细胞与分子免疫学杂志
Chinese Journal of Cellular and Molecular Immunology 세포여분자면역학잡지
- 主管单位： 中国免疫学会；第四军医大学
- 主办单位： 陕西省免疫学会,中国免疫学会
- 影响因子： 0.81
- 审稿时间： 1-3个月
- 国际刊号： 1007-8738
- 国内刊号： 61-1304/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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人天然免疫蛋白载脂蛋白B mRNA编辑酶催化亚基3A(APOBEC3A)的克隆表达及活性鉴定
目的 构建载脂蛋白B mRNA编辑酶催化亚基3A(APOBEC3A)表达载体,真核细胞表达APOBEC3A并鉴定其胞嘧啶脱氨酶活性.方法 构建APOBEC3A真核表达载体pcDNA3.0-APOBEC3A,转染HEK293T细胞和HepG2细胞.Western blot法鉴定APOBEC3A蛋白表达,免疫荧光细胞化学染色确定APOBEC3A在HEK293T细胞和HepG2细胞的定位,利用组蛋白(His)标签蛋白纯化方法富集纯化APOBEC3A蛋白,荧光偏振技术检测APOBEC3A脱氨酶活性.结果 DNA测序证实pcDNA3.0-APOBEC3A插入长600 bp的APOBEC3A基因序列;该质粒能在HEK293T细胞和HepG2细胞表达APOBEC3A,APOBEC3A在HEK293T细胞中主要分布于胞质,在HepG2细胞中胞质和胞核均匀分布;纯化获得的APOBEC3A对单链DNA中TTCA序列具有胞嘧啶脱氨基活性.结论 成功构建APOBEC3A真核表达载体,APOBEC3A在HEK293T细胞和HepG2细胞定位不同,表达的APOBEC3A具有胞嘧啶脱氨基活性.
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他克莫司下调实验性自身免疫性肌炎小鼠肌组织中IL-17和IL-23 mRNA水平
目的 研究白细胞介素17(IL-17)、IL-23 mRNA在实验性自身免疫性肌炎(EAM)小鼠肌组织表达情况,探讨他克莫司(TAC)处理对IL-17、IL-23 mRNA水平的影响及对EAM小鼠的治疗效果.方法 15只雌性BALB/c小鼠随机分为正常对照组、EAM模型组和TAC处理组;HE染色观察肌组织炎症程度;实时荧光定量PCR检测小鼠肌组织IL-17、IL-23 mRNA水平;Pearson法分析二者间的相关性.结果 与正常组相比,EAM组小鼠肌组织IL-17、IL-23 mRNA水平显著升高,给予TAC处理后均明显降低.二者表达水平与肌组织炎症评分呈正相关.与EAM组比较,TAC处理组小鼠肌组织炎症评分也有所下降.结论 TAC可下调EAM小鼠IL-17、IL-23 mRNA水平.
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人髌下脂肪垫干细胞与骨关节炎软骨细胞间接共培养可促进其向软骨细胞分化
目的 将人髌下脂肪垫干细胞(IPFPSC)及骨关节炎软骨细胞(OAC)进行间接共培养,促进OAC软骨表型的恢复及诱导IPFPSC向软骨细胞分化.方法 体外分离、培养人IPFPSC及OAC,分为单独IPFPSC组、单独OAC组及IPFPSC和OAC间接共培养组,体外成软骨诱导21 d后,通过HE染色、Alcian蓝染色、免疫荧光细胞化学染色检测细胞1型胶原蛋白(Col1)、Col2、Col10、聚集蛋白聚糖(aggrecan)及SOX-9的表达情况.结果 共培养组OAC聚集成微球,IPFPSC呈椭圆形;单独组OAC聚集分布,排列松散,单独组IPFPSC呈长梭形.HE染色显示共培养组OAC聚集成团,核染色深,IPFPSC呈椭圆形,胞质丰富,呈旋涡状生长;单独组OAC聚集分布,核染色浅;单独组IPFPSC呈长梭形,核染色浅.Alcian蓝染色显示共培养组OAC及IPFPSC蛋白多糖分泌多,单独OAC及单独IPFPSC组分泌少.免疫荧光细胞化学染色显示共培养组IPFPSC及OAC中Col2、aggrecan及SOX-9表达较强,Col1与Col10表达较弱;而单独培养的IPFPSC及OAC组则相反.结论 IPFPSC和OAC间接共培养可以促进OAC软骨细胞表型的恢复及诱导IPFPSC向软骨细胞分化.
