细胞与分子免疫学杂志
Chinese Journal of Cellular and Molecular Immunology 세포여분자면역학잡지
- 主管单位： 中国免疫学会；第四军医大学
- 主办单位： 陕西省免疫学会,中国免疫学会
- 影响因子： 0.81
- 审稿时间： 1-3个月
- 国际刊号： 1007-8738
- 国内刊号： 61-1304/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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BMP-2和FGF-2对小鼠骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化的影响
目的:观察骨形成蛋白(BMP-2)和成纤维细胞生长因子2(FGF-2)对小鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)向成骨细胞分化的影响.方法:取3～18月雄性C57BL/6J小鼠(共50只)的骨髓细胞, 分离贴壁培养后, 用免疫磁珠法纯化, 并鉴定为MSCs后, 再进行贴壁培养24 h后, 分别在成骨细胞诱导培养液中加入100 μg/L BMP-2和0.5 nmol/L FGF-2持续诱导7、 14、 21 d后, 进行碱性磷酸酶染色、碱性磷酸酶活性检测, Vonkossa染色以及茜素红染色, 并用递转录荧光定量PCR法检测向成骨细胞分化的标志性基因(Runx2/cbfa1、 Alp、 collagen-1、 osteocalcin)的表达情况.结果:BMP-2刺激组的ALP活性以及钙化结节明显高于对照组, Runx2/cbfa1, ALP, collage-1, osteocalcin的mRNA呈高表达; FGF-2刺激组的ALP活性以及钙化结节也高于对照组, Runx2/cbfa1、 Alp、 collagen-1、 osteocalcin的mRNA表达量也高于对照组, 但不如BMP-2明显. 结论:BMP-2和 FGF-2在不同程度上促进体外培养的小鼠MSCs向成骨细胞方向分化.
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重组人白介素18在毕赤酵母中的高效分泌表达
目的:构建人白介素18(hIL-18)真核表达载体, 在毕赤酵母中高效分泌表达hIL-18.方法:通过PCR法扩增得到hIL-18基因, 构建其真核表达载体pPICZaC/hIL-18, 电转化毕氏酵母X-33, PCR、 SDS-PAGE、 Western blot等方法筛选获得高效表达rhIL-18的工程菌株, 疏水层析和阴离子交换层析纯化表达产物, 并初步测定其生物学活性.结果:rhIL-18经甲醇诱导后其表达产量约为202 mg/L.Western blot检测了rhIL-18的特异性结合活性; rhIl-18纯化后纯度达95%左右, 并证明rhIL-18能够协同IL-2诱导PBMC分泌IFN-γ.结论:构建了重组hIL-18的基因工程菌, 并在毕赤酵母中实现了高效分泌表达, 为进一步研究其活性和功能奠定了基础.
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CFSE检测马传染性贫血病毒疫苗免疫马T细胞增殖方法的建立
目的:以流式细胞术(FCM)检测马传染性贫血病毒(EIAV)抗原特异性的T淋巴细胞增殖.方法:将新鲜分离的马外周血单个核细胞(PBMC)进行CFSE 染色, 经纯化病毒体外刺激并培养5 d后, 进行T淋巴细胞亚型标记, 检测特异性增殖的CD4+和CD8+细胞比例.结果:对马PBMC的染色浓度、特异性刺激物的种类及反应时间等条件进行了优化.可对马外周血抗原特异性T淋巴细胞不同亚型的增殖水平进行定量评价 .结论:FCM检测方法为研究马传染性贫血病毒疫苗免疫保护机制提供了一个有效的手段; 该法也可以为其他病毒的免疫学研究提供借鉴.
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异种表皮生长因子受体胞外段的表达及其抗肿瘤效果研究
目的:构建异种EGFR蛋白疫苗并研究其抗肿瘤效果.方法:用PCR方法获得鸡EGFR胞外片段, 与pGEX- 4T-2载体连接, 并在E.coli BL21(DE3)中表达鸡的EGFR胞外片段与GST的融合蛋白, 融合蛋白经Ni2+亲和层析柱纯化、复性后, 免疫小鼠, 免疫3次后, 接种小鼠Lewis细胞, 观测肿瘤生长情况, ELISA检测小鼠血清中抗EGFR蛋白的抗体效价.结果:成功构建了EGFR胞外段基因的原核表达载体; SDS-PAGE显示成功表达了目的融合蛋白; 融合蛋白免疫小鼠后, ELISA法检测到特异性抗EGFR抗体; 实验组与对照组肿瘤体积的比较结果显示, 融合蛋白疫苗能够在一定程度上抑制肿瘤的生长.结论:异种EGFR蛋白能够克服免疫耐受问题, 诱导机体产生抗体, 有一定的抗肿瘤效果, 为后续的肿瘤疫苗研究打下了基础.
