细胞与分子免疫学杂志
Chinese Journal of Cellular and Molecular Immunology 세포여분자면역학잡지
- 主管单位： 中国免疫学会；第四军医大学
- 主办单位： 陕西省免疫学会,中国免疫学会
- 影响因子： 0.81
- 审稿时间： 1-3个月
- 国际刊号： 1007-8738
- 国内刊号： 61-1304/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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热休克蛋白70、葡萄糖调节蛋白94和IgG在人肺癌组织中的表达
目的:探讨热休克蛋白70(Hsp70)、葡萄糖调节蛋白94(Grp94)、IgG在人肺癌组织中的表达及意义.方法:应用免疫组织化学方法结合病理学图像分析系统研究40例肺癌组织中Hsp70、Grp94和IgG的表达.并用免疫荧光双标染色及激光共聚焦技术研究三者的定位关系.结果:人肺癌组织中Hsp70、Grp04、IsG都有高表达,阳性率分别为65%(26/40)、45%(18/40)和82.5%(33/40),Hsp70阳性定位胞核胞质,Grp94和IgG阳性定位主要在胞质,平均光密度值分别为(5.10±0.32)、(3.52±0.35)和(8.12±0.31).26例Hsp70阳性的肺癌病例中有10例与IsG有共定位关系,18例Grp94与IgG有共定位关系.结论:Hsp70、Grp94和IgG在肺癌组织中高表达,提示三者在肺癌的发生发展中起重要作用;肺癌肿瘤细胞表达的ISG与rap70、Grp94分别存在一定共定位关系,其在肿瘤的发展中可能具有协同作用或者在肺癌组织中存在Hsp70-IgG、Grp94-IgG和Hsp70-GW94-IgG复合物的形式.
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重组人sCR1真核表达载体的构建、表达及其生物学活性
目的:采用酵母细胞分泌型载体pPIC9k表达人可溶性补体受体(sCR1),研究重组人sCR1融合蛋白的体外生物学活性.方法:从人外周血中提取总RNA,应用RT-PCR获得人sCR1全长cDNA,然后将其克隆入毕赤酵母细胞分泌型表达载体pPICgk中,构建含人sCR1的重组质粒(pPIC9ksCR1),经测序鉴定正确,电转化入毕赤酵母细胞SMD1168中,将经G418抗性筛选出的重组sCR1酵母细胞株进行PCR鉴定,经甲醇诱导,表达产物经SDS-PAGE分析和Westernblot鉴定,通过Ni2+ -NTA agarose亲和层析纯化后进行生物学活性鉴定.结果:获得毕赤酵母细胞分泌型表达载体pPIC9k-sCRI,经G418筛选及PCR鉴定得到高拷贝整合的重组酵母细胞株,经甲醇诱导含pPIC9k-sCR1的酵母SMD1168细胞表达出重组sCR1融合蛋白.此蛋白在SDS-PAGE上表现为Mr,约31 1300的蛋白区带,在Western blot分析中可被sCR1的CD35单克隆抗体(mAb)识别.经Ni2+-NTA agarose亲和层析纯化后得到较纯的sCR1融合蛋白及较高的生物学活性.结论:人sCR1融合蛋白在酵母细胞表达系统中的高水平表达,并且有与人体天然蛋白相同的抗原性及其生物学活性.
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巨噬细胞特异性启动子调控的真核表达载体的构建及靶向性研究
目的:构建巨噬细胞特异性启动子调控的靶向巨噬细胞的真核表达载体.方法:PCR方法合成巨噬细胞特异性启动子,并将其插入带有绿色荧光蛋白(CFP)基因的真核表达载体pEGFP-N1 中,替代CMV启动子.利用脂质体转染法,将其与红色荧光蛋白真核表达载体(pERFP-N1)共转染巨噬细胞和非巨噬细胞,通过荧光显微镜观察GFP和RFP在不同细胞中的表达水平来鉴定启动子的靶向性.结果:成功构建了巨噬细胞特异性启动子调控的真核表达载体,并且能在巨噬细胞中高效特异性地表达报告基因.结论:构建的靶向巨噬细胞的真核表达载体能提高目的基因的表达特异性,为提高基因治疗胞内菌感染的靶向性及降低毒副作用奠定了实验基础.
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人乳头瘤病毒基因分型液态芯片的构建
目的:通过构建人乳头瘤病毒基因分型的液态芯片,建立高通量、灵敏和特异的HPV型别检测系统.方法:在LuminexTM平台上,采用国际公认的标准HPV质粒建立13种基因分型HPV芯片,选择引物及探针,将探针有效的偶联到微球上.结果:用LuminexTM平台建立了13型HPV芯片,对单一或两种标准质粒混合的样品均可准确分型.对分型检测的阳性标本进行基因测序,经美国NCBI数据库BLAST比对符合其检测型别.结论:利用LuminexTM平台构建了13种HPV 型别液相芯片的诊断体系,具有高通量、快速准确等特点,适用于大规模临床样本的HPV基因分型的诊断.