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肝星状细胞条件培养基激活ERK1/2通路诱导肝癌细胞增殖及上皮间质转化
目的 探讨肝星状细胞(HSC)对肝癌细胞(HCC)恶性生物学行为的影响及其相关机制.方法 分别培养SMMC-7721肝癌细胞、HepG2肝癌细胞和LX-2 HSC,采用LX-2 HSC条件培养基(LX2-CM)、丝裂原激活蛋白激酶(MAPK)特异性抑制剂U0126处理肝癌细胞,TranswellTM小室检测肝癌细胞的侵袭和迁移能力,CCK-8法检测细胞的增殖情况,实时定量PCR和Western blot法分别检测两种肝癌细胞磷酸化的胞外信号调节激酶1/2 (p-ERK1/2)、ERK1/2、c-Myc、波形蛋白(vimentin)、上皮钙黏素(E-cadherin)的mRNA和蛋白水平.结果 LX2-CM能促进SMMC-7721细胞和HepG2细胞的增殖、侵袭和迁移,其作用可被U0126阻断.LX2-CM可以上调p-ERK1/2、c-Myc、vimentin的水平,下调E-cadherin的水平;U0126处理细胞后,p-ERK1/2、c-Myc、vimentin的水平显著降低,E-cadherin水平明显升高.结论 LX2-CM能通过ERK1/2通路激活c-Myc,促进肝癌细胞的增殖、侵袭和迁移,并诱导上皮间质转化.
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冻存SD大鼠脂肪组织中脂肪干细胞的分离培养和鉴定
目的 研究从冻存SD大鼠脂肪组织中分离培养脂肪干细胞(ADSC)的可行性.方法 取健康SD大鼠股沟处脂肪组织,用100 mL/L二甲基亚砜联合900 mL/L胎牛血清(FBS)作为冻存剂,冻存于液氮中.3个月后复苏冻存的脂肪组织,进行ADSC的分离培养,观察细胞的生长状况及形态特征.取第3代细胞,CCK-8法绘制其生长曲线,免疫荧光技术检测CD29、CD45、CD90的表达;分别用成脂、成骨诱导培养液进行诱导分化,油红O、茜素红染色鉴定细胞分化情况.结果 从冻存SD大鼠脂肪组织中分离得到的ADSC形态为长梭形纤维样,具有较好的增殖能力,生长曲线为典型的“S”型;免疫荧光技术证实细胞强表达CD29、CD90,CD45阴性;分离的细胞经成脂诱导后油红O染色为阳性,经成骨诱导后茜素红染色为阳性.结论 从冻存SD大鼠脂肪组织中能够分离出ADSC.
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下调婆罗双树样基因4(SALL4)表达水平可抑制肾癌ACHN细胞周期并促进其凋亡
目的 探讨下调婆罗双树样基因4 (SALL4)对肾癌ACHN细胞周期和细胞凋亡的影响.方法 根据人SALL4的mRNA序列设计合成靶向SALL4的小干扰RNA (siRNA),用于沉默ACHN细胞SALL4的表达.运用实时定量PCR(qRT-PCR)和Western blot法分别检测SALLL4的mRNA与蛋白表达水平;使用流式细胞术检测ACHN细胞的细胞周期和细胞凋亡情况.结果 SALL4 siRNA可显著下调ACHN细胞中SALL4的mRNA和蛋白表达水平,下调SALL4后ACHN细胞的细胞周期受到抑制,G1期细胞增多,S/G2期减少,细胞凋亡显著增加.结论 下调SALL4基因表达可抑制肾癌ACHN细胞增殖并促进其凋亡,SALL4可能是肾癌治疗的新靶点.
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咪喹莫特(imiquimod)联合树突状细胞降低荷黑素瘤小鼠调节性T细胞并增强抗肿瘤效果
目的 观察联合应用Toll样受体7(TLR7)激动剂咪喹莫特(imiquimod)和负载肿瘤相关抗原的树突状细胞(DC)疫苗对荷黑素瘤小鼠的治疗作用并探讨相关机制.方法 培养表达卵白蛋白的B16黑素瘤(B16-OVA)细胞,注射入C57BL/6小鼠皮下制备荷瘤小鼠模型.含重组小鼠粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(rmGM-CSF)和重组小鼠白细胞介素4(rmIL-4)的培养液扩增培养骨髓来源的DC,加入OVA过夜孵育制备负载OVA的DC疫苗(OVA-DC).荷瘤小鼠分别采用PBS、咪喹莫特局部涂抹、OVA-DC皮内注射、咪喹莫特联合OVA-DC进行治疗,数字游标卡尺测量小鼠皮下肿瘤的生长情况.流式细胞术检测荷瘤小鼠外周血CD4+ FOXP3+调节性T细胞(Treg)的比例.采用上述方案免疫小鼠后,用CCK-8法检测小鼠脾脏淋巴细胞对B16-OVA细胞的杀伤效应.结果 与单纯咪喹莫特、OVA-DC治疗组及PBS对照组相比,咪喹莫特联合OVA-DC治疗组荷瘤小鼠黑素瘤体积较小,荷瘤小鼠CD4+细胞中FOXP3+ Treg比例明显降低.咪喹莫特联合OVA-DC免疫小鼠脾脏淋巴细胞杀伤B16-OVA肿瘤细胞能力较其他组明显增强.结论 咪喹莫特联合负载抗原的DC疫苗可诱导荷瘤机体CD4+ FOXP3+ Treg比例降低并增强抗肿瘤效果.
