细胞与分子免疫学杂志
Chinese Journal of Cellular and Molecular Immunology 세포여분자면역학잡지
- 主管单位： 中国免疫学会；第四军医大学
- 主办单位： 陕西省免疫学会,中国免疫学会
- 影响因子： 0.81
- 审稿时间： 1-3个月
- 国际刊号： 1007-8738
- 国内刊号： 61-1304/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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miR-125b通过下调己糖激酶2的表达抑制HOS骨肉瘤细胞有氧糖酵解
目的 探讨miR-125b对HOS骨肉瘤细胞有氧糖酵解的影响和机制.方法 采用实时定量PCR检测HOSB正常成骨细胞和HOS骨肉瘤细胞中miR-125b的表达水平;采用3H标记的2-脱氧葡萄糖(3H-2DG)法检测细胞葡萄糖摄取率、乳酸定量试剂盒检测细胞上清中乳酸含量,以评价miR-125b模拟物(miR-125b-mimics)对HOS骨肉瘤细胞有氧糖酵解的影响.采用双荧光素酶报告基因实验明确己糖激酶2(HK2)是否为mimics-125b的直接靶分子;采用Western blot法检测mimics-125b对HK2蛋白水平的影响.结果 mimics-125b在HOS骨肉瘤细胞中表达水平显著低于HOSB正常成骨细胞;HOS细胞过表达miR-125b后,糖摄取率和乳酸生成明显减少,有氧糖酵解受到显著抑制;HK2蛋白为miR-125b的直接靶分子;HOS细胞过表达miR-125b后,HK2蛋白表达受到抑制.结论 miR-125b在HOS骨肉瘤细胞中低表达,并通过靶向抑制HK2的表达抑制HOS细胞有氧糖酵解.
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TNF-α通过调节神经酰胺水平调控人乳腺癌细胞的增殖
目的 检测肿瘤坏死因子α(TNF-α)对MCF-7和MDA-MB-231人乳腺癌细胞增殖的影响及神经酰胺(Cer)的介导作用.方法 首先确定TNF-α的佳处理剂量和时间,免疫荧光细胞化学染色结合共聚焦显微镜技术检测细胞Cer含量的变化,采用50 ng/mL TNF-α单独或联合ASM抑制剂地昔帕明(Des)、神经鞘氨醇激酶1(SPHK1)抑制剂N,N,-二甲基鞘氨醇(DMS)处理乳腺癌细胞,检测其在TNF-α所致细胞增殖变化中的作用.采用MTT法检测细胞增殖;Westem blot法检测酸性鞘磷脂酶(ASM)、SPHK1及凋亡与增殖相关蛋白Bcl2、Bax、增殖细胞核抗原(PCNA)表达.结果 TNF-α可抑制MCF-7细胞增殖,促进MDA-MB-231细胞增殖,且具剂量和时间依赖性;在MCF-7细胞,TNF-α可显著增加ASM蛋白表达,对SPHK1蛋白表达无明显影响,而在MDA-MB-231细胞,可同时增加ASM和SPHK1蛋白表达;TNF-α作用后,MCF-7细胞Cer含量显著增加,ASM抑制剂Des预处理可抑制此作用;TNF-α作用可降低MDA-MB-231细胞Cer含量,此作用可被SPHK1抑制剂DMS所阻止;Des可抑制TNF-α作用所导致的MCF-7细胞增殖降低、Bcl2表达降低、Bax表达增加;DMS可抑制TNF-α作用所导致的MDA-MB-231细胞PCNA和细胞增殖指数的高表达.结论 TNF-α通过调节ASM和SPHK1蛋白的表达水平调控Cer生成,影响MCF-7和MDA-MB-231人乳腺癌细胞的增殖.
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过表达硫氧还蛋白相互作用蛋白(TXNIP)通过激活p38MAPK通路促进MIN6细胞凋亡
目的 研究硫氧还蛋白相互作用蛋白(TXNIP)对MIN6细胞凋亡的影响及其相关机制.方法 将处于对数生长期的MIN6细胞,进行TXNIP慢病毒感染,用荧光显微镜和Western blot法检测感染效率.将MIN6细胞分为对照组、空载体(LV-GFP)组、TXNIP过表达(LV-GFP-TXNIP)组.利用CCK-8法检测细胞增殖活性,异硫氰酸荧光素标记的膜联素V/碘化丙啶(annexinV-FITC/PI)双染色结合流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot法检测TXNIP、硫氧还蛋白(TRX)、Bax、Bcl2、裂解型胱天蛋白酶3(c-caspase-3)、p38丝裂原激活蛋白激酶(p38MAPK)及其磷酸化蛋白激酶(p-p38MAPK)的蛋白水平.用p38MAPK抑制剂SP169316处理上述三组细胞,Western blot法检测其蛋白磷酸化水平及Bax、Bcl2、c-caspase-3蛋白水平的变化.结果 感染慢病毒72 h后,LV-GFP组、LV-GFP-TXNIP组感染率分别为(87.10±2.30)％、(92.21±0.54)％,说明病毒感染成功.与对照组和LV-GFP组相比较,LV-GFP-TXNIP组的细胞生存率明显降低,细胞凋亡率、Bax/Bcl2比值、c-caspase-3蛋白、p38MAPK蛋白磷酸化水平明显增高.p38MAPK特异性抑制剂作用后,LV-GFP-TXNIP组Bax/Bcl2表达比率及c-caspase-3蛋白表达均显著减少.结论 过表达TXNIP通过激活p38MAPK信号通路促进MIN6细胞的凋亡.
