细胞与分子免疫学杂志
Chinese Journal of Cellular and Molecular Immunology 세포여분자면역학잡지
- 主管单位： 中国免疫学会；第四军医大学
- 主办单位： 陕西省免疫学会,中国免疫学会
- 影响因子： 0.81
- 审稿时间： 1-3个月
- 国际刊号： 1007-8738
- 国内刊号： 61-1304/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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Ang-2在大鼠内毒素性急性肺损伤中的作用
目的:探讨促血管生成素2 (Ang-2 )在不同程度急性肺损伤(ALI)中的作用.方法:清洁级SD大鼠共40只, 随机分为4组: 正常对照组, 不同剂量大肠杆菌脂多糖(LPS)组(3个剂量组: 2 mg/kg、 4 mg/kg及8 mg/kg), 每组平均10只.HE染色光镜观察肺组织标本病理改变并进行肺损伤评分, Western blot检测各组大鼠血浆中Ang-2的表达情况.结果:LPS可致肺泡间隔增宽、出血及大量炎性细胞浸润等急性肺损伤病理改变, LPS各组的肺损伤评分明显高于正常对照组(P<0.01);LPS不同剂量与肺损伤评分呈量效依赖关系(P<0.05).LPS不同剂量组的血浆中Ang-2蛋白表达较空白对照组增高(P<0.01), LPS不同剂量与Ang-2蛋白表达水平呈量效依赖关系(P<0.05).血浆中Ang-2的蛋白表达与肺组织炎症程度积分呈正相关(r=0.862, P<0.05).结论:Ang-2参与大鼠内毒素性急性肺损伤的病理过程, 且血浆Ang-2水平与急性肺损伤程度呈正相关.
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EB病毒潜伏膜蛋白2A基因重组逆转录病毒载体和稳定表达细胞株的构建及鉴定
目的:克隆EB病毒(EBV)潜伏膜蛋白2A(LMP2A)全长基因, 并构建含有该目的基因的重组逆转录病毒载体pGEZ-LMP2A, 转染真核细胞后获得稳定表达LMP2A的细胞株.方法:采用RT-PCR技术从B95.8细胞中获得EB病毒LMP2A全长基因, 克隆到测序载体pMD18-T中, 经测序后再亚克隆到逆转录病毒载体pGEZ-Term中, 与两辅助病毒载体PHIT456、 PHIT60通过Lipofectamine2000共转染包装细胞293T, 测定产生的重组逆转录病毒滴度并感染小鼠成纤维细胞L929, 经Zeocine筛选后得到稳定的细胞克隆, 用RT-PCR和Western blot法检测细胞中LMP2A mRNA和蛋白表达情况.结果:重组逆转录病毒载体pGEZ-LMP2A经测序鉴定正确;转染后上清中病毒的滴度为5×10~8 cfu/L, 感染L929细胞后用Zeocine筛选出稳定的细胞克隆;RT-PCR和Western blot检测结果表明筛选出的细胞克隆能稳定表达EBV-LMP2A.结论:表达EBV-LMP2A细胞株的构建为蛋白制备与纯化奠定了物质基础, 也为后续的EBV相关性疾病疫苗的研究提供了新思路.
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卡介苗(BCG)通过诱导IL-12产生和受体表达促进人NK细胞功能
目的:研究卡介苗(BCG)对人自然杀伤细胞(NK)功能的作用及其机制.方法:分离抗结核抗体阴性志愿者外周血PBMC、纯化NK细胞, 分别与BCG、 IL-12、 BCG+IL-12、 BCG+抗IL-12Rβ1 mAb(2B10)培养.利用ELISA方法检测培养上清液IFN-γ、 IL-12p40含量;利用ELISpot方法检测IFN-γ、颗粒酶B产生细胞的频率;利用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法测定杀伤功能.利用流式细胞术检测NK细胞IL-12Rβ1的表达.结果:BCG呈剂量依赖的方式诱导PBMC产生IFN-γ.在BCG刺激条件下, PBMC颗粒酶B分泌细胞数明显高于不加任何刺激剂组(P<0.05).BCG增强PBMC杀伤活性.BCG不能诱导纯化NK细胞产生IFN-γ, 但与IL-12同时刺激则表现出协同作用.纯化NK细胞经BCG刺激后杀伤活性与未刺激相比差异无统计学意义.BCG呈剂量依赖方式诱导PBMC产生IL-12、并促进NK细胞不同亚群表达IL-12Rβ1.2B10抗体抑制BCG对PBMC产生IFN-γ和分泌颗粒酶B的诱导作用.结论:BCG间接地促进NK细胞的生物学活性, 其部分机制是通过诱导单核细胞产生内源性IL-12、并上调NK细胞表达IL-12R.
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spaA嵌合体核酸疫苗增强抗体水平的研究
目的:探讨提高丹毒丝菌表面抗原A(spaA)N端核酸疫苗免疫应答的策略.方法:通过基因重组构建含人α胰岛素抑制剂(AAT)的信号肽、大鼠寡聚软骨基质蛋白(COMP)片段、丹毒丝菌spaA基因N末端及3分子的C3d序列的真核细胞表达质粒pcDNA3-AAT-COMP-spaAN -C3d3 (pcD-ACSC)和pcDNA3- spa (pcD-S).肌注免疫LCR小鼠后, RT-PCR检测小鼠体内丹毒丝菌spaAN基因的瞬时表达, ELISA检测小鼠血清spaA抗体水平的变化, 以丹毒丝菌XJ1249评价免疫小鼠的保护效果.结果:免疫第4周时pcD-ACSC核酸疫苗激发了较高水平的SpaA_N抗体而pcD-S核酸疫苗激发的抗体水平与对照相比差异不显著;同时pcD-ACSC核酸疫苗具有70%保护效果, pcD-S核酸疫苗则不具保护效果.结论:通过融合高表达分泌蛋白信号肽、增加抗原溶解度的序列和分子佐剂C3d3能显著提高spaAN的抗体水平, 为丹毒丝菌spaA核酸疫苗的应用奠定基础.