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血管紧张素Ⅱ诱导RAW264.7细胞Toll样受体4表达及髓过氧化物酶活性的机制研究
目的:探讨血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)对RAW264.7细胞Toll样受体4(TLR4)mRNA、蛋白表达及髓过氧化物酶(MPO)活性的影响及其致炎致动脉粥样硬化(AS)机制.方法:体外培养RAW264.7细胞, 用不同浓度的AngⅡ(1、 10、 100、 1000 nmol/L)及100 μg/L脂多糖(LPS)刺激RAW264.7细胞24 h后, RT-PCR法测RAW264.7细胞TLR4 mRNA水平, Western blot检测RAW264.7细胞TLR4蛋白表达, 比色法测细胞培养上清中MPO活性.同时, 预先加入不同剂量的TLR4阻断剂(1 mg/L、 5 mg/L)后, 再用AngⅡ(100 nmol/L)刺激RAW264.7细胞24 h, 检测细胞培养上清中MPO活性.结果:AngⅡ浓度依赖性地增加RAW264.7细胞TLR4 mRNA及蛋白表达(P<0.01), LPS也可诱导RAW264.7细胞TLR4 mRNA及蛋白表达(P<0.01); AngⅡ浓度依赖性地升高RAW264.7细胞MPO活性(P<0.01), LPS也可升高RAW264.7细胞MPO活性(P<0.01), 而TLR4阻断剂明显抑制AngⅡ这一效应(P<0.01).结论:AngⅡ上调RAW264.7细胞TLR4表达, 通过跨膜受体TLR4诱导MPO分泌, 加重炎症反应, 促进AS的形成和发展.
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重症肌无力CD45RA、CD45RO胸腺细胞亚群及相关细胞因子表达分析
目的:探讨胸腺细胞异常分化与重症肌无力发生的关系.方法:采用基因芯片对多种白细胞介素、干扰素及其受体mRNA表达进行分析, 采用流式细胞术测定胸腺细胞CD45RA、 CD45RO的表达率, 采用免疫组化对胸腺组织切片CD45RA、 CD45RO表达及分布进行检测.结果:MG患者IL-1R、 IL-4R、 IFNγR1、 IFNγR2、 IL-6、 IL-8表达水平显著低于对照组; IL-10RB表达水平显著高于对照组; IL-1、 IL-2、 IL-4、 IL-10、 IL-7、 IFN-α、 IFN-β、 IFN-γ表达水平在MG和对照组均很低, 无显著差异; MG患者CD56+胸腺细胞百分率(0.56±0.33)显著低于对照组(1.78±0.69), MG患者CD45RO+、 CD1a+细胞显著高于对照组.免疫组化和RT-PCR也有相同结果.结论:MG患者胸腺细胞发育过程中CD45RO+细胞向CD45RA+T细胞转变存在异常.
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淫羊藿甙对小鼠T淋巴细胞体外中期和晚期活化的影响
目的:研究淫羊藿甙(ICA)对刀豆蛋白A(ConA)刺激的小鼠T淋巴细胞体外中期和晚期活化的影响.方法:采用流式细胞术(FCM)结合双色荧光抗体染色技术分别检测中期和晚期活化标志CD25和CD71分子的表达; 取中期活化的细胞上清, 利用LuminexTM100分析上清中IL-2、 IL- 4、 IL-10、 TNF-α、 IFN-γ的含量变化.结果:ICA在终浓度0.3、 1.5、 3.0 μmol/L时明显抑制CD25的表达而对CD71没有明显影响; 下调Th2型细胞因子及上调Th1型细胞因子的分泌量, 但没有剂量依赖效应.结论:ICA下调CD25、 IL-2和Th2型细胞因子水平, 抑制T细胞活化, 同时有一定程度的促进细胞免疫反应, 因此ICA可能具有双向调节免疫平衡的作用.
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口蹄疫病毒多抗原表位基因融合表达产物的抗原性分析
目的:筛选出高抗原性的口蹄疫病毒(FMDV)抗原表位组合体, 为能有效启动细胞免疫、高广谱性的口蹄疫植物疫苗的研究提供研究基础.方法:通过化学方法合成O、 A型口蹄疫病毒的5个T细胞表位基因和2个B细胞表位基因单链, 采用套叠PCR的方法将T或是B细胞表位基因分别融合成融合体T或B, 利用同尾酶的性质将融合体T和B连接成3种不同融合方式的串连体, 即5′-T-B-T-3′、 5′-T-T-B-3′和5′-B-T-T-3′; 利用马铃薯X病毒(potato virus X, PVX)载体在烟草叶片中表达各串连体基因、融合体T基因、融合体B基因和O型口蹄疫病毒的VP1基因; RT-PCR检测各基因在烟草(N.benthamiana)叶片中的转录水平; 间接ELISA及Western Dotblot 检测表达产物的抗原性.结果:各抗原基因在烟草叶片中成功获得了表达, 表达产物的抗原性因不同的融合方式而呈现差异, 其中以5′-T-B-T-3′的融合方式为高, 5′-B-T-T-3′次之, 再是5′-T-T-B-3′, 但都高于VP1基因的表达产物, 更高于融合体T或B基因的表达产物.结论:通过融合口蹄疫病毒的多个表位基因有可能找到一种研制有效启动细胞免疫反应广谱抗口蹄疫病毒的基因工程疫苗的方法, 且T、 B细胞表位的不同组合方式对免疫活性很可能存在一定的影响.