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miR-503-5p通过干扰Rb/E2F信号通路抑制膀胱癌T24和EJ细胞的增殖
目的 研究微小RNA-503-5p (miR-503-5p)对膀胱癌T24细胞和EJ细胞生长的影响和机制.方法 T24细胞和EJ细胞转染miR-503-5p模拟物或阴性对照微小RNA (miR-NC)并验证转染效率,生物信息学软件预测miR-503-5p的靶基因.通过荧光实时定量PCR检测miR-503-5p靶基因E2F转录因子3(E2F3)及下游基因mRNA的表达水平,Western blot法检测视网膜母细胞瘤蛋白(Rb)/E2F信号通路蛋白E2F3、细胞周期蛋白E(cyclin E)、细胞周期蛋白依赖激酶2(CDK2)、Rb和磷酸化的Rb(p-Rb)蛋白水平,流式细胞术检测膀胱癌细胞周期的变化,MTT法和平板克隆形成实验检测膀胱癌细胞的增殖能力.结果 转染miR-503-5p模拟物后,膀胱癌细胞中miR-503-5p的水平显著增加.过表达miR-503-5p可明显降低膀胱癌细胞中E2F3mRNA及Rb/E2F信号通路基因的表达水平,将膀胱癌细胞周期阻滞于G0/G1期,膀胱癌细胞的增殖能力明显降低.结论 过表达miR-503-5p通过干扰Rb/E2F信号通路的转导,抑制膀胱癌细胞的增殖.
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肝素酶抑制剂OGT2115通过阻断Wnt/β-catenin通路抑制HT29结肠癌细胞增殖并促进其凋亡
目的 探讨肝素酶抑制剂OGT2115对结肠癌细胞增殖、分化、凋亡的影响及机制.方法 用(0、1.0、2.0、4.0、8.0) μmol/L的OGT2115处理结肠癌HT29细胞,噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖并计算半数抑制浓度(IC50).用IC50的OGT2115处理HT29细胞,同时设置正常培养的HT29细胞为对照.流式细胞术检测细胞凋亡,ELISA检测肝素酶活性,二氯二氢荧光素乙酰乙酸酯(DCFH-DA)负载法检测细胞中活性氧(ROS)水平,Western blot法检测细胞β联蛋白(β-catenin)、c-MYC蛋白水平.用丁酸钠处理HT29细胞,试剂盒检测细胞中碱性磷酸酶活性,Western blot法检测细胞中上皮钙黏素(E-cadherin)蛋白水平.结果 OGT2115可明显抑制HT29细胞的肝素酶活性.OGT2115处理抑制HT29细胞增殖,IC50为(6.05±0.05)μmol/L,OGT2115处理促进HT29细胞凋亡、碱性磷酸酶活性增加、E-cadherin蛋白水平和ROS水平升高,β-catenin和c-MYC蛋白水平降低.结论 OGT2115通过阻断Wnt/β-catenin通路抑制结肠癌细胞增殖,促进结肠癌细胞凋亡.
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紫花前胡素能降低大鼠肾小管上皮细胞活性氧并抑制顺铂诱导的细胞凋亡
目的 研究紫花前胡素抑制顺铂诱导的NRK-52E正常大鼠肾小管上皮细胞凋亡的作用机制.方法 先采用CCK-8法检测(0、10、20、40、80、100、150、200)μmol/L紫花前胡素、(0、5、10、20、30、40、50) μg/mL顺铂处理24h对细胞增殖的影响,确定佳处理剂量;而后采用20 μg/mL顺铂联合(10、50、100) μmol/L紫花前胡素刺激NRK-52E细胞,CCK-8法检测对细胞活力的影响.细胞分为正常对照组、20 μg/mL顺铂刺激组、(10、50、100)μmol/L紫花前胡素处理组.倒置相差显微镜观察细胞形态改变,4,6-二氨基-2-苯基吲哚(DAPI)染色观察细胞核形态改变,流式细胞术检测细胞凋亡水平,二氯二氢荧光素二乙酸酯(DCFH-DA)染色检测细胞内活性氧(ROS)改变,Western blot法检测细胞凋亡标志蛋白裂解型胱天蛋白酶3(c-caspase-3)、裂解型多腺苷二磷酸核糖聚合酶(c-PARP)的蛋白水平.结果 与正常对照组相比,顺铂能显著抑制细胞活性,其半数抑制浓度(IC50)约为20 μg/mL;与模型组比较,紫花前胡素预处理后,细胞内ROS水平显著降低,c-caspase-3、c-PARP蛋白水平降低,细胞凋亡减少.结论 紫花前胡素能降低NRK-52E细胞ROS水平并抑制顺铂诱导的NRK-52E细胞凋亡.