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Parthenolide抑制脑缺血后神经炎症并促进纹状体内神经发生
目的:检测Parthenolide是否抑制脑缺血诱发的神经炎症及其分子机制.方法:MCAO大鼠腹腔注射parthenolide (500 μg/kg), 行BrdU、 BrdU-DCX、 BrdU-Tuj-1、 BrdU-MAP-2、 BrdU-GFAP免疫组化和Western blot检测缺血侧纹状体组织TNF-α表达水平.结果:脑缺血增加缺血侧纹状体内TNF-α表达水平, Parthenolide抑制TNF-α的表达并促进缺血侧纹状体内新生细胞的增殖.给予Parthenolide在脑缺血后3 d、 7 d 或28 d增加BrdU~+-DCX~+, BrdU~+-Tuj-1~+, and BrdU~+-MAP-2~+阳性细胞数, 同时减少BrdU~+-GFAP~+阳性细胞数.结论:Parthenolide抑制脑缺血诱发的神经炎症, 促进非神经发生区-纹状体内神经发生.尚需在此模型上进一步阐明其分子作用机制.
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人Egr-1启动子的克隆及其在肿瘤细胞中的辐射诱导反应
目的:克隆人Egr-1基因的启动子, 插入荧光素酶报告基因载体中, 并检测电离辐射对其活性的影响.方法:采用PCR技术从人乳腺癌细胞系MCF-7基因组中扩增出Egr-1启动子, 将其克隆到pGL3-basic载体中;将重组质粒转染人肿瘤细胞, 测定Egr-1启动子在不同辐射条件下转录活性的改变.结果:成功构建了Egr-1启动子的荧光素酶报告基因;在不同剂量的γ射线照射后, Egr-1的启动子活性均明显高于未照射组;在同一剂量照射后48 h, Egr-1的启动子活性达峰值.结论:本实验构建的Egr-1启动子具有辐射激活的功能, 为进一步研究放射-基因治疗奠定了基础.
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γ-干扰素在小剂量美法仑治愈肿瘤过程中对荷瘤小鼠外周血血小板计数的影响及其意义
目的:探讨γ-干扰素(IFN-γ)在小剂量美法仑治愈肿瘤过程中对荷瘤小鼠外周血血小板(PLT)计数的影响及其意义.方法:利用单一剂量美法仑治愈荷瘤野生型C57BL/6小鼠模型, 取遗传背景相同、基因型不同的IFN-γ~(+/-) 和IFN-γ~(-/-) C57BL/6小鼠各6只, 观察7.5 mg/kg美法仑治疗后两组荷瘤小鼠肿瘤结节直径的变化, 并且分别在美法仑用药前第3天、用药后6 h、用药后第4、 7、 11、 15、 28天内眦静脉取血, 肝素抗凝后进行血常规检测, 观察两组荷瘤小鼠外周血PLT计数的动态变化并进行比较, 了解美法仑治疗后荷瘤小鼠化疗的疗效及其外周血PLT计数的变化与体内IFN-γ免疫功能之间的关系.结果:美法仑用药前两组荷瘤小鼠肿瘤结节的直径和外周血PLT计数比较差异无统计学意义(P>0.05).7.5 mg/kg美法仑用药后第1天, 两组荷瘤小鼠肿瘤结节缩小均不明显;用药后第4天, 荷瘤IFN-γ~(-/-)小鼠肿瘤生长轻度受抑后进行性增大, 并在用药后2周内所有小鼠肿瘤复发、死亡, 而对照组IFN-γ~(+/-) 小鼠肿瘤的肿瘤结节进行性缩小、肿瘤消退并治愈.7.5 mg/kg美法仑用药后6 h, 荷瘤IFN-γ~(+/-) 小鼠外周血PLT计数较前明显升高, 达(1935±378)×10~9/L (P<0.01), 而荷瘤IFN-γ~(-/-)小鼠外周血PLT计数较前无明显升高, 为(1183±186)×10~9/L (P>0.05), 两组数据比较差异具有统计学意义(P<0.01).美法仑用药1 d以后, 荷瘤IFN-γ~(+/-) 小鼠外周血PLT计数较前逐渐下降, 用药后第11天降至(1158±270)×10~9/L, 恢复至化疗前水平(P>0.05);而荷瘤IFN-γ~(-/-)小鼠外周血PLT计数一直维持在正常水平;两组荷瘤小鼠外周血PLT计数比较差异无统计学意义.结论:小剂量美法仑治疗荷瘤C57BL/6小鼠过程中, IFN-γ免疫功能正常的荷瘤IFN-γ~(+/-)小鼠在用药后6 h出现外周血血小板计数的"一过性"增高, 小鼠肿瘤治愈;而IFN-γ免疫功能缺陷的荷瘤IFN-γ~(-/-)小鼠在用药后6 h不出现外周血PLT计数的增加, 小鼠肿瘤复发死亡.提示在小剂量美法仑治愈肿瘤过程中荷瘤小鼠外周血PLT计数的升高与其体内IFN-γ的免疫功能密切相关.
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截短型人骨保护素在CHO-DHFR-细胞中的表达及活性测定
目的:构建截短型人骨保护素(hTOPG)哺乳动物表达载体pcDNA3.1/DHFR-hTOPG, 实现其在CHO-DHFR~-细胞中的高效表达, 获取生物活性较高的重组蛋白.方法:利用基因重组技术构建重组表达载体pcDNA3.1/DHFR-TOPG, 按Lipofectamine~(TM) 2000试剂盒说明书转染CHO-DHFR~-细胞, 以含50 mL/L透析血清的IMDM培养基培养, 氨甲喋呤(MTX)加压筛选高表达细胞株, ELISA法和RT-PCR法测定重组蛋白和基因的表达, 并采用破骨细胞样细胞(OLC)诱导分化抑制实验测定重组蛋白的体外活性.结果:重组蛋白的表达量高可达6 mg/L·72 h , 且能够明显抑制OLC生成(P<0.05).结论:截短型人OPG在CHO-DHFR~-细胞中成功高效表达, 并具有良好的生物学活性, 为进一步的实验研究和临床应用提供了基础.
