细胞与分子免疫学杂志
Chinese Journal of Cellular and Molecular Immunology 세포여분자면역학잡지
- 主管单位： 中国免疫学会；第四军医大学
- 主办单位： 陕西省免疫学会,中国免疫学会
- 影响因子： 0.81
- 审稿时间： 1-3个月
- 国际刊号： 1007-8738
- 国内刊号： 61-1304/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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RGS1对RAW264.7细胞共刺激分子和细胞因子表达的调节
目的:研究RGS1基因对细胞表面分子表达以及细胞因子分泌的影响.方法:通过克隆RGS1基因、转染RAW264.7细胞、建立稳定转染的细胞系, 利用流式细胞术检测, 基因芯片分析初步探讨RGS1基因的功能.结果:RGS1基因能够抑制NF-κB转录因子活性; RGS1基因明显增加RAW264.7细胞表面CD86分子的表达, 降低CD80表达; 在不同Toll样受体配体刺激后, CD40、 CD80和PD1水平低于对照组.同时, RGS1基因使IL-6、IL-15的表达明显升高, IL-10、 IL-1的表达明显降低.结论:RGS1基因可调节免疫相关细胞表面分子和细胞因子的分泌, 影响Toll 样受体信号通路,表明RGS1可能在免疫调节方面起重要作用.
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使用抗氧化剂调控胞内的ROS对脐血CD34+细胞体外扩增特性的影响
目的:使用抗氧化剂调控胞内活性氧物质(ROS)水平, 考察其对脐血CD34+细胞体外扩增特性的影响.方法:在体外培养过程中, 分别采用超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)或N-乙酰半胱氨酸(NAC)3种抗氧化剂降低脐血CD34+细胞内的ROS水平, 研究了CD34+细胞在抗氧化剂清除ROS后的体外扩增特性.结果:体外培养时细胞因子的应用会使细胞内的ROS水平显著上升.3种抗氧化剂均能有效地清除细胞内ROS, 且清除程度随使用剂量的改变而变化.在培养体系中添加2 000 U/mL SOD、 200 U/mL CAT 或2 mmol/L NAC, 扩增后培养物中CD34+细胞及CD34+CD38-细胞的比例、 集落生成细胞的密度均有明显提高, 但对CD34+细胞扩增倍数影响不大; 而加入8 000 U/mL SOD、 1 000 U/mL CAT 或5 mmol/L NAC, 抑制CD34+细胞的扩增能力.结论:采用细胞因子体外扩增脐血CD34+细胞时, 使用低剂量的抗氧化剂适度清除细胞内的ROS, 明显提高培养物中造血干/祖细胞的含量, 同时并不影响扩增后CD34+细胞的再扩增能力.
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乙肝多表位抗原基因非融合表达载体的构建和表达
目的:研究乙型肝炎病毒(HBV)多表位基因的在原核载体中的克隆、游离表达及其产物的抗原性.方法:设计、并合成HBV多表位抗原基因BPT, 克隆入原核表达载体pBAD/gIIIA, 进而转化Top10大肠杆菌, 阿拉伯糖诱导表达出HBV多表位抗原蛋白(B-BPT), 并用Western blot方法初步检测该抗原蛋白的抗原性.结果:成功构建了原核表达载体pBAD/BPT, 在大肠杆菌中表达出HBV多表位抗原蛋白B-BPT, Western blot 检测显示该蛋白具有良好抗原性.结论:HBV多表位抗原基因的设计是成功的, 其在大肠杆菌中表达的非融合蛋白具有良好的抗原性, 可能是较理想的HBV治疗性疫苗候选物.
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双黄连粉针剂对小鼠T淋巴细胞体外活化与增殖的影响
目的:探讨双黄连粉针剂(以下简称SHL)对小鼠T淋巴细胞的体外活化和增殖的影响.方法:MTT法检测SHL对小鼠淋巴细胞的毒副作用;双色荧光抗体染色技术结合流式细胞术分析SHL对小鼠T淋巴细胞在多克隆刺激剂(ConA)刺激下体外活化抗原CD69表达的影响;MTT法以及羧基荧光素乙酰乙酸(CFDA-SE)标记技术结合流式细胞术分析SHL对小鼠T淋巴细胞在ConA诱导下体外增殖的影响.结果:SHL对小鼠淋巴结来源的淋巴细胞毒副作用非常小;终质量浓度为60、 80、 100、 120 mg/L的SHL对ConA刺激下的T淋巴细胞体外活化抗原CD69表达具有抑制作用(P<0.01);MTT法和CFDA-SE染色法都显示, 终质量浓度为60、 80、 100、 120 mg/L的SHL对ConA诱导的T淋巴细胞增殖作用具有明显的抑制作用(P<0.01).结论:SHL对小鼠T淋巴细胞的体外活化和增殖具有明显的抑制作用.