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IL-10上调SOCS3抑制BmpA刺激的小鼠巨噬细胞炎性因子分泌
目的 探索白细胞介素10(IL-10)对Borrelia疏螺旋体基础膜蛋白A(BmpA)致炎作用的抑制效应,并观察IL-10对抗炎信号通路关键分子-细胞因子信号传送阻抑物3(SOCS3)表达影响.方法 培养小鼠RAW264.7细胞,分为对照组、20 μg/mLBmpA组、20 μg/mL BmpA联合10 ng/mL IL-10处理组、20 μg/mL BmpA联合20 ng/mL IL-10处理组.于分组刺激后12、24h,收集细胞上清液,ELISA检测上清液IL-6、肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平,实时荧光定量PCR检测各组细胞SOCS3 mRNA相对表达水平.结果 两时间点IL-10处理组,上清液IL-6、TNF-α剂量均较BmpA组明显下降.与对照组相比,其他各组SOCS3mRNA相对表达量均明显升高,且IL-10处理组SOCS3 mRNA相对表达量较BmpA组升高更明显.结论 IL-10通过上调SOCS3降低BmpA的致炎作用,减少小鼠巨噬细胞炎性因子的分泌.
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大鼠骨髓间充质干细胞来源的胞外囊泡分离和鉴定
目的 探讨大鼠骨髓间充质干细胞来源的胞外囊泡(BMSC-EV)的分离、鉴定及-80℃冻存对BMSC-EV膜结构完整性的影响.方法 应用超高速离心法从大鼠BMSC培养上清液(BMSC-CS)中分离并纯化EV,扫描电镜和透射电镜观察其大小和形态;Western blot法检测EV标志性蛋白CD63的表达;-80℃冻存后,不同时间段通过透射电镜观察EV膜结构的完整性.结果 扫描电镜观察BMSC表面附着有大量膜结构的EV,形态呈圆形或椭圆形,直径约50～1000 nm;透射电镜观察BMSC-EV具有膜结构,形态和大小与扫描电镜结果一致;Western blot结果表明,BMSC-EV表达CD63;-80℃冻存后,在第1个月和第3个月分别通过透射电镜观察BMSC-EV膜结构完整,而冻存第6个月BMSC-EV膜结构破裂.结论 成功提取了BMSC-EV,且随着冻存时间的延长,其膜结构完整性降低.
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Notch1信号激活核因子κB(NF-κB)参与小鼠RAW264.7巨噬细胞炎症介质释放
目的 观察Notch1信号在脂多糖(LPS)诱导巨噬细胞炎症介质表达中的作用并探讨其作用机制.方法 给予100 ng/mL LPS处理小鼠RAW264.7细胞8h,反转录PCR观察RAW264.7细胞Notch1和发状分裂相关增强子1(Hes1) mRNA表达;LPS处理前给予Notch1信号抑制剂10 μmol/L(3,5-二氟苯乙酰基)-L-丙氨酰基-L-2-苯基甘氨酸叔丁酯(DAPT)预处理1h,ELISA检测细胞培养液中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β (IL-1β)、IL-6、一氧化氮(NO)和前列腺素E2(PGE2)含量,反转录PCR检测诱导型一氧化氮合酶(iNOS)和环加氧酶2(COX-2) mRNA水平,Westem blot法检测iNOS、COX-2、核因子κBp65(NF-κBp65)、磷酸化的核因子κB抑制蛋白α(p-IκBα)蛋白水平.结果 LPS刺激RAW264.7细胞后明显提高细胞Notch1和Hes1 mRNA水平,DAPT明显抑制LPS诱导RAW264.7细胞TNF-α、IL-1β、IL-6、NO和PGE2的表达.DAPT阻断Notch1信号后明显降低LPS诱导RAW264.7细胞的iNOS和COX-2 mRNA和蛋白水平,DAPT能够抑制LPS诱导的IκBα磷酸化和NF-κBp65核转位.结论 Notch1通过激活NF-κB参与LPS诱导巨噬细胞炎症介质释放.