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细菌脂多糖诱导小鼠DC2.4细胞TLR7蛋白的表达
目的:探讨细菌脂多糖(LPS)对小鼠树突状细胞(DC)系DC2.4 TLR7蛋白表达的诱导作用.方法:用RPMIl640完全培养液培养DC2.4细胞,光学显微镜观察LPS刺激前后的细胞形态特征,RT-PCR和Western blot分别测定TLR7 mRNA和蛋白表达.结果:LPS刺激前后,细胞中均有TLR7 mRNA转录.LPS刺激前,细胞较小而透亮,树突较少,无,TLR7蛋白表达;LPS刺激后,细胞体积增大,树突增粗增多,刺激后12 h、24 h、48 h,TLR7蛋白均有表达,且在3个时间点的表达量基本一致.结论:LPS可诱导DC2.4中TLR7蛋白的表达.
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CIAPIN1在人肺癌组织中的表达及其对人小细胞肺癌NCI-H446细胞生长的影响
目的:探讨新基因CIAPINl在人肺癌和癌旁正常组织中的表达差异及该基因导人对人小细胞肺癌NCI-H446细胞生长的调控作用.方法:采用免疫组化方法检测51例石蜡包埋的肺癌及癌旁正常肺组织中CIAPIN1蛋白的表达;构建腺病毒载体介导CIAPIN1基因(Ad-CIAPIN1),转染到自身CIAPIN1低表达的人小细胞肺癌细胞系NCI-H446,Westernblot检测目的蛋白的表达;台盼蓝染色计数活细胞数,绘制细胞生长曲线;流式细胞术(FCM)分析细胞周期及细胞凋亡的变化.结果:癌旁正常肺组织中CIAPIN1基因蛋白阳性表达率(100%)明显高于肺癌组织中表达率(39.2%,P<0.05);与对照组相比,腺病毒介导的CIAPIN1实验组能迅速抑制NCI-H446细胞的生长(P<0.01),诱导细胞发生凋亡,并出现明显的G1/S期阻滞现象.结论:肺癌组织中CIAPIN1基因表达下调可能与肺癌发生密切相关,Ad-CIAPIN1转染NCI-H446细胞能明显抑制肿瘤细胞的生长,提示CIAPINI基因可能是一个新的抑癌相关基因.
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人Delta-like1ext-Fc融合蛋白毕赤酵母表达载体的构建及表达
目的:构建人Delta-like1ext-Fc融合蛋白毕赤酵母表达载体PIC-hDll1ext -Fc,并在毕赤酵母GS115中表达.方法:以pEF-BOSneo-hdll1ext-Fc为模板PCR扩增人Delta-like1胞外段.通过DNA重组构建毕赤酵母表达载体PIC-hDll1ext.-Fc.用MD平板筛选重组子,G418筛选高拷贝转化子,经甲醇诱导表达后,SDS-PAGE、Western blot分析表达蛋白.结果:hDll1基因的胞外段被有效地扩增.序列分析表明,所构建的含hDll1ext-Fc融合基因的质粒与设计相同,融合蛋白hDll1extFc得到正确表达.结论:成功地扩增了人Delta-likel胞外段,构建了hDll1ext-Fc融合基因的毕赤酵母表达载体PIC-hDll1extFc,并在毕赤酵母中正确表达,为进一步研究奠定了实验基础.
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马γ-干扰素双抗体夹心ELISA检测方法的建立
目的:建立检测马γ-干扰素的双抗体夹心 ELISA,为马传染病的免疫学研究提供新方法.方法:将识别不同表位的抗马γ-干扰素的2株单克隆抗体(mAb,A5和SB10)纯化后,利用生物素标记试剂盒对其中1株纯化的mAb(SB10)进行标记,通过对重组马IFN-γ进行ELISA检测来建立马γ-干扰素双抗体夹心ELISA.结果:经过方阵滴定实验确定捕获抗体的佳浓度为1 mg/L,检测抗体的工作效价为1∶1 000.利用建立的方法对不同稀释度的重组马γ-干扰素和丝裂原刺激的马外周血单核细胞培养上清进行检测.结论:此方法检测敏感度达到1μg/L,特异性良好,为马的细胞免疫学研究提供了方法,并为建立马γ-干扰素ELISPOT检测方法奠定了基础.
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真核表达载体pEGFP-claudin-1的构建及其在293T细胞中的表达
目的:构建真核表达载体pEGFP-claudin-1,并在293T细胞中进行表达.方法:用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法扩增claudin-1开放读码框(ORF)基因,将其插入到pEGFP-C3载体的Xho Ⅰ和BamH Ⅰ酶切位点,构建真核表达载体pEGFP-claudin-1,酶切鉴定并测序.通过脂质体法转染293T细胞,进行荧光检测和Western blot分析.结果:构建了含有claudin-1 ORF的真核表达质粒pEGFP-claudin-1,转染293T细胞后,经荧光可见细胞膜有EGFP-claudin-1 融合蛋白的表达,Western blot检测发现有相对分子质量(Mr)49 000的蛋白条带.结论:成功地构建真核表达载体pEGFP-claudin-1,并在293T细胞中表达,为研究claudin-1的功能奠定了基础.
