细胞与分子免疫学杂志
Chinese Journal of Cellular and Molecular Immunology 세포여분자면역학잡지
- 主管单位： 中国免疫学会；第四军医大学
- 主办单位： 陕西省免疫学会,中国免疫学会
- 影响因子： 0.81
- 审稿时间： 1-3个月
- 国际刊号： 1007-8738
- 国内刊号： 61-1304/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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新风胶囊通过BTLA-HVEM诱导Treg免疫耐受改善膝骨关节炎大鼠心肺功能
目的:观察膝骨关节炎(KOA)大鼠心肺功能的变化及新风胶囊(XFC)对其影响,探讨可能的分子机制.方法:按随机数字表将40只大鼠随机分为正常对照(NC)组,模型对照(MC)组,氨基葡萄糖对照(GS)组,XFC组,每组10只.除NC组外,采用关节腔注射木瓜蛋白酶和L-半胱氨酸方法复制成KOA大鼠模型,造模后第14天开始给药.NC组及MC组均给予生理盐水,剂量为0.01 g/kg,其余2组分别给予GS、XFC混悬液,剂量分别为0.098 g/kg、0.375 g/kg.采用超声诊断仪检测大鼠心功能,动物肺功能仪检测大鼠肺功能,ELISA法检测BTLA、HVEM、IL-17、IL-4、TGF-β1；流式细胞术检测大鼠外周血CD4+ CD25+Treg、CD4+ CD25+Foxp3+ Treg的表达.结果:与NC组比较,MC组体质量、E、E/A、FVC、FEV1、FEF25、FEF50、FEF75、MMF、PEF,BTLA、HVEM、IL-4、CD4+ CD25+ Treg、CD4+ CD25+ Foxp3+Treg明显降低,TGF-β1、IL-17明显升高(P＜0.01或P＜0.05).与MC组比较,各组大鼠体质量,心功能参数E峰、E/A,肺功能参数FEV1、FEF5O、FEF75、PEF,BTLA、HVEM、IL-4、CD4+ CD25+ Treg、CD4+ CD25+ Foxp3+ Treg明显升高,关节软骨Mankin评分、心系数、肺系数、TGF-β1、IL-17明显降低(P＜0.01或P＜0.05)；与GS组相比,XFC组体质量、Treg升高为明显(P＜0.01或P＜O.05).结论:新风胶囊改善KOA大鼠关节软骨Mankin评分,改善其心肺功能,其机制可能是促进BTLA-HVEM负调共刺激信号作用,诱导Treg免疫耐受,上调IL-4表达,下调IL-17、TGF-β1表达,抑制异常免疫炎症反应.
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地塞米松对哮喘小鼠肺组织中TWEAK及其受体Fn14表达的调节作用
目的:探讨地塞米松对哮喘小鼠模型肺组织中肿瘤坏死因子样弱凋亡诱导因子(TWEAK)及受体成纤维细胞生长因子诱导的早期反应蛋白14 (Fn4)表达的调节作用.方法:采用卵清蛋白致敏方法建立经典哮喘模型.将36只雌性BALB/c小鼠,随机分为对照组、哮喘组、地塞米松组,每组12只.HE染色评估各组小鼠气道炎症程度；采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测各组肺组织TWEAK、Fn14mRNA表达水平；采用免疫组化方法检测各组肺组织TWEAK、Fn14蛋白表达水平.结果:哮喘组小鼠肺组织TWEAK、Fn14 mRNA水平高于对照组(P＜0.01),地塞米松组TWEAK、Fn14 mRNA水平低于哮喘组(P＜0.01).TWEAK、Fn14蛋白的表达水平哮喘组较对照组明显升高(P＜0.01),地塞米松组表达量较哮喘组明显降低(P＜0.01).结论:地塞米松可抑制哮喘小鼠肺组织中TWEAK及Fn14表达,从而减少气道炎症反应.
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迁移诱导蛋白7促进胃癌血管生成拟态
目的:体外观察胃癌细胞株形成血管生成拟态(VM)的能力,并通过Mig-7-siRNA转染SGC7901细胞,观察其对VM形成的影响,初步探讨其可能机制.方法:采用体外三维培养技术,在光镜及扫描电镜下观察不同分化程度的胃癌细胞形成VM的能力,并检测迁移诱导蛋白7(Mig-7)表达；通过Mig-7-siRNA转染SGC7901细胞,观察其对VM、侵袭及迁移能力的影响；Western blot检测SGC7901细胞中Mig-7、磷酸化细胞外调节蛋白激酶1、2(p-ERK1/2)及基质金属蛋白酶2(MMP-2)表达.结果:体外实验显示MKN45和SGC7901能形成VM,表达Mig-7；而MKN28和GES-1无形成VM能力,Mig-7表达阴性；Mig-7-siRNA转染SGC7901细胞后可干扰VM形成、侵袭及迁移能力；下调p-ERK1/2和MMP-2蛋白表达,可干扰VM形成.结论:能形成VM的细胞,可表达Mig-7；干扰Mig-7的表达,抑制VM的形成,可能与下调p-ERK1/2和MMP-2蛋白表达有关.