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过表达前脑啡肽原(PPENK)增强线粒体自噬减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤
目的 探讨前脑啡肽原-低限度免疫定义基因表达-核定位信号(PPENK-MIDGE-NLS)基因载体后处理对大鼠心肌缺血再灌注线粒体自噬的影响.方法 成年雄性SD大鼠随机分为假手术对照组(sham)组:开胸不进行冠状动脉左前降支(LAD)血流阻断及再灌注;缺血再灌注(L/R)组、PPENK-MLDGE (MIDGE)-NLS载体(PPENK)组及Control-MIDGE-NLS载体(对照)组均阻断LAD 30 min,分别于再灌注前给予生理盐水、PPENK-MIDGE-NLS 200 μg及Control-MIDGE-NLS 200 μg,股静脉注射各1.5 mL.再灌注24h后取材.ELISA测定血浆心肌肌钙蛋白Ⅰ(cTnI)含量;2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)法测定心肌梗死面积;透射电镜下观察心肌细胞超微结构及线粒体自噬并分析线粒体损伤评分;Western blot法检测线粒体自噬相关蛋白微管相关蛋白1轻链3B(LC3B)、p62、线粒体外膜转位酶20(TOM20)、PTEN诱导推定激酶1(PINK1)、帕金森病蛋白(parkin)水平.结果 PPENK组血浆cTnI含量降低,心肌梗死面积减少,线粒体损伤评分改善,心肌组织及线粒体超微结构明显改善,线粒体自噬体增多.线粒体PINK1、parkin、p62、LC3B表达增强.对照组与I/R组间无显著性差异.结论 PPENK-MIDGE-NLS基因载体处理后可减轻大鼠心肌I/R损伤,可能与增强线粒体自噬,保护线粒体结构完整有关.
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硫氢化钠通过激活硫氧还蛋白系统减轻糖尿病大鼠心肌损伤
目的 观察外源性硫化氢的供体硫氢化钠(NaHS)对糖尿病大鼠心肌硫氧还蛋白(Trx)系统的影响.方法 雄性SD大鼠随机分为正常组、糖尿病组、(14、28、56) μmol/kg NaHS处理组,每组6只.采用一次性腹腔注射链脲佐菌素的方法制备1型糖尿病大鼠模型.造模成功4周后,NaHS处理组大鼠每天分别腹腔注射NaHS溶液(14、28、56) μmol/kg.处理4周后,测空腹血糖值(FBG)和左心室动力学指标;HE染色观察心肌病变情况、透射电镜观察心肌超微结构变化;利用试剂盒检测血清乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶(CK)和肌酸激酶MB同工酶(CK-MB),ELISA检测血清白细胞介素1β(IL-1β)、IL-6和肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平;利用试剂盒检测心肌组织总抗氧化能力(T-AOC)、脂质过氧化物(LPO)和丙二醛(MDA)含量;反转录PCR检测心肌组织血红素加氧酶1(HO-1) mRNA水平,Western blot法检测心肌组织Trx、Trx相互作用蛋白(TXNIP)和烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶2(NOX2)的蛋白水平.结果 与正常组比较,糖尿病组左心室收缩和舒张功能均降低,心肌组织形态和心肌细胞超微结构损伤明显;FBG、LDH、CK、CK-MB、IL-1β、IL-6、TNF-α、LPO和MDA均明显增高,T-AOC明显下降;心肌Trx蛋白表达明显降低,HO-1 mRNA、TXNIP和NOX2蛋白表达明显增加.与糖尿病组比较,各剂量NaHS处理组中左心室收缩和舒张功能、心肌组织形态和心肌细胞超微结构均得到改善;LDH、CK、CK-MB、IL-1β、IL-6、TNF-α、LPO和MDA均下降,T-AOC增高;心肌组织HO-1 mRNA和Trx蛋白表达增强,TXNIP和NOX2蛋白表达降低.结论 NaHS处理可以减轻糖尿病大鼠心肌损伤,其机制可能与激活Trx系统,增强抗氧化能力及抑制炎症因子释放相关.