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NE(MHS)纳米乳剂疫苗的抗肿瘤免疫学效应研究
目的:制备包裹有MAGE1-Hsp70和SEA的复合抗原的纳米乳剂疫苗NE(MHS)(nanoemulsion-encapsulatedMAGE1-Hsp70/SEA),评价其抗肿瘤免疫学特性.方法:采用磁力超声法制备纳米疫苗NE(MHS),评价其粒径、包裹率及稳定性;NE(MHS)免疫动物,IFN-γ ELISPOT和LDH杀伤实验检测疫苗激活机体特异性细胞免疫反应情况;肿瘤攻击实验检测纳米乳剂疫苗的抗肿瘤效应.结果:(1)成功制备出粒径为(20±5)nm的NE(MHS),其药物包裹率为87%,于4℃放置6个月后或3 000 r/min 10 min离心后无分层;(2)与其他组相比,NE(MHS)组小鼠脾淋巴细胞中分泌IFN-γ的T细胞数量明显增多(P<0.05),CTL对B16-MAGE-1的特异性杀伤作用明显增强;NE(MHS)组B16-MAGE-1肿瘤成瘤时间长、成瘤率低.结论:NE(MHS)纳米乳剂疫苗具有良好的理化性质,能够刺激机体产生强烈的MAGE-1特异性的细胞免疫,能有效预防表达MAGE-1的肿瘤细胞攻击,是一种很有希望的新型抗肿瘤疫苗.
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4-1BBL胞膜外区蛋白对人外周血淋巴细胞体外活性的调节作用
目的:研究4-1BBL胞膜外区融合蛋白(ex4-1BBL)对人外周血淋巴细胞(PBL)体外活性的调节作用.方法:表达纯化人4.1BBL胞膜外区融合蛋白,台盼蓝计数观察其对淋巴细胞增殖的作用;CytoTox 96非放射性细胞毒试剂盒检测培养液的乳酸脱氢酶(LDH)水平,ELISA检测白介素-2(IL-2)水平.CytoTox 96检测其联合应用anti-CD3/anti-PgP微型双功能抗体及PBL对靶细胞K562/A02细胞的杀伤作用.结果:4-1BBL胞膜外区融合蛋白能够促进淋巴细胞增殖,减少细胞死亡,促进IL-2分泌;联合应用ex4-1BBL的淋巴细胞组的杀伤效率优于对照组.结论:ex4-1BBL可能成为增强淋巴细胞活性的重要免疫佐剂.
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黄芪、党参提取物对小鼠Matrigel种植体血管生成的影响
目的:研究黄芪、党参提取物对血管生成的影响,为其抗肿瘤应用提供实验依据.方法:采用b-FGF诱导小鼠腹壁Matrigel种植体方法进行血管生成实验,Matrigel 与b-FGF、肝素混合后植入C57BL/6小鼠腹壁正中区域皮下,5 d后取出,分别测量Matrigel种植体中血红蛋白含量和微血管面积,以此反应微血管的生成状况.在Matrigel种植前3d,给予不同剂量的实验药物,连用8 d进行抑制实验.结果:低剂量(≤50%,V/V)黄芪、党参提取物,能促进Matrigel种植体内的血管生成,而高剂量(≥60%,V/V)则表现出抑制现象.这种促进和抑制作用具有一定的剂量-效应关系.结论:不同剂量的黄芪、党参提取物对微血管的生成具有不同的影响,表现出中医药特有的双向调节作用.临床使用时应根据不同的目的,选择不同的药物剂量.
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肝硬化患者血清CA199、外周血T细胞亚群和B细胞数检测的临床意义
目的:探讨肝硬化患者血清CAl99和外用血T细胞亚群和B细胞数.方法:分别应用RIA和单克隆技术测定61例肝硬化患者血清C199含量和外周血T细胞亚群和B细胞数,并与35名正常人作比较.结果:肝硬化患者血清CA199含量和外周血B细胞数显著高于正常组(P<0.01),而CD3、CD4、CD4/CD8水平则显著地低于正常组(P<0.01).结论:检测肝硬化患者血清CA199和外周血T细胞亚群及B细胞水平的变化可作为病情及预后评估的重要指标.
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肝肾综合征大鼠肾组织葡萄糖调节蛋白与TOU样受体4的表达
目的:探讨肾组织葡萄糖调节蛋白78、94(GRP78、94)和Toll样受体4(TLR4)的表达及其在肝肾综合征发生中的作用.方法:采用胆总管结扎诱导肝硬化及肝肾综合征大鼠模型(BDL.组),术后1、2、4和6周各选6只大鼠取血及组织标本.从股静脉取血,监测血浆丙氨酸转氨酶(ALT)、总胆红素(TBil)、尿素氮(BUN)、肌酐(Cr).用ELISA检测血浆肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量.取肝、肾组织称其质量,并制备标本;用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、蛋白质Western blot分别检测肾组织GRP78、94和TLR4的mRNA及蛋白表达.同时以假手术组设为对照(C组).结果:与C组比较,BDL组各时间点大鼠肝脏、肾脏质量及血浆ALT、TBil和血浆TNF-α均明显升高(P<0.05),4周和6周BUN和Cr也明显升高(P<0.05).BDL组各时间点肾组织GRP78、94tuRNA及其蛋白表达均明显低于C组(P<0.01),而TLR4mRNA及其蛋白表达量却明显高于C组(P<0.01).结论:肾组织GRP78、94表达减少可能有助于TLR4 炎性信号通路激活,并可能与肝硬化并发的肝肾综合征发生相关.