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重组大鼠4-1BBL对树突状细胞免疫学功能的影响
目的:探讨大鼠4-1BBL对骨髓来源的树突状细胞(DC)表面分子及免疫功能的影响.方法:构建真核表达质粒pIRES2-EGFP- 4-1BBL并利用脂质体介导转染HepG2细胞, G418筛选出阳性克隆, RT-PCR和荧光显微镜分别检测4-1BBL基因转录和EGFP的表达; 流式细胞术(FCM)检测不同HepG2细胞与DC共培养2 d后表面CD80及MHC-Ⅱ的表达, ELISA测定共培养上清中IL-6和IL-12的含量.结果:成功构建pIRES2-EGFP- 4-1BBL重组表达载体并在HepG2细胞中获得稳定表达, 重组大鼠4-1BBL能促进骨髓来源DC表面MHC-Ⅱ、 CD80分子表达和分泌IL-6、 IL-12(P<0.05).结论:重组大鼠4-1BBL具有促进骨髓来源DC成熟的功能.
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多房棘球绦虫重组Bb-EmⅡ/3-Em14-3-3疫苗诱导小鼠细胞因子变化的研究
目的:研究多房棘球绦虫重组Bb-EmⅡ/3-Em14-3-3疫苗对原头蚴攻击小鼠细胞因子变化的影响.方法:将重组Bb-EmⅡ/3-Em14-3-3疫苗分别通过皮下注射、肌肉注射、鼻腔黏膜接种和口服接种免疫BALB/c小鼠12周后, 用50个多房棘球绦虫原头蚴腹腔注射进行攻击, 攻击感染后18周剖杀小鼠, 取脾脏制备淋巴细胞悬液体外培养, 分别以多房棘球绦虫抗原(EmAg)、 刀豆素A(ConA)刺激诱生白细胞介素12(IL-12)、白细胞介素10(IL-10)和干扰素γ(IFN-γ);以脂多糖(LPS)刺激诱生肿瘤坏死因子α(TNF-α).常规ELISA测定脾细胞培养上清液中IL-12、 IL-10、 IFN-γ和TNF-α水平.结果:与对照组相比,疫苗免疫组IFN-γ、 IL-12、 TNF-α水平增加, IL-10水平降低, EmAg刺激组和ConA或LPS刺激组细胞因子水平明显高于相应的原液组.结论:多房棘球绦虫重组Bb-EmⅡ/3-Em14-3-3疫苗可诱导攻击感染小鼠产生Th1型细胞免疫应答, 增强宿主抗多房棘球绦虫感染的保护性免疫反应.
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小鼠BCMA基因启动子活性研究
目的:探索B淋巴细胞成熟抗原(BCMA)基因5′上游序列的启动子活性, 为进一步研究BCMA基因的表达调控机制提供实验依据.方法:构建由BCMA基因5′上游-820～+145、 -607～+145、 -359～+145、 -157～+145、 -93～+145 5个片段驱动的荧光素酶报告载体pGL3-B820、 pGL3-B607、 pGL3-B359、 pGL3-B157、 pGL3-B93, 通过转染J558L、 293T、 HeLa细胞检测荧光素酶的表达, 观察荧光素酶相对活性.结果:5种5′删除体的转录激活性由大到小为pGL3-B157>pGL3-B607>pGL3-B359>pGL3-B93>pGL3-B820.pGL3-B157在3种细胞中的转录激活能力为J558L>HeLa>293T, 且在J558L中的转录激活能力明显强于Hela和293T细胞.结论:BCMA基因5′上游序列"-820 bp～+145 bp"具有启动子活性, 核心启动子可能位于-93～+145区域中.
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hTSHR胞膜外区片段真核表达载体的构建和表达
目的:构建人类促甲状腺激素受体(hTSHR)胞膜外区氨基端的两个片段hTSHRf(aa29 ～100)、 hTSHRe(aa101～278)的真核表达载体pcDNA3.1-hTSHRf和pcDNA3.1-hTSHRe, 并在CHO细胞中进行表达.方法:RT-PCR法从人甲状腺正常组织的cDNA中扩增hTSHRf和hTSHRe,定向插入真核表达载体pcDNA3.1(D)/V5-His-TOPO中, 经酶切、 PCR和测序鉴定后通过脂质体介导转染至CHO细胞中进行表达, RT-PCR扩增转染细胞的cDNA、 Western blot分别鉴定hTSHR在CHO细胞中mRNA和蛋白水平的表达.结果:RT-PCR分别扩增两个片段的阳性克隆株, 所得片段大小与预期一致, 经Western blot鉴定, 相对分子质量(Mr)分别为11900、 23600左右, 与预期的大小相符.结论:真核表达载体pcDNA3.1-hTSHRf和pcDNA3.1-hTSHRe构建成功, RT-PCR和Western blot检测证实重组质粒能在CHO细胞中高效表达, 为进一步研究pcDNA3.1-hTSHRf和pcDNA3.1-hTSHRe在体内的基因表达, 建立Graves'病的动物模型奠定了基础.
