细胞与分子免疫学杂志
Chinese Journal of Cellular and Molecular Immunology 세포여분자면역학잡지
- 主管单位： 中国免疫学会；第四军医大学
- 主办单位： 陕西省免疫学会,中国免疫学会
- 影响因子： 0.81
- 审稿时间： 1-3个月
- 国际刊号： 1007-8738
- 国内刊号： 61-1304/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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天麻素对乙醇诱导肝细胞株L02细胞损伤的影响
目的:探讨天麻素对乙醇诱导肝细胞株L02损伤的影响.方法:将人肝细胞株L02培养,加入不同浓度的乙醇,采用MTT比色法确定乙醇作用的浓度.用流式细胞仪测定细胞活性氧簇(ROS)及线粒体膜电位的改变;采用反相高效液相色谱(RP-HPLC)分析法检测细胞ATP含量.结果:乙醇(25 mL/L)作用36 h可损伤肝细胞,细胞内ROS的水平明显增加;而细胞线粒体膜电位及肝细胞中ATP的含量则显著降低(P<0.01).天麻素具有减轻细胞损伤的作用,并可降低损伤的肝细胞内ROS的含量,增加细胞线粒体膜电位和ATP的水平.结论:天麻素可抑制乙醇诱导的肝细胞损伤及脂质过氧化反应,改善线粒体功能,增加能量合成,发挥保护肝细胞的作用.
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葡萄球菌分离株肠毒素sek基因的分布及其蛋白的表达纯化
目的:了解国内葡萄球菌分离株携带肠毒素sek基因的分布情况,获得纯化的重组SEK蛋白并初步了解其生物学活性.方法:应用PCR方法检测葡萄球菌属122株分离株sek分布,克隆了葡萄球菌PTJ-2分离株的sek成熟肽基因,构建了重组质粒pGEX-6P-sek、pET28一sek重组表达载体,经GST亲和层析、镍螯合层析,制备纯化的重组蛋白GST-SEK、P28-SEK.通过Western Not检测重组蛋白的免疫原性及其诱导小鼠脾淋巴细胞凋亡的能力.结果:122株葡萄球菌属分离株sek基因的检出率为23%(28/122);PTJ-2分离株与已报道sek基因的同源性在97.62%以上.获得2种具有良好免疫原性,表达量占菌体蛋白的24%、17%的可溶性重组蛋白.结论:除已报道的金黄色葡萄球菌外,国内非致病性葡萄球菌分离株也可携带sek基因.PTJ-2国内分离株SEK蛋白与已报道同型肠毒素存在3个氨基酸变异.重组的SEK蛋白可诱导小鼠脾淋巴细胞凋亡.
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哮喘大鼠淋巴液与血液CD4~+ CD25~+ Treg及IL-10、TGF-β水平比较和地塞米松干预的影响
目的:观察CD4~+ CD25~+ Foxp3~+调节性T细胞、IL-10、TGF-β在哮喘大鼠淋巴液与血液中的水平,以及地塞米松干预的影响,探讨其与哮喘发病的关系.方法:建立大鼠哮喘模型,收集激发后0、24、48 h淋巴液、血液中淋巴细胞,采用流式细胞术(FCM)检测淋巴液及血液中CD4~+ CD25~+ Foxp3~+ T细胞百分率;采用ELISA方法检测血浆及淋巴液中IL-10、TGF-β水平.结果:哮喘组淋巴液和血液的CD4~+ CD25~+ Foxp3~+ T细胞百分率水平、血浆IL-10和TGF-β浓度在各时间点均低于对照组和治疗组(P<0.05);哮喘组淋巴液中CD4~+ CD25~+ Foxp3~+ T细胞百分率水平、IL-10浓度在不同时间点均高于血液水平(P<0.05),而TGF-β浓度则低于血液水平(P<0.05);治疗组淋巴液和血液中CD4~+ CD25~+ Foxp3~+ T细胞百分率水平、血浆IL-10和TGF-β浓度与对照组相比无显著性差异(P>0.05).结论:哮喘大鼠淋巴液中存在CD4~+ CD25~+ Foxp3~+调节性T细胞数量以及功能失调,且淋巴液中CD4~+ CD25~+ Foxp3~+调节性T细胞水平显著高于其血液水平,地塞米松可能通过影响CD4~+ CD25~+ Foxp3~+调节性T细胞数量以及功能而发挥治疗作用.