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真核表达载体p4ARE-TK-GFP/Neo的构建及其表达
目的:构建真核表达载体p4ARE-TK-GFP/Neo, 并在HepG2细胞中进行表达.方法:PCR法扩增TK启动子克隆到pEGFP-N1上, 构建表达载体pTK-GFP/Neo.人工合成4个ARE序列, 经退火和磷酸化后插入pTK-GFP/Neo载体的TK启动子上游, 构建由TK启动子启动以及上游有4个ARE调控的真核表达载体p4ARE-TK-GFP/Neo, 将其转染入HepG2细胞株并筛选, 进行稳定表达.结果:成功构建了真核表达载体p4ARE-TK-GFP/Neo, 并建立HepG2细胞稳定表达株.结论:成功地构建了由TK启动子启动以及上游有4个抗氧化反应元件(ARE)重复序列调控的真核表达载体p4ARE-TK-GFP/Neo, 并在HepG2细胞中稳定表达, 为下一步研究ARE的调控作用奠定了基础.
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脑胶质瘤中β-catenin和细胞周期素D1表达的意义
目的:研究β-catenin与Cyclin D1蛋白在脑胶质瘤的表达及其意义.方法:应用免疫组织化学SABC法检测49例脑胶质瘤组织和5例正常脑组织中β-catenin和Cyclin D1的蛋白表达.男30例, 女19例, 年龄12～75岁, 平均42.56岁.结果:在正常脑组织和脑胶质瘤中, β-catenin蛋白阳性的比例分别为2/5和38/49(P<0.01), Cyclin D1蛋白阳性的比例分别为1/5和42/49(P<0.01);比较β-catenin和Cyclin D1在脑组织、低级别脑胶质瘤和高级别脑胶质瘤中的光密度值, 发现发现各组之间均存在着统计学差异(P<0.05或P<0.01);β-catenin的过度表达与Cyclin D1的过度表达显著相关(r=0.6395, P<0 05).结论:脑胶质瘤细胞β-catenin与Cyclin D1表达增强, 可能参与胶质瘤的发生.
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转录因子Sox2 SUMO修饰位点突变体的构建及真核表达
目的:构建Sox2及突变体Sox2 K247R的真核表达载体, 并在293FT细胞中表达.方法:以含有Sox2基因全长的馈赠质粒为模板, 用循环延伸PCR法得到该基因的突变体Sox2 K247R, 并将野生型及突变型基因定向亚克隆到真核表达载体pCMV-HA上.得到的重组质粒经限制性内切酶消化和DNA测序鉴定.其后用脂质体包埋法将pCMV-HA-Sox2及pCMV-HA-Sox2 K247R分别单独转染或与pCMV-Myc-SUMO1共转染293FT细胞.采用Western blot分析蛋白表达情况及SUMO修饰情况.结果:经酶切和DNA序列测定, 重组子序列正确, 突变体第247位密码子由AAG转变为CGG.Western blot结果显示野生型及突变型的Sox2都在细胞内得到了很好的表达, SUMO修饰位点突变后, Sox2不能与SUMO蛋白结合.结论:Sox2野生型及突变型真核表达载体构建成功, 在蛋白水平体现了SUMO修饰的差异性.
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Sirt2基因的克隆及其在HEK293中的表达
目的:克隆大鼠Sirt2 基因, 构建其真核表达载体并在HEK293细胞中表达.方法:利用RT-PCR从大鼠脑组织总RNA中扩增出包含Sirt2编码区的cDNA片段, 产物纯化后T-A克隆连接至pMD20-T载体.以此为模板, 将该基因编码区克隆入真核表达载体pcDNA3.1myc-his(-)中, 转染HEK293细胞检测其表达.结果:测序证实所克隆的Sirt2编码区cDNA正确地插入pcDNA3.1myc-his(-)中, 经免疫荧光检测证实其在HEK293细胞中得到表达.结论:成功克隆了大鼠Sirt2 cDNA, 构建了其真核表达载体, 并在HEK293细胞中得到有效表达, 为进一步研究大鼠Sirt2的功能奠定了基础.
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精子蛋白17抗体免疫磁性颗粒活性分析及细胞成像研究
目的:制备精子蛋白17(Sp17)抗体免疫磁性纳米颗粒, 以期用于卵巢癌的磁共振成像靶向诊断.方法:在偶联剂EDC/NHS作用下, 将壳聚糖修饰磁性氧化铁纳米颗粒与抗人Sp17抗体结合, 制备抗Sp17抗体免疫磁性纳米颗粒(IMNPs).透射电镜观察颗粒的形貌特征, 非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳评价抗体与磁性颗粒的结合效果, ELISA检测免疫磁性颗粒的免疫活性.将IMNPs与转染人Sp17的卵巢癌HO-8910细胞共孵育, 进行体外磁共振成像检测.结果:成功实现了抗体与磁性纳米颗粒的偶联, 并且IMNPs保持良好的抗体活性.磁共振显示该颗粒成功靶向Sp17阳性的细胞, 没有发生明显的非特异吸附.结论:该免疫磁性纳米颗粒特异性良好, 可进一步用作卵巢癌的靶向治疗研究.