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TNF-α和IL-1β在急性呼吸窘迫综合征小鼠肺组织表达的变化及评价
目的 探究肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素1β(IL-1β)在急性呼吸窘迫综合征(ARDS)小鼠模型肺组织中表达水平随时间的变化规律,并评价其与小鼠肺组织损伤严重程度之间的相关性.方法 采用脂多糖(LPS)诱导建立小鼠ARDS模型,HE染色观察小鼠肺组织形态结构改变,并计算肺损伤评分;实时定量PCR法检测小鼠肺组织内TNF-α和IL-1β的mRNA水平;ELISA检测小鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)中TNF-α和IL-1β的含量.结果 与正常对照组小鼠相比,ARDS小鼠的肺泡及间质组织正常结构破坏,炎症浸润明显,3d时肺损伤评分达到高值;ARDS小鼠肺组织中TNF-α和IL-1β mRNA表达水平显著升高,分别在LPS滴注后30 min和6h达峰值;同时ARDS小鼠BALF中TNF-α和IL-1β含量也明显升高.结论 LPS诱导ARDS小鼠的肺组织损伤程度与TNF-α、IL-1β等炎症介质表达水平,随着时间表现出“驼峰样”升高,炎症介质的高值出现在肺损伤程度的高峰之前,提示这些炎症因子在ARDS炎症性损伤的形成及发展中扮演着重要角色.
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骨髓间充质干细胞移植可增强衰老模型大鼠抗氧化能力和免疫活性
目的 研究骨髓间充质干细胞(BMSC)移植对D-半乳糖致衰老大鼠抗氧化能力和免疫活性的影响.方法 取10只健康雄性SD大鼠为青年对照组(2月龄).另选取健康SD大鼠,每日皮下注射D-半乳糖(400 mg/kg),制备衰老模型.将衰老模型大鼠随机分为衰老模型组和BMSC治疗组(每组10只),治疗组给予尾静脉移植3×106个BMSC;同时对照组和模型组注射等量生理盐水.取各组大鼠血样本,检测血清中丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活性.称胸腺质量计算各组大鼠胸腺指数;MTT法测定胸腺淋巴细胞转化指数;ELISA检测大鼠胸腺中白细胞介素2(IL-2)和IL-10含量.透射电镜观察各组大鼠胸腺组织的超微结构.结果 BMSC移植可提高大鼠血清SOD的活性,降低MDA含量.与衰老模型组相比,BMSC治疗组的胸腺指数、淋巴细胞转化指数升高.BMSC移植大鼠胸腺IL-2含量增加、IL-10含量降低.衰老模型组胸腺细胞排列稀疏,部分胞核固缩、凋亡;脂肪组织增多.而BMSC治疗能使胸腺细胞、网状上皮细胞的超微结构趋于正常,胞质内细胞器丰富完整.结论 BMSC移植可增强大鼠抗氧化能力并增强免疫活性,从而延缓免疫衰老.
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与脐带间充质干细胞共培养促进奶牛乳腺上皮细胞乳蛋白合成及其机制
目的 研究脐带间充质干细胞(UCMSC)调节奶牛乳腺上皮细胞(BMEC)乳蛋白合成的可能作用机制.方法 利用TranswellTM小室将UCMSC和BMEC进行双层共培养,BMEC单纯培养为对照组,胰岛素样生长因子1受体(IGF-1R)抑制剂AG1024处理细胞,ELISA检测上清IGF-1和β酪蛋白(CSN2)、κ酪蛋白(CSN3)含量变化,实时定量PCR检测Janus激酶2/信号转导子与转录激活子5(JAK2/STAT5)信号通路相关基因的相对表达丰度;再用JAK2信号通路阻断剂AG490孵育细胞,实时定量PCR检测CSN2、CSN3 mRNA的相对表达丰度.结果 与UCMSC共培养后,BMEC的CSN2、CSN3合成量和CSN2、CSN3、JAK2、STAT5、E74样ETS转录因子5(ELF5) mRNA相对表达丰度均显著高于单纯培养的BMEC;AG1024处理后,显著降低BMEC的CSN2、CSN3合成量,显著降低CSN2、CSN3、JAK2、STAT5、ELF5 mRNA的相对表达丰度;给予AG490阻断后,显著降低CSN2、CSN3 mRNA相对表达丰度;在AG1024基础上,加入AG490后显著降低CSN2、CSN3 mRNA相对表达丰度.结论 UCMSC能够通过IGF-1介导JAK2/STAT5信号通路,上调BMEC乳蛋白合成关键基因mRNA的表达丰度,促进其乳蛋白的合成.