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过表达Bax抑制子1(BI-1)通过内质网IRE1-JNK通路抑制蛛网膜下腔出血大鼠海马神经元凋亡
目的 探讨慢病毒介导Bax抑制子1(BI-1)过表达对蛛网膜下腔出血(SAH)大鼠海马神经元保护作用以及与内质网膜蛋白肌醇酶1-c-Jun氨基末端激酶(IRE1-JNK)信号通路的关系.方法 制备BI-1过表达慢病毒并经侧脑注射,24h后采用血管内穿刺法建立SAH大鼠模型.于造模后24h,对大鼠进行神经行为学评估和脑含水量检测,原位末端转移酶标记技术(TUNEL)观察大鼠海马神经元凋亡情况,Western blot法检测BI-1蛋白以及内质网应激标志蛋白葡萄糖调节蛋白78(GRP78)和IRE1蛋白水平.采用IRE1 α特异性抑制剂KIRA6处理SAH后大鼠,Westem blot法检测BI-1过表达对IRE1-JNK信号通路相关蛋白磷酸化的IRE1(p-IRE1)、磷酸化的JNK(p-JNK)及凋亡相关蛋白Bax、Bcl2和caspme-3蛋白水平的影响.结果 过表达BI-1提高SAH模型大鼠的神经行为学评估得分,降低SAH模型大鼠的脑含水量和海马神经元凋亡率,并且BI-1过表达可以下调SAH后大鼠海马神经元中GRP78和IRE1蛋白水平.KIRA6处理和BI-1过表达均可抑制p-IRE1、p-JNK、Bax的表达和caspase-3的活化,促进Bcl2的表达.结论 过表达BI-1可通过阻断IRE1-JNK通路抑制SAH后大鼠海马神经元凋亡.
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敲低花生四烯酸5脂加氧酶(Alox5)基因促进K562/ADM细胞凋亡
目的 研究短发夹RNA(shRNA)敲低花生四烯酸5脂加氧酶(Alox5)基因对慢性粒细胞白血病耐药细胞K562/ADM细胞凋亡的影响.方法 设计并合成3对针对人Alox5基因的靶向shRNA片段,插入到pGenesil-1干扰载体中,经过酶切和测序验证,成功构建pGenesil-1-shRNA-Alox5重组质粒,转染K562/ADM细胞,实时定量PCR和Western blot法检测Alox5 mRNA及蛋白水平,筛选好干扰组.选择较高干扰效率的pGenesil-1-shRNA-Alox5重组质粒组作为实验组,采用实时定量PCR检测K562/ADM细胞bcr/abl mRNA水平、Westem blot法检测BCR/ABL融合蛋白水平、流式细胞术检测细胞凋亡率.结果 酶切及测序结果显示重组质粒构建成功.与阴性对照组(pGenesil-1-K562/ADM)和空白K562/ADM细胞组相比,转染pGenesil-1-shRNA-Alox5重组质粒组的K562/ADM细胞Alox5 mRNA和蛋白水平均明显降低.敲低K562/ADM细胞Alox5后,bcr/abl mRNA、BCR/ABL融合蛋白水平均显著降低、细胞凋亡率显著增加.结论 敲低Alox5基因后,K562/ADM细胞bcr/abl mRNA和BCR/ABL融合蛋白表达水平下降,细胞凋亡率增加.
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小鼠鲍曼不动杆菌肺感染模型的制备
目的 构建小鼠鲍曼不动杆菌(A.baumannii)诱导的肺炎模型,研究A.baumannii致病的分子机制.方法 实验分为正常对照组、环磷酰胺预处理组、正常小鼠接种组和免疫缺陷小鼠接种组.利用免疫抑制剂环磷酰胺预处理实验雄性C57BL/6小鼠制备免疫缺陷小鼠模型,使用临床重症监护病房(ICU)分离的A.baumannii制备新鲜菌液(1×108集落形成单位/mL),通过气道接种方法接种至小鼠,分别于接种后6、24、72 h,进行小鼠肺及肺泡灌洗液白细胞和中性粒细胞计数,HE染色观察肺组织炎症变化,ELISA检测试剂盒检测血清粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、γ干扰素(IFN-γ)、白细胞介素1β(IL-1β)、IL-2、IL-4、IL-5、IL-6、IL-10、IL-12、肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平.结果 免疫功能正常的小鼠感染A.baumannii72 h后,肺内细菌基本被清除,而免疫抑制剂处理的小鼠接种A.baumannii后,肺及血液中细菌计数持续增加;正常小鼠感染6h后,体内白细胞计数和中性粒细胞升高,至72 h下降,而经过免疫抑制剂处理的小鼠感染后,肺及血液中白细胞计数和中性粒细胞持续升高;感染72 h后,免疫功能正常小鼠肺部有轻微炎症,免疫缺陷小鼠肺部炎症较为明显;正常小鼠感染6h后,血清中上述细胞因子含量均增加,至72 h下降,而经过免疫抑制剂处理的小鼠感染后,肺及血液中上述细胞因子水平均持续升高.结论 成功制备了A.baumannii诱导的小鼠肺部感染模型.