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白藜芦醇通过上调SIRT1促进退变髓核细胞胞外基质合成
目的:研究白藜芦醇(RES)对人退变椎间盘髓核细胞(DNPCs)合成细胞外基质(ECM)的影响.方法:对人退变椎间盘髓核组织进行分离、单层培养细胞鉴定、藻酸盐培养.取原代藻酸盐培养细胞分别用0、12.5、25、50、100、200μmol/L的RES分别刺激DNPCs 12、24、48 h,Western blot法检测沉默交配型信息调节因子2同源蛋白1(silent mating type information regulation 2 homolog 1,SIRT1)、Ⅱ型胶原(Colla2α1)、蛋白聚糖聚合物(aggrecan)蛋白表达,real-time 荧光定量PCR检测SIRTl mRNA表达水平.用SIRT1-siRNA 转染后再与100 μmol/L RES共培养24h,观察Colla2α1、aggrecan的蛋白表达.结果:RES上调SIRTl mRNA和蛋白水平的表达,促进DNPCs合成ECM的表达,与对照组相比具有统计意义(P＜0.05).siRNA靶向沉默SIRT1表达后,再加入RES刺激,观察到Colla2α1与aggrecan的蛋白表达与对照组相比显著下降(P＜0.05).结论:RES可刺激DNPCs ECM的合成,且呈现一定的量效关系,这种调节作用与SIRT1的活性有关.
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Toll样受体4在高氧暴露对小胶质细胞功能影响中的作用
目的:探讨Toll样受体4(TLR4)在高浓度氧暴露对小胶质细胞功能的影响.方法:体外培养N9小胶质细胞(TLR4野生型)和EOC20小胶质细胞(TLR4敲除型),给予950 mL/L高氧分别暴露不同时段,建立高氧损伤细胞模型.RT-PCR检测N9细胞TLR4 mRNA表达时序变化；Western blot法检测N9细胞TLR4蛋白表达；通过抗氧化剂N-乙酰半胱氨(N-acetyl-L-cysteine,NAC)干预,观测950 mL/L高氧暴露后2h及6h的N9和EOC20小胶质细胞内的活性氧(ROS)含量、NF-κB核转录活性及细胞上清中TNF-α含量.结果:高浓度氧暴露的N9小胶质细胞TLR4的表达上调,并呈一定时间依赖性,同时ROS活性,核转录因子NF-κB活性,TNF-α表达明显增高(P＜0.05).抗氧化剂NAC干预后,ROS活性明显降低,核转录因子NF-κB活性明显降低,细胞上清内TNF-α水平亦显著下调(P＜0.05).与N9小胶质细胞相比,高氧暴露后各时间点EOC20细胞的ROS活性,核转录因子NF-κB活性以及TNF-α表达均较低(P＜0.05).结论:TLR4参与调控高氧导致的小胶质细胞ROS的形成及炎症因子的释放.
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酪氨酸激酶抑制剂甲磺酸伊马替尼对PTEN介导的K562细胞侵袭的影响
目的:研究酪氨酸激酶抑制剂甲磺酸伊马替尼对K562细胞PTEN信号转导的调控,以及对细胞侵袭功能的影响.方法:不同浓度甲磺酸伊马替尼作用K562细胞不同时间后,通过荧光定量PCR检测BCR/ABL、PTEN、FAK水平变化及相互关系,免疫细胞化学染色检测FAK蛋白水平,Transwell小室检测K562细胞侵袭功能.结果:2μg/mL甲磺酸伊马替尼作用K562细胞在36 h内,随着BCR/ABL融合基因表达减低,PTEN mRNA表达上调,FAK mRNA及蛋白表达下调,K562细胞侵袭功能明显减弱.作用48 h后,随着BCR/ABL融合基因的抑制减弱,PrEN表达进而减低,而FAK表达升高.BCR/ABL mRNA与PTEN mRNA呈负相关趋势,与FAK mRNA呈正相关趋势.结论:甲磺酸伊马替尼通过抑制BCR/ABL融合基因调控PTEN/FAK信号转导通路,参与抑制白血病K562细胞侵袭作用.
