细胞与分子免疫学杂志
Chinese Journal of Cellular and Molecular Immunology 세포여분자면역학잡지
- 主管单位： 中国免疫学会；第四军医大学
- 主办单位： 陕西省免疫学会,中国免疫学会
- 影响因子： 0.81
- 审稿时间： 1-3个月
- 国际刊号： 1007-8738
- 国内刊号： 61-1304/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
-
重组可溶性MHC Ⅰ类相关蛋白A对NK细胞生物学活性的影响
目的:研究体外重组可溶性MHC Ⅰ类相关蛋白A(sMICA)对NK细胞杀伤靶细胞活性、分泌IFN-γ、增殖和凋亡的影响.方法:将重组sMICA蛋白与人外周血NK细胞相互作用过夜后,流式细胞仪检测NK细胞杀伤K562靶细胞的能力;ELISA检测培养上清IFN-γ浓度;MTS/PMS法检测sMICA对NK细胞增殖的影响;给NK细胞标记Annexin V和碘化丙啶检测凋亡情况.结果:可溶性MICA抑制NK细胞杀伤K562细胞的活性,下调IFN-γ的分泌,却对NK细胞的增殖和凋亡没有影响.结论:肿瘤细胞表面脱落的sMICA抗原可通过抑制NK细胞活性而逃逸机体的免疫监视功能.
-
5HRE联合P_(CEA)调节TSST-1/CD80TM重组基因表达的逆转录病毒载体的构建
目的:构建5个拷贝的缺氧反应元件(5HRE)增强子和癌胚抗原启动子(P_(CEA))联合调控超抗原-中毒性休克综合症基因(TSST-1)与CD80分子跨膜序列(CD80TM)融合基因的逆转录病毒表达载体.方法:设计引物应用PCR法分别从人直肠癌基因组克隆P_(CEA),从野生株金黄色葡萄球菌基因组克隆TSST-1全长基因.利用重叠PCR法从pCMV-SPOR-T6-CD80载体克隆融合有中性linker的CD80TM基因片段.选择pLEGFP-N1为原始逆转录病毒表达载体,选取合适的酶切位点SphⅠ和BglⅡ,联合双酶切和PCR方法去除原始载体中巨细胞病毒即刻早期启动子(P_(CMV IE)).将上述基因片段与去除了PCMV IE的pLEGFP-N1重组,构建携带5HRE、PCEA、TEST-1、linker-CD80TM基因的逆转录病毒表达载体.结果:成功克隆PCEA和TSST-1基因.构建了融合中性linker的CD80TM,测序与预期相符.将上述片段重组到载体pLEGFP-N1上,酶切鉴定和DNA序列分析无误.结论:成功构建了逆转录病毒表达载体pLEFGP-N1-5HRE-P_(CEA)-TEST-1-linker-CD80TM,为下一步的体外实验奠定了基础.
-
实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠脾脏和肝脏中NKT细胞调变的研究
目的:观察NKT细胞在实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)小鼠脾脏和肝脏中所占百分比的变化特点,探讨NKT细胞在EAE模型中的免疫调节作用.方法:以MOG_(35-55)21肽诱导C57BL/6小鼠建立EAE模型并进行临床评分.于发病高峰期处死小鼠,分离脾脏和肝脏淋巴细胞,采用免疫荧光染色和流式细胞术(FCM)分析,观察EAE小鼠与正常小鼠脾脏和肝脏中NKT细胞在全部淋巴细胞中所占百分率的变化.结果:在EAE小鼠不同器官中,NKT细胞占淋巴细胞的百分率均较正常小鼠减少.脾脏NKT细胞百分率(%)从正常组2.22±0.14下降到EAE模型组1.94±0.07(P<0.05),肝脏NKT细胞百分率(%)从正常组5.52±2.17下降到2.67±1.41(P<0.05).结论:NKT细胞在EAE模型C57BL/6小鼠脾脏和肝脏中增殖受抑,提示EAE发病可能通过对NKT细胞数量的调节进而影响其对免疫应答的调节.