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敲低AKT1基因增强裸鼠胃癌移植瘤对阿霉素的敏感性
目的 研究敲低AKT1基因对裸鼠胃癌移植瘤阿霉素敏感性的影响.方法 构建AKT1基因RNA干扰(RNAi)的慢病毒载体pGCSIL-shAKT1-GFP,转染HEK293T细胞,以pGCSIL-shCON-GFP为空载体组.获得慢病毒颗粒后,感染胃癌BGC-823细胞,采用Western blot法检测感染后BGC-823细胞中AKT1蛋白水平.皮下注射慢病毒感染的BGC-823细胞构建裸鼠胃癌移植瘤模型,使用阿霉素(DOX)进行处理,观察处理后移植瘤体积大小并绘制肿瘤生长曲线,采用HE染色观察移植瘤组织病变情况,采用组织原位末端转移酶标记技术(TUNEL)检测移植瘤组织中细胞凋亡情况.结果 成功构建AKT1基因RNAi的慢病毒载体并成功感染胃癌BGC-823细胞,感染后胃癌BGC-823细胞中AKT1蛋白水平明显降低.敲低AKT1的BGC-823细胞裸鼠移植后,移植瘤生长减慢、移植瘤细胞凋亡增加,并可增强DOX对移植瘤生长的抑制作用.结论 敲低AKT1基因可增强BGC-823细胞裸鼠移植瘤对DOX的敏感性.
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阿司匹林通过诱导乳腺癌细胞凋亡及自噬从而抑制细胞增殖
目的 探讨阿司匹林对人表皮生长因子受体2(HER2)阳性乳腺癌AU-565细胞和三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡及自噬的影响.方法 采用MTT法检测阿司匹林对细胞增殖的影响,流式细胞术检测阿司匹林对细胞凋亡的影响,Westernblot法检测Bcl2、裂解型胱天蛋白酶3(c-caspase-3)、裂解型多腺苷二磷酸核糖聚合酶(c-PARP)及自噬相关基因3(ATG3)、微管相关蛋白1轻链3A(LC3A)、LC3B的蛋白水平.结果 阿司匹林可抑制AU-565细胞和MDA-MB-231细胞增殖,使细胞凋亡率明显增加,促凋亡蛋白c-caspase-3、c-PARP表达上调,凋亡抑制蛋白Bcl2表达降低,细胞自噬相关蛋白ATG3、LC3A、LC3B表达显著上调.结论 阿司匹林可通过诱导AU-565细胞和MDA-MB-231细胞凋亡及自噬,抑制细胞增殖.
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拉帕替尼抑制HL60细胞增殖和促进细胞凋亡的机制
目的 探讨拉帕替尼对急性髓细胞白血病HL60细胞增殖和凋亡的影响及其相关分子机制.方法 用(5、10、15) μmol/L的拉帕替尼处理HL60细胞24h,光学显微镜下观察细胞形态变化,CCK-8法检测细胞活力,集落形成实验检测细胞增殖能力,异硫氰酸荧光素标记的膜联素V/碘化丙啶(annexin V-FTT℃/PI)双标记法结合流式细胞术检测细胞凋亡,Wright改良染色(LIU染色)和Hoechst33342荧光染色观察细胞核形态;Western blot法检测Bax、Bcl2、胱天蛋白酶3(caspase-3)、caspase-9、裂解型caspase-3 (c-caspase-3)、裂解型caspase-9 (c-caspase-9)、裂解型多腺苷二磷酸核糖聚合酶(c-PARP)、蛋白磷酸酶2A细胞增殖调节抑制因子(CIP2A)、c-MYC、AKT和磷酸化AKT (p-AKT)蛋白水平.结果 与对照组相比,拉帕替尼能以剂量依赖的方式抑制HL60细胞的增殖,促进细胞凋亡,诱导细胞产生核碎裂、染色质凝聚.下调Bcl2蛋白的表达,上调Bax、c-caspase-3、c-caspase-9和c-PARP蛋白水平,下调CIP2A、p-AKT和c-MYC蛋白水平.结论 拉帕替尼能够抑制HL加细胞增殖并促进细胞凋亡,这一作用可能与下调CIP2A/AKT/c-MYC信号通路有关.
