为肺癌治疗的潜在靶标.

  • 卵巢上皮性癌YAP1和SOX2的表达及其临床意义

    作者:倪晓鸽;杨佩芳

    目的:检测卵巢上皮性癌中Yes相关蛋白1(Yes-associated protein1,YAP1)和Y染色体性别决定区相关的高迁移率族盒蛋白2(sex-determing region of Y chromosome related high mobility group box 2,SOX2)的表达及意义。方法:选取86例卵巢上皮性癌组织和20例行卵巢活检的正常卵巢组织(少数局灶伴良性上皮性囊肿),采用免疫组织化学法检测YAP1和SOX2的表达;记录并统计86例卵巢癌患者的生存时间、肿瘤相关的临床病理参数,分析其与YAP1高表达的关系;建立SOX2稳定转染的卵巢上皮癌细胞株,免疫印迹法检测SOX2及YAP1的表达,划痕实验检测SOX2过表达细胞的迁移能力。结果:卵巢上皮性癌中YAP1和SOX2的高表达率明显高于正常卵巢组织(P均<0.01);YAP1高表达患者生存时间明显短于低表达者(P<0.01);卵巢上皮性癌组织中YAP1高表达与年龄无关,但与化疗耐药、肿瘤转移、FIGO分期、组织分化相关。YAP1和SOX2表达与卵巢上皮性癌相关,且两者表达呈正相关(r=0.635,P<0.01)。与对照组比较,SOX2过表达细胞中YAP1蛋白表达明显增加(t=6.304,P<0.01),细胞迁移能力明显提高(t=11.77,P<0.01)。结论:YAP1和SOX2在卵巢上皮性癌中呈高表达,且与卵巢上皮性癌发生发展相关。

  • 不同病理类型子宫内膜组织中β-catenin、YAP-1、Survivin 表达观察

    作者:荆丽红;严鹏;高玉彤

    目的:观察不同病理类型子宫内膜组织中β-链蛋白(β-catenin)、Yes相关蛋白1( YAP-1)和生存素( Sur-vivin)的表达变化,并探讨三者与子宫内膜样腺癌发病的关系。方法采用免疫组化法分别检测增殖期、单纯性增生、复杂性增生子宫内膜组织及子宫内膜样腺癌组织中的β-catenin、YAP-1、Survivin。结果β-catenin、YAP-1、Sur-vivin在增殖期、单纯性增生、复杂性增生子宫内膜组织及子宫内膜样腺癌组织中的阳性表达依次增多( P均<0.05);β-catenin在高分化、中分化、低分化子宫内膜样腺癌组织中的阳性表达依次减少(P均<0.05)。子宫内膜样腺癌组织中β-catenin与YAP-1、YAP-1与Survivin阳性表达均呈正相关关系( r 分别为0.378、0.700, P均<0.05)。结论子宫内膜样腺癌组织中β-catenin、YAP-1、Survivin阳性表达增高,三者可能协同参与了子宫内膜样腺癌的发病。

  • 核因子-κB抑制物激酶ε促进人脑胶质母细胞瘤恶性进展的实验研究

    作者:郭彩丽;郭高超;黄强;张振中

    目的 探讨核因子-κB抑制物激酶 ε(IKKε)通过IKKε-Yes相关蛋白1(Yap1)-miR-Let-7b/i途径促进人脑胶质母细胞瘤恶性进展的具体作用机制.方法 构建IKKε 短发夹核糖核酸(shRNA)慢病毒及YAP1小干扰RNA(siRNA).以IKKεshRNA慢病毒转染U87-MG细胞,下调细胞中IKKε的表达水平.通过RT-PCR及Western blot检测细胞中IKKε、YAP1及miR-Let-7b/i的表达;通过Transwell法检测细胞迁移和侵袭能力的变化.以YAP1 siRNA转染U87-MG细胞株,下调细胞中YAP1的表达水平.通过RT-PCR及Western blot检测细胞中YAP1及miR-Let-7b/i的表达.结果 与对照组和无义序列组相比较,转染IKKεshRNA组IKKε蛋白及mRNA水平明显降低;YAP1蛋白水平明显降低;miR-Let-7b/i水平明显升高;穿过小室细胞数明显降低(P均<0.05).与对照组和无义序列组相比较,转染YAP1 siRNA组YAP1蛋白及mR-NA水平明显降低;miR-Let-7b/i水平明显升高(P均<0.05).结论 IKKε 可以通过IKKε-YAP1-miR-Let-7b/i途径促进人脑胶质母细胞瘤恶性进展,有望为人胶质母细胞瘤的治疗提供新的治疗策略.