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干扰素调节因子5(IRF5)调控小鼠骨髓源性巨噬细胞的极化
目的 诱导小鼠骨髓来源的巨噬细胞极化为M1型巨噬细胞和M2型巨噬细胞,检测干扰素调节因子5(IRF5)在M1型和M2型巨噬细胞中的表达差异,并用IRF5小干扰RNA(IRF5 siRNA)沉默巨噬细胞中IRF5基因表达,观察其极化状态的改变.方法 用γ干扰素(IFN-γ)和脂多糖(LPS)诱导小鼠骨髓来源的巨噬细胞向M1型巨噬细胞分化,白细胞介素4(IL-4)诱导其向M2型巨噬细胞分化,实时定量PCR检测IRF5、IL-12、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、精氨酸酶1(Arg1)和巨噬细胞甘露糖受体(MMR) mRNA在M1型和M2型巨噬细胞中的表达.用IRF5 siRNA转染巨噬细胞,实时定量PCR检测M1型巨噬细胞标志物IRF5、IL-12、TNF-α、iNOS和M2型巨噬细胞标志物Arg1、MMR mRNA的表达,评估其极化状态的改变.结果 流式细胞术检测巨噬细胞分化率达81.7％,实时定量PCR检测显示M1型巨噬细胞中IRF5、IL-12、iNOSmRNA的表达量明显高于M2型巨噬细胞,TNF-α亦高于M2型巨噬细胞;M2型巨噬细胞中Arg1、MMR mRNA表达量同M1型巨噬细胞比较显著增高.IRF5 siRNA转染巨噬细胞后,IRF5、IL-12、TNF-α、iNOS mRNA的表达量显著降低,Arg1、MMRmRNA的表达量明显增加.Western blot法检测结果显示IRF5、IL-12、TNF-α、iNOS蛋白的表达量显著降低,Arg1、MMR蛋白的表达量明显增加,极化状态向M2型巨噬细胞偏移.结论 IRF5对巨噬细胞的极化调控有重要作用,可作为鉴别M1型巨噬细胞和M2型巨噬细胞的重要标志物.
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大鼠骨髓间充质干细胞促进RSC96细胞凋亡并抑制其增殖和迁移
目的 探讨大鼠骨髓间充质干细胞(BMSC)对大鼠RSC96施万细胞增殖及迁移的影响.方法 全骨髓细胞贴壁法分离并提取SD大鼠BMSC,倒置显微镜观察第3代BMSC形态;流式细胞术检测细胞表面CD19、CD34、CD73、CD105;第3代BMSC经成脂成骨诱导液分别诱导3周和2周后,分别应用油红O染色和碱性磷酸酶检测BMSC的多向分化能力.应用24mm共培养板,将第3代BMSC与RSC96细胞共培养24h,采用MTT法和平板克隆形成实验检测RSC96细胞增殖及克隆形成能力;划痕实验及TranswellTM小室实验检测RSC96细胞的迁移能力;Western blot法检测RSC96细胞Bax和Bcl-2蛋白表达水平.结果 SD大鼠第3代BMSC显微镜下呈梭形、旋涡状排列,形态大小相似;BMSC表面标志CD73、CD105高表达,造血干细胞表面标志CD34和淋巴细胞表面标志CD19低表达;BMSC经成脂诱导培养3周后,细胞有大量脂滴;经成骨诱导培养2周后,碱性磷酸酶染色呈阳性;BMSC与RSC96细胞共培养后,与对照组相比,RSC96细胞的增殖活性显著降低,克隆形成能力显著减弱、细胞迁移能力降低;共培养后RSC96细胞Bax蛋白水平升高,Bcl-2蛋白表达降低.结论 BMSC能促进RSC96细胞凋亡,抑制其增殖、迁移.
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富氢液激活自噬减轻带状疱疹后神经痛大鼠痛敏并降低炎症因子的水平
目的 探讨自噬在富氢液治疗带状疱疹后神经痛(PHN)中的作用.方法 雄性SD大鼠100只,采用随机数字表法,将其分为5组(n=20):对照组、PHN组、富氢液处理的PHN组(PHN-H2组)、富氢液和3-MA同时处理的PHN组(PHN-H2-3-MA组)、富氢液和雷帕霉素(Rap)同时处理的PHN组(PHN-H2-Rap组).通过水痘带状疱疹病毒(VZV)接种建立PHN大鼠模型.造模成功的大鼠给予腹腔注射15 mg/kg 3-MA或10 mg/kg Rap,隔日1次,连续3次.富氢液处理方式为于造模后每天2次,腹腔注射富氢液10 mL/kg,连续7d.50只大鼠分别于造模后3、7、14、21 d,测定机械缩足反应阈(PWT);另50只大鼠,于造模后7 d,收集脊椎腰膨大处,ELISA测定肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)和IL-6的含量,Westernblot法测定自噬蛋白微管相关蛋白1轻链3、beclin 1、P62的水平.结果 与对照组比较,PHN组大鼠PWT值减少,TNF-α、IL-1β、IL-6、LC3Ⅱ和beclin 1水平增加,P62含量减少;与PHN组比较,PHN-H2组和PHN-H2-Rap组大鼠PWT值增加,TNF-α、IL-1β和IL-6水平降低,LC3和belin 1表达进一步增加,P62含量增加;与PH-N-H2组比较,PHN-H2-3-MA组大鼠PWT值明显减少,TNF-α、IL-1β、IL-6水平增加、LC3和beclin 1水平降低、P62含量增加.结论 富氢液可以通过激活自噬减轻PHN大鼠的机械痛敏和炎症因子的释放.