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耳廓软骨膜炎1例
1 临床资料患者女,19岁.主因"左耳水肿红斑3 d"于2007年10月9日来空军总医院门诊就诊.患者3 d前无明显诱因自觉左耳烧灼、痒痛,次日晨耳前上部位突然高度水肿、胀痛难忍,自服"扑尔敏"、外用"肤轻松",症状不能缓解,为进一步治疗来我院就诊.患者病程中无发热,精神饮食睡眠均正常.既往及家族史无特殊.体格检查;系统检查未见异常.皮肤科检查:左耳廓前部红肿,触之坚硬,压痛明显,表面无破溃、渗出糜烂,耳垂正常.
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结肠癌裸鼠移植瘤中Raf-1的表达与肿瘤血管生成的相关性
目的:研究Raf-1在结肠癌裸鼠移植瘤中的表达与肿瘤血管生成的关系.方法:通过Western blot方法检测不同结肠癌细胞系(HT.29、SW480、IS174T)中Raf-1的表达,然后将表达差异较大的2株细胞(HT-29、LS174T)分别接种到BALB/C nu/nu小鼠体内,分别观察肿瘤的生长速度、瘤重变化等情况,后通过免疫组化的方法分别检测瘤组织中Raf-1的表达及肿瘤微血管密度(MVD)的情况,分析二者的相关性.结果:在裸鼠移植瘤模型中,LS174T组移植瘤生长速度及瘤重大于HT-29组;免疫组化结果显示Raf-1在LS174T组中的强阳性率为50%,在HT-29组中为10%,两组之间的差异有统计学意义(P<0.01);在LS174T组中MVD平均值为28.32±5.2,HT-29组MVD平均值为19.23±4.7,两组之间MVD值差异有统计学意义(P<0.01).结论:Raf-1是调控肿瘤组织血管生成的关键分子,在结肠癌裸鼠移植瘤中Raf-1的表达与MVD值成正相关.
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类风湿关节炎患者外周血Th细胞亚群的变化及依那西普的调节作用
目的:观察活动期类风湿关节炎(RA)患者外周血中辅助性T细胞亚群(Th1、Th2和Thl7)数量和比例的变化,探讨依那西普治疗对Th亚群的作用.方法:选择20例活动期中重度RA患者,随机分为依那西普加MTX联合治疗组、MTX治疗组,于治疗前后分离PBMC,采用流式细胞术(FCM)检测Th1、Th2、Th17细胞的数量及Th1/Th2比值,同步用ELISA测定培养上清中IFN-γ、IL-4、IL-17水平,与同期选择的健康对照组比较并与患者的病情活动指标进行相关性分析.结果:治疗前活动期RA患者PBMC中IFN-γ+Th1细胞的量、IL-17+Th17细胞的量及平均荧光强度、Th1/Th2比值均高于健康对照组[(27.0±2.9)%vs(23.2±1.7)%,P<0.05;(36.78 ±2.6)%vs(2.35±0.9)%及(26.61±2.6)vs(11.4±1.2),P<0.01;(12.8±1.6)vs(8.60±1.9),P<0.01];依那西普加MTX联合治疗12周后,RA患者的病情改善,IFN-γ+Th1细胞、Th1/Th2比值、IL-17+Th17细胞的量及平均荧光强度、培养上清中IL-17水平均低于治疗前,而与健康对照组相比无统计学意义(P>0.05),且联合治疗组降低的幅度均大于MTX治疗组;治疗前后Th17细胞的量与C反应蛋白(CRP)、疾病活动指数(DAS28)的消长呈正相关(P<0.05,r=0.38和P<0.05,r=0.42).结论:IL17+Th17细胞、IFN-γ+Th1细胞及Th1/Th2比值的增高可能参与活动期RA的发病机制,依那西普治疗可改善RA病情并下调Th1和Th17细胞亚群.
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痤疮丙酸杆菌对小胶质细胞产生TNF-α、IL-1β的影响
目的:探讨痤疮丙酸杆菌(P.acnes)对小胶质细胞产生TNF-α、IL-1β的影响,明确外伤后细菌性致死性肉芽肿(FBGT)致病菌P.acnes临床株、标准株刺激机体产生细胞因子的差别.方法:采用ELISA法、RT-PCR的方法观察标准株、临床株对小胶质细胞产生TNF-α和IL-1β的影响.结果:(1)P.acnes临床株和标准株均可促进小胶质细胞产生TNF-α和IL-1β,与空白对照组相比有统计学意义(P<0.05),标准株较临床株有较强的刺激小胶质细胞产生 TNF-α的能力;(2)临床株和标准株均能促小胶质细胞进产生IL-1β,二者差别无统计学意义,但产生IL-1β的能力大于TNF-α.结论:P.acnes均可促进小胶质细胞产生TNF-α、IL-1β,但其能力不同,说明P.acnes刺激机体早期免疫应答水平不同.
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重型乙型肝炎患者单核细胞HLA-DR分子表达及临床意义
目的:探讨重型乙型肝炎患者外周血单核细胞功能变化的特点及其意义.方法:应用流式细胞术(FCM)和酶联免疫吸附法对重型肝炎患者单核细胞HLA-DR分子的表达及外周血中白细胞介素.10(IL-10)的水平进行检测,并结合临床资料加以分析.结果:与正常对照组比较,慢性乙型肝炎、肝炎肝硬化、慢性重型肝炎患者外周血单核细胞HLA-DR的表达水平逐渐下降,尤其以慢性重型肝炎患者下降为明显;而慢性重型肝炎患者外周血中IL-10的水平则明显升高,差异均具有统计学意义(P＜0.01).相关分析表明,HLA-DR的表达水平与凝血酶原活动度呈正相关(rs=0.61,P＜0.01).慢性重型肝炎患者死亡与存活组比较,前者HLA-DR水平明显降低;而IL-10水平明显升高,差异具有统计学意义(P＜0.01).结论:外周血单核细胞HLA-DR的表达水平与慢性重型肝炎患者病情严重程度以及预后密切相关,检测外周血单核细胞HLA-DR分子水平有助于评价重型肝炎患者的免疫功能状态以及判断预后.