  • Yes相关蛋白1调控U87MG胶质瘤细胞株的细胞周期

    作者:宫崧峰;王新军;王晓彬;文燕;丁建军;蒋太鹏;李维平;高永中

    目的 观察Hippo信号通路下游关键因子Yes相关蛋白1(YAP1)对胶质瘤细胞株U87MG细胞增殖周期的影响.方法 使用YAP1特异性小干扰RNA(siRNA)敲低U87MG胶质瘤细胞株YAP的表达,实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)鉴定U87MG胶质瘤细胞中YAP1是否已被敲低;采用RT-qPCR方法分别检测干扰24、48 h后YAP1、细胞核增殖抗原(Ki-67)、c-Myc、血管内皮生长因子(VEGF)、细胞周期蛋白(Cyclin) D1、Cyclin E和p73 mRNA的表达变化.结果 3对siRNA寡核苷酸序列对YAP1都有干扰,第1对siRNA寡核苷酸序列对YAP1有较好的干扰效果,干扰效率可达90%以上,P=0.044;以1.0为参照,结果显示,YAP1 (0.213),Ki-67 (0.365),c-Myc (0.618),VEGF(0.534),Cyclin D1 (0.540),Cyclin E (0.494),p73(0.314)在24h出现不同程度下降,在48 h基因的转录水平明显提高;同时可以发现,随着YAP1 (0.810)干扰的恢复,Ki-67(1.051),c-Myc(1.498),VEGF(1.057),Cyclin D1(1.598),Cyelin E(0.897),p73(1.110)的活性明显增高,P =0.007.结论 YAP1调控胶质瘤细胞株U87MG细胞增殖周期,干扰YAP1蛋白后,能阻止细胞增殖于细胞任一周期.

  • 干扰Yes相关蛋白1表达抑制U87MG胶质瘤细胞的迁移

    作者:王新军;王晓彬;宫崧峰;贾军;丁建军;熊博韬;蒋太鹏;董广宇;吴春波

    目的 观察Hippo信号通路下游关键因子Yes相关蛋白1(YAP1)对胶质瘤细胞株U87MG细胞迁移的影响.方法 用YAP特异性小干扰RNA(siRNA)敲低U87MG胶质瘤细胞株YAP的表达,实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)鉴定U87MG胶质瘤细胞中YAP1被敲低,通过Blank、NC、YAP1干扰组3组对比,通过细胞划痕实验验证YAP1在胶质瘤细胞迁移中的作用.结果 对照发现所选YAP1 siRNA寡核苷酸序列对YAP1干扰效果显著,干扰效率超过90%.利用siRNA干扰YAP1表达后胶质瘤细胞的迁移明显下降,定量分析显示YAP1干扰表达的U87MG细胞迁移率相对于对照细胞差异明显.结论 YAP1参于U87MG胶质瘤细胞的调控,干扰YAP1表达抑制U87MG胶质瘤细胞的迁移.