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NT4-Apoptin-HA2-TAT融合基因重组腺相关病毒的构建及鉴定
目的:构建编码融合基因NT4-Apoptin-HA2-TAT的重组腺相关病毒表达载体.方法:利用限制性内切酶切相应载体后将Apoptin和HA2-TAT连入pUC19/NT4质粒, 再将融合基因NT4-Apoptin-HA2-TAT亚克隆至腺相关病毒的穿梭质粒内, 与辅助质粒pAAV/Ad、 腺病毒质粒pFG140共同转染HEK-293细胞, 通过同源重组获得NT4-Apoptin-HA2-TAT重组腺相关病毒载体, 收集病毒上清, Dot blot法测定其滴度.MTT比色法观察NT4-Apoptin-HA2-TAT重组腺相关病毒表达载体, 对HepG2细胞存活率的影响.结果:经酶切及测序证实克隆出NT4-Apoptin-HA2-TAT融合基因; 得到高滴度的(3.14×1015 pfu/L)重组腺相关病毒表达载体.NT4-Apoptin-HA2-TAT重组腺相关病毒表达载体, 对HepG2细胞有强烈的诱导凋亡作用, 与对照组比较, 处理组细胞的存活率明显降低.结论:通过分子克隆体外重组技术成功制备了NT4-Apoptin-HA2-TAT重组腺相关病毒载体, 为下一步的Apoptin应用于基因治疗奠定了基础.
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大鼠透明质酸合成酶-3基因真核表达载体的构建及趋化作用研究
目的:构建透明质酸合成酶-3(hyaluronan synthase-3)真核表达载体, 转染真核细胞并检测重组蛋白酶活性.方法:提取损伤大鼠坐骨神经总RNA, RT-PCR扩增HAS-3编码框cDNA, 构建于真核表达载体pcDNA3.1D中, 并亚克隆到荧光载体pEGFP-N1中.将构建好的质粒转染大鼠施旺细胞RSC96, 检测HAS-3的表达及酶活性.研究转染细胞培养上清对巨噬细胞的趋化作用.结果:HAS-3真核表达载体pcDNA3.1D-HAS3及pEGFP-HAS3测序结果显示片段插入正确, 序列与GenBank公布数据一致, 转染RSC96细胞并检测到重组蛋白的表达和酶活性, 过表达HAS-3细胞的培养上清对巨噬细胞的趋化作用显著高于未转染细胞上清.结论:成功地构建HAS-3真核表达载体且真核表达的重组HAS-3具有合成HA活性, HAS-3过表达培养上清能趋化巨噬细胞, 在体内可能参与到炎症反应中.
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HMGB1对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬和I-A/E表达的影响
目的:探讨HMGB1对巨噬细胞免疫功能的影响.方法:梯度浓度HMGB1处理小鼠腹腔巨噬细胞, 或将小鼠随机分为生理盐水对照、 24 h和48 h高与低剂量HMGB1注射组, 腹腔注射0.2 μg或20 μg HMGB1, 或生理盐水.检测巨噬细胞吞噬功能和I-A/E表达.结果:10 μg/L HMGB1刺激6～12 h, 巨噬细胞吞噬功能较其他剂量组明显增强(P<0.05或P<0.01).HMGB1对培养巨噬细胞I-A/-E表达无影响.高剂量HMGB1攻击小鼠24 h, 其腹腔巨噬细胞吞噬能力明显降低(P<0.05); 低剂量HMGB1攻击48 h, 巨噬细胞I-A/-E表达明显上调(P<0.05或P<0.01).结论:高剂量HMGB1抑制巨噬细胞吞噬功能, 低剂量HMGB1增强巨噬细胞免疫功能.
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脱氢表雄酮对实验性自身免疫性神经炎大鼠细胞免疫的影响
目的:探讨脱氢表雄酮(DHEA)对实验性自身免疫性神经炎(EAN)大鼠细胞免疫反应的影响.方法:21只Lewis大鼠随机分为DHEA 0.5 mg治疗组、 2 mg治疗组和对照组, 治疗组于注射牛周围神经髓磷脂(BPM)抗原乳剂后第5天开始每日皮下注射DHEA, 对照组皮下注射相同体积的DHEA溶媒.疾病高峰期检查坐骨神经IFN-γ、 TNF-α阳性反应细胞, 检测引流淋巴结和脾脏单个核细胞增殖反应, 检测培养上清TNF-α、IFN-γ、IL-10含量.结果:两种剂量DHEA治疗组均能减少坐骨神经IFN-γ、 TNF-α阳性反应细胞数目(P<0.05), 抑制BPM刺激T淋巴细胞增殖(P<0.05), 降低培养上清中IFN-γ、 TNF-α水平(P<0.05).各组间 IL-10水平差异无统计学意义(P>0.05).结论:DHEA可抑制EAN大鼠自身反应性T淋巴细胞增殖和促炎性细胞因子过度表达, 抑制细胞免疫反应.