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骨髓间质干细胞移植促进大鼠脊髓损伤后巨噬/小胶质细胞极化方向的改变
目的:探索骨髓间充质干细胞(BMSC)移植促进脊髓损伤后修复的新机制.方法:通过体外培养获得CD29+CD90+ CD45-的大鼠BMSC,并将BMSC移植到重度夹伤的大鼠脊髓中.通过BBB行为学评分,检测BMSC移植后,大鼠后肢运动功能恢复情况；经免疫组化和Western blot等方法,进一步检测巨噬/小胶质细胞的极化标志性分子iNOS(M1型细胞)及Argl(M2型细胞)分子的表达水平.结果:经BMSC移植治疗的大鼠,其脊髓损伤面积明显减小,同时后肢运动功能明显恢复较好；BMSC可以促进脊髓损伤区域中iNOS+细胞数量减少,Arg1+细胞数量增加；Westem blot法检测结果显示:给予BMSC处理的大鼠,在脊髓损伤后各时间点上,M1型巨噬/小胶质细胞标志分子iNOS蛋白水平逐渐降低,而M2型巨噬/小胶质细胞标志分子Arg1蛋白表达水平则明显升高.结论:脊髓损伤后,移植BMSC可以促进脊髓损伤区中的巨噬/小胶质细胞向M2型细胞方向极化.
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HIV-1 gp41融合多肽对CD3抗体激活的调节性T细胞的抑制作用
目的:观察HIV-1 gp41融合多肽(FP)能否影响CD3抗体激活的调节性T细胞(Treg).方法:用免疫磁珠分离小鼠脾脏CD4+ CD25+的Treg、CD4+ CD25-的效应性T细胞(Teff),丝裂霉素C处理小鼠脾细胞获得APC.通过CCK-8法和羧基荧光素双乙酸盐琥珀酰亚胺酯(CFSE)标记检测FP对CD3抗体刺激的Teff增殖效应分析其对Treg抑制功能的影响；用ELISA检测FP对Treg激活后IL-10分泌的影响；用激光共聚焦显微镜观察细胞表面FP与TCR的分布.结果:通过CCK-8法和流式细胞术分析发现,在CD3抗体刺激下Teff细胞有显著增殖效应；当Treg和Teff混合培养时,Treg能够明显抑制共培养的Teff增殖；当加入25 μg/mL FP后,Treg+ Teff组与Teff组细胞增殖没有明显变化；当FP浓度为5 μg/mL时,Treg+ Teff组比Teff组增殖显著降低.Treg未活化时IL-10分泌较低,经过CD3抗体刺激后其IL-10分泌显著增多,而当FP浓度为25μg/mL时IL-10显著下降,5μg/mL FP对IL-10分泌无显著影响.通过激光共聚焦显微镜检测发现Treg未活化时,T细胞受体(TCR)在细胞表面均匀分布,同时未见FP与TCR共分布；当Treg在CD3抗体刺激下,TCR活化形成半月形,且FP与活化的TCR在细胞表面共分布.结论:25μg/mL FP对Treg体外抑制功能具有显著抑制作用,而5 μg/mL FP不影响Treg的抑制功能,可能与其抑制Treg细胞IL-10分泌以及阻断APC在Treg细胞跨膜区域活化信号的递呈有关.
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细胞因子体外诱导外胚间充质干细胞向树突状细胞分化
目的:探讨外胚间充质干细胞(EMSC)向树突状细胞(DCs)分化的能力.方法:利用基因重组大鼠GM-CSF和IL-3连续诱导17 d,在第19天加入基因重组大鼠TNF-α继续诱导,观察其形态、超微结构、表面标记、混合淋巴细胞反应、IL-12分泌功能等,以SD大鼠骨髓间充质干细胞向DC分化作为对照.结果:经过诱导的EMSC出现细长伪足和毛刺,变为半贴壁状态；扫描电镜显示长的细胞突起和许多毛刺；其表面标记与骨髓来源的DC相似；混合淋巴细胞反应证实其可以刺激淋巴细胞增殖；诱导后的EMSC有分泌IL-12功能.结论:EMSC在体外经诱导可向DC分化.
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Tpr-Met转化的Ba/F3稳定株的构建
目的:建立一种可用于高通量筛选c-Met抑制剂的细胞模型.方法:采用电转染将Tpr-Met表达载体导入Ba/F3细胞中并筛选出能够稳定表达Tpr-Met的细胞株.而后对这种稳定株的白细胞介素3(IL-3)非依赖性增殖、Tpr-Met的表达及下游通路的活化、c-Met抑制剂SUl1274对细胞增殖和信号通路的抑制作用进行全面评价.通过酶标仪检测细胞MTS吸光度值判断细胞的增殖水平,通过Western blot法检测Tpr-Met的表达及下游通路的活化、c-Met抑制剂SU11274对细胞信号通路的抑制作用.结果:获得稳定表达Tpr-Met的Ba/F3细胞株,该细胞株呈现IL-3非依赖性生长；能够表达持续活化的Tpr-Met；下游信号通路中关键分子Erk的磷酸化水平显著提升；c-Met特异性抑制剂SU11274通过抑制Tpr-Met磷酸化抑制下游信号通路的活化并抑制稳定株细胞增殖.结论:成功构建了Tpr-Met转化的Ba/F3细胞株.