  • 胶质瘤恶性程度与Hippo-Yes相关蛋白信号通路的关系

    作者:王新军;宫崧峰;丁建军;文燕;王以国;蒋太鹏;高永中;李维平

    目的 Hippo信号通路中的关键蛋白Yes相关蛋白1(YAP1)在脑胶质瘤标本中高表达,及其与胶质瘤的恶性程度关系.方法 选取63例脑胶质瘤患者的病理切片,采用免疫组织化学的方法,不同级别的胶质瘤切片的染色程度进行对比,应用SPSS 22.0进行统计分析.结果 病理切片显示YAP1在Ⅱ级胶质瘤中表达率约93%,表达区间5% ~ 15%;Ⅲ级胶质瘤中表达率约100%,表达区间15%~ 30%;Ⅳ级胶质瘤中表达率约100%,表达区间>30%.细胞核增殖抗原(Ki-67)在Ⅱ级胶质瘤中表达率约93%,表达区间2%~5%;Ⅲ级胶质瘤中表达率约100%,表达区间10%~ 15%;Ⅳ级胶质瘤中表达率约100%,表达区间>20%.Spearman相关系数分析肿瘤等级、YAP1与Ki-67表达之间差异有统计学意义(P<0.01).结论 YAP1及Ki-67在胶质瘤标本中高表达,YAP1、Ki-67与胶质瘤的恶性程度有明显相关;胶质瘤的恶性程度越高,YAP1及Ki-67在显微镜下染色值明显增高.Spearman相关系数分析肿瘤等级、YAP1与Ki-67表达之间明显相关.

  • Yes相关蛋白1短发卡RNA质粒构建及其对膀胱癌T24细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响

    作者:董锐;王行环

    目的 用RNA干扰技术阻断人膀胱癌T24细胞中Yes相关蛋白1(YAP1)基因的表达,观察细胞增殖、迁移和侵袭能力的变化.方法 检测人膀胱癌T24细胞中YAP1表达水平;采用真核转录质粒pGreenPuro构建针对YAP1基因的重组转染质粒.将4种不同序列的YAP1短发卡RNA(shRNA)质粒以及含与YAP1无关序列的对照质粒(YAP1 shRNA NC)分别转染T24细胞,48 h后行实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测其YAP1表达水平,筛选YAP1基因沉默效果好的shRNA质粒干扰T24细胞;使用噻唑蓝(MTT)检测shRNA质粒对T24细胞增殖能力的影响、划痕实验检测其对迁移能力的影响、Transwell小室体外侵袭实验检测侵袭能力的影响.结果 RT-qPCR检测T24细胞阳性表达YAP1基因,用Lipofectamine 2000成功将不同YAP1 shRNA质粒转染入T24细胞;RT-qPCR检测发现YAP1 shRNA3质粒沉默T24细胞YAP1表达效果显著(抑制率为75.5%),随后用YAP1 shRNA3质粒干扰T24细胞,MTT检测结果显示转染YAP1 shRNA3质粒组T24细胞增殖能力小于空白对照组(干扰组增殖率为空白对照组的85.9%,P=0.000);转染YAP1 shRNA3的T24细胞迁移能力较空白对照组低[24h平均划痕宽度分别为(218.50±3.50) μm和(86.5±4.50) μm,P=0.003];转染YAP1 shRNA3的T24细胞侵袭能力较空白对照组弱(穿透Transwell小室的平均细胞数62∶ 345,P=0.000).结论 用RNA靶向干扰能明显降低人膀胱癌T24细胞内的YAP1基因表达,并抑制肿瘤细胞的增殖、迁移和侵袭能力.

  • 上调Yes相关蛋白1表达抑制动脉夹层血管平滑肌细胞凋亡的研究

    作者:刘涛;徐娟;张立;刘华;李亦舒;张群献;张军;郭家龙

    目的 观察Yes相关蛋白1(YAP1)的表达在血管平滑肌细胞凋亡和主动脉夹层(AD)发病中的作用.方法 建立AD大鼠模型,比较AD模型大鼠血管组织和正常对照大鼠血管组织中细胞凋亡、YAP1的表达.体外培养大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞(VSMC),分成4组:Control组、循环拉伸应力加载(Cyclic stretch)组、Cyclic stretch+pIRES2-blank组、Cyclic stretch+ pIRES2-YAP1组,检测细胞凋亡率和YAP1、生存素(Survivin)表达.AD模型大鼠分成3组:单纯AD组、Ad-NC注射组、Ad-YAP1注射组,比较YAP1、Survivin的表达,检测血管内细胞凋亡,比较AD形成率和AD直径、长度.结果 单纯AD模型组AD形成率为43.1%,AD直径为(6.21±1.13) mm,AD长度为(9.25±1.77) mm;Ad-NC注射组AD形成率为42.3%,AD直径为(6.35±1.22) mm,AD长度为(9.11±1.64)mm;Ad-YAP1注射组AD形成率为28.5%,AD直径为(3.72±0.43) mm,AD长度为(6.42±1.16) mm.与对照组比较,模型大鼠AD血管组织内细胞凋亡明显增加,YAP1的表达明显降低.Cyclic stretch明显诱导VSMC细胞凋亡,过表达YAP1明显上调Survivin的表达,拮抗Cyclic stretch诱导的细胞凋亡.尾静脉注射Ad-YAP1明显上调AD模型大鼠血管组织内YAP1、Survivin的表达,使细胞凋亡明显减少,AD形成率和AD直径、长度也明显降低.结论 YAP1的表达降低在促进VSMC细胞凋亡和AD发病中起作用,上调YAP1的表达则可抑制VSMC细胞凋亡和AD的形成.