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NT-3基因逆转录病毒表达载体的构建
目的:分离大鼠神经营养素-3(NT-3)基因, 构建pLEGFP-NT3逆转录病毒表达载体.方法:利用RT-PCR技术钓取大鼠NT-3基因, 克隆到测序载体pMD18-T中, 测序后再亚克隆到逆转录病毒载体pLEGFP-C1中, 通过Lipofectamine 2000导入包装细胞PA317.结果:RT-PCR产物为776 bp, 经测序鉴定虽与GenBank中NT-3基因的序列相差1个碱基, 但不影响NT-3蛋白质的表达;构建的pLEGFP-NT3重组载体经酶切鉴定,证实NT-3基因片段正确插入pLEGFP-C1载体中.转染包装细胞后, 激光共聚焦显微镜下观察导入NT-3基因的PA317细胞发绿色荧光.结论:分离得到了大鼠NT-3基因成功构建了pLEGFP-NT3表达载体.
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小鼠PDL1-Red2融合蛋白真核表达载体的构建、表达及其效应
目的:小鼠跨膜型PD-L1与红色荧光蛋白(RFP)融合基因真核表达载体的构建、表达与鉴定, 及其效应初步研究.方法:应用基因工程技术构建重组载体, 脂质体转染NIT细胞株, 以流式细胞术(FCM)和倒置相差荧光显微镜检测融合蛋白的表达;采用混合淋巴细胞培养, 以FCM测定脾细胞的增殖反应.结果:融合基因在转染的真核细胞中获得表达, 并呈膜分布, 转染PD-L1/pDsRed2-N1的细胞对淋巴细胞增殖反应有一定的抑制作用, 表明PD-L1/pDsRed2-N1融合蛋白中分子标签未影响PD-L1的结构及其生物学活性.结论:PD-L1与DsRed2融合基因载体构建成功, 表达的融合蛋白具有生物学活性.
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食管癌组织微环境对树突状细胞的影响
目的:探讨食管癌组织匀浆上清液体外模拟肿瘤微环境对人树突状细胞(DC)分化发育的影响, 揭示肿瘤免疫逃逸机制, 为DC疫苗的应用提供理论基础.方法:制备新鲜食管癌及癌旁组织匀浆上清液, ELISA检测其VEGF-A含量.密度梯度离心法分离人外周血单个核细胞, 含rhGM-CSF和rhIL- 4 RPMI1640培养液诱导DC, 第2天在继续诱导DC基础上设食管癌匀浆上清组、癌旁匀浆上清组、 VEGF-A组, 均隔天半量换液, 第4天加入食管癌细胞株EC9706抗原, 第6天加入脂多糖, 第8天收集各组细胞.观察DC形态, 流式细胞术(FCM)检测免疫表型, RT-PCR检测CD1a表达, CCK-8检测T细胞增殖率及杀伤率.结果:食管癌组织匀浆上清VEGF-A含量[(0.987±0.319) μg/L]明显高于癌旁[(0.152±0.105) μg/L, P<0.05]; 食管癌匀浆上清组细胞形态明显受到抑制, CD86分子阳性率(%)与正常DC相比由69±8降为42±11、 CD1a由56±12降为27±12、 CD11c由21±13降为18±13(P<0.01), CD1a基因几乎无表达, 刺激T细胞增殖率(%)由112.5±7.2降为70.2±3.5(P<0.01), 杀伤率(%)由62.4±0.6 降为46.8±1.6(P<0.01); 癌旁匀浆上清液组、 VEGF-A组结果与正常DC组无统计学意义.结论:食管癌组织匀浆上清液所模拟的微环境对DC的诱导分化及其功能有明显的抑制作用, 在该抑制作用中VEGF-A并不起主要作用.