-
对比硫化砷对两种白血病细胞株凋亡和hTERT-mRNA表达的影响
目的:对比硫化砷对慢性粒细胞白血病细胞株K562和急性早幼粒细胞白血病细胞株NB4两种细胞的作用是否存在差异及其机制.方法:PCR-ELISA法测定端粒酶活性;半定量RT-PCR检测hTERT mRNA的表达;流式细胞术测量细胞周期、凋亡.结果:0.15～0.6 mg/L硫化砷(72 h)可在诱导NB4细胞凋亡的同时,下调细胞端粒酶活性和hTERT-mRNA表达,同样作用对于K562细胞需要硫化砷浓度达到0.3～3 mg/L.0.3 mg/L硫化砷(72 h)可引起NB4细胞出现G2/M期细胞比例增高.而K562细胞需要在1.5mg/L硫化砷诱导下出现G2/M期细胞比例增高.结论:端粒酶系统可能是硫化砷诱导NB4和K562细胞凋亡的途径之一;由硫化砷诱导的G2/M期阻滞可能与端粒酶活性的显著下降相关.NB4和K562细胞对硫化砷的敏感性存在明显差异,具体机制有待进一步研究.
-
巯基丙酸修饰CdTe量子点光学性能及其生物相容性研究
目的:研究水相合成巯基丙酸(MPA)修饰的CdTe量子点(CdTe QDs)用于对细胞的标记,探讨其与活细胞的生物相容性.方法:水相中合成MPA CdTe QDs;透射电子显微镜、荧光分光光度计及紫外分光光度计表征MPA CdTe QDs;将MPA CdTe QDs与亲和素连接、纯化、制备成MPA CdTeQDs荧光探针;应用激光扫描共聚焦显微术观察MPA CdTeQDs荧光探针标记小鼠腹腔巨噬细胞(PM@)MHC Ⅱ抗原的表达;以黑色素瘤B-16细胞为靶细胞,应用细胞培养和MTT法观察MPA CdTe QDs的生物相容性.结果:水相中合成MPACdTe量子点粒径均匀,具备良好的光学性能,稳定性强;以量子点标记亲和素(QDs-Avidin)作为荧光探针标记小鼠腹腔巨噬细胞MHCⅡ抗原,在荧光显微镜和激光共聚焦显微镜下可见标记细胞具有较强的荧光表达;MPA CdTe QDs在高浓度时有一定的细胞毒性,但是,在用于对细胞进行荧光标记成像的浓度范围内,量子点对细胞活性的影响很小.结论:MPA CdTe QDs大小比较均匀且具有较好的光学性能,不易漂白淬灭,稳定性好,是一种新的良好的荧光标记物;MPACdTe QDs具有较好的生物相容性.
-
巨细胞病毒感染细胞的免疫原性分析
目的:检测细胞感染巨细胞病毒后诱导免疫应答的能力.方法:将巨细胞病毒感染人胚肺成纤维母细胞(HELF),抗体标记细胞表面HLA-A2分子,流式细胞术(FCM)检测感染细胞HLA-A02表达强度;将感染的HELF、荷载外源性多肽的自身PBMC以及未感染的HELF,分别与PBMC共同孵育,FCM检测CD8~+T细胞内IFN-γ的表达作为应答指标.结果:感染细胞HLA-A分子表达强度较未感染组降低78.24%±19.72%.感染并荷载外源性多肽的HELF诱导产生的刺激应答率,高于单纯巨细胞病毒感染的HELF和荷载多肽的未感染HELF所诱导应答比率.结论:尽管巨细胞病毒下调MHC Ⅰ分子表达,但可能不减弱细胞递呈外源多肽的能力,并足以诱导产生免疫应答.