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短期使用雷帕霉素联合调节性T细胞可延长小鼠移植心脏时间但不能抑制受体肿瘤发生
目的 研究短期使用雷帕霉素(Rap)联合调节性T细胞(Treg)在诱导同种异体小鼠心脏移植物长期存活,同时探讨此方案对移植受体肿瘤免疫的影响.方法 免疫磁珠法分离得到受体小鼠脾脏Treg,经CD3/CD28单克隆抗体磁珠及2000 U/mL重组小鼠白细胞介素2(rmIL-2)体外扩增后,流式细胞术检测纯度;建立小鼠腹腔同种异体心脏移植模型(H-2b到H-2d),分为对照组(单纯移植)、Rap组、Rap联合Treg组.Rap组连续14 d经腹腔注射Rap 1 mg/(kg·d),Rap联合Treg组注射相同剂量的Rap,并移植当天经尾静脉过继输注扩增后的1×107个Treg,同时设同基因移植组(H-2d到H-2d),每日观察移植心脏搏动并在相应时点进行组织学评价.在受体肿瘤免疫实验中设三组同种异体心脏移植(H-2b到H-2d)小鼠,同时经尾静脉过继输注B16-F10细胞(H-2b)(受体来源),另三组同种异体心脏移植(H-2d到H-2b)小鼠经尾静脉过继输注B16-F10细胞(H-2b)(供体来源),两周后比较肺部肿瘤结节数量.结果 对照组移植心脏中位生存时间(MST)为7d,Rap组为15 d,Rap联合Treg过继输注能够显著延长移植心脏MST至93 d,组织学显示长期存活心脏淋巴细胞浸润及慢性血管病变;对于供体来源肿瘤,对照组未见肿瘤结节,Rap组为(15±8)个,Rap联合Treg组小鼠肺部肿瘤结节为(14±7)个,后2组类似无显著性差异;对于受体来源肿瘤,对照组肿瘤结节为(70±12)个、Rap组为(28±9)个、Rap联合Treg组小鼠肺部肿瘤结节为(146±12)个,与对照组、Rap组相比均显著增加.结论 短期使用低剂量Rap联合Treg能够显著延长小鼠移植心脏的存活时间,但仍不能抑制受体肿瘤的发生.
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高原低氧暴露小鼠脾脏T淋巴细胞数量减少且免疫活性下降
目的 研究高原低氧条件下,小鼠脾脏T淋巴细胞亚群及其功能的改变.方法 分别在400m、2200 m和4200 m的不同海拔条件下饲养小鼠30 d后,ELISA检测脾细胞培养上清中白细胞介素4(IL-4)、γ干扰素(IFN-γ)的含量;MTT法检测小鼠脾脏T淋巴细胞的增殖能力;流式细胞术观察小鼠脾脏T淋巴细胞亚群的变化.结果 高海拔低氧暴露30 d后,与对照组(海拔400m)相比,4200 m和2200 m实验组小鼠脾脏指数明显增高,4200 m低氧组小鼠脾脏指数与2200 m低氧组相比也显著增加;小鼠脾细胞培养上清中IFN-γ的含量明显降低,而IL-4的水平未发生明显变化;脾脏T淋巴细胞增殖能力明显降低,同时,4200 m低氧组与2200 m低氧组相比,其T细胞增殖能力也显著下降;脾脏CD3+T细胞、CD4+T细胞、CD8+T细胞数显著下降,其中,CD4+T细胞数较CD8+T细胞数下降明显,另外,4200m低氧组与2200m低氧组相比,CD3+T细胞、CD4+T细胞数也明显减少.结论 海拔4200m和2200m高原低氧暴露30d后,小鼠脾脏T淋巴细胞数目减少且增殖能力降低,IFN-γ水平降低.
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EDTA修复液提高套细胞淋巴瘤CD5和细胞周期蛋白D1(cyclin D1)的免疫组织化学染色效果
目的 探讨柠檬酸、EDTA抗原修复液及不同修复时间分别对套细胞淋巴瘤(MCL)组织CD5和细胞周期蛋白D1(cyclin D1)免疫组织化学染色结果的影响.方法 选取15例MCL组织切片,分别采用柠檬酸和EDTA修复20 min,进行CD5免疫组织化学染色;分别采用柠檬酸修复20 min、EDTA修复20、30、40 min,观察cyclin D1的染色效果.上述不同修复液及不同修复时间均选用反应性增生淋巴结进行CD5和cyclin D1染色作为对照.结果 采用EDTA修复20 min,CD5阳性率优于柠檬酸修复20 min;采用EDTA修复40 min,cyclin D1阳性率优于EDTA修复30、20 min及柠檬酸修复20 min.结论 采用EDTA进行抗原修复20 min对MCL组织CD5免疫组织化学染色效果较好,对于cyclin D的免疫组织化学染色应选择EDTA修复40 min.