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原发性乳腺癌组织中KLK6蛋白和mRNA的表达及其临床病理学意义
目的:探讨KLK6蛋白及其mRNA在原发性乳腺癌组织中的表达和临床意义.方法:随机选取原发性乳腺癌患者88例并收集其术后标本, 采用SABC免疫组化方法和RT-PCR技术, 检测乳腺癌组织和正常乳腺组织中KLK6蛋白及其mRNA的表达.并分析其与原发性乳腺癌组织临床病理学特征之间的关系.结果:KLK6蛋白在原发性乳腺癌组织中的阳性表达率为78.40% (69/88), 并与癌组织的临床病理学特征有关;发生淋巴结转移及ER(+)的癌组织中KLK6蛋白的阳性表达率明显低于未转移组(P<0.05)及ER(-)组(P<0.05).KLK6 mRNA在原发性乳腺癌组织中的表达水平显著高于正常乳腺组织(P<0.01);但发生淋巴结转移的癌组织中, KLK6 mRNA的表达水平明显低于未转移组(P<0.05);ER+组亦低于ER(-)组(P<0.05).KLK6蛋白及其mRNA的表达与乳腺癌相关基因CerbB-2 的表达无相关性(P>0.05) .结论:KLK6蛋白及其mRNA的异常表达可能与原发性乳腺癌的发生、浸润、转移有关, 可以作为一个肿瘤标志物在临床中应用.
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肿瘤相关糖蛋白-72抗原在原发性乳腺癌组织中的表达及其临床意义
目的:探讨抗肿瘤相关糖蛋白(TAG-72)抗原的表达与原发性乳腺癌病理特征及预后的关系.方法:随机选取原发性乳腺癌患者118例, 应用SABC免疫组化方法检测TAG-72抗原的表达.并对其中的92例原发性乳腺癌患者中作术后为期5年的随访, 分析TAG-72抗原与原发性乳腺癌患者预后的相关性.结果:TAG-72抗原在原发性乳腺癌组织中的阳性表达率为78.81% (93/118), 并与原发性乳腺癌组织的临床病理学特征及患者的预后均有密切的关系.在直径较大(P<0.05)、 TNM分期较高(P<0.05)、淋巴结转移(P<0.01)及组织学分级低(P<0.01)的肿瘤组织中, TAG-72抗原高表达.此外, TAG-72抗原阳性表达的原发性乳腺癌患者的生存率明显低于阴性表达的患者 (P<0.01).结论:TAG-72抗原的表达可能与原发性乳腺癌的发生、浸润、转移有关;TAG-72抗原可以作为一个肿瘤标志物在临床中应用, 检测其在原发性乳腺癌组织中的阳性表达率, 并结合临床病理学分级, 可提高对患者预后判断的准确性.
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Smad7而非Smad6基因可抑制TGF-β诱导肾小管上皮-间充质转分化
目的:观察Smad6和Smad7基因能否抑制TGF-β诱导肾小管上皮-间充质转分化.方法:构建产生表达Smad6和Smad7基因的无辅毒腺相关病毒载体, 再将病毒颗粒分别转染入人肾小管上皮细胞(HKC), 细胞随机分为正常对照、 TGF-β1组、 Smad7 组、 LacZ组、 TGF-β1+Smad7或Smad6组、 TGF-β1+LacZ组.10 μg/L TGF-β1添加入培养液孵育15、 30、 60、 120 min和3 d.Western blot测定TGF-β1和Smad6或Smad7基因转染对细胞p-Smad2、 E-cadherin、α-smooth muscle actin(α-SMA)表达的影响, ELISA法测定培养上清羟脯氨酸的含量的变化, 倒置显微镜观察细胞形态变化.结果:与未加TGF-β1细胞相比, 添加TGF-β1后15、 30、 60、 120 min胞内Smad2磷酸化水平明显增加, 30 min时表现大.10 μg/L TGF-β1与HKC孵育72 h后, 细胞α-SMA和羟脯氨酸量合成增加, E-cadherin表达减少;细胞形态变长, 呈纺锤状细胞, 失去鹅卵石样的形状.Smad7基因转染可抑制TGF-β1诱导Smad2磷酸化, 抑制细胞α-SMA和羟脯氨酸合成, 增加E-cadherin表达, 维持培养细胞的上皮样形态, 相反, Smad6没有这样的作用.结论:Smad7而不是Smad6基因转染能抑制TGF-β1诱导肾小管上皮-间充质转分化, 这些作用可能与Smad7阻断Smad2磷酸化有关.
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急性冠脉综合征患者CD4+CD28-T淋巴细胞与HLA-DRB1的相关性
目的:探讨人HLA-DRB1等位基因多态性与急性冠脉综合征(ACS)CD4+CD28- T细胞数量的关系.方法:采用聚合酶链反应-序列特异性引物DNA分型技术对136例ACS患者和115例健康对照进行HLA-DRB1基因分型.同时采用流式细胞术(FCM)进行CD4+CD28- T 细胞测定, 分析HLA与CD4+CD28- T 细胞的相关性.结果:HLA- DRB1*15, DRB1*04和DRB1*01等位基因与CD4+CD28- T淋巴细胞数量相关, 表达DRB1*04和DRB1*01的患者有高百分比的CD4+CD28-T淋巴细胞, 而表达DRB1*15的所有患者却有低数量的CD4+CD28- T淋巴细胞.结论:在黑龙江地区人群中, ACS患者CD4+CD28- T细胞的形成与HLA-DRB1*01、 DRB1*04和DRB1*15 密切相关.