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Glypican-3在多种肿瘤中的表达
目的:研究Glypican-3在多种肿瘤中的表达及意义.方法:免疫组化方法检测Glypiean-3在461例多种肿瘤及部分正常组织中的表达.结果:多种肿瘤中:Glypican-3在肝癌中阳性率为74.4%(119/160),大肠癌中Glypican-3阳性率为66.0%(132/200),Glypican-3在肝癌及大肠癌组织中表达明显高于癌旁组织(P<0.05);Glypican-3在子宫内膜癌(3/16),肺癌(3/32),乳腺癌(1/15),卵巢癌(1/11),胰腺癌(0/15),食管癌(1/12)等肿瘤中表达较低,Glypican-3在癌组织中的表达与癌旁组织无统计学意义.在正常组织如肾,胎盘,乳腺当中Glypican-3表达为阳性,其他多种正常组织中表达均为阴性.结论:Glypican-3在肝癌、大肠癌、肺癌等中均有不同程度表达,且表达意义不尽相同,Glypican-3可能在多种肿瘤发生、发展中起重要作用.
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人胆固醇酯转运蛋白的eDNA克隆、原核表达及抗血清制备
目的:克隆人胆固醇酯转运蛋白(CETP)eDNA序列,利用大肠杆菌表达人CETP,制备兔抗人CETP的多克隆抗血清.方法:采用RT-PCR方法,将人CETP基因克隆到pET-30b(+)上,构建CETP原核表达载体并转化大肠杆菌,IPTG诱导表达,切胶纯化蛋白后免疫家兔,制备CETP抗血清,以ELISA、Western blot、细胞免疫荧光方法对抗血清效价及特异性进行鉴定.结果:SDS-PAGE分析表明,经IPTG诱导,CETP基因在大肠杆菌BL21(DE3)的包涵体中高效表达,佳诱导表达时间为4 h.将切胶纯化的蛋白免疫家兔,ELISA法测定的抗血清效价为1∶5.12×105.Western blot及细胞免疫荧光检测结果显示,抗血清可以与CETP原核及真核表达蛋白特异结合.结论:成功地将CETP进行了原核表达并制备了高效价、高特异性的兔抗人CETP抗血清,为进一步研究CETP的结构与功能奠定了基础.
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抗藤黄微球菌Rpf结构域单克隆抗体的制备与特性鉴定
目的:克隆、表达藤黄微球菌Rpf结构域多肽,并制备针对该多肽的单克隆抗体(mAb).方法:采用聚合酶链反应(PCR)藤黄微球菌基因组中扩增出藤黄微球菌Rpf结构域基因,用限制性内切酶消化后插入到pUC-19克隆载体中,测序正确后,再亚克隆到融合表达载体pPro-EXHT中,转化大肠杆菌DH5α,目的基因经IPTG诱导,由T7启动子调控表达了氨基端带6个连续组氨酸残基的Rpf结构域基因多肽,在变性条件下纯化目的蛋白.用纯化的目的蛋白作为免疫原免疫BALB/c小鼠,进行细胞融合、克隆化制备抗Rpf domain单抗(mAb),用ELISA法初步鉴定其特异性和相对亲和力.结果:在变性条件下用Ni2+-NTA亲和色谱柱纯化目的融合蛋白,纯化获得的蛋白纯度大于90%.用该融合蛋白免疫小鼠后,获得了3株抗Rpf domain mAb,这3株mAb均特异性识别Rpf domain多肽.结论:所获得的抗Rpf domain mAb特异性强、效价高,对进一步研究Rpf domain在结核病免疫预防中的作用提供了有力的工具.
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抗禽流感病毒M2蛋白单克隆抗体的制备及鉴定
目的:制备抗禽流感病毒M2蛋白的单克隆抗体(mAb)并进行特性鉴定.方法:利用纯化的融合蛋白GST-M2免疫BALB/c小鼠,然后以GST-M2 和 GST分别作为ELISA抗原进行筛选,选择GST-M2抗原检测强阳性、GST抗原检测阴性的杂交瘤细胞进行克隆,建立能稳定分泌抗AIV M2 mAb的杂交瘤细胞株.mAb的效价采用间接ELISA和琼脂扩散试验(AGP)测定,用夹心ELISA测定Ig亚类,Western blot、抗原捕获ELISA、间接免疫荧光及免疫组化染色法检测 mAb 的特性.结果:得到4株分泌抗禽流感病毒M2蛋白的mAb的杂交瘤细胞株1E1、2F8、4E3 和 5D6,小鼠腹水中抗体的ELISA效价大于210×100、AGP效价大于1:4.抗体亚类鉴定1E1和4E3为IgG2a,2178和5G6为IgG2b.抗原捕获ELISA表明,2F8 wAb能与H5、H9亚型AIV发生特异性反应,而不能与鸡新城疫病毒(NDV)和鸡传染性法氏囊病毒(IBDV)反应.IFA和免疫组化试验表明,2F8 mAb能够与感染了禽流感病毒的MDCK细胞以及鸡体组织细胞发生特异性结合.结论:本研究获得4株抗禽流感病毒M2蛋白的mAb,其中2F8mAb的效价高、特异性强,可作为检测AIV方法的核心试剂.