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五种不同血清量倍比稀释检测孕妇IgG型抗A(B)效价的比较
目的 探讨五种不同血清量倍比稀释后检测孕妇IgG型抗A(B)效价积分的差异.方法 标记试管1～5排,每排10管,第1排各加生理盐水25 μL、第2排各加50 μL、第3排各加100 μL、第4排各加200μL、第5排各加250μL.在第1～5排第1管分别加入纯化后的孕妇血清25、50、100、200、250 μL,进行倍比稀释.在第1排各加与孕妇血清抗体相应的30 mL/L红细胞悬液12.5 μL、第2排各加25 μL、第3排各加50 μL、第4排各加100 μL、第5排各加125 μL,置37℃孵育30 min;洗涤3次,各管加入多特异性抗人球蛋白试剂1滴,以3400 r/min离心15 s,观察结果.结果 五种血清量倍比稀释抗体效价平均积分分别为71、88、91、95、92分;65例孕妇IgG型抗A(B)效价的异常率分别为30.8％(20/65)、36.9％(24/65)、38.5％ (25/65)、40.0％(26/65)、40.0％(26/65).结论 25 μL血清量倍比稀释检测孕妇IgG型抗A(B)效价积分和异常率明显低于50、100、200、250 μL血清量,50 μL～250 μL血清量之间无显著性差异.
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化疗可增加肺鳞状细胞癌患者外周血中FcγRⅡB含量
目的 检测肺鳞状细胞癌患者化疗前后外周血单核细胞和B细胞膜表面FcγRⅡB表达水平、血清中可溶性FcγRⅡB(sFcγRⅡB)及其抗体的含量.方法 免疫荧光技术检测鳞状细胞癌患者化疗前后单核细胞和B细胞膜表面FcγRⅡB的表达和定位、实时定量PCR检测FcγRⅡBmRNA水平,Western blot法检测sFcγRⅡB蛋白水平;ELISA检测鳞状细胞癌患者化疗前后、健康人血清中sFcγRⅡB总量、与IgG结合的sFcγRⅡB(sFcγRⅡB-IgG)、抗FcγRⅡB自身抗体的含量变化.结果 与健康人相比,鳞状细胞癌患者化疗前单核细胞和B细胞FcγRⅡB的水平、sFcγRⅡB总量及抗FcγRⅡB自身抗体的含量明显降低,化疗后高于化疗前;sFcγRⅡB-IgG含量高于健康人,化疗后低于化疗前.结论 鳞状细胞癌患者FcγRⅡB含量减少,化疗后FcγRⅡB表达有所增加.
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血清氨基肽酶N(APN/CD13)水平与类风湿性关节炎患者骨破坏相关
目的 评价血清氨基肽酶N(APN/CD13)水平对类风湿性关节炎(RA)患者骨破坏影响和监测意义.方法 将RA患者分为有骨质破坏组和无骨质破坏组,采用ELISA检测各组血清APN水平及肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素17 (IL-17)水平.通过独立样本T检验比较两组RA患者血清APN、细胞因子水平差异,皮尔逊相关分析细胞因子和APN水平的相关性.结果 有骨质破坏的RA患者,其血清APN水平高于无骨质破坏的RA患者,并且随着RA患者双手正位片的分级,血清APN水平增高.以APN血清含量作为RA骨破坏的预测指标,与类风湿因子(RF)、抗环瓜氨酸肽(CCP)抗体进行对比,APN的约登指数高于RF、抗CCP抗体的约登指数.RA患者的血清APN含量和TNF-α水平呈正相关.结论 RA患者的血清APN水平与其骨破坏程度存在相关性.
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雌激素受体β基因3'非翻译区G1730A多态性影响该基因转录活性
目的 研究雌激素受体β(ERβ)基因的3'非翻译区G1730A的单核苷酸多态性(SNP)对ERβ转录活性的影响.方法 采用基因重组和定点突变技术,构建ERβ基因该位点的野生型G及突变型A双荧光素酶报告基因载体,将其转染HEK293细胞和HeLa细胞,分析比较不同基因型载体的相对荧光素酶活性.结果 1730A突变型的荧光素酶相对活性比值,在两种细胞中均高于野生型1730G.结论 ERβ基因G1730A位点的SNP影响ERβ的转录,可能导致其蛋白表达水平的增加.