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卵巢癌相关抗原CA125串联重复序列的原核表达纯化及抗血清制备
目的:建立CA125串联重复序列(CA125R)原核表达系统,表达纯化重组CA125R蛋白并制备其抗血清.方法:全基因合成一段CA125串联重复序列,并将其克隆至pET-32a(+),构建CA125R蛋白原核表达载体pET-CA125R；将构建好的pET-CA125R载体转化至E coli BL21(DE3),确定佳可溶性表达条件,通过Ni-NTA亲和层析系统纯化重组CA125R蛋白；纯化重组蛋白经Western blot方法验证后,免疫家兔制备抗血清.结果:成功构建CA125串联重复序列原核表达载体,确定了佳可溶性诱导表达条件(0.5 mmol/LIPTG,15℃诱导6h)；Western blot结果证实纯化的重组蛋白正确,纯度高；制备的抗血清能特异识别重组CA125R蛋白和天然CA125糖蛋白.结论:成功建立了CA125R高效原核表达系统,并制备了高纯度重组CA125R蛋白及其抗血清.
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Th17淋巴细胞及相关细胞因子加重哮喘小鼠气道炎症
目的:研究Th17淋巴细胞及其相关的细胞因子在加重哮喘小鼠气道炎症中的作用机制.方法:20只小鼠随机均分为哮喘组和正常对照组.哮喘组用卵白蛋白(OVA)致敏与激发建立小鼠哮喘模型.对照组致敏与激发均以生理盐水代替.HE染色观察小鼠气道及肺组织病理变化；光学显微镜下观察小鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)中细胞分类及计数；酶联免疫吸附试验(ELISA)检测小鼠BALF上清中IL-4、IFN-γ及IL-17的含量,流式细胞技术(FCM)检测小鼠外周血Th1、Th2及Th17淋巴细胞占CD4+细胞百分率情况.将外周血各T淋巴细胞亚群与BALF的中性粒细胞数作相关性分析.结果:哮喘组小鼠BALF中细胞数及中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、淋巴细胞百分率均显著高于对照组(P＜0.05),BALF上清中IL-4和IL-17的水平显著增高(P＜0.05),而IFN-γ的水平显著降低(P＜0.05),外周血Th2、Th17淋巴细胞占CD4+细胞百分比显著增高(P＜0.05),而Th1淋巴细胞占CD4+细胞百分比显著降低(P＜0.05).相关性分析显示Th1淋巴细胞与BALF的中性粒细胞数呈显著负相关(rThl=-0.446,P＜0.05),Th17淋巴细胞与BALF的中性粒细胞数呈显著正相关(rTh17=0.394,P＜0.05).结论:Th17淋巴细胞可促进中性粒细胞及炎性介质在哮喘小鼠气道内的聚集,加重气道炎症.
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MPTP处理的SAMP8小鼠黑质纹状体损伤中血红素加氧酶-1的表达变化
目的:研究1-甲基-4-苯基-1、2、3、6-四氢吡啶(MPTP)诱导6月龄快速老化小鼠(SAMP8)黑质纹状体急性损伤,以及血红素加氧酶-1(HO-1)的表达变化,探讨其与MPTP导致的SAMP8小鼠黑质纹状体系统损害的关系.方法:给6月龄健康雄性SAMP8小鼠背部皮下注射MPTP 20mg/(kg·次),连续注射4次,每次间隔2h；对照组注射等量生理盐水.在注射后6h、24h、3d和8d处死小鼠留取脑组织标本,用免疫组织化学技术检测小鼠黑质、纹状体的酪氨酸羟化酶(TH)和HO-1,以计数黑质多巴胺能神经元数量及其投射纤维的改变,及HO-1阳性细胞的变化；用Western blot方法检测TH和HO-1蛋白表达的变化.结果:MPTP致6月龄SAMP8小鼠各时间点TH阳性神经元分别减少14.23％(P＜0.05),23.85％ (P＜0.01),36.77％ (P ＜0.01),45.9％(P＜O.01),24 h与3d比较有显著性差异(P＜0.05),神经元的丢失以24 h至3d为显著；MPTP组随时间延长纹状体区酪氨酸羟化酶免疫反应阳性染色逐渐变浅淡,不均匀,于注射后24h明显,第8天为浅淡；同时TH蛋白表达具有相同变化.但仅在注射后3d小鼠纹状体区见到大量HO-1阳性细胞,同时HO-1蛋白表达增高,具有统计学意义,其余各时间点及对照组未见HO-1阳性细胞.中脑区HO-1阳性细胞及蛋白表达在各时间点均未见显著变化.结论:MPTP导致6月龄SAMP8小鼠黑质纹状体系统急性损伤,产生多巴胺能神经元数量减少及蛋白表达降低；其黑质纹状体HO-1的高表达是一过性短暂的,它在PD中的作用是有限的.