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截短型鸭乙型肝炎病毒核心蛋白原核表达、多克隆抗体的制备和鉴定
目的:构建截短型鸭乙型肝炎病毒(DHBV)核心蛋白的原核表达质粒并在大肠杆菌中表达,制备多克隆抗体.方法:应用基因工程技术将编码截短型DHBV核心蛋白(DH-BeAg 1～214 aa)的基因片段装入原核表达载体pRSET-B内,在宿主菌Rosetm(DE3)pLacI内进行诱导表达,运用Ni-NTA方法纯化目的蛋白.用纯化的重组蛋白免疫BALB/c小鼠制备多克隆抗体,并采用酶联免疫吸附实验(ELISA),Westemblot及免疫组化检测抗体的灵敏度和特异性.结果:成功地构建了含截短型DHBV核心区基因的质粒,并纯化得到了相对分子质量(Mr)约为28 000的目的蛋白,用之免疫BALB/c小鼠获得了高效价的特异性多克隆抗体.结论:获得的重组截短型DHBV核心抗原纯度高,免疫反应性强;获得的多克隆抗体有较高的效价和较好的特异性,为DHBV的检测和研究奠定了实验基础.
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氨甲酰磷酸合成酶单克隆抗体的制备、鉴定及应用
目的:制备抗人氨甲酰磷酸合成酶(CPSI)的单克隆抗体(mAb)并进行初步鉴定与应用.方法:将正常成人肝组织匀浆离心并分离线粒体,用线粒体总蛋白免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备 mAb,并通过间接ELISA法、Western blot、免疫组化及免疫荧光染色的方法对mAb进行特性鉴定,通过免疫沉淀联合质谱、Uni-ZAP XR表达文库筛选鉴定抗原,借助免疫捕获的方法用抗体来分离复合物.结果:获得3株可稳定分泌抗人CPSI mAb的杂交瘤细胞系.mAb的Ig亚类(型)为IgGl(K),该mAb可用于ELISA检测、Western blot、免疫组化、免疫荧光染色、免疫沉淀实验和复合物的分离.结论:成功制备了抗人CPSI的mAb,为CPSI的研究提供了有力的工具.
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抗PTD-bcr/abl单克隆抗体的制备及鉴定
目的:制备单克隆抗体(mAb)并初步用于PTD-bcr/abl融合蛋白的研究,为慢性粒细胞白血病的免疫治疗提供实验依据.方法:在大肠杆菌中表达PTD-bcr/abl融合蛋白,用所获得的蛋白免疫BALB/e小鼠,常规收集小鼠脾细胞与Sp2/O细胞融合,筛选杂交瘤细胞株的阳性克隆,并对其进行一系列鉴定.结果:(1)表达PTD-bcr/abl融合蛋白;(2)制备了抗PTD-ber/abl融合蛋白mAb;(3)用mAb以多种方法检测PTD-bcr/abl融合蛋白,证实此抗体效价高,特异性强.结论:此抗体可用于PTD-ber/abl融合蛋白的进一步研究.
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T7噬菌体衣壳蛋白P11的原核表达、纯化及其单克隆抗体的制备
目的:表达、纯化T7噬菌体衣壳蛋白P11,并制备其单克隆抗体(mAb).方法:克隆并表达T7噬菌体P11蛋白,其氨基端带有6-His标签.纯化后的蛋白免疫BALB/e小鼠,经融合、筛选制备特异性mAb.结果:成功表达了P11蛋白. SDS-PAGE显示所表达蛋白的相对分子质量(Mr)约为27 000.获得了1株稳定分泌抗P11抗体的杂交瘤细胞株(2G11),其分泌的mAb的Ig亚类(型)为IgG2b.ELISA检测,对应腹水mAb的效价为1∶8.1×105.Western blot结果显示抗P11mAb具有良好的特异性.结论:成功地制备了P11蛋白及其mAb.
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人源肝癌单链抗体(scFv)基因真核表达载体的构建和表达
目的:构建人源肝癌单链抗体(scFv)基因真核表达载体pSeetag2/seFv并在中国仓鼠卵巢(CHO)细胞中获得表达.方法:利用噬菌体细胞内重组技术筛选得到了肝癌特异性scFv,用PCR技术及核酸内切酶技术将其克隆入真核表达载体psectag2,构建重组载体pSectag2/scFv,测序鉴定后,电转染CHO细胞,利用SDS-PAGE和Western blot检测目的蛋白的表达情况.结果:将750 bp人源肝癌scFv插入真核表达载体pSectag2,经DNA测序鉴定正确,成功构建了pSectag2/scFv.将pSectag2/scFv转染CHO细胞后获得目的蛋白表达.SDS-PAGE和Western blot检测表明目的蛋白Mr约为34 000.结论:成功地构建抗scFv真核表达载体pSectag2/scFv,并在CHO细胞中获得表达,为人源肝癌scFv的进一步的应用研究提供依据.