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中国北方人群系统性红斑狼疮患者KIR基因多态性的研究
目的:检测和分析系统性红斑狼疮患者的杀伤细胞免疫球蛋白样受体(KIR)基因的多态性, 探讨系统性红斑狼疮(SLE)从基因到临床表达的发病机制.方法:应用PCR-SSP技术检测北方62例确诊SLE患者和61例同一区域同一民族正常对照者的KIR基因位点多态性.结果:SLE 患者KIR基因表型分布较常见的为KIR3DP1、 2DL1、 2DP1、 3DL1、 2DL3及1D, 其次为2DS4、 2DL5、 3DS1、 2DS2、 2DS5和2DL2, 较低者为2DS1、 2DS3及3DP1V, SLE病例组KIR3DS1, 2DL2、 2DL5和2DL3基因型频率比对照组显著降低(P<0.01).结论:中国北方人群的SLE的发生可能与多个KIR基因等位基因有相关性.
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系统性红斑狼疮患者血中sCD30L的变化及其临床意义
目的:通过检测系统性红斑狼疮(SLE)患者血清中可溶性CD30配体(sCD30L)的表达水平, 探讨其水平变化及在疾病发病中的作用.方法:选取符合1982年美国风湿病学会制定的SLE诊断标准的45例SLE患者, 另选20例健康人作对照, 采取双抗体夹心ELISA方法检测SLE组及对照组血清中的sCD30L的水平, 同时检测临床相关指标, 分析sCD30L在各组患者血中的变化及其与临床各指标的相关性.结果:SLE 血清sCD30L水平为(21.20±10.90)μg/L, 显著高于正常对照组水平;(6.45±1.17)μg/L, P<0.01].SLE血清sCD30L水平与ds-DNA, 尿α1, SLEDAI评分呈正相关(r=0.324, P<0.05;r=0.658, P<0.05;r=0.486, P<0.05), 特别是在SLEDAI评分大于10分和早期狼疮性肾炎的患者中相关性更强(r=0.508, P<0.01;r=0.715, P<0.01).SLE患者血清sCD30L水平明显升高, 其升高水平与ds-DNA, 尿α1, SLEDAI评分呈正相关.结论:sCD30L的表达异常可能是SLE 发病的重要环节, 在一定程度上反映疾病活动, 特别在早期狼疮性肾炎的发病及诊断中起重要作用.
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缓解-复发型多发性硬化患者血清中IL-12p40和IFN-γ水平
目的:探讨白细胞介素(interleukin,IL)-12p40、干扰素(interferon, IFN)-γ在缓解复发型多发性硬化(relapsing remitting form of multiple sclerosis, RRMS)发病中的病生机制.方法:选取RRMS急性期患者24例及作为对照组的非炎性神经系统疾病(non-inflammatory neurological diseases, NIND)患者12例, 应用ELISA法测定受试者血清及脑脊液中IL-12p40、 IFN-γ水平.结果:RRMS组血清中IL-12p40水平明显下降, IFN-γ水平与NIND组相比无统计学意义.脑脊液中IL-12p40、 IFN-γ水平在两组中可检测到的阳性例数均低, 相比之下无统计学意义.结论:IL-12p40参与了多发性硬化发病的免疫病理过程.
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PTPN22基因多态性与自身免疫甲状腺病的相关性
目的:检测PTPN22基因的单核苷酸多态性(SNP)及其与中国人自身免疫甲状腺病(AITD)的相关性, 并研究CTLA- 4基因SNP与PTPN22 SNP的相互关系.方法:采用PCR-RFLP技术分析231例AITD患者, 其中Graves'病(GD)149例, 桥本甲状腺炎(HT)82例和131例健康对照者PTPN22基因+1858 C>T及CTLA- 4基因49A>G位点的基因型.采用SASP-PCR技术分析PTPN22基因启动子-1123G>C的基因型.结果:(1)PTPN22基因的+1858C>T位点不存在多态性;(2)PTPN22基因-1123G>C SNP的等位基因和基因型分布频率在GD组与正常对照组间的差异有统计学意义(P值分别为0.040和0.013, OR值分别为1.44和2.33);(3) CTLA- 4基因 49A>G位点的等位基因和基因型分布频率在AITD组与正常组间有明显差异;(4)与携带PTPN22的G等位基因及CTLA- 4的AA基因型者相比, 携带PTPN22CC基因型与CTLA- 4 AG或GG基因型者发生GD的OR值=3.31(95%CI: 2.69-8.89).结论:PTPN22基因启动子-1123G>C SNP与GD的发生相关, 其CC基因型与CTLA- 4基因的G 等位基因对GD的发生起协同作用.