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着色性干皮病A基因表达对A549/DDP化疗敏感性的影响
目的:探讨沉默着色性干皮病A(XPA)基因表达在非小细胞肺癌耐药细胞株顺铂化疗敏感性的影响.方法:采用免疫组化法、实时定量PCR(qPCR)及Western blot方法检测非小细胞肺癌患者肿瘤组织中XPA的表达情况.应用qPCR及Western blot方法检测A549/DDP细胞经XPA-shRNA转染后XPA-mRNA及其蛋白表达.通过MTT法检测沉默XPA基因后A549/DDP细胞凋亡情况及其对顺铂的敏感性.结果:肺癌组织XPA表达水平明显高于癌旁组织；沉默XPA基因能够促进A549/DDP细胞凋亡,并能提高A549/DDP对顺铂的药物敏感性.结论:沉默XPA基因表达能够逆转肺癌A549/DDP细胞对顺铂的耐药性.
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Rh(E)同型输血在临床输血中的重要性
目的:研究Rh(E)抗原在临床输血中的重要性,讨论临床输血治疗是否应进行Rh(E)同型输血.方法:对住院的44 800名患者进行ABO、Rh(D)、Rh(C)、Rh(E)抗原及不规则抗体筛选检测；对不规则抗体筛选阳性的患者做抗体特异性鉴定.结果:就诊者44 800例中,检出Rh血型抗体32例,其中孕妇8例,有输血史者22例,抗体来自母体的新生儿2例；Rh血型抗体的特异性为:抗-D 8例(25％)、抗-E15例(46.88％)、抗-e 1例(3.13％)、抗-c 3例(9.38％)、抗-cE 4例(12.5％)、抗-CD 1例(3.13％).结论:Rh(E)抗原在临床输血中具有非常重要的意义,应将其与ABO及Rh(D)同时作为患者输血前常规检查.
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HIV感染者外周血CD4+ CD25+ Foxp3+/CD127low/-调节性T细胞表达水平对疾病进展的影响
目的:探讨HIV感染者外周血中CD4+ CD25+Foxp3+调节性T细胞(Treg)、CD4+ CD25+ CD127low/-Treg的水平及其与其他免疫指标的关系.方法:采集68例未经抗HIV治疗的HIV/AIDS患者(长期不进展组即LTNP组29例、典型进展的HIV感染组27例、AIDS组12例)及20例健康成人的外周抗凝全血,经免疫荧光染色,应用流式细胞仪分析CD4+T细胞、CD8+T细胞、NK细胞及CD4+CD25+Foxp3+/CD127low/-Treg的含量,并进行统计学分析.结果:除CD8+T细胞外,HIV/AIDS患者外周血中CD4+T细胞、NK细胞、CD4 +/CD8+结果均明显低于健康对照组(P＜0.05)；随着疾病的进展,LTNP组、HIV组、AIDS组CD4+T细胞百分比、绝对值计数,CD8+T细胞绝对计数,NK细胞绝对计数,CD4 +/CD8+比值逐渐下降,而CD8+T细胞百分比逐渐上升.对CD4+ CD25+ Foxp3+ Treg与CD4+ CD25+CD127low/-Treg百分含量、绝对计数进行多重比较发现,各组间CD4+ CD25+ Foxp3+ Treg与CD4-CD25+ CD127low/-Treg所占CD4+T细胞百分含量的差异均有统计学意义(P＜0.05),并且随着疾病的发展,CD4+ CD25+ Foxp3+/CD127low/ Treg细胞百分含量逐渐上升,LTNP组与健康对照组之间、HIV组和AIDS组之间CD4+ CD25+Foxp3+/CD127low/ Treg绝对计数差异无统计学意义(P＞0.05),其余各组间的差异均有统计学意义(P＜0.05),并且随着疾病的发展,CD4+ CD25+ Foxp3-/CD127low/-Treg绝对计数逐渐下降.结论:CD4+ CD25+ Foxp3 +/CD127low/-Treg在HIV持续感染的免疫发病机制中有一定作用.