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抑制核因子κB与妊娠糖尿病大鼠子宫胰岛素抵抗的关系
目的:观察妊娠糖尿病(GDM)大鼠子宫组织中,核因子-κB(NF-κB)及葡萄糖转运蛋白-4(GLUT-4)的表达,探讨GDM子宫胰岛素抵抗与抑制NF-κB表达的关系.方法:将30只SD孕鼠随机分为正常妊娠对照(NC)组、妊娠糖尿病(GDM)组和PDTC干预组,每组10只.采用链脲霉素(STZ)腹腔注射建立大鼠CDM模型.PDTC干预组大鼠在建模后每日腹腔注射PDTC(40 mg/kg).大鼠分娩前及妊娠20 d处死留取子宫标本,观察子宫组织的病理变化.用免疫组化染色法及Western blot法检测子宫组织中GLUT-4与NF-κB的表达变化.结果:CDM组NF-κB的表达明显高于NC组(P<0.01);PDTC干预组NF-κB的表达明显降低(P<0.01).GDM组GLUT-4的表达明显低于NC组(P<0.01);PDTC干预组GLUT-4的表达与GDM组比较明显升高(P<0.01).结论:抑制核因子κB的活性能使CDM大鼠子宫组织中GLUT-4的表达升高,提示GDM大鼠子宫胰岛素抵抗的发生可能与核因子κB活化介导的GLUT-4表达下调有关.
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酪氨酸磷酸化抑制剂AG490抑制Jurkat T细胞增殖
目的:通过AG490对Jurkat T细胞活化、增殖、周期、凋亡及ICBP90蛋白表达的影响.探讨阻断JAK/STAT信号通路以抑制Jurkat T细胞生长的可能性及其初步机制.方法:以Jurkat T细胞为模型,应用双荧光抗体标记结合流式细胞仪检测AG490对Jurkat T细胞表面分子CD69和CD25表达的影响;利用噻唑蓝(MTT)比色法观察AG490对Jurkat T细胞增殖的影响;采用碘化丙锭(PI)染色检测AG490对Jurkat T细胞周期的影响;应用Annexin V-FITC和PI双染色检测AG490对Jurkat T细胞凋亡的影响;Western blot检测AG490对Jurkat T细胞中ICBP90蛋白表达的影响以确定其与AG490抑制Jurkat T细胞增殖的关系.结果:随着AG490浓度从1 mmol/L增至30 mmol/L,细胞停滞于G0/G1期,阻止其进入S期和G2/M期,导致Jurkat T细胞ICBP90蛋白的表达显著降低;AG490对细胞的抑制作用于24 h为明显,抑制率可达27.37%,呈剂量依赖关系;AG490不能明显抑制Jurkat T细胞的活化或促进其凋亡.结论:AG490能明显抑制Jurkat T细胞的生长,其抑制作用可能通过下调Jurkat T细胞ICBP90蛋白的表达与细胞周期阻滞有关,而不是通过促进细胞凋亡而实现.
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人PD-1△ex3基因的克隆、表达及其生物学活性的鉴定
目的:构建表达人PD-1△ex3(△PD-1)基因的真核表达载体,检测其表达和生物学活性.方法:通过RT-PCR的方法获得人PD-1全长(PD-1)基因,设计特异性引物,PCR方法获得PD-1△ex3基因的2个cDNA片段,通过重组PCR的方法获得△PD-1基因,将目的片段双酶切后与pIRES2-EGFP真核表达载体连接,构建重组真核表达载体pIRES2-EGFP/PD-1和pIRES2-EGFP/△PD-1并进行鉴定;脂质体转染法将重组载体导入293T细胞;流式细胞术(FCM)检测转染细胞膜表面PD-1的表达;Western blot法检测培养上清中可溶性PD-1(sPD-1)的表达;间接免疫荧光实验分析△PD-1蛋白与PD-1两个配体PD-L1和PD-L2的结合.结果:酶切和测序结果均证实插入的基因序列正确,成功构建两个真核表达载体;FCM分析和Western blot检测结果表明,PD-1转染细胞膜表面高表达PD-1蛋白,细胞培养上清中无sPD-1蛋白,而△PD-1转染细胞膜表面不表达PD-1蛋白,细胞培养上清中则有大量sPD-1;间接免疫荧光实验结果表明,△PD-1蛋白能够与PD-1两种配体产生特异性结合.结论:成功进行PD-1△ex3基因的真核表达,证实PD-1△ex3基因编码sPD-1蛋白,该蛋白具有良好的生物学活性,为进一步研究PD-1△ex3在PD-1/PD-L信号通路中的生物学作用提供了有价值的物质基础.
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幽门螺杆菌alpA基因在乳酸菌中的表达及免疫原性分析
目的:在乳酸菌中表达幽门螺杆菌(Hp)黏附素alpA基因,口服免疫小鼠后检测其免疫原性.方法:PCR方法从基因组中扩增alpA基因,将其克隆至表达载体pNICE:sec,将重组质粒转化乳酸菌NZ9000株,筛选鉴定阳性菌落,诱导表达的alpA蛋白用SDS-PAGE和Western blot进行鉴定.将雌性ICR(CV级)小鼠随机分为4组,分别用PBS、携带空质粒的乳酸菌、携带pNICE:sec-alpA的乳酸菌、灭活的Hp灌胃.免疫7次后检测其特异性IgG和IgA的产生.结果:扩增alpA基因并构建了重组原核表达质粒pNICE:sec-alpA,转化乳酸菌NZ9000后经nisin诱导可表达M_r约56 000的重组蛋白,表达量约占菌体总蛋白量的9.6%,Western blot分析其能与幽门螺杆菌抗血清特异性反应,具有良好的免疫原性.携带pNICE:sec-alpA质粒的乳酸菌刺激产生的IgG水平明显高于携带空质粒组,与灭活Hp组没有明显的差异,但其刺激产生的IgA水平明显高于其他组(P<0.05).结论:表达alpA蛋白的乳酸菌口服免疫小鼠后,能够刺激小鼠产生特异的IgG和IgA,可作为幽门螺杆菌口服疫苗候选抗原.为乳酸菌作为抗原递送载体的研究和Hp口服疫苗的开发提供一定的实验基础.