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脂肪来源的干细胞移植对脑缺血大鼠脑组织IL-10及TNF-α表达的影响
目的:观察脂肪来源的干细胞(ADSC)移植对脑缺血大鼠脑组织IL-10及TNF含量变化, 探讨ADSC对脑缺血损伤的保护机制.方法:将72只清洁级成年雄性Sprague-Darley大鼠随机分为假手术组(Sham组)、脑缺血组(MCAO组)、溶剂对照组(Vehicle组)和ADSC治疗组(ADSC组)四组, 每组18 只, 采用线栓法制作大脑中动脉栓塞(MCAO)模型, ADSC移植前用DAPI标记, ADSC 组于造模成功1 d后经侧脑室注射入30 μL的经DAPI标记的ADSC细胞悬液, 内含1×10~6细胞, Vehicle组则注射同等剂量的PBS, 各组分别于术后4 d、 7 d和14 d分批处死后取出脑脑织, 采用ELISA法、免疫组织化学法和半定量RT-PCR法, 检测大鼠脑组织中IL-10和TNF-α表达的变化.结果:与假手术组相比较, MCAO组大鼠4 d和7 d时脑组织中TNF-α和IL-10的表达明显上调(P<0.05).MCAO组与vehicle组各相应时间点IL-10和TNF-α表达均无统计学差异(P>0.05).与vehicle组相比, ADSC组4 d、 7 d和14 d时脑组织中IL-10的表达显著上调, TNF-α的表达明显下调(P<0.05).结论:ADSC移植可上调脑缺血大鼠IL-10的表达, 并下调TNF-α的表达, 这可能是ADSC具有脑缺血保护作用的机制之一.
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HAPO蛋白的可溶性表达、纯化及生物学活性测定
目的:为了得到可溶性表达的人促血液血管细胞生成素(HAPO)蛋白, 构建含HAPO基因片段的pET22b(+)表达载体, 获得纯化的HAPO蛋白并检测其生物学活性.方法:利用RT-PCR技术从人胎肝中获得HAPO cDNA片段, 并克隆至表达载体pET22b(+)中, 利用基因工程菌BL21(DE3)进行表达, 产物利用Ni~(2+)-螯合亲和层析及SP Sepharose FF柱层析分离纯化. 采用黏附实验检测HAPO对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)黏附性的影响.结果:从人胎肝中克隆出长为897 bp HAPO目的片段, 成功构建重组质粒pET22b(+)-HAPO, 其表达的融合蛋白以可溶状态存在, 表达量占菌体总蛋白的10%, 经分离纯化融合蛋白的纯度可达80%.活性测定结果表明HAPO以剂量依赖性方式增加HUVEC的总黏附性.结论:可溶性表达了HAPO蛋白, 并用体外实验证实HAPO对造血干/祖细胞归巢有一定促进作用.
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肿瘤特异性抗原长循环纳米脂质体的制备及其抗肿瘤免疫效应
目的:制备包裹基因工程MAGE3/HSP70(简称M3H)融合蛋白的长循环纳米脂质体, 研究其生物学特性及抗肿瘤免疫效应.方法:采用薄膜分散-超声法, 制备包裹M3H的长循环纳米脂质体(简称NL M3H), 观察其形态并测量其粒径, 凝胶层析法检测纳米乳剂包裹率、载药量、稳定性及体外释药特性.用NL M3H免疫小鼠, 运用酶联免疫斑点法(ELISPOT)和细胞毒性杀伤实验(LDH)检测了NL M3H激活机体细胞免疫反应的状况.结果:成功地制备出平均粒径<100 nm的长循环纳米脂质体, 包裹率为38%, 载药量0.038 g/L, 4℃放置6月后性质稳定.体外释药特性显示有74%的蛋白释放在24 h内完成.ELISPOT和细胞毒性杀伤实验显示NL M3H可以激活机体免疫反应产生针对MAGE3的CTL, 特异性杀伤表达MAGE3的肿瘤细胞.结论:NL M3H具有良好的包裹率和载药量, 性质稳定且具有缓释作用, 可以有效激活机体免疫反应产生针对特异性抗原MAGE3的CTL, 是一种很有希望的新型抗肿瘤疫苗.
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急性乙型肝炎患者FoxP3~+调节性T细胞数量与功能的随访
目的:观察急性HBV感染患者外周血FoxP3~+CD4~+CD25~+调节性T细胞(Treg)的数量和功能的变化特点.方法:采集15例急性乙型肝炎(AHB)患者急性期、恢复早期及痊愈后外周血、 15例健康人的外周血, 分离PBMC, 通过MACS免疫磁珠分选CD4~+ T细胞和Treg, 应用实时荧光定量RT-PCR比较AHB患者不同疾病发展阶段(急性期, 恢复早期, 痊愈后)CD4~+ T细胞的FoxP3(Forkhead/winged helix transcription factor)mRNA表达量的差异, 应用~3[H]掺入法检测Treg抑制CD4~+CD25~- T细胞增殖的能力的差异.所有病例及对照均ELISA检测HBsAg、 HBsAb、 HBeAg、 HBeAb、 HBcAb, 实时荧光定量RT-PCR检测血清HBV DNA载量, 同时进行肝功能检测.结果:AHB患者CD4~+ T细胞表达FoxP3 mRNA的量在急性期稍低于健康对照, 在疾病恢复早期明显高于健康对照(t=3.44, P<0.01), 痊愈后恢复至正常.Treg抑制CD4~+CD25~- T细胞增殖的能力在急性期显著低于恢复早期(t=-5.30, P<0.01)和痊愈后(t=-3.20, P<0.05).结论:Treg在AHB患者急性期数量减少, 功能减弱, 在恢复早期数量增加, 功能增强, 提示Treg可能在急性肝炎的不同发病阶段中通过调节细胞免疫反应影响乙肝病毒清除.
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Runt相关转录因子3依赖的维生素D3抑制结肠癌细胞的增殖
目的:探讨维生素D3在结肠癌中的抗肿瘤机制及其与抑癌基因runt相关转录因子3(RUNX3)的关系, 为临床有效治疗结肠癌提供依据.方法:不同浓度维生素D3作用于SW480结肠癌细胞系, RT-PCR和Western blot分别检测RUNX3在mRNA和蛋白水平的表达情况.构建RUNX3基因的小干扰RNA载体并将其转染SW480结肠癌细胞, 经G418 筛选获得稳定表达的细胞系.MTT法和流式细胞术检测维生素D3对转染前后的细胞生长作用的影响.结果:随着维生素D3作用浓度增加, SW480细胞中RUNX3基因在mRNA和蛋白表达水平均呈剂量依赖性增加.成功构建了RUNX3的小干扰RNA载体并将其转染SW480细胞;筛选到稳定的敲除RUNX3的结肠癌细胞系.与其他对照组相比, 维生素D3对RUNX3敲除的SW480细胞的生长抑制作用减弱.结论:维生素D3在转录和翻译水平正性调控RUNX3的表达而抑制结肠癌细胞的增殖.