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高剂量PM2.5诱导卵清蛋白致哮喘小鼠肺损伤及其机制
目的 研究不同剂量直径≤2.5 μm的细颗粒物(PM2.5)诱导卵清蛋白(OVA)致哮喘小鼠肺损伤的程度.方法 雄性BALB/c小鼠被随机分为正常对照组、OVA哮喘组、(1、5、15) mg/mL PM2.5处理的OVA哮喘组.收集支气管肺泡灌洗液(BALF)进行Gimsa染色观察白细胞数量,ELISA检测小鼠血清γ干扰素(IFN-γ)、白细胞介素17(IL-17)和IL-10的含量;实时定量PCR进行外周血单个核细胞(PBMC)Toll样受体4(TLR4)、核因子κB(NF-κB)的mRNA水平;Western blot法检测T细胞表达的T盒(T-bet)、维甲酸相关孤核受体γt(RORγt)和叉头盒P3(FOXP3)蛋白水平;HE染色观察小鼠肺组织病变情况.结果 与对照组相比,OVA哮喘组小鼠的肺泡间隔增厚,肺泡腔增大,且出现较明显的炎性细胞浸润,BALF中与炎症反应相关的白细胞数目增多;与OVA哮喘组相比,15 m∥mL PM2.5诱导的哮喘小鼠上述变化极其明显.与对照组相比,OVA哮喘组小鼠血清中IFN-γ、IL-10显著降低,而IL-17显著增加;与OVA哮喘组相比,15 mg/mL PM2.5处理的OVA哮喘组IFN-γ、IL-10含量显著减少,而IL-17含量显著增加.与对照组相比,OVA哮喘组小鼠PBMC中TLR4、NF-κB表达量明显增加,与OVA哮喘组相比,15 mg/mL PM2.5处理OVA哮喘组TIR4、NF-κB表达量显著增加.与对照组相比,OVA哮喘组小鼠T-bet和FOXP3蛋白水平明显降低,RORγt蛋白水平明显升高;与OVA哮喘组相比,15 mg/mL PM2.5处理OVA哮喘组小鼠T-bet和FOXP3蛋白水平极显著降低,而RORγt蛋白水平显著增加.结论 15 mg/mL PM2.5通过激活TLR4/NF-κB信号通路促进OVA诱发的哮喘和肺损伤.
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多发性骨髓瘤患者血型鉴定和交叉配血的影响因素及处理方法
目的 探讨多发性骨髓瘤(MM)患者ABO血型鉴定和交叉配血试验的影响因素及其处理方法.方法 采用微柱凝胶法对患者做ABO血型鉴定,对正反定型不符和交叉配血不合的血标本再用试管法进行重复检测、生理盐水稀释、37℃加温处理、吸收放散试验、不规则抗体筛选及特异性鉴定.结果 在66例MM患者ABO血型鉴定和交叉配血的影响因素中,血浆蛋白增高37例(54.1％)、ABO血型抗体减少13例(19.7％)、ABO血型抗原减弱9例(13.6％)、冷凝集素7例(10.6％).采用生理盐水稀释、吸收放散试验、抗体增强方法、37℃处理及4℃吸收冷凝集素,可消除上述因素对检测结果的影响.结论 MM患者ABO血型鉴定和交叉配血的主要影响因素是血浆蛋白增高、血型抗原抗体减弱及冷凝集素,因此ABO血型鉴定型必须正反定型,并进行不规则抗体筛选及特异性鉴定,以保证检测结果的准确性和临床输血安全有效.
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中国多省份人群IL1B-511C/T和IL1RN+8006T/C单核苷酸多态性与冠心病相关性的Meta分析
目的 探讨中国多省份人群白细胞介素1β(IL-1β)基因IL1B-511C/T和IL-1受体拮抗剂(IL1RN)基因+8006T/C单核苷酸多态性(SNP)与冠心病(CHD)的相关性.方法 通过文献检索收集2017年6月前已发表或完成的与IL1B和IL1 RN基因单核苷酸基因多态性与CHD相关性研究的文献,将不符合要求的文献剔除,以漏斗图检验入选文献的偏移性,并根据各入选文献结果的同质性检验结果进行数据合并,计算总比值比(OR)和95％可信区间(CI),Meta分析采用Review Manager 5.3版软件.结果 本研究共纳入8篇文献,其中有1460例CHD患者和1547例对照者.Meta分析结果显示IL1B基因IL1B-511C/T位点等位基因模型合并后的OR为1.17,95％ CI为[1.04,1.31];隐形基因模型合并后的OR为1.58,95％ CI为[1.32,1.90].IL基因IL1RN+ 8006T/C基因多态性结果显示等位基因模型合并后的OR为0.55,95％ CI为[0.43,0.69],共显性基因模型合并后的OR为0.51,95％ CI为[0.40,0.66].结论 IL1基因IL1B-511C/T和IL1RN+ 8006T/C基因多态性与CHD易感性存在相关性,前者可增加患CHD的风险,后者可降低患CHD的风险.
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肿瘤坏死因子超家族成员12(TNFSF12/TWEAK)在寻常型银屑病皮损组织表达增强
目的 探索肿瘤坏死因子超家族成员12/肿瘤坏死因子样凋亡微弱诱导剂(TNFSF12/IWEAK)在寻常型银屑病(PV)患者皮损组织中的表达及意义.方法 临床上收集22例PV患者进行期斑块状皮损以及18例正常皮肤组织.采用实时定量PCR检测皮肤组织TNFSF12/TWEAK的mRNA水平,Western blot法检测其蛋白水平;采用免疫组织化学染色法检测皮肤组织TNFSF12/TWEAK的表达情况.结果 PV皮损组织中TNFSF12/TWEAK的mRNA和蛋白水平高于正常皮肤组织.结论 PV皮损组织TNFSF12/TWEAK高表达.