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p27和TGF-β在大鼠肾间质纤维化中的表达及关系
目的:研究单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠肾组织p27的表达, 同时观察TGF-βmRNA在各组的变化, 探讨UUO模型中 TGF-β与p27的关系.方法:60只SD大鼠随机分成假手术组(SOR)、 UUO模型组.于术后第7、 14、 21天分别处死各组大鼠10只.用HE染色动态观察肾脏病理变化, 免疫组织化学法测定p27的蛋白表达及动态变化, RT-PCR法测定p27mRNA和TGF-βmRNA的水平.结果:SOR组肾小管上皮细胞p27蛋白及肾皮质p27mRNA的表达均强, UUO组随着间质纤维化程度的加重, p27的表达逐渐减弱, 而TGF-βmRNA随着肾间质纤维化程度的加重, 其表达呈上升趋势;UUO组TGF-βmRNA与p27mRNA成负相关.结论:p27参与了UUO大鼠肾间质纤维化的发病过程;UUO大鼠肾间质纤维化模型中TGF-β促纤维化机制可能与p27的下调相关.
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乙肝病毒血清标记物与血清HBV-DNA的关系
目的:探讨不同乙肝感染模式的患者与HBV-DNA定量结果进行对比分析.方法:采用ELISA方法检测乙肝病毒血清标记物, 荧光定量PCR (FQ-PCR) 检测HBV-DNA, 比较二者之间的关系.结果:HBsAg、 HBeAg、 HBcAb阳性组和HBsAg、 HBeAg阳性组 HBV-DNA检出率较高, 分别为96.61%和100%.HBsAg、 HBeAg、 HBcAb阳性组HBV-DNA含量平均水平为3.86×108, HBsAg、 HBeAg阳性组HBV-DNA含量平均水平为1.73×108;HBsAg、 HBeAb、 HBcAb阳性组和HBsAg、 HBcAb阳性组检出率也较高, 达45% 以上, HBV-DNA含量平均水平分别为1.30×107和1.31×106.结论:FQ-PCR检测HBVDNA能准确地反映体内的HBV真实感染和复制情况, 在乙肝的诊断和治疗中, 不能单凭两对半的检测, 同时应做HBV-DNA的定量测定.
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诺如病毒表达衣壳蛋白单克隆抗体的制备、鉴定和初步应用
目的:建立能稳定分泌抗诺如病毒(Norovirus)N蛋白的单克隆抗体(mAb)细胞株, 制备抗诺如病毒核衣壳蛋白的mAb, 为诺如病毒的早期快速检测及致病机制的研究提供实验材料.方法:用E.coli表达的GⅡ组广州株NVgz01(DQ369797)Norovirus-N蛋白免疫BALB/c小鼠, 通过PEG使小鼠脾细胞和Sp2/0细胞融合, 使用HAT选择性培养基培养融合细胞, 用间接ELISA和Western blot测定mAb的效价、免疫球蛋白亚型和mAb的特异性, 并将各mAb之间进行配对.结果:通过细胞融合和克隆化, 共筛选出4株分泌抗Norovirus-N蛋白抗体的杂交瘤细胞株N2C3、 N7C2、 N4B1、 N8A9.间接ELISA和Western blot检测结果表明, 这4株mAb都可以与E.coli表达的GⅡ组广州株Norovirus-N蛋白产生特异性反应, 并且能与天然粪便标本中的GⅡ组Norovirus产生特异性反应.配对结果显示N2C3和N7C2之间配对, 对表达蛋白和天然病毒都具有较强的检测灵敏度.结论:获得了诺如病毒GⅡ组特异性mAb, 为制备免疫诊断试剂盒及致病机制的研究奠定了基础.