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单肺通气对小儿围手术期炎性细胞因子的影响
目的:观察单肺通气 (OLV) 方式对小儿围手术期炎性细胞因子影响.方法:选择 40 例ASAⅠ～Ⅱ级肺部手术小儿, 随机分为长时间组(Ⅰ组)和间断双肺通气组 (Ⅱ组), 每组20例.两组患者分别在麻醉诱导后(T1)、 OLV 30 min(T2)、 60 min(T3)及术后 2 h(T4)采取静脉血, 测定血清肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素(IL-6、 IL-8、 IL-10)浓度.用Datex-Ohmeda Anesttesia Delivery Unit(ADU)监测呼吸力学参数: 气道锋压(Ppeak)、气道平台压(Pplat)、气道阻力(Raw)、分钟通气量(MV)等.结果:两组TNF-α、 IL-6、 IL-8和 IL-10于 T3时明显上升(P<0.05), Ⅱ组T3、 T4时TNF-α和IL-8均明显低于Ⅰ组(P<0.05), 而 IL-10高于Ⅰ组(P<0.05).两组患儿呼吸动力学参数比较无统计学差异.结论:单肺通气期间间断双肺通气可减轻小儿围手术期炎性反应.
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晚期卵巢癌患者一线化疗后机体免疫重建的动态研究
目的:研究晚期卵巢癌患者一线化疗后免疫细胞数量和表型的动态变化, 探询化疗后机体是否存在免疫重建的动态过程, 为制定化疗联合免疫治疗方案提供实验依据.方法:选取术后行紫杉醇联合卡铂化疗的晚期卵巢上皮癌患者共13例, 采集化疗前(S_0)、化疗后5～7 d(S_1)、化疗后12～14 d(S_2)和化疗后25～28 d(S_3)外周血, 流式细胞术检测患者外周血中CD3~+、 CD4~+、 CD8~+细胞、 CD4~+CD25~+ Treg细胞的百分比及绝对数量, 并进一步分析CD4~+和CD8~+细胞中记忆细胞、原始细胞的比例.结果:在一个完整的化疗周期中, 淋巴细胞的总数量在化疗后S_1期下降至低, S_2期即开始恢复, 到S_3期则已恢复到化疗前水平;CD3~+、 CD4~+、 CD8~+细胞及CD4~+CD25~+ Treg细胞的绝对数目均于S_1期降至低点, 且与S_0期分别都有统计学差异;CD8~+细胞的比例于S_1期降至低;CD4~+CD25~+ Treg细胞的比例于S_2期降至低;CD4~+CD45RO~+和CD8~+CD45RO~+细胞的比例于S_2期升至高, 而CD8~+CD45RA~+细胞的比例于S_2期低.结论:紫杉醇联合卡铂诱发卵巢癌患者于化疗后5～7 d出现一过性淋巴细胞减少症, 之后开始产生淋巴细胞自稳性增生(免疫重建).免疫重建期可能是免疫治疗实施的佳窗口期.
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HIV-1感染者CD4~+CD25~(nt/hi)CD127~(lo)调节性T细胞PD-1表达水平与疾病进展的关系
目的:阐明HIV-1感染者外周血中具有CD4~+CD25~(nt/hi)CD127~(lo)特征的调节性T细胞(Treg)表面PD-1的表达水平与疾病进展的关系.方法:选取108名未经治疗的不同进展期的HIV-1感染者和27名健康人对照, 采集静脉血, 用Ficoll-Hypaque密度梯度离心法分离获得PBMC, 加入PerCP-CD4抗体、 FITC-CD25抗体、 PE-CD127抗体和APC-PD-1抗体, 经细胞表面四色染色、流式细胞术(FCM)分析Treg表面PD-1的表达;另将50 L全血加入Trucount绝对计数管, 采用Multitest CD3/CD8/CD45/CD4试剂盒检测CD4+T细胞绝对数;分离静脉血血浆, NucliSens EasyQ测定血浆HIV-1病毒载量;实验数据采用SPSS14.0 统计学软件分析处理.结果:HIV-1感染者Treg表面PD-1表达水平显著高于健康人(5.33%±2.24% vs 1.72%±0.65%, P<0.01);AIDS期(7.87%±2.23%)明显高于进展期(5.21%±1.72%, P<0.05)和新近感染者(3.22%±1.01%, P<0.05);HIV-1感染者Treg表面PD-1表达水平与血浆中的HIV-1病毒载量和CD4~+T细胞绝对数密切相关.结论:首次证实HIV-1感染者外周血中Treg表面PD-1表达增加, 且表达水平与病程进展相关.该结果为进一步揭示HIV-1感染中Treg的效应机制、探索新的免疫治疗方案提供了理论及实验依据.
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慢性乙型肝炎患者外周血CD4~+T细胞免疫效应分子的表达特征
目的:探讨慢性乙型肝炎患者外周血CD4~+T细胞免疫效应蛋白和炎症因子的表达情况, 并分析其与感染状态的相关性.方法:根据感染状态患者分为肝功能正常高病毒复制组、肝功能正常低病毒复制组、肝功能异常高病毒复制组、肝功能异常低病毒复制组.应用流式细胞术检测外周血CD4~+T细胞表达的免疫效应蛋白和炎症因子水平, 并分析上述指标与感染状态的相关性.结果:肝功能正常/异常的高病毒组的CD4~+T细胞分泌的TNF-α明显高于正常对照组(P<0.05);肝功能异常高病毒组CD4~+T细胞分泌的IFN-γ明显低于肝功能正常高/低病毒组和正常对照组(P<0.05);而各组CD4~+T细胞分泌的穿孔素(PF)、颗粒酶B(GrB)、颗粒溶素(GNLY)相比无明显差异;CD4~+T细胞表达的GrB、 IFN-γ、 GNLY两两相比呈正相关, PF和GrB呈正相关.结论:慢性乙型肝炎患者外周血CD4~+T细胞表达的免疫效应蛋白与感染性无关, 但表达的炎症因子TNF-α与病毒复制呈正相关, IFN-γ与肝脏损害呈负相关.