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人EPO基因重组腺病毒载体的构建及表达
目的:制备表达人促红细胞生成素基因(hEPO)的重组腺病毒.方法:将hEPO基因亚克隆到穿梭质粒pAdTrack-CMV上,采用细菌内同源重组"两步转化法"构建携带hEPO基因的重组腺病毒载体.获得的重组腺病毒载体线性化后转染HEK293细胞,包装、扩增出重组腺病毒,氯化铯梯度离心法进行纯化,PCR和电镜负染鉴定重组腺病毒,荧光显微镜观察绿色荧光蛋白(GFP)的表达并检测重组腺病毒的滴度.继而用纯化的重组腺病毒感染HeLa细胞,测定转染效率,以Western blot检测hEPO蛋白的表达.结果:成功构建了携带hEPO基因的重组腺病毒载体pAd-hEPO,PCR、透射电镜和绿色荧光鉴定证实病毒包装成功,并且具有感染力,病毒的滴度可达1.8 × 10~(10) pfu/mL.Western blot检测表明RAd-hEPO感染的HeLa细胞中hEPO基因能够有效表达.结论:制备的BAd-hEPO可成功表达hEPO基因,为后续开展BAd-hEPO治疗缺血性心脏病的研究奠定基础.
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DO11.10转基因小鼠脊髓损伤后的运动功能恢复
目的:通过比较两种小鼠-DO11.10和BALB/c小鼠脊髓损伤后不同的运动功能恢复程度和损伤区的形态学变化来分析T淋巴细胞对脊髓损伤修复的影响.方法:建立小鼠脊髓重度夹伤模型,H&E染色,GFAP、CD11b和淋巴细胞免疫组织化学实验分析损伤14 d、21 d后损伤区的变化;在损伤后0 d、7 d、14 d和21 d进行Basso-Beattie-Bresnahan(BBB)运动评分来评价小鼠运动功能恢复情况.结果:脊髓损伤后21 d,BALB/c小鼠产生了较厚的胶质瘢痕并伴有明显的固缩现象;而DO11.10小鼠中只观察到稀薄的胶质瘢痕形成并没出现明显的固缩.DO11.10小鼠脊髓损伤后14 d,巨噬/小胶质细胞浸润较BALB/c小鼠明显增加.脊髓损伤后21 d,DO11.10小鼠脊髓损伤区中的T淋巴细胞较BALB/c小鼠明显减少.BBB运动评分显示,在损伤后21 d内DO11.10小鼠较BALB/c小鼠有显著的运动功能恢复.结论:脊髓损伤后21 d内,针对神经组织抗原的自身反应性T淋巴细胞的浸润和存在不利于脊髓损伤后的运动功能恢复.
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葛根素对脂多糖诱导N9小胶质细胞激活的抑制作用
目的:探索葛根素对脂多糖(LPS)诱导N9小胶质细胞激活的抑制作用,为其在神经退行性疾病的防治方面提供依据.方法:用MTT法检测脂多糖和葛根素对小胶质细胞的细胞毒性作用;用流式细胞术(FCM)检测葛根素对LPS诱导N9细胞内活性氧(ROS)产生的抑制作用;分别用Griess法和FCM检测细胞培养液和细胞内一氧化氮(NO)含量;用HE染色法观察LPS激活N9细胞,及葛根素恢复细胞静息状态下细胞的形态;以FCM检测细胞凋亡和细胞周期.结果:葛根素(100～200 μmol/L)能使LPS激活的N9细胞,从阿米巴样的活化形状明显恢复至静息态的圆形;LPS激活的N9细胞能产生大量的NO到培养液中,葛根素(50～200 μmol/L)能使NO的产生减少,其中,高浓度组(200 μmol/L)与LPS模型组相比,NO从23.45±0.19 μmol/L降至12.43±0.11 μmol/L(P<0.01).胞内ROS检测表明:葛根素(200 μmol/L)同样明显降低ROS的产生.葛根素对激活的N9细胞胞内ROS的产生具有抑制作用,高浓度组(200 μmol/L)能使其恢复至对照组水平;此外,葛根素能显著抑制LPS诱导的细胞凋亡,并恢复LPS对N9细胞G_0/G_1期的阻滞作用.结论:葛根素具有抑制小胶质细胞激活的作用.