-
从噬菌体7肽库中筛选的哇巴因结合肽对血管内皮细胞的保护作用
目的:寻找与哇巴因高亲和力结合并抑制其生物功能的相关小分子肽,为治疗原发性高血压提供新策略.方法:以哇巴因为筛选分子,应用M13噬菌体呈现随机7肽库进行筛选.经过3轮生物淘筛,并通过ELISA法鉴定,对噬菌体阳性克隆ssDNA电泳鉴定和基因测序分析.委托合成筛选获得哇巴因结合肽,采用放射配基受体结合法检测其结合活性;MTT法检测血管内皮细胞的增殖抑制率,Hoechst33342/PI双荧光染色检测细胞形态学变化;利用RT-PCR和细胞免疫荧光检测钠泵α1、β1的表达水平;荧光探针检测细胞内游离Na+浓度变化.结果:筛选获得14个阳性克隆,基因测序显示:哇巴因结合肽一致率达64.3%(9/14).委托合成肽(Arg-Cys-Met-Thr-Ser-Arg-Ser).放射性配基受体结合法检测显示,合成的哇巴因结合肽能够与哇巴因结合.哇巴因结合肽+哇巴因的EAhy926细胞组增殖抑制率小于哇巴因组(P<0.05);Hoechst33342/PI双荧光染色显示细胞死亡数量减少;RT-PCR和免疫细胞化学检测钠泵α1、β1亚单位转录和翻译水平,显示哇巴因结合肽能拈抗哇巴因所引起钠泵α1亚单位表达的上调、β1亚单位的下调作用;荧光探针显示哇巴因结合肽能够拮抗哇巴因对钠泵的抑制作用.结论:哇巴因特异性结合肽能够阻抑哇巴因对血管内皮细胞的抑制增殖和诱导死亡作用,为研究哇巴因与钠泵的相互作用机制及进一步研究抗哇巴因的分子药物奠定基础.
-
脂多糖、转化生长因子-β1对小鼠骨髓来源树突状细胞的生物学作用
目的:探讨加入LPS、TGF-β1体外刺激小鼠骨髓来源树突状细胞(BMDC)的方法及其对生物学特性的作用.方法:GM-CSF和IL-4诱导培养小鼠BMDC 6 d后,分别用培养基(对照组)、LPS、TGF-β1、LPS+TGF-β1,刺激BMDC48 h后进行形态学观察,流式细胞术检测细胞表型CD_(11C)、CD_(80)、CD_(86)、MHC Ⅱ,混合淋巴细胞反应检测其抗原提呈功能,收集上清液用ELISA检测IL-6,IL-12 p70.结果:LPS组具有典型的成熟样DC形态,CD_(80)、CD_(86)及MHC Ⅱ的表达水平显著升高,混合淋巴细胞反应和分泌IL-4、IL-12 p70能力强,与对照组,TGF-β1组,LPS+TGF-β1组比较差异具有统计学意义(P<0.05),TGF-β1组成熟样DC形态不典型,CD_(80)、CD_(86)和MHC Ⅱ的表达水平低,混合淋巴细胞反应和分泌IL-4、IL-12 p70能力弱,与对照组,LPS组比较差异具有统计学意义(P<0.05).结论:LPS在DC的分化晚期可以刺激其成熟,并且具有更高的生物学特性,TGF-β1不抑制DC的分化,但可以抑制DC的成熟,从而降低其生物学特性.
-
氧固醇诱导巨噬细胞J774A.1的凋亡依赖于NF-κB的活化
目的:探讨7-酮基胆固醇(7-KC)作用小鼠巨噬细胞J774A.1后,NF-κB的活化与细胞凋亡的关系.方法:细胞经7-KC处理后,通过形态学观察,MTT检测法,DNA电泳,流式细胞术检测细胞凋亡水平.用Western blot和免疫组织化学方法检测NF-κB活化情况,采用二硫代氨基甲酸吡咯烷(PDTC)抑制实验检测NF-κB活化对7-KC诱导的细胞凋亡的影响.结果:7-KC能抑制小鼠巨噬细胞的生长并促进细胞凋亡,同时能诱导小鼠巨噬细胞NF-κB的活化,且NF-κB特异性抑制剂PDTC能显著抑制7-KC诱导的细胞凋亡.结论:7-KC能通过活化NF-κB途径诱导巨噬细胞发生凋亡.