  • 微小RNA-920靶向调控Yes相关蛋白1增强食管癌的化疗敏感

    作者:徐岗;王正;黄中

    目的 探讨Yes相关蛋白1(YAP1)在食管癌组织中的表达及其与化疗耐受的关系,以及微小RNA(miRNA,miR)-920在YAP1表达调控中的作用.方法 免疫组织化学检测YAP1在30例食管癌组织及其正常组织中的表达,小干扰RNA(siRNA)干扰技术结合聚合酶链反应(PCR)及四唑氮化合物(MTS)实验在食管癌细胞株中检测YAP1表达与化疗敏感性的关系.流式细胞仪分选食管癌肿瘤干细胞群,结合PCR及Western blot方法检测YAP1在肿瘤干细胞的表达.siRNA干扰技术结合干细胞微球体培养检测YAP1在肿瘤干细胞活性维持中的作用.运用生物信息学软件预测靶向YAP1的miRNAs,同时利用miRNA定量PCR确定候选miRNA的表达差异.转染miRNA模拟物结合Western blot实验验证候选miRNA对YAP1靶向调节作用.后利用四唑氮化合物(MTS)方法检测miR-920在食管癌化疗中的作用.结果 YAP1在食管癌癌组织中表达(5.300 ±0.559)明显高于食管正常组织(2.200±0.327,P=0.001),干扰YAP1可增强食管癌化疗敏感性(DDP组:P=0.003,PTX组:P=0.000),YAP1在食管癌肿瘤干细胞群中表达(5.667±0.636)明显高于非干细胞群(1.267±0.176,P=0.002),miR-920在食管癌中表达降低与YAP1表达呈负相关.结论 miR-920可靶向抑制YAP1表达,增强食管癌的化疗敏感性.

  • Yes相关蛋白1和内质网蛋白29在结直肠癌组织的表达及临床意义

    作者:黄哲;蔡朋株;许庆文;林琳;徐飞鹏

    目的 探讨检测Yes相关蛋白1(YAP1)和内质网蛋白29(ERp29)在结直肠癌组织中的表达水平,以及两者与结直肠癌临床病理因素的关系.方法 应用免疫组织化学法检测85例结直肠癌组织和癌旁组织中YAP1和ERp29表达,分析两者与结直肠癌各临床病理因素的关系.结果 YAP1在结直肠癌组织中的阳性表达率为61.18% (52/85),明显高于癌旁组织中YAP1阳性表达率17.65%(15/85),两者差异有统计学意义(t=43.731,P<0.01),YAP1表达水平与与结直肠癌TNM分期、淋巴结转移呈明显相关(分别为t=6.632、5.273,P<0.05);ERp29在结直肠癌组织中的阳性表达率为42.35%(36/85),明显低高于癌旁组织中ERp29阳性表达率95.29%(81/85),两者差异有统计学意义(t =55.515,P<0.01),ERp29表达水平与结直肠癌TNM分期、浸润深度、淋巴结转移呈明显相关(分别为t=5.058、5.472、5.908,P<0.05).结论 YAP1和ERp29的异常表达与结直肠癌的发生发展有关,检测YAP1和ERp29表达水平有助于判断结直肠癌浸润转移潜能及评估结直肠癌患者的预后.

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