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自身免疫病患者血液中穿通支原体分离培养及其血清IL-6与TNF-α的检测
目的:探讨自身免疫病AID患者血液中穿通支原体(Mpe)的分离检出以及Mpe感染患者血清中IL-6与TNF-α的浓度水平.方法:采用分离培养共计从44例AID患者血液标本, 16例ASO或RF阳性体检人员及28例正常对照相应标本中进行支原体分离检测, 对培养阳性菌株采用穿通及发酵支原体套式PCR予以证实, 并用RIA对相应血清进行IL-6及TNF-α浓度检测.结果:于17例(38.6%)AID患者血液中分离到Mpe, 2例(12.5%)ASO或RF阳性体检人员中分离到Mpe, 而正常对照组中则无1例阳性, 组间支原体检出率有统计学意义(P<0.01).支原体阳性AID组血液IL-6浓度(3.30±1.49) μg/L与支原体阴性AID组(2.43±0.95) μg/L及正常对照组(1.14±0.32) μg/L之间差异有统计学意义(P<0.01);支原体阳性AID组血液TNF-α浓度(293.3±179.9) ng/L与支原体阴性AID组(173.9±73.9) ng/L及正常对照组(108.8±33.8) ng/L组之间也有统计学意义(P<0.01).结论:Mpe感染与AID的发生密切相关, Mpe感染患者血清中IL-6与TNF-α较非感染对照人群明显升高.
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Survivin在儿童急性淋巴细胞白血病的表达及中期随访报告
目的:了解Survivin 在儿童急性淋巴细胞白血病(ALL)的表达及预后意义.方法:测定了54例儿童ALL的标本, 同时分析其临床特征、危险程度分类, 并对所有病例进行2年的随访, 并比较2年的无事生存率(EFS).结果:ALL患者Survivin阳性41例, 阴性13例, 36例对照组Survivin皆为阴性.阳性组和阴性组在平均年龄、初诊时白细胞计数、肿瘤细胞百分数无统计学意义(P>0.05), 但阳性组中、高危病儿明显多于阴性组, Kaplan-Meier分析, Survivin阴性的2年EFS优于Survivin阳性组(P<0.05).结论:在儿童ALL Survivin的表达阳性病例中, 中、高危病例数多, EFS时间短, 预后差.
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肾移植术后血清IL-18的动态监测及临床意义
目的:观察肾移植术后发生急性排斥反应、感染、环孢霉素A(CsA)中毒时血清白介素-18(IL-18)的变化, 探讨IL-18在急性排斥反应中的早期诊断及鉴别诊断的意义.方法:采用 ELISA法对90例肾移植患者手术前后的血清IL-18水平进行动态监测.结果:肾移植患者术前血清IL-18水平与健康对照组比较明显升高(P<0.01), 术后第1天明显升高, 10 d左右基本降至术前水平.发生急性排斥反应时, 血清IL-18持续升高, 经甲基强的松龙(MP)冲击有效后迅速下降, 治疗无效者, 血清IL-18持续在高水平.并发感染时, IL-18也显著升高, 与急性排斥反应组相比差别无显著性意义;而CsA中毒时, IL-18变化不明显.结论:动态监测IL-18有助于用于急性排斥反应的早期诊断和鉴别诊断.
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类风湿关节炎患者血清结缔组织生长因子水平及与间质性肺疾病的关系
目的:研究类风湿关节炎(RA)患者血清中结缔组织生长因子(CTGF)的水平与间质性肺疾病(ILD)的关系, 探讨RA发病机制及RA继发性ILD相关因素.方法:选择我院2007-05/2007-09风湿免疫科收治的RA患者53例, 其中RA伴ILD患者 19例, 单纯RA患者34例;正常人健康对照20例, RA诊断标准按照1987年美国风湿病学会(ARA)提出的RA分类标准, ILD诊断标准按照2002年中华医学会呼吸病学分会制定的特发性肺纤维化(IPF)非外科肺活检诊断标准.用酶联免疫吸附试验(ELISA)分别检测3组血清中CTGF水平, 应用SPSS13.0统计软件分析检测结果.结果:RA伴ILD的患者血清中CTGF水平明显升高, 与单纯RA组比较差异有统计学意义(P<0.05);两组分别与健康对照组比较血清中CTGF水平明显升高, 差异均有统计学意义(P<0.05).结论:CTGF可能参与了RA发病, 同时与RA继发ILD密切相关.
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ERCC1的表达纯化及其单克隆抗体的制备
目的:表达纯化ERCC1蛋白并制备其单克隆抗体(mAb).方法:克隆并原核表达ERCC1蛋白, 其氨基端带有6-His标签.纯化后的蛋白免疫BALB/c小鼠, 经融合、筛选制备特异性mAb.结果:成功表达了ERCC1蛋白.SDS-PAGE显示所表达蛋白的相对分子质量(Mr)约为37 000.获得了1 株稳定分泌抗ERCC1抗体的杂交瘤细胞株(6F8), 其分泌的mAb的Ig亚类(型)为IgG2b.ELISA检测, 对应腹水mAb的效价为1∶ 1.5×106.Western blot结果显示抗ERCC1 mAb具有良好的特异性.结论:成功地表达纯化ERCC1蛋白并制备了1株抗ERCC1 mAb.