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IL-23受体基因单核苷酸多态性与复发性口腔溃疡相关
目的 探讨白细胞介素23受体(IL-23 R)基因单核苷酸多态性与复发性口腔溃疡(ROU)的易感性.方法 选取ROU患者42例及年龄、性别匹配的86例正常人,采用应用基质辅助激光解吸附电离飞行时间质谱(MALIDI-TOF-MS)技术检测rs11465817和rs1343152基因型.用卡方检验统计两组等位基因和基因型的频率,计算比数比(OR)和95％置信区间(95％CI)评价多态性位点与ROU的遗传易感性.结果 rs1343152位点等位基因和基因型频率在病例组和对照组间差异无统计学意义;rs11465817位点差异显著(OR=2.715,95％ CI=1.543～4.777),AA+ AC基因型可增加患ROU的易感性2.44倍.结论 IL-23R基因rs11465817位点单核苷酸多态性与ROU易感性相关.
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抗鸭坦布苏病毒非结构蛋白1(NS1)多克隆抗体的制备和应用
目的 原核表达鸭坦布苏病毒(DTMUV)非结构蛋白1(NS1)蛋白,并制备小鼠抗NS1多克隆抗体.方法 利用PCR从DTMUV AH-F10株cDNA中获得NS1基因,亚克隆至pET-32a中进行原核表达,对表达产物进行鉴定.使用含尿素的Tris缓冲液洗去杂蛋白再梯度复性,纯化重组蛋白,并免疫小鼠制备小鼠抗NS1多克隆抗体,琼脂扩散试验测定抗体效价,Western blot法鉴定该抗体的特异性与反应原性,将抗体应用于病毒的间接免疫荧光法(IFA)检测.结果 获得鼠抗NS1蛋白多克隆抗体,效价达到1∶8;Western blot结果表明该多抗血清具有良好的特异性和反应性,且可以应用于病毒的IFA检测.结论 成功制备了鼠抗NS1多克隆抗体.
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C1q/肿瘤坏死因子相关蛋白6(CTRP6)参与免疫及相关疾病的研究进展
新型脂肪因子C1q/肿瘤坏死因子相关蛋白6(CTRP6)属于CTRP家族成员,在人类和小鼠多种组织中广泛表达.与其他CTRP一样,CTRP6由N端信号肽、短的可变区、胶原结构域和C端C1q球状结构域四部分组成,其结构在进化过程中高度保守.CTRP6参与多种炎症过程,在炎症调节、脂肪组织炎症、类风湿性关节炎(RA)、炎症性肾损伤、血管内皮炎症和肿瘤发生发展过程中起重要作用.我们主要对CTRP6的结构、表达分布及其参与免疫及相关疾病的研究进展进行总结.
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胱天蛋白酶11(caspase-11)介导的非典型炎性体信号通路研究进展
非典型炎性体(non-canonical inflammasome)是宿主细胞在感受细胞质内脂多糖(LPS)时在胞内形成的的大分子蛋白复合物,在抵御Gram阴性病原菌入侵以及维持机体免疫系统的稳定中起重要作用.在小鼠体内非典型炎性体是指前体胱天蛋白酶11(pro-caspase-11)和LPS组成的复合物.在胞内前体caspase-11可以直接与LPS结合,然后发生寡聚化激活caspase-11,激活的caspase-11可剪切gasdermin-D (GSDMD),产生的N端片段通过在细胞膜表面形成10～20 nm的孔径破坏细胞膜完整性而促进细胞发生炎性细胞死亡即焦亡(pyroptosis),同时caspase-11也可激活NLRP3炎性体,通过caspase-1促进成熟白细胞介素1β(IL-1β)和IL-18的分泌.目前该信号通路中仍存在很多问题还不清楚,我们对caspase-11介导的非典型炎性体的激活以及在多种疾病中的作用进行了总结.
| 年 | 期数 |
| 2018 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2017 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2016 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2015 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2014 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2013 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2012 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2011 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2010 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2009 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2008 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2007 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2006 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2005 | 01 02 03 04 05 06 z1 |
| 2004 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2003 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2002 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2001 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2000 | 01 02 03 04 05 06 |
| 1999 | 01 02 |
| 1995 | 01 02 03 |
| 1994 | 01 02 |
| 1993 | 01 02 03 04 |
| 1992 | 01 02 03 04 |
| 1991 | 01 02 03 04 |
| 1990 | 01 02 |
| 1989 | 01 02 03 04 |