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过表达kisspeptin抑制MKN-45胃腺癌细胞的增殖和迁移
目的 探讨肿瘤转移抑制因子kisspeptin(KISS-1)在胃腺癌组织中的表达及对胃腺癌细胞增殖、迁移能力的影响.方法 实时定量PCR和Western blot法分别检测50例胃腺癌组织和对应的癌旁组织中kisspeptin的mRNA和蛋白水平.分别将kisspeptin小干扰RNA(kisspeptin-siRNA)和对照小RNA(control-siRNA)、kisspeptin过表达载体(pEGFP-N1-kisspeptin)和对照空载体(pEGFP-N1)转染至MKN-45胃腺癌细胞中,培养48 h后,Western blot法检测细胞中kisspeptin、基质金属蛋白酶9(MMP-9)、MMP-2、β联蛋白(β-catenin)、C-myc蛋白水平,MTT法检测细胞增殖能力,细胞划痕实验检测细胞迁移能力.用Wntt/β-catenin信号通路抑制剂FH535作用于胃腺癌细胞后,MTT法检测细胞增殖、流式细胞术检测细胞凋亡情况.结果 Kisspeptin在胃腺癌组织中的表达水平明显低于癌旁组织.与空载体组相比,过表达kisspeptin后,MKN-45细胞存活率和迁移率、MMP-9、MMP-2、β-catenin、C-myc水平均明显降低;与control-siRNA组细胞相比,敲低kisspeptin水平后,细胞存活率和迁移率、MMP-9、MMP-2、β-catenin、C-myc水平明显增加.FH535处理后的胃腺癌细胞增殖、迁移趋势与过表达kisspeptin细胞一致.结论 Kisspeptin在胃腺癌组织中低表达,kisspeptin通过Wnt/β-catenin信号通各抑制胃腺癌细胞增殖迁移能力.
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兔抗小鼠含SET结构域(赖氨酸甲基转移酶)8(Setd8)多克隆抗体制备和应用
目的 在大肠杆菌表达小鼠含SET结构域(赖氨酸甲基转移酶)8(Setd8)蛋白并制备兔抗Setd8多克隆抗体.方法 将pGADT7-Setd8质粒和pET-30a载体分别双酶切后连接、转化和鉴定,构建pET-30a-Setd8原核表达质粒.将pET-30a-Setd8质粒转化到E.coli BL21中,用异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导蛋白表达,通过镍亲和层析柱进行蛋白纯化.应用纯化的Setd8蛋白免疫新西兰大白兔,获得Setd8多克隆抗体.利用ELISA、Western blot法及免疫组织化学染色法对所得多克隆抗体进行效价测定及特异性鉴定.结果 应用限制性内切酶双酶切后电泳及序列测定法,成功构建的pET-30a-Setd8重组质粒在大肠杆菌中IPTG诱导下能够高效表达重组Setd8蛋白.免疫获得的多克隆抗体经ELISA检测其抗体效价为1∶1 000 000,Western blot法结果显示制备的多克隆抗体能特异性识别细胞和组织中的Setd8蛋白,免疫组织化学染色法显示多克隆抗体识别的Setd8主要表达于成年小鼠睾丸组织中的精原细胞.结论 成功获得较高纯度Setd8蛋白,制备的Setd8多克隆抗体具有较高反应性和特异性.
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小鼠抗人S100A9单克隆抗体可变区基因克隆及其序列分析
目的 克隆小鼠抗人S100A9单克隆抗体(mAb)可变区基因并对其序列进行分析.方法 从分泌小鼠抗人S100A9mAb的杂交瘤细胞株(ⅡD4B10)中提取RNA,采用逆转录PCR扩增出轻链可变区基因VL和重链可变区基因vH,并对vL和VH进行克隆测序与BLAST同源性比较分析.结果 小鼠抗人S100A9 mAb VL基因编码区291 bp,编码97个氨基酸,属于IGKV14-111 *01家族;VH基因编码区324 bp,编码108个氨基酸,属于IGHV1-80* 01家族.所获取的vH和vL序列有明显抗体可变区特征,具有骨架区和互补决定区.结论 获得鼠抗人S100A9 mAb的重链和轻链可变区基因,为构建基因工程抗体奠定基础.
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免疫检查点分子T细胞激活抑制物免疫球蛋白可变区结构域(VISTA)的研究进展
T细胞激活抑制物免疫球蛋白可变区结构域(VISTA)是可抑制T细胞应答的负向免疫检查点分子,主要表达于造血细胞,具有受体和配体的双重功能,在肿瘤微环境和肿瘤浸润淋巴结中表达升高.VISTA可抑制T细胞对肿瘤抗原的应答,抑制T细胞分化为调节性T细胞(Treg),降低白细胞介素2(IL-2)的产生,具有免疫抑制和免疫调节的功能.但是VISTA并不会对B细胞的增殖产生影响.VISTA与转移性黑素瘤、诱导性黑素瘤和年龄相关的炎症表型的发生相关,并且具有与不同于程序性死亡蛋白1及配体1(PD-1/PD-L1)信号通路,联用VISTA/PD-1的单克隆抗体可取得更好的治疗效果.此外,VISTA在小鼠急性移植物抗宿主疾病模型上也表现出显著的调节作用.VISTA在免疫抑制中具有明确的功能,可能是这一生物学行为的核心控制元件,然而其天然配体及其发挥作用的内在机制尚不清楚.提示我们VISTA作为新发现的负向免疫检查点有望成为肿瘤免疫治疗的新靶点.