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小鼠双尾C蛋白Bicc1多克隆抗体的制备及细胞内定位的初步研究
目的:制备小鼠双尾C蛋白Bicc1的多克隆抗体并确定其在细胞内定位.方法:根据生物信息学分析结果, PCR扩增小鼠Bicc1编码61E-199A的cDNA片段.将该片段克隆到GST融合蛋白表达载体上, 在IPTG诱导下产生Bicc1-N抗原.纯化目的蛋白并制备兔抗Bicc1蛋白多克隆抗体.Western blot鉴定抗体特异性, 并以间接免疫荧光法初步分析该蛋白在细胞内定位.结果:成功构建Bicc1-N片段原核表达载体, 在大肠杆菌中实现可溶性表达, 制备小鼠Bicc1蛋白的多克隆抗体, 并证实该蛋白主要表达于细胞质内.结论:成功制备了高效价并特异的兔抗Bicc1多克隆抗体, 为进一步研究Bicc1基因产物的生物功能奠定了基础.
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环磷酰胺免疫删减法制备细胞表面抗原单克隆抗体小鼠模型的建立
目的:观察不同剂量环磷酰胺(CP)诱导免疫耐受的作用, 建立一个免疫删减法制备细胞表面抗原单克隆抗体(mAb)的动物免疫模型.方法:雌性 BALB/c小鼠经CHO细胞免疫后分别给予不同剂量的CP诱导免疫耐受, 选择血清抗体效价低的一组小鼠按常规方式腹腔注射CHO-TM5细胞进行免疫.ELISA测定各小鼠血清中CHO抗体及CHO-TM5抗体效价, 检测血清抗体对CHO细胞与CHO-TM5细胞结合反应的差异性.结果:BALB/c小鼠腹腔注射不同剂量的CP后, 各剂量组均出现不同程度的免疫耐受作用.CP 100 mg/kg组与CP 125 mg/kg组小鼠血清抗体效价较低, 接近阴性对照组.ELISA检测显示CP 100 mg/kg组血清抗体与CHO-TM5细胞呈阳性结合反应, 不与CHO细胞结合;而CP 0 mg/kg组血清抗体与CHO细胞与CHO-TM5细胞的结合反应均呈阳性.结论:CP 100 mg/kg具有良好诱导小鼠对CHO和CHO-TM5细胞的共同抗原表位产生免疫耐受, 相对增强对CHO-TM5细胞目的抗原hTM的免疫应答的作用, 为免疫删减法制备细胞表面抗原mAb提供了一个理想的动物免疫模型.
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聚乙二醇修饰鼠抗人CD3单克隆抗体
目的:确定一条聚乙二醇化鼠抗人CD3单克隆抗体(mAb)和抗体片段的制备工艺路线.方法:以胃蛋白酶酶解并通过凝胶柱分离和纯化得到抗体Fab′, 利用PEG-SPA修饰抗体和抗体片段Fab′上的氨基, 通过体内和体外T细胞增殖实验, 考查修饰后的抗体和抗体片段的免疫活性.结果:较佳的修饰工艺条件为:在pH9.0硼酸缓冲液, 反应温度25℃, 抗体浓度0.2 g/L, 抗体和聚乙二醇摩尔比为1∶ 20, 反应3 h.修饰后抗CD3 mAb全抗, 对T淋巴细胞增殖抑制活性下降了32.3%, 抗体Fab′下降了8.0%, PEG化Fab′下降了19.9%.利用ELISA检测血液中修饰后的抗体和抗体片段的半衰期.结果显示mPEG修饰后抗体和抗体片段血药浓度降低明显减缓, 修饰后抗CD3抗体半衰期从2.66 h延长到8.72 h, 延长了3.28倍.而修饰后抗体Fab′片段半衰期从2.21 h延长到4.17 h, 延长了1.90倍.结论:利用聚乙二醇修饰抗体和抗体片段, 提高了抗体半衰期, 且无细胞毒性, 活性损失较小, 该技术具有较高的可行性, 可极大地提高mAb尤其是非人源性抗体在临床上的应用.