-
重组腺病毒介导的转录因子Runx3在神经胶质瘤细胞中的表达及其亚细胞定位
目的:制备含有融合Flag标签的Runx3基因的复制缺陷型重组腺病毒,感染神经胶质细胞瘤U251,观察外源Runx3在细胞中的表达及亚细胞定位.方法:用PCR的方法扩增Runx3基因,并将Flag标签蛋白的编码基因与RUNX3基因进行融合,构建腺病毒穿梭载体pShuttle-CMV-Runx3,经Kpn Ⅰ/Xho Ⅰ双酶切鉴定并测序.利用电转化方法将经Pme Ⅰ线性化的pShuttle-CMV-Runx3穿梭载体导入BJ5183重组细菌,获取重组腺病毒质粒Ad-Runx3,再将经Pac Ⅰ线性化的Ad-Runx3重组病毒骨架质粒转染293A包装细胞,包装并扩增病毒.利用该病毒感染神经胶质细胞瘤U251,用免疫印迹法观察外源Runx3在细胞中的表达,用间接免疫荧光法观察其在细胞内的定位.结果:构建并包装表达Runx3蛋白的重组腺病毒,用重组腺病毒感染U251细胞后,经免疫印迹和间接免疫荧光法检测,可见外源导入的Runx3蛋白在细胞核内的特异性定位.结论:成功制备了含有融合Flag标签的转录因子Runx3基因的重组腺病毒,感染U251细胞,在细胞中观察到该分子表达后定位于细胞核中,为研究Runx3在神经胶质瘤发生中的作用奠定了实验基础.
-
TIP-6通过诱导细胞自噬抑制培养的HepG2细胞和正常肝细胞增殖
目的:研究7-(4-甲氧基苯基)-5,8a-二苯基-1,2,3,7,8,8a-六氢咪唑[1,2-a]吡啶(TIP-6)对培养的人肝癌HepG2细胞和人正常肝细胞L02增殖的影响.方法:用MTT法和台盼蓝染色法检测TIP-6对细胞增殖的影响;相差显微镜观察细胞形态学的变化;流式细胞术(FCM)分析细胞周期改变;吖啶橙荧光染色观察自噬泡的变化;Annexin V/7-AAD和DAPI染色检测细胞凋亡;DNA电泳检测凋亡梯形带的产生.细胞免疫化学法测定NF-κB的表达.结果:TIP-6浓度为90～200 μLmol/L时,细胞增殖受到抑制,且与浓度、时间有关;当浓度为200 μmol/L、处理72 h时,两种细胞增殖数分别只有对照的12.10%和18.75%,空泡化也随剂量和时间的增加而加剧,空泡数目越来越多、体积越来越大;FCM结果显示,细胞被阻滞在G2/M期,且HepG2比L02细胞敏感.吖啶橙荧光染色证实自噬及自噬性细胞死亡会随着化合物浓度和时间增加而增多;Annexin V/7-AAD、DAPI染色及DNA电泳均证实凋亡并非TIP-6诱导HepG2及L02细胞增殖抑制的主要形式;细胞免疫化学法的结果显示,随着核转录因子NF-κB表达量的上调,自噬泡会随之增加,细胞增殖却相应减少.结论:TIP-6可能诱导自噬抑制培养的肝癌细胞和肝细胞增殖.自噬性细胞死亡可能与NF-κB蛋白的活化有关.
-
香加皮杠柳苷对荷瘤小鼠的免疫调节作用
目的:研究香加皮杠柳苷(CPP)对荷瘤小鼠的免疫调节作用及其作用机制.方法:建立BALB/c小鼠H22皮下移植瘤,观察低、中、高剂量CPP(0.25、0.50、1.00 mg/kg)对荷瘤小鼠免疫器官的影响,应用流式细胞术检测各组小鼠脾T淋巴细胞亚群的分布,应用MTT法检测ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞增殖活性,用ELISA试剂盒测定各组荷瘤小鼠血清中细胞因子TNF-α、IL-2和IL-12的含量.结果:对照组荷瘤小鼠的胸腺指数及脾脏指数均明显低于未荷瘤正常小鼠(P<0.05),而CPP组荷瘤小鼠的胸腺指数及脾脏指数较对照组明显增高,甚至高于正常对照组(P<0.05).CPP对荷瘤小鼠体内CD8+T细胞数量无影响,但可明显上调CD3~+、CD4~+T细胞数及CD4~+/CD8~+比值,其中CD3~+、CD4~+细胞百分率与正常小鼠无差别(P>0.05),CD4~+/CD8~+比值高于正常小鼠(P<0.05).CPP可明显增强ConA诱导的荷瘤小鼠脾淋巴细胞的增殖能力,SI甚至超过正常对照组(P<0.05).不同剂量CPP组小鼠血清中TNF-α、IL-2和IL-12水平均较对照组明显增高(P<0.05),并随剂量增加呈升高趋势,至接近或超过正常小鼠水平.结论:CPP可保护荷瘤小鼠的免疫器官不受损害,并可明显提高CD4~+T细胞百分率和CD4~+/CD8~+比值,增强荷瘤小鼠T细胞增殖能力,促进细胞因子TNF-α、IL-2和IL-12的产生,表明CPP具有显著的免疫增强作用.