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抗HIV-1 Tat蛋白单克隆抗体的制备及初步鉴定
目的:制备抗HIV-1 Tat蛋白的单克隆抗体(mAb),并对其进行初步鉴定.方法:通过动物免疫、细胞融合、克隆化制备抗Tat蛋白的mAb,并用ELISA法对所得mAb的特异性、抗原识别表位及相对亲和力等做了初步鉴定.结果:获得了3株抗Tat蛋白的mAb,这3株mAb均能特异识别Tat蛋白.结论:获得了3株杂交瘤细胞系,均可以稳定分泌抗HIV-1 Tat蛋白的mAb,有望为HIV早期检测及HIV抗病毒治疗提供有用工具.
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Toll样受体介导的抗病毒天然免疫
病毒能否在细胞内生存和复制取决于宿主的抗病毒机制.天然免疫(Innate immunity)作为机体抗感染免疫的第一道防线,主要在获得性免疫(Adaptive immunity)活化前,发挥抗感染作用.
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适应性免疫在丙型肝炎病毒持续感染中的作用
丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)是一种黄病毒属的单股正链嗜肝RNA病毒,是引起慢性肝病的主要病原体.机体在抗HCV感染免疫过程中,固有免疫(innate immunity)与适应性免疫(adaptive immunity)相互依赖,互相协作.
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大黄、当归多糖对巨噬细胞甘露糖受体作用的研究
目的:探讨当归多糖(APS)、大黄多糖(RTP)与腹腔巨噬细胞(Mψ)甘露糖受体(MR)的结合特性及其对腹腔Mψ免疫功能的影响.方法:以异硫氰酸荧光素标记的甘露糖化牛血清白蛋白(Man-FITC-BSA)可特异性的与甘露糖受体相结合为模型,以甘露糖为阳性对照、半乳糖为阴性对照,通过竞争性抑制实验,将APS、RTP分别与腹腔Mψ共同孵育60 min后,用荧光显微镜和多功能酶标仪检测腹腔Mψ摄取Man-FITC-BSA的情况;通过ELISA方法检测APS、RTP刺激Mψ分泌TNF-α及IL-4的情况.结果:D-甘露糖、APS、RTP均可抑制腹腔Mψ吞噬:Man-FITC-BSA,而D-半乳糖则没有此作用;APS、RTP均可诱导腹腔Mψ分泌TNF-α,且呈剂量依赖性,甘露糖可完全阻滞RTP诱导Mψ分泌TNF-α,对APS诱导Mψ分泌TNF-α只有部分对抗作用;两种多糖对IL-4的分泌没有统计学意义;甘露糖不能诱导Mψ分泌TNF-α与IL-4.结论:RTP引起的Mψ分泌TNF-α作用是通过甘露糖受体介导,而APS的作用不仅仅与甘露糖受体有关.两种多糖与甘露糖受体的作用差异可能与其单糖组成密切相关.
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细胞因子对HSC-T6细胞DCN mRNA表达的影响
目的:探讨细胞因子对核心蛋白聚糖(DCN)mRNA表达的调节作用.方法:以HSC-T6细胞为研究靶细胞,选择血小板衍生生长因子(PDGF)、IFN、TNF-α和IL-6,通过RT-PCR技术观察这些细胞因子对HSC-T6细胞DCN mRNA表达的影响.结果:IFN-γ在108～109U/L浓度能抑制HSC-T6细胞增殖和增加DCN mRNA的表达,而IFN-γ在105～106 U/L浓度时使细胞DCN mRNA的表达降低;TNF-α.在高浓度(50nmol/L)能够使DCN mRNA表达减少;PDGF在10μg/L和100 mL/L FCS培养条件下作用明显;IL-6使HSC-T6细胞DCN mRNA水平下调.结论:IFN-γ和TNF-αa对DCN核心蛋白基因表达有双重调节作用,这种调节作用发生在转录和转录后水平,PDGF对细胞增殖的调节与DCN表达抑制相关.
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纳米肿瘤疫苗的制备工艺的优化及特性鉴定
目的:制备无明显毒性、高效的恶性肿瘤基因工程纳米疫苗.方法:纯化融合蛋白MH,薄膜分散-超声法制备包裹MH的纳米脂质体肿瘤疫苗NL(MH),并评价其粒径、包裹率及稳定性;观察NL(MH)免疫组小鼠的急性毒性反应,及重要脏器的病理学改变.结果:成功制备出粒径为(80±250)nm的纳米脂质体,其药物包裹率为30%,于4℃放置6个月后或3 000 r/min 10 min离心后无分层,证明其稳定性良好;与PBS对照组相比,免疫组小鼠未见明显毒性反应.结论:该恶性肿瘤基因工程纳米疫苗具有良好的理化性质,未见毒性反应.
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BrdU标记在大鼠睾丸支持细胞体外培养中的应用
目的:探讨大鼠睾丸支持细胞原代培养5-溴-2-脱氧尿苷(BrdU)的佳标记时间、剂量.方法:大鼠睾丸支持细胞进行体外原代培养;以终浓度分别为5、10、15、20 μmol/L的BrdU检测睾丸支持细胞的佳标记剂量;在细胞培养的12、24、36、48 h掺入BrdU,使终浓度为15 μmol/L,测定BrdU的佳标记时间;免疫细胞化学法跟踪观察大鼠睾丸支持细胞在体外培养中的分化发育情况和BrdU标记率.结果:免疫组化检查提示终浓度为15lμmol/L和孵育36 hBrdU标记率均>90%,并且连续传3代均可检测到.结论:终浓度15 μmoL/L及孵育36 h为BrdU标记睾丸支持细胞的佳剂量及时间,表明BrdU标记可用于睾丸支持细胞体内后的存活、生长的动态观察.