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miR-146a与固有免疫应答的研究进展
miR-146a是一种单链非编码小RNA,通过与靶mRNA的特异性结合,在转录后水平对基因表达进行调控,参与固有免疫应答的多个环节,与多种感染性疾病及自身免疫性疾病有关,在抑制炎症反应的加重和维持免疫稳态中发挥重要作用.在病原微生物感染时,miR-146a作为重要的固有免疫信号调节分子,可以与经典的固有免疫应答体系共同组成机体抵御病原微生物入侵的“第一道防线”.本文总结了miR-146a对固有免疫应答的调控作用,尤其是miR-146a的作用靶点及作用途径.
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与滤泡辅助性T(Tfh)细胞分化发育相关的主要转录因子
滤泡辅助性T(Tfh)细胞是一群定位于淋巴滤泡的辅助性T细胞,表型为CD4+ CXCR5+ ICOS+ PD1+,是主要负责辅助B细胞产生抗体的T细胞亚群.多种转录因子对初始T淋巴细胞向各亚群细胞分化至关重要,包括B细胞淋巴瘤因子6(Bcl-6)、淋巴增强结合因子1(LEF-1)、T细胞因子1(TCF-1)、活化性T细胞的核因子(NFAT)、无刚毛鳞甲复合体同源物2(Ascl2)、干扰素调节因子4 (IRF4)、细胞肌腱膜纤维肉瘤因子(c-Maf)、B淋巴细胞诱导成熟蛋白1(Blimp1)、碱性亮氨酸拉链转录因子ATF样蛋白(BATF)和信号转导与转录激活子(STAT)等.
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免疫细胞的CD98分子功能研究进展
CD98是一种由重链和轻链组成异二聚体跨膜糖蛋白,在人体内广泛分布.轻链是氨基酸转运受体,重链通过β整合素相关信号通路参与细胞多种功能.CD98重链(CD98hc)在T和B淋巴细胞的增殖、浆细胞的形成和抗体分泌的过程中发挥着重要作用,还影响巨噬细胞和嗜酸性粒细胞的功能,进而调控免疫细胞参与的固有免疫应答和适应性免疫应答.CD98也在多种自身免疫性疾病的发生发展中扮演重要角色,并有望成为自身免疫性疾病的治疗靶向标志物.
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转铁蛋白受体(TfR)在丙型肝炎病毒感染中的作用机制研究进展
丙型肝炎病毒(HCV)是导致慢性化肝炎、原发性肝癌的主要病原体.多种病毒蛋白及宿主细胞分子参与HCV入胞过程,但其感染机制仍未完全阐明.转铁蛋白受体(TfR)可作为多种病毒受体在人胞过程中发挥作用.TflR不仅与HCV引起的铁代谢紊乱密切相关,且在CD81依赖的病毒黏附后作为特异性受体介导HCV与宿主细胞膜融合.
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布鲁菌感染中免疫细胞作用的研究进展
布鲁菌病是世界上广泛流行的人畜共患病之一,近年来发病率明显增加,严重影响着人类的健康和畜牧业的发展.布鲁菌病的发病机制不清,目前研究认为可能与免疫细胞亚群中的自然杀伤细胞、树突状细胞和巨噬细胞的改变有关,也可能与CD4+T细胞亚群中Th1细胞/Th2细胞的失衡、调节性T细胞(Treg)和Th17细胞的免疫调节以及CD8+T细胞的作用机制有关.本文主要对这些固有免疫细胞和CD4+T细胞亚群及CD8+T细胞在布鲁菌感染中的研究进展进行综述.
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针对前列腺特异性膜抗原的抗体靶向治疗研究进展
前列腺特异性膜抗原(PSMA)是一种2型跨膜糖蛋白,它特异性地表达于前列腺上皮细胞,是一种前列腺特异性标志物.PSMA在前列腺癌组织中的表达显著上调,且其表达水平与肿瘤的恶性程度及患者的生存密切相关.此外,PSMA也特异性地表达于多种肿瘤的新生血管内皮细胞.这些特点使得PSMA成为一种理想的肿瘤治疗靶点,以PSMA为靶点的肿瘤靶向治疗研究发展迅速,其中基于抗体的抗肿瘤策略如抗体偶联药物、免疫细胞治疗及免疫放射治疗等取得了显著的进展,证实了PSMA作为抗肿瘤靶点的可行性和有效性.本文就PSMA的结构和功能及针对PSMA的基于抗体的抗肿瘤治疗策略进行了总结.
| 年 | 期数 |
| 2018 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2017 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2016 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2015 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2014 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2013 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2012 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2011 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2010 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2009 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2008 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2007 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2006 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2005 | 01 02 03 04 05 06 z1 |
| 2004 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2003 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2002 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2001 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2000 | 01 02 03 04 05 06 |
| 1999 | 01 02 |
| 1995 | 01 02 03 |
| 1994 | 01 02 |
| 1993 | 01 02 03 04 |
| 1992 | 01 02 03 04 |
| 1991 | 01 02 03 04 |
| 1990 | 01 02 |
| 1989 | 01 02 03 04 |