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乙肝病毒表面抗原G145R变异单克隆抗体的制备及其初步鉴定
目的:研制抗乙肝病毒G145R变异表面抗原的单克隆抗体(mAb).方法:将重组乙肝病毒G145R变异表面抗原以Al(OH)3佐剂化, 常规免疫BALB/c小鼠, 采用细胞融合技术制备抗乙肝病毒G145R变异表面抗原的mAb.采用ELISA对制备物的效价与特异性进行鉴定, 将其用于部分临床标本的检测, 并与德国抗HBs mAb GL2.001进行比较.结果:获得1株稳定分泌抗G145R HBs mAb的杂交瘤细胞, 命名为4-E12.该细胞株染色体数目为90条, 所分泌mAb属IgG1亚类.其培养上清与腹水抗G145R HBs ELISA效价为(0.5～1)×103及(1～10)×106.经持续3月培养, 低血清适应以及反复冻存与复苏后, 其细胞增殖能力与上清抗G145R HBs效价与克隆化结束时大致相似.将其与德国抗G145R HBs mAb GL2.001相比, 二者对重组乙肝表面抗原G145R变异S蛋白的反应性大致相当, 灵敏度前者稍低于后者(分别为2.0 μg/L与1.0 μg/L).对野生株表面抗原的检测前者在实验浓度范围内未显示有意义的反应信号, 后者在与高浓度(1 mg/L及以上)抗原反应时S/N值达到或高于3.9.将二者用于对一组特定患者的临床检测, 其阳性率前者(17/200, 8.5%)较后者(11.5%)略低, 其差别经统计学比较无统计学意义(P>0.05).结论:成功地制备了1株抗乙肝表面抗原G145R变异体的mAb, 为乙肝G145R变异的基础、 临床与流行病学研究提供了进一步的物质基础.
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新疆家蚕抗菌肽的抗体制备及鉴定
目的:制备鼠抗新疆家蚕抗菌肽(Cecropin-XJ)的抗体, 用于抗菌肽的体外细胞定位分析.方法:将编码抗菌肽的cDNA序列亚克隆到真核表达载体pcDNA3上, 构建重组真核表达载体pcDNA3/Cecropin-XJ, 进行核酸免疫昆明白小鼠;同时构建原核表达载体, 对抗菌肽进行融合表达, 以表达的融合蛋白作为检测抗原.采用免疫电镜技术分析Cecropin-XJ的作用部位.结果:间接ELISA表明, 重组质粒第5次免疫的效价高;免疫胶体金实验显示, 所制备的抗血清能够对抗菌肽作用部位进行准确清晰的定位.结论:所制备的鼠抗Cecropin-XJ的抗血清具有较高的免疫反应性和特异性, 为Cecropin-XJ的抑菌机制研究提供了有力的工具, 同时也为小分子肽抗体的制备提供了参考.
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降钙素原抗原的表达及其抗体的制备与初步鉴定
目的:构建降钙素原(PCT)原核表达载体, 制备其多克隆抗体(pAb)和单克隆抗体(mAb), 并进行特性鉴定.方法:以甲状腺癌细胞cDNA文库为模板, 构建重组表达质粒pGEX- 4T-1-PCT和PET-32a-PCT, 在大肠杆菌中分别表达GST-PCT和His-PCT融合蛋白, 用His-PCT免疫家兔和BALB/c小鼠制备兔pAb和鼠mAb.通过ELISA法测定抗人PCT抗血清效价;用Western blot、 间接免疫荧光鉴定pAb的特异性.使用间接ELISA法筛选分泌特异性抗PCT的杂交瘤细胞株, 采用Western blot和间接免疫荧光鉴定mAb的特异性. 结果:构建了重组表达质粒pGEX- 4T-1-PCT和PET-32a-PCT, 并在大肠杆菌中表达、纯化.经ELISA法测得抗人PCT抗血清效价是1∶ 256 000.制备的抗PCT兔多克隆抗体可特异地识别重组和天然的PCT蛋白.获得8株可稳定分泌抗PCT的杂交瘤细胞株, 可识别重组人PCT蛋白, 其中有4株可特异性结合TT细胞质中的天然蛋白. 结论: 成功地制备出兔抗人PCT抗血清和8株抗PCT的mAb, 为进一步研究PCT在严重的细菌感染和脓毒症中的病理及生理作用奠定了基础.
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Toll样受体在哮喘中的作用研究进展
Toll蛋白是由昆虫向脊椎动物的长期物种进化过程中保留下来的Ⅰ型跨膜蛋白.目前有哺乳动物发现的13种Toll蛋白类似物组成Toll样受体(Toll-like receptors,TLRs)家庭.
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靶向肿瘤血管的抗体免疫治疗
肿瘤细胞引起多样性和易突变性很难直接用药物治疗, 并且肿瘤细胞的耐药性也已成为治疗的一个瓶颈.靶向肿瘤血管的抗体治疗通过靶向实体肿瘤内血管内皮细胞生长增殖的相关靶点, 切断肿瘤细胞的营养供应从而达到治疗肿瘤的目的.本文中总结了近年来世界各国已上市或处于临床阶段及实验室阶段的靶向肿瘤血管抗体药物, 并阐述了该治疗策略的特点及部分抗体药物的作用机制, 提出目前存在的问题和相关解决方法, 为靶向肿瘤血管的抗体治疗研究提供一定的参考.