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特发性血小板减少性紫癜患者Th1/Th2的细胞因子水平及临床意义
目的:检测特发性血小板减少性紫癜(ITP)患者外周血Th1(IL-2、IFN-γ)及Th2(IL-4、IL-10)细胞因子的变化,探讨ITP患者发病与Thl/Th2优势活化状态之间的关系.方法:通过酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测30例ITP患者治疗前、治疗后及26例健康志愿者外周血清中IL-2、IFN-γ、IL-4、IL-10水平.结果:ITP患者治疗前IFN-γ及IL-2因子水平高于治疗后和对照组,差异有统计学意义(P＜0.05),而IL-4及IL-10因子治疗前水平低于治疗后和对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).结论:Thl型细胞因子介导的免疫应答在ITP的发病机制中占主导地位,糖皮质激素治疗可调整Th1/Th2细胞因子的偏移状态.
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抗人CD86双价抗体的表达及与抗原的结合特性
目的:用中国仓鼠卵巢(CHO)细胞表达抗人CD86双价抗体(CD86-diabody),鉴定该抗体对表达CD86分子肿瘤细胞的识别及介导的生物学效应.方法:从分泌抗人CD86小鼠源抗体的杂交瘤1D1中克隆抗体重、轻链可变区基因VH及VL.SOE-PCR构建VH-(GGGGS)-VL双价抗体基因,整合到真核表达载体plRES2-EGFP中,脂质体法转染CHO细胞,FCM筛选G418加压培养的阳性克隆.IMAC纯化并定量抗体.免疫荧光法分析抗体对人B系淋巴瘤细胞株Raji及Daudi膜型CD86分子的阳性结合率,将抗体加入到Raji细胞的培养体系中,培养72 h,MTT法分析抗体对细胞体外增殖的影响.结果:获得了稳定分泌抗人CD86-diabody的CHO细胞株.培养上清中抗体纯品的得率为5.24 mg/L.抗体与Raji及Daudi细胞的阳性结合率分别为77.2％及70.6％.经抗体孵育72 h,Raji细胞体外增殖抑制率为37％.结论:成功制备了抗人CD86-diabody,可特异性结合细胞膜型CD86分子,并对表达该分子的肿瘤细胞体外增殖具有抑制效应.
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抗基质金属蛋白酶-2单克隆抗体的制备、鉴定及其应用
目的:制备和鉴定基质金属蛋白酶-2(MMP-2)单克隆抗体(mAb),检测其在人卵巢癌组织和裸鼠移植瘤中的表达.方法:利用戊二醛法制备人工抗原MMP-2-BSA和MMP-2-KLH,并免疫小鼠,采用标准杂交瘤技术,亚克隆筛选出单克隆细胞株,制备腹水,采用辛酸-硫酸铵法纯化mAb.以ELISA、Western blot法对抗体进行鉴定.通过免疫组织化学法与商品化多抗进行对比,并联合CA125将自制抗体应用于临床人卵巢癌组织和裸鼠移植瘤的检测.结果:人工抗原MMP-2-BSA和MMP-2-KLH合成成功.获取3株稳定分泌抗MMP-2的杂交瘤细胞株(3G10、4D12、1E8),抗体亚型均为IgG1.其中3G10反应性强.经间接ELISA法检测纯化后抗体的效价达1∶1×106.自制mAb应用于人卵巢癌组织切片和裸鼠模型检测,卵巢癌组织与正常组织之间表达差异有统计学意义(P＜0.01).卵巢癌患者CA125和MMP-2联合检测阳性率较单一检测高(P＜0.01).自制mAb的染色特性与商品化抗体相似,且检出率较商品化多抗高(P＜0.01).结论:采用人工合成多肽作为免疫原成功制备了与卵巢癌相关的特异性抗MMP-2 mAb.
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补体在慢性神经性疼痛中的作用研究进展
慢性疼痛是指疼痛持续超过一种急性疾病的一般病程或超过损伤愈合所需的一般时间,或疼痛复发持续超过1个月.神经元、神经胶质细胞、免疫细胞等多种机制参与其中.补体是慢性疼痛发生和维持的一个新研究点.神经系统中多种细胞可以表达补体成分和补体受体.在多种慢性神经痛模型中,补体mRNA和蛋白质表达发生变化,并且阻断补体激活可以逆转痛觉敏感.激活的补体可以通过氧化应激损伤、与细胞因子相互作用及形成膜攻击复合物参与疼痛信号的转导.