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Survivin在小鼠髓源性树突状细胞不同分化阶段中的差异性表达
目的:探讨不同分化阶段的树突状细胞(DC)survivin的差异性表达.方法:制备骨髓细胞作为DC前体,以rmGM-CSF联合rmIL-4对前体细胞诱导培养,第5天时添加rmTNF-α继续孵育48h以进一步刺激DC分化成熟.分别收集0、5、7 d的细胞(其中第5天的细胞为添加rmTNF-α前收集),扫描电镜观察DC形态、流式细胞术鉴定DC表型,RT-PCR、Western blot检测不同分化阶段DC survivin的表达.结果:扫描电镜下不同分化阶段的细胞均具有典型DC形态;流式细胞术分析表明,不同成熟阶段的DC均高表达小鼠髓源性DC相对特异性标志CD11c,经rmTNF-α刺激后的DC其细胞表面CD40、CD86、MHC-Ⅱ等分子呈高水平表达;RT-PCR、Western blot检测结果显示,随着DC的分化成熟,survivin mRNA及蛋白的表达水平呈上升趋势.结论:不同诱导条件下,获得的DC survivin表达有差别,随着DC成熟,survivin表达增加.
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IL-17A与自身免疫性疾病发病机制的初步探讨
目的:通过研究系统性红斑狼疮和类风湿关节炎患者血浆IL-17A水平和外周血单核细胞RORrt基因表达状态研究IL-17A与自身免疫性疾病的发病机制的关系.方法:分别选取初发系统性红斑狼疮患者(SLE组)和类风湿关节炎(RA组)患者为研究对象,同年龄的健康体检者为对照组,通过ELISA法检测各组血浆IL-17A水平,荧光实时定量PCR检测外周血单核细胞RORrt基因表达情况.结果:(1)SLE组和RA组的血浆IL-17A水平和RORrt基因表达显著高于正常对照组(P<0.01).(2)SLE与RA组间的比较:IL-17A水平SLE组高于RA组,但无统计学意义;RORrt基因表达SLE组高于RA组,差异有统计学意义(P<0.05).(3)两组患者中均发现血浆IL-17A水平和RORrt基因表达增高相关;多元回归分析显示SLE组血浆IL-17A水平和RORrt基因表达的增高与狼疮活动指数(SLEDAI)相关,RA组血浆IL-17A水平的升高与Hb、ESR、CRP、RORrt基因表达相关.结论:IL-17A和RORrt基因表达增高与系统性红斑狼疮和类风湿关节炎的发生有关,IL-17A的升高参与该类自身免疫性疾病的发生可能与RORrt基因表达的增加有关.
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系统性红斑狼疮患者血清中β抑制蛋白质-1水平及其与疾病活动性的关系
目的:探讨β抑制蛋白质-1(β-arrestin1)在系统性红斑狼疮(SLE)患者血清中的水平及其与疾病活动性的关系.方法:收集临床确诊的31例SLE患者及31例健康体检者的血清.根据SLEDAI评分≥10或<10,将31例SLE患者分为活动期和缓解期,ELISA测定健康对照与31例SLE患者血清中β抑制蛋白质-1(β-arrestin1)的水平,并采用SPSS13.0软件对各组数据进行差异性比较和相关分析.结果:SLE患者血清中β-arrestin1的水平(0.252 μg/L)低于健康人(0.501 μg/L),具有统计学意义(P<0.05);SLE活动期(SLEDAI评分≥10)患者血清中β-arrestin1水平(0.133 μg/L)低于缓解期(SLEDAI评分<10)(0.342 μg/L),亦具有统计学意义(P<0.01);抗核抗体滴度1:80 SLE患者血清中β-arrestin1的水平低于抗核抗体1:40,(0.214μg/L vs 0383 μg/L,P<0.05).结论:血清β-arrestin1水平在SLE患者中明显降低,且与疾病的活动性呈一定程度负相关.
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URG4在肝癌组织中的表达及其与HBx的关系
目的:检测URG4在肝癌组织中的表达及意义.探讨URG4与HBx在肝癌组织表达之间的关系.方法:免疫组化方法检测URG4和HBx在正常组织、肝癌组织及癌旁组织中的表达分布,并分析其表达的意义及表达之间的相关性.结果:URG4在肝癌组织及肝癌细胞系中的阳性表达率分别为48%和54%,而在正常组织中仅22.2%弱表达,其与HBx表达的相关系数分别为0.38和0.45(P<0.05).结论:URG4在肝癌组织及癌旁组织中的表达高于正常组织,且与HBx密切相关.
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海洛因依赖者急性戒断前后IL-1β、TNF-α、ACTH及CORT含量变化的研究
海洛因依赖者存在着严重免疫功能紊乱或损伤,其中以细胞免疫损伤尤甚.我们在之前的流式细胞术分析结果基础上,为进一步探讨海洛因依赖者急性戒断前后血浆IL-1β、TNF-α、ACTH及CORT水平变化及其临床意义,对其血浆进行放射免疫测定,现将结果报告如下.