-
CRT-E2-EGFP表达、胞内定位及其对B16细胞凋亡的影响
目的:观察CRT-E2融合蛋白在小鼠黑色素瘤B16细胞中的表达及其定位,并探讨CRT引起的E2蛋白表达定位改变对B16细胞增殖及调亡的影响.方法:构建荧光真核表达载体pEGFP-CRT、pEGFP-E2、pEGFP-CRT-E2,将上述载体以及空载体pEGFP-C1经脂质体瞬时转染B16细胞,West-em blot分析确认目的蛋白表达.荧光显微镜下观察CRT-E2融合蛋白在细胞中表达定位;流式细胞术检测不同重组表达载体转染B16细胞24 h、48 h后,对细胞周期的影响和诱导凋亡的情况.结果:CRT-E2融合蛋白在B16细胞中正确表达,主要分布于细胞质,能将细胞阻滞于G1期,有效诱导肿瘤细胞发生凋亡(P<0.01).结论:成功构建CRT-E2真核表达载体,外源性CRT能够引起E2蛋白表达定位于细胞质,并明显促进了肿瘤细胞的调亡.
-
肝组织中Chymase浓度在酒精性肝纤维化中的意义
目的:探讨肝组织中Chynmse浓度在酒精性肝纤维化中的意义.方法:采用酶联免疫吸附实验(ELISA)检测48例酒精性肝纤维化患者肝组织中Chymase浓度,与28例急性肝炎做对比;用免疫组织化学染色法观察Chymase单克隆抗体(mAb)标记的肥大细胞分布情况.结果:酒精性肝纤维化患者肝组织中Chymase浓度为(17.5±4.4)μg/g,明显高于急性肝炎(2.8±1.0)μg/g,P<0.01;免疫组化染色结果,Chymase标记的肥大细胞主要分布于纤维化旺盛的肝细胞周围及中心静脉周围,其分布与纤维化部位相一致,且肝组织中Chymase浓度高的患者,其肝组织内Chymase标记的肥大细胞分布增多.结论:肝组织中Chymase浓度可能与酒精性肝纤维化关系密切.
-
IFN-γ/IL-4对呼吸道合胞病毒感染呼吸道上皮细胞TLR3和TSLP mR-NA表达的影响
目的:探讨呼吸道合胞病毒(RSV)感染呼吸道上皮细胞16HBE对Toll样受体3(TLR3)和胸腺基质淋巴细胞生成素(TSLP)mRNA表达的影响,并探索Th1/Th2细胞因子IFN-γ/IL-4对RSV感染16HBE细胞TLR3和TSLPmRNA表达的作用.方法:利用Hep-2细胞扩增病毒,并进行病毒毒力鉴定;不同浓度人工合成双链RNA(dsRNA)聚肌胞加入细胞培养基中,实时荧光定量RT-PCR检测16HBE细胞TLR3mRNA和TSLP mRNA表达水平变化;RSV感染16 HBE细胞试验分组:对照组、RSV感染组(MOI为2的RSV病毒感染16HBE6h)、RSV/IFN-γ组(RSV病毒感染,同时重组人IFN-γ 100μg/L加入培养基)、RSV/IL-4组(RSV病毒感染,同时重组人IL-4 100μg/L加入培养基),实时荧光定量RT-PCR检测TLR3mRNA和TSLPm RNA表达水平变化.结果:经Hep-2细胞培养扩增获得足量Long株RSV病毒;聚肌胞能有效刺激16HBE细胞TLR3mRNA和TSLPmRNA表达水平升高(P<0.01),并随聚肌胞浓度增加提高;RSV感染16HBE细胞6 h,TLR3和TSLPmRNA表达水平均升高(P<0.01);Th2细胞因子IL-4可以加强RSV感染引起的TSLPmRNA表达水平升高(P<0.01),而Th1细胞因子IFN-γ能抑制RSV感染引起的TSLP mRNA表达水平升高(P<0.01).结论:TLR3刺激物聚肌胞能有效刺激人呼吸道上皮细胞TLR3 mR-NA和TSLPmRNA表达水平升高;RSV感染16HBE细胞引起TLR3mRNA和TSLPmRNA表达水平升高;Th2细胞因子IL-4能协同病毒感染增加TSLPmRNA表达水平;Th1细胞因子IFN-γ能抑制RSV感染引起的TSLPmRNA表达水平升高.