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MicroRNA与肺部感染的研究进展
MicroRNA (miRNA)通过激活或抑制基因转录来调控基因表达,在机体的生理发育、疾病的发生和发展过程中发挥着重要作用.研究发现,miRNA不仅在细胞分化,细胞增殖,器官发育等过程中扮演重要角色,miRNA还可作为不同生理和病理状态的分子标记.许多研究标明miRNA与肺部感染的发生、发展及转归有着密切的关联.虽然目前研究不甚深入,很多问题有待探索,但可以肯定的是,对miR-NA的研究将会对肺部感染性疾病的分子机制、临床诊断与治疗等研究产生很大的影响.本文综述了miRNA与肺炎及肺结核的关系.
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Notch信号与树突状细胞发育分化及功能调控
树突状细胞(DC)在免疫反应中发挥重要作用,Notch信号通路在胚胎期和出生后的发育过程中调节细胞增殖、分化和凋亡.Notch信号参与了DC发育分化及其功能调控,本文综述了Notch信号与DC发育分化、功能调控的研究进展.
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感染免疫中ICOS和PD-1在调节性T细胞上的表达及平衡
调节性T细胞(Treg)是一个具有免疫调节作用的T细胞亚群,在机体免疫防御、识别并清除外来抗原、维持免疫耐受和免疫应答稳态中具有非常重要的作用.可诱导共刺激分子(ICOS)和程序性死亡分子l(PD-1)主要表达于已活化的T淋巴细胞,对免疫应答分别发挥正向、负向调控作用,辅助维持机体免疫的自稳状态,确保宿主获得佳的适应性免疫有重要作用,在感染性疾病的发生发展中有重要意义.且两个分子在Treg上均有上调表达,可调节Treg在免疫应答中的作用,将有希望成为对临床疾病进行免疫干预的靶位之一.现就感染免疫中ICOS/PD-1在Treg上的表达及平衡进行简要综述.
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HIV-1广谱中和性单克隆抗体的研究进展
从HIV感染患者血清中分离的针对HIV-1包膜上保守表位的中和性单克隆抗体(mAb)很多,识别的表位分别是HIV-1gp120上CD4结合位点(CD4bs),gp41的跨膜前域MPER,gp120表面包膜的高甘露聚糖,gp120上V2/V3环,这些抗体对HIV-1疫苗免疫原的研究设计至关重要.本文主要综述了各中和性单克隆抗体的结构特征,识别的表位,抗体与病毒包膜之间的相互作用.
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脂肪酸合酶与脂肪酸代谢及细胞因子的关系
脂肪酸合酶(FASN),是一种大分子蛋白复合物,在内源性长链脂肪酸的合成中发挥着重要作用.研究证实脂肪酸代谢障碍可导致细胞因子的释放紊乱,与许多疾病发生相关,FASN的异常表达与某些疾病的发生、发展密切相关,尤其是在代谢性疾病如:肥胖、胰岛素抵抗中扮演了重要角色.本文对FASN蛋白的结构、功能、表达调控,以及与相关疾病细胞因子的关系进行了总结.
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Th17细胞在霍乱毒素黏膜免疫佐剂效应中的作用
霍乱毒素(CT)是霍乱弧菌分泌的不耐热肠毒素,具有很强的免疫原活性和佐剂活性,是当今研究多且深入的黏膜免疫佐剂之一.目前有关CT黏膜佐剂作用的机制尚不完全清楚,近来研究发现CT发挥黏膜免疫佐剂作用与其诱导Th17细胞分化密切相关.现就Th17细胞在CT发挥黏膜佐剂效应的机制作一综述.
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人神经菌毛素-1基因shRNA慢病毒载体的构建
目的:构建并鉴定靶向人神经菌毛素-1(NRP-1)基因的小发卡RNA的慢病毒载体.方法:针对NRP-1mRNA设计了4条shRNA,并构建pGCSIL-RFP-shNRP1慢病毒质粒,PCR扩增阳性克隆并测序鉴定.用pGCSIL-RFP-shNRP1、pHelper1.0和pHelper2.0质粒共转染293T细胞包装产生慢病毒,测定病毒滴度.将慢病毒干扰RNA及含有NRP-1过表达载体共转染293T细胞,Western blot法检测Flag表达,观察NRP-1蛋白相对表达抑制效果.结果:PCR和测序结果与设计的干扰序列一致,病毒滴度达1×109 Tu/mL.转染细胞中NRP-1蛋白相对表达显著降低.结论:成功构建了高效率的人NRP-1基因shRNA慢病毒载体.