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鼻腔及鼻窦内翻性乳头状瘤预后与临床病理免疫组织化学参数的相关性
目的:探讨鼻腔及鼻窦内翻性乳头状瘤临床及病理免疫组织化学参数及其与预后的关系.方法:将52例可随访鼻腔及鼻窦内翻性乳头状瘤病例分成良性组、复发组和恶变组.利用免疫组织化学染色技术检测HPV、MMP-9、PCNA在各组中的表达情况.采用组织学观察、多参数统计学分析方法对52例鼻腔及鼻窦内翻性乳头状瘤的临床特点、病理形态及预后的相关性进行研究.结果:①性别、年龄、病程及肿瘤发生范围比较,三组之间差异无统计学意义;②对临近骨质的侵犯、瘤细胞不典型增生程度及核分裂像多少,恶变组与良性组之间存在统计学差异(P<0.01),但复发组与良性组之间差异无统计学意义;③MMP-9、PCNA在良性组、复发组及恶变组中的高表达率逐渐增强;④HPV感染比较,三组之间存在高度显著差异.结论:综合考虑病理组织学参数可预测鼻腔及鼻窦内翻性乳头状瘤的复发;HPV感染、PCNA和MMP-9的表达可作为判断鼻腔及鼻窦内翻性乳头状瘤发展及预后的参考指标.
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尼美舒利提高γδT细胞杀伤胃癌细胞的机制探讨
目的:探讨尼美舒利对人γδT细胞功能影响.方法:按常规方法培养γδT细胞,收集培养第9天的γδT细胞用不同浓度的尼美舒利(分别为0.25、0.5、1、2、4 μmol/L)诱导24 h后收集培养上清液检测细胞因子IFN-γ、TNF-α、IL-12,沉淀细胞流式细胞测定穿孔素、粒酶B和NKG2D,LDH法检测γδT细胞杀伤胃癌细胞活性.结果:经尼美舒利诱导后γδT细胞穿孔素、粒酶B表达量(分别为62.8%和72.7%)明显高于对照组(分别为51.4%和60.9%)P<0.05,尤其尼美舒利浓度在1 μmol/L时显著;经尼美舒利诱导后γδT细胞分泌IFN-γ和INF-α浓度(分别为262.3 ng/L和177.5 ng/L)明显高于对照组(分别为196.1 ng/L和158.5 ng/L)P<0.05;分泌的IL-12浓度与对照组比较无明显差异(P>0.05).γδT细胞杀伤胃癌细胞SGC-7901和BCG-823的活性在1 μmoL/L时高(分别为73%和70%),明显高于对照组(分别为54%和53%)P<0.05.结论:经尼美舒利诱导后γδT细胞的穿孔素、粒酶B含量和γδT细胞杀伤胃癌细胞SGC-7901、BCG-823活性明显高于对照组.其培养上清液中IFN-γ和TNF-α浓度也明显高于对照组.这一结果为临床尼美舒利预防和治疗消化道肿瘤提供了实验依据.
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类风湿性关节炎患者外周血Th17/Treg细胞比率失衡的研究
目的:观察类风湿性关节炎(RA)患者外周血Th17细胞与Foxp3~+ CD4~+ CD25~+调节性T(Treg)细胞的平衡状态与疾病状态的关系,初步阐明Th17/Treg细胞比率失衡在RA发病机制中的作用和意义.方法:流式细胞术(FCM)检测RA患者和健康人外周血中Th17细胞和Foxp3~+ CD4~+ CD25~+ Treg细胞的比率.结果:活动期RA患者外周血CD3~+ CD4~+ T细胞和Th17细胞的比率均明显高于健康对照组(P均<0.05);而Foxp3~+ CD4~+ CD25~+ Treg细胞的比率明显低于健康对照组(P<0.05).随疾病活动性的增加,Th17细胞表达增高(P<0.05);而Foxp3~+ CD4~+ CD25~+ Treg细胞表达降低,但无统计学意义(P>0.05).结论:RA患者外周血T细胞紊乱以CD4~+ T细胞的增加为主,Th17细胞比率的增加和Foxp3~+ CD4~+ CD25~+ Treg细胞比率的降低所致的Th17/Treg细胞比率失衡,可能在RA的发生发展中起重要作用.
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人Fkbp19的多克隆抗体的制备
目的:制备针对人Fkbp19的多克隆抗体,为进一步研究Fkbp19基因的功能奠定基础.方法:利用鉴定正确的重组原核表达载体pET21a-Fkbp19,在大肠杆菌BL21-DE3中诱导表达,应用Ni-NTA亲和层析法获得纯度较高的原核表达蛋白,并免疫家兔制备多克隆抗体,Western blot及免疫荧光的方法检测抗体对乳腺癌细胞中内源性Fkbp19蛋白的识别能力.结果:成功地在大肠杆菌中实现了His-Fkbp19融合蛋白的表达,经纯化后免疫家兔得到了高滴度的多克隆抗体,该抗体可以用Western blot的方法检测内源性Fkbp19蛋白.结论:所制备的多克隆抗体可以用于Fkbp19的Western blot检测.