-
鸡胚精原干细胞转染EGFP获得转基因精子的研究
目的:通过精原干细胞体外转染外源基因获得转基因精子.方法:孵化16 d的鸡胚睾丸,酶消化获取精原干细胞(SSCs),纯化后体外培养和传代扩增,碱性磷酸酶(AKP)活性和胚胎阶段特异性抗原(SSEA-1)免疫荧光鉴定.电穿孔介导EGFP转染SSCs,G418筛选8 d后将阳性SSCs移植入经白消安处理的实验鸡体内.结果:移植后25 d采集实验鸡精液检测,精子密度为3.87(10~(10)/L),表达EGFP的成熟精子比率为4.25%;移植后85 d,精子密度为3.27(10~(11)/L),表达EGFP的成熟精子比率为16.25%.睾丸组织冰冻切片显示,曲精细管中转染后的SSCs定居在曲精细管的基底部,有表达EGFP蛋白生精细胞.收集实验鸡精液,提取DNA进行PCR扩增EGFP基因,经凝胶电泳检测,精液DNA的条带清晰,与目的片段大小一致.结论:鸡胚精原干细胞体外转染EGFP可获得转基因精子,为进一步生产转基因模型动物拓宽了途径.
-
胃肠道间质瘤组织中PDGFR-α、Ki-67和细胞周期素D1的表达及临床意义
目的:探讨血小板衍生生长因子受体-α(PDGFR-α)、Ki-67、细胞周期素D1(Cyclin D1)在胃肠道间质瘤(GISTs)中的表达,分析其与胃肠道间质瘤临床病理特征的关系.方法:收集本院普外科2000-01/2008-12收治的胃肠道间叶源性肿瘤手术切除患者196例,应用免疫组织化学法检测196例GISTs组织中PDGFR-α、Ki-67及Cyclin D1的表达情况,并分析上述指标与肿瘤临床病理学特征、危险度的关系.结果:不同部位和不同病理类型组间PDGFR-α阳性表达率有统计学差异(P<0.05),不同危险度组间Ki-67 LI、Cyclin D1表达差异有统计学意义(P<0.05).50例CD117阴性或弱阳性病例中,PDGFR-α同为阴性或弱阳性病例23例(46.0%),PDGFR-α中度以上阳性27例(54.0%);146例CD117中度以上阳性病例中,PDGFR-α阴性或弱阳性118例(80.8%),PDGFR-α中度以上阳性28例(19.2%),比较有统计学意义(P<0.05).结论:PDGFR-α联合CD117对胃肠道间质瘤的诊断及鉴别诊断具有重要的临床意义,但其不能作为胃肠道间质瘤分化程度的评定指标,而Ki-67和CyclinD1可作为判断GISTs恶性程度的参考因素.