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抗人绒毛膜促性腺激素单克隆抗体的制备与鉴定
目的:制备抗人绒毛膜促性腺激素(HCG)的单克隆抗体(mAb).方法:利用从人工流产刮宫物中提取的HCG免疫BALB/c小鼠, 取其脾细胞同NS-1小鼠骨髓瘤细胞融合, 采用有限稀释法筛选杂交瘤细胞株, 并对mAb的亚型、亲和力及特异性进行鉴定.结果:共获得26株能稳定分泌抗HCG特异性mAb的杂交瘤细胞株.mAb的亚类均为IgG1, 亲和力介于1.14×108～2.0×108 mol/L之间, 其中4株mAb与HCG的β亚基有较强的反应, 而与黄体激素(LH)、促卵泡激素(FSH)、促甲状腺激素(TSH)均无交叉反应.结论:成功获得4株鼠抗人HCG mAb的杂交瘤细胞株, 其分泌的mAb能特异识别人HCG的β亚基, 可用于早孕、肿瘤等诊断的进一步研究.
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人高迁移率族B1蛋白原核表达、纯化及抗体制备和初步应用
目的:原核表达并纯化人高迁移率族B1蛋白(HMGB1)免疫日本大耳白兔制备其抗体.方法:构建原核表达质粒pRsetA2-HMGB1, 转化大肠杆菌BL21(DE3), HMGB1蛋白经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达.融合蛋白通过Ni2+-NTA树脂亲和纯化后免疫兔子制备抗体血清.以间接ELISA法检测抗体效价, Western blot和免疫荧光染色鉴定抗体特异性.结果:成功构建原核表达质粒, 表达并纯化HMGB1蛋白.ELISA检测抗体效价为1∶ 16 000以上, Western blot和免疫荧光染色确定抗体具有高度特异性.结论:HMGB1蛋白和抗体的成功制备, 为下一步研究将HMGB1作为肿瘤等疾病治疗的新靶点奠定基础.
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B细胞免疫调控在SLE中的作用
系统性红斑狼疮(SLE)免疫功能紊乱的主要特点是机体产生众多的自身抗体, B细胞是SLE发病的直接参与者.研究显示, SLE患者的B细胞处于高度活化状态, 多种因素均可影响B细胞的免疫活性, 其中, 抗原提呈细胞(APC)如巨噬细胞(Mφ)和树突状细胞(DC)、 T细胞和免疫分子等与B细胞相互作用, 共同调节SLE的发生、发展和转归.
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Ph(-)慢性骨髓增殖性疾病JAK2V617F检测技术及临床应用的进展
2005年以来多个研究组报道了在Ph(-)慢性骨髓增殖性疾病患者的外周血和骨髓中存在JAK2V617F突变, 所用的检测方法有DNA直接测序、序列特异性PCR、实时定量PCR与DNA溶链曲线分析、限制性片段长度多态性、焦磷酸测序, 兹就这些方法的原理、敏感性以及临床应用进行综述.
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IL-12家族新成员及其在免疫应答中的重要调节作用
白细胞介素-12(Interleukin-12, IL-12)家族成员IL-12、 IL-23、 IL-27三者及其各自受体在结构上的相似性, 使得它们在发挥调节NK细胞活性、 T细胞增殖和细胞因子产生以及抗体类别转换等方面的功能相互重叠但又不完全相同.而2007年发现的该家族的另一新成员IL-35, 结构上虽与其他3个成员同源, 但却具有独特的生物学功能, 是一种主要由调节性T细胞(Treg)分泌的抑制性细胞因子.IL-12家族各成员以及同其他细胞因子之间存在着相互协同、相互拮抗的网络, 不仅在细胞内感染及炎症过程中起着重要的调节作用, 而且与银屑病、多发性硬化症、 Crohn' s病等多种临床疾病的发病密切相关.IL-12家族相关生物制品在自身免疫性疾病、感染性疾病以及肿瘤的治疗中有着广阔的应用前景.
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病毒样颗粒疫苗的研究进展
病毒样颗粒(virus-like particles,VLPs)是不含病毒核酸的空壳结构,许多病毒结构蛋白都具有自动组装成VLPs的能力,在形态结构上与天然的病毒颗粒相似,具有很强的免疫原性和生物学活性.由于VLPs不含有病毒遗传物质,因此不具有感染性, 其中有些已经作为疫苗成功应用于临床.VLPs在结构上允许外源基因或基因片段的插入而形成嵌合型VLPs并将外源性抗原展示在其表面.此外,多数病毒VLPs还具有包裹核酸或其他小分子的能力,可作为基因或药物的运载工具.