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人脱嘌呤脱嘧啶核酸内切酶单克隆抗体抗原表位的鉴定及应用
目的:研究鉴定人脱嘌呤脱嘧啶核酸内切酶单克隆抗体(hAPE1 mAb)的抗原表位,并建立定量检测hAPE1的ELISA一步法.方法:设计并合成:LPE1-15肽阵列,鉴定hAPE1 mAb 2-G1和4-F6的抗原表位,应用三维立体结构观察软件Molsoft.ICM-Pro模拟hAPE1 mAb抗原表位的立体结构;采用改良的过碘酸钠法标记抗体,以hAPE1 mAb为捕获抗体和酶标抗体,建立hAPE1的ELISA一步检测法.结果:APE1-15肽阵列检测结果和抗原表位三维结构显示,2-G1 mAb的抗原表位对应为hAPE1天然蛋白氨基酸残基序列的76-90位和109-123位,位于氧化还原区域,为构象型抗原表位;4-F6 mAb的抗原表位对应为hAPE1天然蛋白氨基酸序列的109-147位,位于DNA修复内切酶活性区.ELISA一步法检测hAPE1蛋白的线性范围为8.0～200μg/L,低检测限为2.0μg/L.平均批内变异系数为8.67%,平均批间变异系数为12.45%,平均回收率为105.47%.结论:hAPE1 2-C1 mAb和4-F6 mAb具有不同的抗原表位,成功建立的hAPE1 ELISA一步法为简便、快速、准确检测血清中hAPE1的含量奠定了基础.
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人UNC5CL原核蛋白的表达及多克隆抗体的制备和鉴定
目的:构建UNC5CL基因的原核表达载体,纯化GST-UNC5CL融合蛋白,并以其为抗原免疫家兔,制备抗人UNC5CL多克隆抗体,并鉴定其反应性和特异性.方法:用PCR方法扩增UNC5CL基因(表达其280-518位氨基酸)片段并克隆至pGEX-4T-2原核表达载体中,转化大肠杆菌BL21诱导融合蛋白GST-UNC5CL(aa 280-518)表达;所获得的可溶性蛋白经亲和层析纯化,免疫家兔制备抗血清,再采用ELISA、Western blot和免疫组化的方法检测抗体的效价及特异性.结果:测序证实原核重组质粒构建成功;经IPTG诱导,可表达M_r为52 000的GST-UNC5CL(aa280-518)的融合蛋白;谷胱甘肽亲和层析柱纯化的融合蛋白免疫家兔制备的抗血清经Western blot和免疫组化检测证实可识别目的蛋白.结论:制备了兔抗人UNC5CL的多克隆抗体,且抗体对内源性UNC5CL具有较好的反应性和特异性,为进一步研究UNC5CL的功能奠定了基础.
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人源抗梭曼过渡态类似物(P6)的抗体筛选
目的:从大容量天然噬菌体抗体库中筛选抗梭曼过渡态类似物的人源单链抗体(scFv)并进行鉴定.方法:以膦酸梭曼水解过渡态类似物五配位.羟基膦酸酯,3-羟基-1-对硝基苯基甲膦酸单频哪基醇酯,为半抗原,通过吸附-洗脱-扩增过程从大容量天然噬菌体抗体库中筛选特异性抗体,对其抗原结合活性进行鉴定.结果:经过4轮的筛选,分别获得14个抗梭曼类似物的阳性克隆.经DNA指纹分析,判断所获克隆分别包含4个不同的抗梭曼类似物的scFv基因.结论:利用噬菌体抗体库技术获得了特异性的人源抗梭曼类似物抗体.
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翻译控制肿瘤蛋白TPT1的原核表达、纯化、抗体制备和初步应用
目的:原核表达并纯化翻译控制蛋白TPT1,免疫日本大耳白兔制备其抗体.方法:构建原核表达质粒pRSETA_2-TPT1,转化大肠杆菌BL21(DE3),TPT1蛋白经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达.融合蛋白通过Ni-NTA树脂亲和纯化后免疫兔子制备抗体血清.以间接ELISA法检测抗体效价,Western blot和免疫荧光染色鉴定抗体特异性.结果:在大肠埃希菌中诱导出高水平表达的TPT1融合蛋白,经亲和树脂纯化后免疫大白兔,获得了高特异性的抗TPT1抗血清.结论:成功构建原核表达质粒pRSETA_2-TPT1,表达并纯化TPT1蛋白,制备出高滴度、高特异性的多克隆抗体.为进一步研究TPT1在肿瘤等疾病发生、发展过程及治疗中的作用奠定基础.
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抗GBM抗体特异性单链抗体scFv3原核表达载体的构建及表达
目的:构建单链抗体scFv3的原核表达载体pET28a-scFv3并诱导表达,纯化并检测表达产物的免疫抗原性.方法:用PCR扩增抗肾小球基底膜(GBM)抗体单链抗体scFv3基因,构建pGEM-scFv3重组质粒并测序.将重组基因亚克隆于原核表达载体pET28a(+)中,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,亲和层析法纯化,用间接ELISA检测纯化的单链抗体scFv3的免疫抗原性.结果:酶切和测序证实得到的scFv3基因序列正确.间接ELISA检测表明,纯化获得的scFv3能与抗GBM抗体结合.结论:成功构建了pET28a-scFv3原核表达系统并获得纯化的scFv3蛋白.表达产物具有良好的抗原性,为进一步研究该单链抗体在抗GBM抗体病中的治疗作用奠定了基础.