-
慢性淋巴细胞性甲状腺炎患者外周血Th17的检测及意义
目的:探讨慢性淋巴细胞性甲状腺炎(CLT)患者外周血辅助性T细胞17(Th17)的水平及意义.方法:收集甲状腺功能正常组CLT患者15例,甲状腺功能减退组CLT患者30例及20例健康对照组研究者的外周血样.采用胞内细胞因子染色流式细胞术(FCM)分析法,检测各组外周血Th17细胞占CD4~+T细胞比值.应用电化学发光法检测CLT患者及健康对照组血清中抗甲状腺过氧化物酶抗体(TPO-Ab)和抗甲状球蛋白抗体(TG-Ab)水平.结果:与健康对照组比较:甲状腺功能正常组及甲状腺功能减退组的CLT患者外周血Th17/CD4~+T细胞比值分别为(3.64±1.96)%、(3.13±1.56)%,均高于健康对照组(0.50±0.32%,P<0.01);两组CLT患者血清TPO-Ab和TG-Ab水平分别为(398.99±222.88;1456.02±1054.97)IU/L和(423.26±167.21;1587.94±1210.36)IU/L,均明显高于健康对照组(15.23±10.36;36.32±26.99)IU/L;差异有统计学意义(P<0.01).CLT患者外周血Th17/CD4+T细胞比值改变与血清TPO-Ab及TG-Ab阳性表达呈显著正相关(分别为r=0.50,r=0.43;P<0.01).结论:两组CLT患者外周血Th17细胞比率增加,且与甲状腺自身抗体水平存在显著正相关,Th17细胞可能参与CLT的发生发展.
-
间断性低氧暴露对红细胞参数及血清HIF-1α、EPO的影响
目的:探讨间断性低氧暴露及复氧休息对红细胞参数及血清低氧诱导因子-1α(HIF-1α)、促红细胞生成素(EPO)的影响.方法:制备间断性低氧动物模型,检测全血RBC、Hb、HCT红细胞参数,采用ELISA法检测血清HIF-1α、EPO水平,结合现场调查,检测间断性高原作业人员红细胞参数及EPO水平.结果:IH7、14、21、28 d组大鼠RBC、Hb、HCT水平明显高于常氧对照组(P<0.05),复氧后各参数水平下降.IH3、7、14 d组HIF-1α高于常氧对照组(P<0.05),EPO在IH3、7 d组高于对照组(P<0.05),复氧后HIF-1α、EPO水平下降.8个月组高原作业人员RBC水平高于平原对照组(P<0.05),Hb在2年组高于平原对照组(P<0.05).HCT与RBC大致呈同一规律,且2年组HCT仍明显高于平原对照组(P<0.05).与平原对照组比较,各组EPO的差异不显著.结论:间断性低氧暴露可以增加血清HIF-1α、EPO的含量,提高红细胞数量和血红蛋白的浓度,并随低氧周期的延长存在一定变化规律;复氧休息有利于低氧后机体的调整,使升高的红细胞参数及HIF-1、EPO水平下降.
-
α-1b干扰素宫颈局部注射联合复方莪术油栓剂治疗宫颈糜烂的疗效观察
目的:探讨α-1b干扰素宫颈局部注射联合复方莪术油栓剂治疗宫颈糜烂的疗效.方法:232例患者随机分为干扰素组(79例)莪术油组(75例)和联合治疗组(78例).干扰素组采用重组人干扰素α-1b注射液宫颈局部注射治疗,莪术油组采用阴道置入复方莪术油栓剂治疗,联合治疗组采用以上二药同时治疗,评价疗效.结果:联合治疗组痊愈率明显高于干扰素组和莪术油组,相比较有统计学差异(P<0.05);联合治疗组Ⅲ度糜烂患者平均治愈时间为(8.4±0.6)周,明显高于中轻度(P<0.05).结论:α-1b干扰素宫颈局部注射联合复方莪术油栓剂治疗宫颈糜烂方便无痛苦,效果显著,特别适合轻重度患者,是治疗宫颈糜烂的一种良好方法,值得推广使用.
-
连翘对严重烧伤大鼠外周血Treg及脾脏Foxp3的影响
目的:探讨中药连翘对严重烧伤大鼠的免疫调节作用及其机制.方法:采用大鼠30%体表面积Ⅲ度烧伤模型.实验共分5组,分别为正常对照组(Control),烧伤后8 h组(8PBH),连翘高、中、低剂量组(AFS1、AFS2、AFS3),其中AFS1、AFS2和AFS3组在烧伤前7 d开始灌胃给药,1次/d,分别给予AFS 5 g/kg、2.5 g/kg和1.25 g/kg.各组在烧伤后8 h留取外周血和脾脏组织,流式细胞术测外周血Treg百分数;RT-PCR和免疫组化法测定脾脏组织Foxp3表达.结果:与Control组比较,8PBH组外周血Treg水平显著升高,脾脏组织Foxp3mRNA和蛋白表达明显上调;AFS1、AFS2及APS3组均能显著减轻上述指标变化,并呈剂量依赖关系.结论:连翘具有免疫调节作用,其作用机制与干扰Foxp3基因的表达有关.