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儿童喉乳头状瘤组织中Survivin及Caspase-3蛋白表达及相关性研究
目的:研究儿童喉乳头状瘤中survivin及caspase-3蛋白的表达及其相互关系.方法:应用免疫组化方法对儿童喉乳头状瘤组织、儿童声带小结组织及正常的喉黏膜组织中survivin及caspase-3的表达进行检测并进行相关性分析.结果:42例儿童喉乳头状瘤组织中survivin阳性表达率为57.14%, 明显高于儿童声带小结组(P<0.01)和正常黏膜组(P<0.01);42例喉乳头状瘤组织中caspase-3阳性表达率为26.19%, 显著高于儿童声带小结组和正常喉黏膜组 (P<0.01);Spearman相关性分析显示, 儿童喉乳头状瘤中survivin与caspase-3的表达呈显著负相关(r=-0.682, P<0.01).结论:Survivin的高表达和caspase-3的低表达可能在儿童喉乳头状瘤发生发展过程中起着重要作用.
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癫痫患者血清细胞因子水平与脑电图的相关性研究
目的:探讨癫痫患者外周血肿瘤坏死因子(TNF-α)和白细胞介素2(IL-2)水平变化及其与脑电图的关系.方法:选择我院神经内科2006-01/2009-01收治癫痫患者72例和同期健康体检者50例.采用ELISA法测定发作后1 h、24 h血清TNF-α和IL-2水平, 同时做常规脑电图检查, 研究患者TNF-α和IL-2表达水平与脑电图的关系.结果:癫痫患者发作后1 h、 24 h血清TNF-α和IL-2表达水平均明显高于对照组(P<0.01);72例癫痫患者血清TNF-α和IL-2表达水平之间呈显著正相关(r=0.479, P<0.01);癫痫组患者发作后1 h脑电图异常率为80.6%(58/72), 发作后24 h为68.1%(49/72), 发作后1 h脑电图异常率明显高于发作后24 h (P<0.05);癫痫发作后1 h及24 h, 脑电图异常患者的血清TNF-α和IL-2表达水平均明显高于脑电图正常患者表达水平(P<0.05).结论:癫痫患者存在着细胞免疫功能低下, 且离癫痫发作期的时限越近, 血清TNF-α和IL-2的水平越高, 脑电图异常率越高, 脑电图改变与TNF-α及IL-2的表达水平有关.
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乳腺癌新辅助化疗前后血清免疫指标CA15-3、CA125和CEA水平的变化
目的:探讨乳腺癌患者新辅助化疗前后血清CA15-3、 CA125和CEA水平的变化.方法:应用化学发光免疫分析法(CLIA)检测60例乳腺癌(Ⅰ期30例, II-IV期各10例)患者新辅助化疗前后血清CA15-3、 CA125和CEA表达水平, 并与60例非肿瘤患者作比较.结果:乳腺癌患者化疗前血清CA15-3、 CA125和CEA含量显著高于非肿瘤患者组(P<0.01);三者联合检测较单一检测阳性率明显增高.Ⅰ+Ⅱ期患者行新辅助化疗3个疗程后CA15-3、 CA125和CEA水平显著下降(P<0.05), 与非肿瘤患者组比较无统计学差异;Ⅲ+Ⅳ期患者行新辅助化疗3个疗程后CA15-3、 CA125和CEA水平明显下降(P<0.05), 但仍高于非肿瘤患者组(P<0.05). 结论:血清免疫指标CA15-3、 CA125、 CEA变化对临床诊断和预后观察具有重要的临床价值.
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不同麻醉和镇痛方法对肺癌根治术患者T细胞亚群变化的影响
目的:观察不同麻醉和镇痛方法下肺癌根治术患者术中和术后外周静脉血T淋巴细胞亚群的变化.方法:选择60例择期肺癌手术患者, 随机分为3组: 全凭静脉复合硬膜外麻醉联合静脉镇痛(A)组;全凭静脉复合硬膜外麻醉联合硬膜外镇痛(B)组;全凭静脉麻醉联合静脉镇痛(C)组, 每组20例.分别于麻醉前30 min(T0)、切皮2 h(T1)、术后4 h(T2)、术后24 h(T3)和术后48 h(T4)抽取外周静脉血, 用流式细胞检测技术测定CD4~+%和CD8~+%, 计算CD4~+/CD8~+, 同时测定各时点皮质醇水平, 并用视觉模拟评分(VAS)判定术后镇痛效果.结果:(1)A、 B组T2时点的VAS评分明显低于C组(P<0.05), B组T3时点的VAS评分明显低于C组和A组(P<0.05);(2)A组CD4~+%在T1至T3时点明显高于C组(P<0.05), A组CD4~+/ CD8~+比值在T2时点明显高于C组, B组CD4~+%、 CD4~+/ CD8~+比值在T3、 T4时点明显高于A组(P<0.05);(3)T2和T3时A、 B组血浆皮质醇的升幅明显低于C组(P<0.05).结论:在麻醉和术后镇痛中辅以硬膜外阻滞能减轻围手术期应激反应及其对T细胞亚群的影响, 更有利于恶性肿瘤患者.