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利用ELISA法研究幽门螺杆菌感染与颈动脉斑块形成的相关性
目的:探讨胃幽门螺杆菌(Hp)感染与颈动脉斑块的相关性.方法:利用ELISA对100例无胃炎无胃溃疡病史的急性脑梗塞患者进行Hp细胞毒素抗体检测,分Hp感染阴性组和阳性组,比较颈动脉斑块及颈动脉狭窄的发生率,比较相关因子C-反应蛋白、血脂、白细胞的变化水平,进行统计学处理.结果:Hp细胞毒素阳性者,颈动脉斑块发生率100%,阴性55%(P<0.01),相关因子阳性组明显高于阴性组(P<0.05).结论:Hp细胞毒素感染与颈动脉斑块发生、发展有密切关系,应当予以积极治疗与预防.
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突变型人胰岛素原基因的克隆及其腺病毒载体的构建
目的:构建含有定点突变的人胰岛素原基因的腺病毒表达载体.方法:首先利用RT-PCR方法从正常流产胎儿胰腺组织获取野生型人胰岛素原eDNA;然后通过重叠延伸PCR方法在人胰岛素原cDNA上产生2个突变位点,使突变的eDNA编码的蛋白质含弗林蛋白酶的识别位点,该突变型胰岛素原cDNA片段命名为INS-M2;后将INS-M2亚克隆至腺病毒载体系统的穿梭载体的多克隆位点上,并与骨架载体共转染至细菌内,通过细菌内同源重组得到重组载体.结果:HindⅢ和Xho I酶切、Poc I酶切及测序均证实载体pAd-INS-M2构建成功.结论:构建的含定点突变人胰岛素原基因腺病毒载体pAd-INS-M2为进一步转染非胰岛β细胞,对糖尿病进行基因治疗奠定了基础.
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1,25-二羟维生素D3对哮喘小鼠气道重塑及基质金属蛋白酶-9表达的影响
目的:观察1,25-二羟维生素D3(VD)对哮喘小鼠气道重塑及其肺组织中基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达的影响,探讨VD在哮喘治疗中的作用.方法:BALB/c小鼠随机分为对照组、哮喘组及VD组.卵蛋白致敏和激发建立慢性哮喘小鼠模型;HE染色观察各组气道结构改变情况;采用计算机图像分析系统评价各组气道重塑情况;采用RT-PCR法检测各组的MMP-9mRNA表达水平.结果:①HE染色提示哮喘组与对照组相比出现炎性细胞浸润增多、上皮细胞脱落及平滑肌细胞层增厚等气道重塑改变,而VD组可部分逆转上述病理改变;②VD组的支气管内壁厚度、平滑肌层厚度和平滑肌细胞核数显著低于哮喘组,但仍高于对照组(P<0.05);③VD组肺组织MMP-9mRNA表达水平均明显低于哮喘组,但仍高于对照组(P<0.05).结论:VD干预可明显减轻慢性哮喘气道重塑的病理改变;并可通过部分抑制肺内MMP-9的表达来延缓气道重塑进程.
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β细胞素对胰腺干细胞转分化为胰岛样细胞团的影响
目的:探讨大鼠β细胞素在胰腺干细胞的增殖和转分化为胰岛细胞中的生物学作用.方法:分离并培养大鼠胰腺干细胞于CMRL1066和无血清DMEM/F12培养液中,不同浓度大鼠β细胞素处理后,双硫腙染色,放免法检测胰岛素分泌量.结果:在大鼠β细胞素浓度为20～30 mg/L时,大鼠胰腺干细胞转分化为胰岛样细胞团的数量明显高于对照组;其胰岛素分泌量明显高于对照组(P<0.01).结论:大鼠β细胞素具有促进胰腺干细胞转分化为胰岛β细胞并增强其胰岛素分泌的作用.
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蜂胶佐剂对E.coli多价灭活苗免疫小鼠效果的实验研究
目的:铝胶苗和蜂胶佐剂苗对E.coli免疫原性的比较.方法:选用菌株O2、O78及O57菌株血清型,研制的多价大肠杆菌氢氧化铝胶和蜂胶佐剂灭活苗,对同血清型菌株的攻击具有良好的保护作用.结果:通过用铝胶苗和蜂胶佐剂苗试验结果表明,对于大肠杆菌病而言,用蜂胶佐剂苗的效果优于铝胶苗.结论:蜂胶佐剂苗的效果优于铝胶苗.
| 年 | 期数 |
| 2018 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2017 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2016 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2015 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2014 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2013 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2012 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2011 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2010 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2009 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2008 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2007 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2006 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2005 | 01 02 03 04 05 06 z1 |
| 2004 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2003 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2002 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2001 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2000 | 01 02 03 04 05 06 |
| 1999 | 01 02 |
| 1995 | 01 02 03 |
| 1994 | 01 02 |
| 1993 | 01 02 03 04 |
| 1992 | 01 02 03 04 |
| 1991 | 01 02 03 04 |
| 1990 | 01 02 |
| 1989 | 01 02 03 04 |