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MICA基因与器官移植及前景
MICA基因( major histocompatibility complex class I chain-related gene A)是MIC基因家族的一个成员, Tom' Spie的研究小组于1994年首先报道了这种MHC- Ⅰ类相关基因家族.MIC是位于MHC-Ⅲ类基因区长度为的2MB的免疫功能相关基因, 包括MICA、 MICB、 MICC、 MICD、 MICE、 MICF和MICG, 其中MICA及MICB为功能基因, 其余为假基因.MIC基因与经典MHC-I类基因具有较高的同源性, 其分子结构与经典MHC- Ⅰ类分子有30%的同源性, 但功能不同.国外大量临床实验及研究表明, 在兼顾经典HLA配型的同时, 如果MICA基因亦匹配, 器官移植后受体生存率将明显提高.
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检测可溶性B7-H4 ELISA夹心法的建立
目的:建立定量检测可溶性B7-H4的ELISA夹心法.方法:采用抗人B7-H4单克隆抗体(mAb)包被酶标板, 以兔抗鼠B7-H4多克隆抗体为夹心抗体、 HRP标记羊抗兔IgG为检测抗体、重组小鼠可溶性B7-H4为标准品, 建立检测可溶性B7-H4的间接ELISA法, 并对50例正常人和37例术后乳腺癌患者血清样本进行了检测.结果:建立的夹心ELISA法检测B7-H4的线性范围为3.13 μg/L～200 μg/L, 批内、 批间变异系数分别为7.92%和11.1%.50例正常人和37例术后乳腺癌患者血清B7-H4的含量分别为(31.62±9.85) μg/L和(42.52±16.63) μg/L, 两者比较差异有统计学意义(P<0.001).结论:成功建立了一种灵敏度高、 稳定性好的检测可溶性B7-H4的夹心ELISA法.
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自身免疫性溶血性贫血患者的血清学特性检测分析
目的:探讨自身免疫性溶血性贫血(AIHA)患者的血清学特性, 选择其血型鉴定与交叉配血试验的适方法.方法:采用抗人球蛋白试验、 微柱凝胶法(MGT)及手工凝聚胺试验(MPT), 对患者血液标本进行血型鉴定、交叉配血试验、抗体筛查及其特异性鉴定.结果:在75例疑似AIHA患者中, 发现直接抗人球蛋白试验(DAT)及抗体筛查阳性、血型正反定型不相符及交叉配血试验不合54例;经患者自身红细胞吸收后的血清, 在上述试验中不再出现凝集反应者50例, 仍发生凝集反应者4例, 经抗体特异性鉴定为抗-C1例、抗-E2例、抗-e1例.结论:AIHA患者多数为抗人球蛋白试验阳性、造成血型鉴定及交叉配血困难, 少数存在同种抗体并多具有Rh血型抗体特异性.
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选择性环氧合酶-2抑制剂NS-398对肝星状细胞凋亡的影响
目的:观察选择性环氧合酶-2抑制剂NS-398对肝星状细胞(HSC)凋亡及凋亡相关基因的影响.方法:采用不同浓度的NS-398作用于HSC-T6, 应用流式细胞术和透射电镜检测HSC凋亡, 细胞免疫化学法检测凋亡HSC中凋亡相关基因p53、 bcl-2蛋白表达的变化.结果:90、 120、 150 μmol/L NS-398作用HSC-T6 48 h后, 流式细胞术检测到HSC凋亡, 各组凋亡指数分别为(10.5±0.015)%、 (13.2±0.010)%和(17.3±0.012)%, 与对照组(4.3±0.006)%比较, 差异有统计学意义(P<0.01); 透射电镜观察到细胞皱缩、 核染色质浓缩沿核膜排列等细胞凋亡特征性改变; 以120 μmol/L NS-398作用HSC-T6 48 h后, 凋亡相关蛋白p53、 bcl-2的阳性细胞百分率分别为(82.06±0.14)%、 (34.20±0.77)%, 与对照组(14.06±0.24)%、 (96.66±0.79)%比较, 差异有统计学意义(P<0.01).结论:NS-398可以剂量依赖性诱导HSC凋亡; 上调凋亡相关基因p53的表达, 下调bcl-2的表达可能是NS-398诱导HSC凋亡的机制之一.