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上皮性钙黏蛋白G-347GA SNP单核苷酸多态性与食管癌的关系
目的:探讨CDH1基因启动子区G-347GA单核苷酸多态性(SNP)对食管鳞状细胞癌(ESCC) 发生、淋巴结转移及预后的影响.方法:采用病例-对照研究, 以聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)的方法, 分析218例ESCC和218名健康对照者的CDH1 G-347GA SNP分布情况.结果:ESCC组的CDH1基因启动子区G-347GA多态性基因型和等位基因型分布与健康对照组无统计学差异(P>0.05).根据吸烟状况分层分析发现, CDH1 G-347GA多态性基因型及等位基因型频率在吸烟及非吸烟的患者和健康个体中均无统计学意义.根据有无淋巴结转移进行分层分析表明, CDH1 G-347GA多态性基因多态性在有淋巴结转移组和无淋巴结转移组之间无统计学意义, 所以CDH1G-347GA 基因多态性与淋巴结转移的风险性无关.结论:CDH1G-347GA多态性基因型和等位基因型与ESCC的发生和发展及ESCC患者淋巴结转移和预后无关.
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白细胞介素-21及其与相关疾病的研究进展
白细胞介素-21(interleukin-21, IL-21)是近年来发现的一种细胞因子, 属于 I型细胞因子家族, 主要是由活化的CD4~+T细胞合成和分泌.IL-21的受体广泛分布在脾、 胸腺 、 淋巴结等器官和组织, IL-21功能的发挥依靠其受体的共用γ链, 主要通过JAK-STAT 途径传递信号, 通过对一些重要的免疫细胞如NK细胞、 T细胞、 B细胞和树突状细胞(DC)发挥作用, 参与机体的天然免疫和获得性免疫 , 并在自体免疫形成中扮演一定角色, 使其与肿瘤和自体免疫性疾病的治疗有关.
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缺氧诱导因子-1基因多态性与疾病相关性研究进展
缺氧诱导因子-1(hypoxia inducible factor-1, HIF-1)是特异性缺氧状态下发挥活性的一种转录因子.由Semenza等~[1]于1991年在肝细胞癌株Hep3b细胞核抽提物中发现.HIF-1在缺氧条件下广泛存在于哺乳动物和人体内许多类型的细胞内, 可上调多种靶基因如促红细胞生成素、血管内皮生长因(vascular endothelial growth factor, VEGF)子等基因的转录.研究发现HIF-1存在多态性, 并且与疾病发生密切相关.现就缺氧诱导因子-1结构、生物学功能、多态性及与疾病相关性研究做一综述.
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B7-H3的免疫调控及新研究进展
活化的T淋巴细胞在抗肿瘤、抗感染及自身免疫性疾病方面起着重要的作用.T细胞介导的免疫应答反应的启动需要双信号刺激: 即MHC-肽复合物提供的特异性信号及由抗原递呈细胞(APC)表面分子提供的共刺激信号~[1].
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CD305分子在小鼠巨噬细胞的表达
目的:研究CD305分子在不同小鼠巨噬细胞上的表达规律.方法:对小鼠巨噬细胞系、免疫组织中的巨噬细胞和脂多糖刺激的腹腔巨噬细胞进行免疫荧光染色, 流式细胞术分析小鼠CD305在各种巨噬细胞上的表达规律.结果:小鼠CD305高表达于小鼠巨噬细胞系和组织中的巨噬细胞.此外, LPS刺激后6 h内腹腔巨噬细胞上小鼠CD305的表达显著下降, 与此同时上清中IL-6的水平显著升高.结论:小鼠CD305分子高表达于小鼠巨噬细胞, LPS刺激后表达明显下降(P<0.05).
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红景天苷对MPP~+诱导的PC12细胞凋亡的保护作用
目的:探讨红景天苷对MPP~+诱导的PC12细胞凋亡是否具有保护作用.方法:采用MPP~+诱导的具有多巴胺能神经元特性的PC12细胞凋亡作为PD的体外模型.实验分对照组、 500 μmoL/L MPP~+诱导组、红景天苷(10、 50、 100 μmol/L)3个浓度预处理组.用MTT法测定细胞活性, 流式细胞术检测细胞凋亡, TUNEL法检测细胞凋亡断裂的DNA片段.结果:10、 50、 100 μmoL/L红景天苷对MPP~+诱导的PC12细胞具有一定的保护作用.与MPP~+组(50.2±1.8)%相比, 10、 50、 100 μmoL/L红景天苷预处理细胞活力分别上升为(65.1±1.0)%、 (69.5±2.3)%、 (80.9±2.0)%(P<0.05).流式细胞术检测提示正常组、 MPP~+组、红景天苷预处理组(10、 50、 100 μmoL/L)凋亡百分率分别为0.9%、 34.5%、 26.9%、 20.1%、 14.2%.经红景天苷预处理后, 与MPP~+组相比较细胞断裂的DNA片段明显减少.结论:红景天苷对MPP~+诱导的细胞凋亡具有浓度依赖性的保护作用.
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中药对过敏性哮喘大鼠模型Th1/Th2型细胞因子的影响
目的:探讨中药治疗对哮喘大鼠IL- 4 mRNA和IFN-γ mRNA表达及IgE含量的影响.方法:24只Wistar大鼠, 随机分为中药治疗组、空白对照组和哮喘模型组, 利用卵白蛋白(OVA)及氢氧化铝制作大鼠哮喘模型, 在雾化激发期, 中药组用杏仁、甘草等中药制成的溶液雾化大鼠, 其余组用生理盐水代替.采用免疫放射法、逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)半定量法分别检测各组大鼠血清和肺泡灌洗液(BALF)中免疫球蛋白E(IgE)含量以及肺组织IL- 4 mRNA和IFN-γ mRNA表达.结果:与空白对照组比较, 模型组大鼠IgE含量和IL- 4 mRNA的表达明显升高(P<0.05).与模型组比较, 中药治疗血清IgE的含量和IL- 4 mRNA的表达明显降低(P<0.05), 而IFN-γ mRNA表达则升高(P<0.05).结论:IL- 4可能参与哮喘的发生, 而中药治疗可通过抑制IL- 4 mRNA和上调IFN-γ mRNA的合成, 改善哮喘炎症状态.