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重组葡激酶-人HC蛋白融合蛋白的原核表达、纯化及鉴定
目的:表达和纯化重组葡激酶-人HC蛋白融合蛋白,并初步鉴定其生物学活性.方法:利用重叠延伸PCR方法使基因重组获得目的基因片段,插入带有GST标签的原核高效可溶性表达载体pEGX-6P-1中,构建重组表达质粒pEGX-6P-1-SAK-HC,将重组表达质粒转化大肠杆菌B834,经IPTG诱导目的蛋白表达；对融合蛋白用谷胱甘肽琼脂糖凝胶柱(GST)亲和层析柱及DEAE离子交换柱纯化,用PreScission蛋白酶切除GST标签,SDS-PAGE分析该融合蛋白的表达量和纯度,应用纤维蛋白平板溶圈法测定评价其生物学活性.结果:构建的重组表达质粒经PCR、内切酶鉴定及基因序列测定证实,目的蛋白在大肠杆菌中获得表达,SDS-PAGE显示相对分子质量(Mr)为36000；对表达产物进行了亲和层析纯化,从上清中获得了纯度较高的葡激酶-人HC蛋白融合蛋白,体外实验显示其纤溶活性为9.4×104 IU/mg.结论:获得了可溶性的葡激酶-人HC蛋白融合蛋白,且其纤溶活性与尿激酶标准品相当.为下一步进行融合蛋白免疫原性鉴定奠定了基础.
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靶向人STAT3基因的shRNA慢病毒载体的构建
目的:构建并鉴定靶向人转录因子STAT3基因的shRNA慢病毒载体.方法:设计合成针对人STAT3基因的shRNA序列,运用基因重组技术将其插入到含U6启动子及绿色荧光蛋白基因的慢病毒表达载体pSicoR中,构建shRNA重组质粒pSicoR-STAT3-shRNA.经双酶切及DNA测序鉴定后,利用转染试剂X-tremeGENE HP将第3代慢病毒载体共转染至HEK293细胞进行病毒包装.以阴性载体为对照,用RT-PCR和Western blot分别检测STAT3基因和蛋白表达水平.结果:双酶切及测序证实载体构建正确,在HEK293中成功包装出高滴度慢病毒颗粒,感染HEK293后STAT3基因表达和蛋白质表达水平均较对照组明显降低(P＜0.05).结论:成功构建了靶向人STAT3基因的shRNA慢病毒载体.
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成年小鼠心成纤维细胞的原代培养及生物学特性
目的:建立适用于成年小鼠心成纤维细胞的体外分离培养及鉴定的技术方法.方法:应用胰蛋白酶、Ⅱ型胶原酶联合消化法及组织贴块法两种方法对小鼠心成纤维细胞进行体外培养.在倒置显微镜下观察心成纤维细胞生长情况；台盼蓝法测定细胞传代成活率；通过绘制生长曲线法、MTT法、DNA周期检测比较两种方法获得的心成纤维细胞的增殖情况；观察不同培养基对心成纤维细胞生长的影响；苏木素-伊红(HE)染色观察细胞形态,采用免疫荧光染色观察培养细胞波形蛋白、纤维连结蛋白及盘状结构域受体2(DDR2)的表达.结果:酶联合消化法分离培养的细胞1d后,在倒置相差显微镜下可见细胞贴壁呈长椭圆形生长,3d后生长迅速呈长梭形；贴块法培养的细胞4d后,可见细胞从组织块边缘长出,7d后细胞数量逐渐增多,细胞成活率均为97％.两种方法获得的第3代细胞生长曲线近似“S”形、MTT法显示3～5d细胞增殖较明显；酶联合消化法培养的细胞G0-G1期和S+G2+M期所占比例分别为62.61％和30.87％,组织贴块法培养的细胞G0-G1期和S+G2+M期所占比例分别为69.24％和28.05％；含100 mL/L胎牛血清的HG/DMEM培养基培养的细胞出现明显对数期.两种方法培养的第3代细胞行苏木素-伊红染色可见细胞漩涡状排列,免疫荧光检测波形蛋白、纤维连接蛋白及盘状结构域受体2表达阳性.结论:两种方法均可高效获得心成纤维细胞在体外稳定培养.与贴块法培养相比较,利用联合酶消化法能较有效的获得波形蛋白、纤维连结蛋白、DDR2高表达阳性的心成纤维细胞.
| 年 | 期数 |
| 2018 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2017 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2016 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2015 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2014 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2013 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2012 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2011 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2010 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2009 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2008 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2007 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2006 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2005 | 01 02 03 04 05 06 z1 |
| 2004 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2003 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2002 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2001 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2000 | 01 02 03 04 05 06 |
| 1999 | 01 02 |
| 1995 | 01 02 03 |
| 1994 | 01 02 |
| 1993 | 01 02 03 04 |
| 1992 | 01 02 03 04 |
| 1991 | 01 02 03 04 |
| 1990 | 01 02 |
| 1989 | 01 02 03 04 |