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慢性阻塞性肺疾病与免疫
1 慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary disease,COPD)是一种呼吸系统常见的慢性疾病,现居当前疾病死亡原因的第4位.据预测,到2020年,COPD将成为全球范围主要死因的第3位.COPD以不完全可逆的气流受限为特征,而气流受限与小气道、肺泡对有害颗粒、气体产生的异常炎症反应有关.2004年Hogg等~([1])研究发现:COPD的病程与气道壁的厚度、小气道管腔内炎性渗出物量强相关.
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口蹄疫病毒固有免疫研究进展
口蹄疫(foot-and-mouth disease,FMD)是由口蹄疫病毒(foot-and-mouth disease virus,FMDV)引起的偶蹄动物的一种急性、热性、高度接触性并可远距传播的动物传染病.世界动物卫生组织(OIE)将其列为A类动物疫病之首,我国农业部也把FMD列为17个第1类动物疫病中的第1位,充分显示了国内外对FMD的关注程度.
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调节性T细胞foxp3基因表达的表观遗传学调控
机体的免疫系统主要通过免疫应答与免疫耐受维持机体的免疫平衡.调节性T细胞(Regulatory T cells,Treg)通过选择性抑制作用在调节免疫耐受中发挥着非常重要的功能.自1995年Sakaguchi等首次发现清除天然CD4~+ CD25~+ Treg细胞可导致自身免疫疾病,而补充这种细胞又可以防止自身免疫疾病的发生以来,CD4~+ CD25~+ Treg细胞已成为免疫学研究的热点领域之一~([1,2]).Foxp3分子做为Treg细胞的关键的转录因子,对其发生、发育以及功能的发挥起着重要作用,但是我们对调控foxp3基因表达的机制尚不十分清楚.近,从表观遗传学的角度研究Foxp3分子的表达调控取得了很大进展,这将有助于我们进一步阐明Treg细胞的发生、分化以及功能发挥的机制.现对foxp3基因表达的表观遗传学调控机制做一综述.
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介导穿孔素短发夹RNA重组腺病毒的构建及其生物学作用
目的:采用腺病毒介导的RNAi技术对穿孔素(PF)的功能进行体外研究,以期为深入研究PF的作用机制奠定基础.方法:构建腺病毒介导的穿孔素shRNA(Ad-shPF).首先通过mRNA水平验证所设计的pShuttle-shPF序列的有效性,有效后包装Ad-shPF,验证其对NK-92细胞穿孔素mRNA和蛋白表达水平的影响.结果:转染pShuttle-shPF(1-3)的干扰效率分别为(74.2±4.1)%、(43.2±3.2)%、(61.7±2.6)%.干扰效果明显,其中又以pShuttle-shPF1的干扰效果佳.成功包装Ad-shPF1,感染NK-92细胞,mRNA表达水平降至对照组的32%;Western blot分析表明Ad-shPF1处理后可在蛋白水平上明显抑制PF的表达.结论:PF shRNA重组腺病毒可以在mRNA和蛋白水平抑制NK-92细胞中PF的表达.
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卵清蛋白雾化吸入诱导肠道菌群失调小鼠肺部过敏反应的发生
目的:在抗生素所致肠道菌群失调小鼠模型上采用卵清蛋白(OVA)雾化吸入激发,探讨气道变应性反应与肠道菌群失调的关系.方法:112只BALB/c小鼠分为6组:菌群失调Ⅰ组、对照Ⅰ组、菌群失调Ⅱ组、菌群失调加激发组、激发组、对照Ⅱ组.前2组和后4组分别于第6天和第14天时取盲肠内容物做细菌培养计数,后4组同时行支气管肺泡灌洗液(BALF)细胞分类计数、BALF和血清中OVA特异性IgE(OVA-sIgE)检测以及肺部病理观察;采用流式细胞术检测肺组织中Th1以及Th2细胞水平.结果:应用抗生素的小鼠出现肠道菌群失调,菌群失调加激发组小鼠肺部出现以嗜酸粒细胞和淋巴细胞为主的炎症细胞浸润,肺部黏液分泌明显增高,BALF中细胞总数、淋巴细胞、嗜酸粒细胞和中性粒细胞增加,OVA-sIgE水平显著增高,肺部Th2细胞水平增高,Th1细胞与对照组无差异.结论:抗生素致肠道菌群失调小鼠经过OVA雾化吸入后,可产生Th2细胞优势的变应性气道反应,提示抗生素所致肠道菌群失调是诱发哮喘等变应性疾病的危险因素之一.