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三种方法检测弱抗体抗原反应效果分析
目的:对常用盐水法、凝聚胺以及微柱凝胶技术3种方法检测弱ABO抗原抗体反应效果进行评价分析.方法:采用我站发现的2例AxB和A3B 标本, 分别以其红细胞与10例B型个体的血浆反应, 以其血浆与10例AB型的红细胞反应, 同时采用3种方法进行检测比较检测效果.结果:没有出现预期的结果中, 盐水试管法有4例, 凝聚胺法20例, 微柱凝胶卡技术29例.结论:检测ABO弱抗原抗体反应能力以盐水法检测灵敏度高, 在交叉配血时, 为了确保输血安全, 应该不能省略盐水法, 以防弱ABO抗体引起的输血反应.
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大鼠肾脏缺血再灌注损伤过程中水通道蛋白-2的表达变化
目的:研究大鼠肾脏缺血再灌注损伤(IRI)后水通道蛋白-2(AQP-2)的表达变化与肾功能变化的关系.方法:建立大鼠左侧肾脏缺血再灌注损伤模型, 于IRI不同的时间点处死大鼠, 留取尿液、血清、肾脏标本行尿常规、肾功能、肾脏病理形态学及AQP-2的免疫组化、 RT-PCR检测.结果:大鼠肾脏IRI后出现尿量增多、尿渗透压降低, 血肌苷、尿素氮升高症状;HE染色示肾小管上皮细胞肿胀、坏死、脱落;AQP-2表达量及其mRNA含量均较对照组减少, 这些变化于IRI 3 d时低, 至IRI 7 d时恢复正常.结论:肾脏IRI后AQP-2表达的减少可能是急性肾衰竭时尿量增多、尿渗透压降低的重要因素之一.
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小鼠B16黑色素瘤细胞酪氨酸酶基因的克隆及在毕赤酵母中的表达
目的:克隆酪氨酸酶基因(TYR), 并在毕赤酵母中表达和纯化其融合蛋白, 体外测定纯化的TYR活性.方法:利用RT-PCR技术, 从小鼠B16黑色素瘤细胞中克隆全长TYR, 克隆至pMD18-T载体, 进行双链核苷酸序列测定.构建TYR毕赤酵母表达质粒pPICZaA- TYR并导入毕赤酵母Pichia pastoris GS115, 表达的重组蛋白用SDS-PAGE和Western blot进行分析, 采用Co2+离子亲和层析柱纯化TYR并采用TYR多巴速率氧化法体外测定纯化的TYR活性.结果:克隆了TYR基因.构建了重组表达质粒pPICZaA-TYR.SDS-PAGE和Western blot分析显示, 在相对分子质量(Mr)为约53 000处出现1条特异性蛋白带, 且能与兔抗TYR抗体发生反应.结论:克隆TYR基因片段与基因库所登录的序列相一致, 并在毕赤酵母中获得表达和纯化并在体外测定了纯化的TYR活性.
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猪肢体体外循中神经组织损伤和固有免疫的实验研究
目的:观察体外循环灌注保存猪肢体12 h后神经组织病理改变和固有免疫系统的改变, 探讨固有免疫系统在体外循环灌注中对猪肢体神经组织的影响.方法:实验分3组, 实验组: 随机取10头实验用landrace猪为实验对象, 取每头猪的1条前肢体进行实验, 经32℃体外循环灌注保存12 h;对照组: 实验组猪的另一前肢放置于4℃冰箱低温保存;再灌注组: 将2例对照组肢体体外循环灌注1 h.收集3组肢体神经组织、冰冻神经组织样品, 进行病理及补体C3b/c、 C4c和固有免疫抗体IgG和IgM抗体的免疫荧光强度的检测, 同时观测猪肢体跟腱反射.结果:实验组猪的神经反射正常, 而对照组猪未引出神经反射, 再灌注组神经反射很弱.病理结果显示实验组神经组织有轻微的水肿, 免疫荧光染色补体C3b/c、 C4c和固有免疫抗体IgG和IgM抗体免疫荧光强度增强, 而对照组神经组织轻微水肿, 免疫荧光染色补体C3b/c、 C4c和固有免疫抗体IgG和IgM抗体免疫荧光强度没有改变, 再灌注组神经损伤明显, 可见水肿和无髓鞘现象.结论:体外循环对肢体神经组织可能有保护作用.尽管体外循环也激活固有免疫, 但对神经组织仍有保护作用.
| 年 | 期数 |
| 2018 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2017 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2016 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2015 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2014 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2013 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2012 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2011 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2010 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2009 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2008 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2007 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2006 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2005 | 01 02 03 04 05 06 z1 |
| 2004 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2003 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2002 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2001 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2000 | 01 02 03 04 05 06 |
| 1999 | 01 02 |
| 1995 | 01 02 03 |
| 1994 | 01 02 |
| 1993 | 01 02 03 04 |
| 1992 | 01 02 03 04 |
| 1991 | 01 02 03 04 |
| 1990 | 01 02 |
| 1989 | 01 02 03 04 |