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流式细胞术鉴定人外周血滤泡辅助性T细胞
目的:用免疫荧光染色和流式细胞术(FCM)鉴定正常人外周血单个核细胞(PBMC)中滤泡辅助性T(Tfh)细胞, 以便对其功能进行进一步研究.方法:密度梯度离心法分离人PBMC, 采用不同荧光素标记的抗CXCR5、 CD4及CD19抗体进行染色FCM分析, 鉴定出表型为CD4~+CXCR5~+的T细胞亚群.结果:外周血可以检测到CD4~+CXCR5~+T细胞亚群, 占CD4~+T淋巴细胞百分比为(11.09±0.38)%, MFI值为25.78±0.72, 低于B细胞膜表面CXCR表达水平(MFI值为99.6±8.1).结论:健康人外周血存在一定比例的Tfh细胞, 应用FCM可以成功鉴定Tfh细胞, 为进一步研究其功能提供了良好的技术平台.
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乙酰半胱氨酸对小鼠缺血再灌注损伤肝肺组织的保护作用及机制
目的:研究抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸(NAC)对小鼠肝脏缺血再灌注损伤模型中肝肺组织的保护作用及机制.方法:制备BALB/c小鼠肝部分缺血再灌注损伤模型, 将小鼠随机分为3组: 假手术组(SH组), 缺血再灌注组(I/R组)和NAC组(I/R-NAC组).分别于再灌注后1 h、 3 h取静脉血测定血清TNF-α浓度和ALT水平;取肺组织标本测湿干质量比及病理.同时取肝、肺组织行RT-PCR以观测Toll样受体2/4(TLR2/4)表达.结果:肺组织病理结果显示I/R组肺组织毛细血管充血, 肺泡结构破坏, 肺泡间质中性粒细胞浸润, 肺泡腔内不同程度渗出及少量红细胞.肺湿干质量比显示肺水肿.缺血再灌注后静脉血清TNF-α浓度和ALT水平较假手术组显著升高.受损肝叶和肺组织内均出现TLR2/4 mRNA高表达, NAC干预后, 肺水肿明显减轻;TLR2/4 mRNA表达受到抑制;血清TNF-α浓度和ALT水平较I/R组明显下降.结论:N-乙酰半胱氨酸抑制再灌注后TLR2/4的活化, 降低TNF-α的分泌, 从而减轻缺血再灌注肝、肺组织的损伤.
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miR-21真核表达载体的构建及其活性鉴定
目的:构建miR-21的真核表达载体, 并使其在骨肉瘤MG63细胞中表达, 为研究miR-21对骨肉瘤细胞MG63的作用打下基础.方法:根据miRNA的成熟序列以及附近约200多碱基共433个碱基序列, 设计PCR引物, PCR扩增, 退火后用T4连接到线性化的pcDNA3.1(+)质粒中, 并对重组质粒进行双酶切、菌落PCR及测序分析, 鉴定完全正确的重组质粒转染骨肉瘤细胞MG63, G418(400 mg/L)筛选4周获得miR-21稳定表达细胞系, 用Northern blot及real time RT-RCR法鉴定pcDNA3.1(+)-miR-21可在真核细胞中过表达.结果:成功构建了miR-21的真核表达载体, 并获得稳定转染重组质粒的细胞系.结论:miR-21的真核表达载体在骨肉瘤细胞MG63中稳定高表达, 为进一步研究miR-21在骨肉瘤MG63中的功能及基因调控机制奠定了实验基础.
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八珍汤对TGF-β1抑制的T淋巴细胞增殖及其活化影响
目的:研究八珍汤对TGF-β1抑制下人T淋巴细胞的增殖及活化的影响.方法:以正常人外周血来源的T淋巴细胞为研究对象, 设对照组、 PHA组、 PHA+八珍汤组、 PHA+TGF-β1组、 PHA+TGF-β1组+八珍汤组.以MTT法检测八珍汤对TGF-β1抑制的T淋巴细胞增殖的影响;流式细胞术(FCM)检测八珍汤对TGF-β1抑制的T淋巴细胞活化的影响及对CD4~+CD25~+调节性T淋巴细胞的数量的影响;ELISA法检测八珍汤对TGF-β1抑制的T淋巴细胞分泌IFN-γ、 IL-2的影响.结果:八珍汤可以使TGF-β1抑制的T淋巴细胞的增殖率回升(P<0.01), 但仍低于对照组(P<0.01), 并随TGF-β1作用时间的延长, 恢复难度增加.八珍汤可以使T淋巴细胞活化率增加, TGF-β1+八珍汤组与TGF-β1组的活化标志CD69表达有统计学差异(P<0.01);八珍汤能使CD4~+CD25~+调节性T淋巴细胞的比例降低(P<0.01);能使T淋巴细胞分泌IFN-γ、 IL-2的能力恢复(P<0.01), 但都未能恢复到TGF-β1抑制前的水平, 明显低于PHA组水平(P<0.01).结论:八珍汤对TGF-β1抑制的T淋巴细胞增殖率、 T淋巴细胞的活化、 CD4~+CD25~+调节性T细胞比例、 IFN-γ、 IL-2的分泌水平都有一定的恢复作用.
| 年 | 期数 |
| 2018 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2017 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2016 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2015 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2014 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2013 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2012 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2011 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2010 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2009 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2008 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2007 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2006 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2005 | 01 02 03 04 05 06 z1 |
| 2004 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2003 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2002 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2001 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2000 | 01 02 03 04 05 06 |
| 1999 | 01 02 |
| 1995 | 01 02 03 |
| 1994 | 01 02 |
| 1993 | 01 02 03 04 |
| 1992 | 01 02 03 04 |
| 1991 | 01 02 03 04 |
| 1990 | 01 02 |
| 1989 | 01 02 03 04 |