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树突状细胞负载肺癌细胞抗原的方法研究
目的:建立自体热休克凋亡肺癌细胞抗原制备、树突状细胞(DC)体外诱导、以及抗原负载方法, 为制备DC肿瘤疫苗提供技术基础.方法:采用酶消化法从手术切除的肺癌新鲜组织获得单细胞悬液, 热休克后用白桦脂酸诱导其凋亡制备成细胞抗原;采用血细胞分离机采集外周血单个核细胞(PBMC), 贴壁法获得单核细胞, 经GM-CSF与IL- 4体外诱导成未成熟树突状细胞(imDC);负载细胞抗原后制备成DC肿瘤疫苗, 并对DC疫苗的形态、数量及表型特征进行分析.结果:(1)肿瘤细胞抗原得率:(13.68±1.30)×106/g组织;平均凋亡率:(93.79±2.31)%;(2)imDC平均得率为(9.37±0.83)×106/(118.77±12.56)×106个PBMC, 活率>95%;imDC表型分析:CD11c+CD14-、 CD11c+HLA-DR+、 CD11c+CD80+、 CD11c+CD83+、 CD11c+CD86+ 表达率分别为(87.45±3.42)%、 (87.16±1.08)%、 (2.80±1.52)%、 (5.64±1.56)%、 (5.11±1.09)%;(3)DC疫苗平均得率为(5.75±0.69)×106/(9.37±0.83)×106个imDC, 活率>95%, DC疫苗表型:CD11c+CD14-、 CD11c+HLA-DR+、 CD11c+CD80+、 CD11c+CD83+、 CD11c+CD86+ 表达率分别为(92.73±1.21)%、 (89.35±2.31)%、 (86.80±1.23)%、 (69.53±7.21)%、 (94.92±1.48)%. 结论:该方法稳定、安全、可靠, 可制备出具有成熟DC表型的肿瘤疫苗.
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一种基于免疫印迹的高通量肿瘤相关抗原筛选和鉴定方法
目的:为了分析SEREX抗原克隆在异体食管癌患者血清中和健康对照人血清中的反应情况, 我们发展了一种基于免疫印迹的高通量肿瘤相关抗原筛选和鉴定方法.方法:采用新发展的基于免疫印迹原理的抗原克隆微阵列检测方法与传统的噬菌斑检测法对食管癌患者血清中IgG的反应情况进行了比较, 并采用两种方法分析了两个SEREX阳性克隆与40例食管癌患者血清和40例健康人血清中的IgG的阳性反应率.通过ELISA对两种方法得到的结果进行了验证.结果:两个阳性克隆在两种检测方法中均与同一例食管癌病人血清起反应, 采用抗原克隆微阵列检测方法检测p53和rps3两个克隆阳性率分别为25%和37.5%, 采用噬菌斑检测法检测p53和rps3两个克隆阳性率分别为27.5%和 37.5%;ELISA方法检测p53和rps3两个克隆阳性率分别为25.0%和31.25%.结论:本研究采用两种方法检测患者血清IgG反应的结果是一致的, 抗原克隆微阵列检测方法可以代替传统的噬菌斑筛选法.
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呼吸道合胞病毒感染中性粒细胞Toll样受体- 4表达及其功能
目的:观察呼吸道合胞病毒(RSV)感染中性粒细胞Toll样受体- 4(TLR4)的表达及对炎症介质产生的影响, 探讨地塞米松(DEX)干预对RSV感染后中性粒细胞TLR4表达及炎症介质的作用.方法:RSV感染中性粒细胞, 流式细胞术(FCM)检测中性粒细胞TLR4表达及代表中性粒细胞呼吸爆发功能的过氧化氢(H2O2), ELISA检测中性粒细胞培养上清的IL-6和IL-8水平, 并观察阻断TLR4信号通路及DEX干预对RSV感染中性粒细胞功能的影响.结果:(1) RSV感染中性粒细胞TLR4表达增加;RSV感染中性粒细胞IL-6的产生增加, 阻断TLR4信号传导, RSV感染组IL-6产生减少 (阻断组IL-6:391.307±43.45 ng/L;RSV感染组IL-6:466.03±36.478 ng/L;对照组IL-6:21.205±15.059 ng/L);RSV感染中性粒细胞IL-8和H2O2的产生均明显增加, 阻断TLR4信号传导对IL-8和H2O2的产生没有影响.(2)DEX下调RSV感染后中性粒细胞TLR4表达, 减少RSV感染的中性粒细胞产生IL-6、 IL-8和H2O2的产生;阻断TLR4, 与DEX协同抑制RSV感染中性粒细胞IL-6的产生, 逆转DEX对RSV感染中性粒细胞H2O2产生的抑制作用.结论:TLR4信号通路在RSV感染后中性粒细胞炎症介质产生及呼吸爆发功能中起重要作用;阻断TLR4信号通路和DEX联合作用可能成为临床治疗的新靶点.
| 年 | 期数 |
| 2018 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2017 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2016 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2015 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2014 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2013 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2012 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2011 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2010 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2009 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2008 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2007 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2006 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2005 | 01 02 03 04 05 06 z1 |
| 2004 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2003 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2002 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2001 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2000 | 01 02 03 04 05 06 |
| 1999 | 01 02 |
| 1995 | 01 02 03 |
| 1994 | 01 02 |
| 1993 | 01 02 03 04 |
| 1992 | 01 02 03 04 |
| 1991 | 01 02 03 04 |
| 1990 | 01 02 |
| 1989 | 01 02 03 04 |