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D2蛋白酶双抗体夹心ELISA定量检测方法的建立
目的:建立一种定量测定D2蛋白酶的双抗体夹心ELISA方法.方法:用棋盘滴定法确定捕获抗体、检测抗体的佳工作浓度;绘制标准曲线,确定线性范围、检测限和定量限;检测该方法的准确性(回收率)、精密性和特异性,并与Bradford法检测结果进行比较.结果:包被抗体和捕获抗体的佳包被效价分别为1:4 000和1:5 000;检测的线性范围为(28～1180)μg/L,检测限为4.6μg/L.经方法学考核,批内、批间变异系数分别为5.64%和7.17%,回收率为92.44%～105.26%,与碱性蛋白酶、蛋白酶K等其他蛋白无交叉反应,与Bradford法检测结果具有良好的相关性.结论:该方法灵敏度高,重复性好,为后期D2蛋白酶规模发酵优化、分离纯化研究提供了定量检测的方法,并为后期药代动力学、临床研究提供了思路和备选方法.
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颈动脉狭窄影响大鼠认知功能及海马神经元凋亡
目的:研究改善颈动脉狭窄对大鼠认知功能、海马神经元凋亡及bcl-2、Bax蛋白表达的影响.方法:采用SD大鼠制作颈动脉狭窄模型,2周后将颈动脉狭窄解除,4周后各组采用Morris水迷宫检测记忆能力、HE染色观察神经元形态学变化、TUNEL法观察海马神经元凋亡、免疫组织化学检测Bcl-2、Bax蛋白表达.结果:对照组与假手术组比较,大鼠记忆能力明显下降(P<0.01),神经细胞凋亡率明显增高(P<0.01),Bcl-2和Bax免疫阳性细胞数增多(P<0.01),改善狭窄组较对照组记忆能力明显改善(P<0.01),神经细胞凋亡率明显低于对照组(P<0.05),Bcl-2免疫阳性细胞数明显增多(P<0.05),Bax免疫阳性细胞数明显减少(P<0.05).结论:改善颈动脉狭窄可提高大鼠海马Bcl-2蛋白的表达,抑制海马神经细胞凋亡,改善认知功能障碍.
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Hlx修饰的树突状细胞系(DC2.4/mHlx)的建立
目的:建立稳定、高表达鼠转录因子Hlx的树突状细胞系DC2.4/mHlx.方法:参照GenBank中mHlx基因序列.设计mHlx CDS全长引物;以PGEM-T/mHlx质粒为模板,通过PCR获得目的基因,再克隆到PIRES2-EGFP真核表达载体,经PCR、酶切鉴定后进行序列测定,用脂质体转染DC2.4;应用G418筛选出耐药克隆,有限稀释法进行单克隆.通过观察EGFP的表达选定单克隆细胞株,再用流式细胞术分析、Real-time PCR和Western blot进行鉴定.结果:构建了PIRES2-mHlx-EGFP真核表达载体,并成功建立mHlx修饰和EGFP修饰的细胞系(DC2.4/mHlx和DC2.4/EGFP).结论:成功建立稳定高表达mHlx的树突状细胞系DC2.4/mHlx,为深入探讨mHlx功能构建了平台,为Hlx修饰后的树突状细胞作为工具细胞的应用奠定了基础.
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锂-匹鲁卡品诱导大鼠癫痫发作后海马齿状回IL-1 mRNA表达的变化
目的:观察大鼠癫痫发作后海马齿状回细胞因子IL-1(IL-1R、IL-1β、IL-1ra)mRNA的表达变化,探讨IL-1在癫痫发作中的作用.方法:大鼠随机分为对照组和实验组.实验组大鼠腹腔注射氯化锂以及匹鲁卡品,对照组注射生理盐水,观察其行为学特征,并用RT-PCR方法检测大鼠海马齿状回内细胞因子IL-1 mRNA的动态表达变化.结果:大鼠腹腔注射锂-匹鲁卡品后30 min内相继出现严重癫痫持续状态发作,实验组各种细胞因子在严重癫痫持续发作后1 h表达水平开始明显增加(P<0.05),随着时间的延长表达逐渐增多,IL-1β的表达于发作后6 h达高峰,IL-1ra和IL-1 R1则在发作后12 h达高峰,随后表达逐渐下降,各因子到发作后48 h表达降低但仍高于对照组表达水平(P<0.05).结论:癫痫发作后急性期细胞因子IL-1β、IL-1ra及其受体IL-1 R1在不同时间点均有增加,提示炎性因子参与了癫痫发作以及癫痫发作后脑损伤.
| 年 | 期数 |
| 2018 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2017 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2016 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2015 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2014 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2013 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2012 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2011 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2010 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2009 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2008 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2007 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2006 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2005 | 01 02 03 04 05 06 z1 |
| 2004 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2003 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2002 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2001 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2000 | 01 02 03 04 05 06 |
| 1999 | 01 02 |
| 1995 | 01 02 03 |
| 1994 | 01 02 |
| 1993 | 01 02 03 04 |
| 1992 | 01 02 03 04 |
| 1991 | 01 02 03 04 |
| 1990 | 01 02 |
| 1989 | 01 02 03 04 |