-
慢性阻塞性肺病炎性细胞因子的检测及临床意义
慢性阻塞性肺病(COPD)是呼吸系统的常见病多发病,由于肺功能呈进行性下降,严重影响患者的劳动力和生活质量.COPD的发病机制复杂.细胞因子干扰素-γ(IFN-γ)和白细胞介素4(IL-4)等炎性细胞因子在COPD发病中作用日益受到重视~([1]).我们观察IFN-γ和IL-8在COPD急性期和缓解期的动态变化,探讨它们与COPD发病及发展过程的关系,为临床防治参考.
-
联合应用硫化砷和α干扰素对K562细胞的作用
目的:研究联合应用硫化砷和α干扰素是否可以增强对K562细胞的作用.方法:采用PCR-ELISA法测定端粒酶活性;流式细胞仪分析细胞凋亡.IFN-α和硫化砷的终浓度分别均为10 000 u/mL和0.6 mg/L.结果:单独应用IFN-α或硫化砷8 d,可以诱导37.8%和37%的K562细胞出现凋亡;同时应用IFN-α和硫化砷8 d或先单独应用IFN-α 3 d,再单独应用硫化砷5 d,K562细胞的凋亡率分别为59.9%和60.37%;端粒酶活性的抑制,单用硫化砷为71.3%,联合用药分别为81.2%和78.8%.结论:联合应用IFN-α和硫化砷较单独用药相比,可以显著提高K562细胞的凋亡,抑制细胞端粒酶活性.提示IFN-α司能促进硫化砷诱导K562细胞凋亡.
-
人精胺氧化酶的原核表达及多克隆抗体制备
目的:克隆、原核表达有酶活性的重组人精胺氧化酶(SMO)蛋白,并制备兔抗人SMO多克隆抗体.方法:采用RT-PCR法从人非小细胞肺腺癌A549细胞株总RNA中克隆人精胺氧化酶cDNA,构建SMO原核表达质粒pET-15b/SMO.将SMO原核表达质粒转化E.coli的BL21(DE3)菌并使用IPTG诱导重组SMO表达.表达的蛋白产物经Ni-NTA亲和层析纯化、透析复性后,化学荧光法测定其酶活性.使用制备性聚丙烯酰胺凝胶电泳分离、纯化重组人SMO蛋白,以此蛋白作为抗原皮内接种日本大耳白兔来制备抗人SMO多克隆抗体.分别以ELISA、Western blot和免疫细胞化学法检测兔血清中抗体的滴度和抗原特异性.结果:纯化并透析复性后的重组人SMO蛋白具备快速氧化精胺的酶活性.用此重组蛋白制备的抗体具有较高抗体滴度和针对人SMO的特异性.结论:建立了人SMO原核表达、纯化系统,获得了有酶活性的高纯度人SMO蛋白并成功制备了兔抗人SMO的多克隆抗体,为以SMO为靶点的抗肿瘤基础和临床研究提供了有力的研究工具.
-
一株识别肿瘤细胞上CD40突变体分子的单克隆抗体的研制及其生物学功能研究
目的:以本科室发现肿瘤细胞上表达的CD40 787AA突变为基础,研制识别肿瘤细胞上CD40突变体分子的单克隆抗体(mAb),并对其生物学特性作初步分析.方法:以转人CD40突变体转基因细胞L929-CD40mu为免疫原,免疫6～8周龄的雌性BALB/c小鼠;采用B淋巴细胞融合技术,将免疫小鼠脾脏细胞与Sp2/0融合,以L929-CD40mu转基因细胞为抗体筛选阳性细胞,免疫荧光标记法对杂交瘤进行反复筛选和多次的克隆化培养;采用快速定性试纸法及竞争抑制结合试验分析该mAb的亚类及抗原识别位点;免疫印迹法对该mAb进行鉴定;采用MTT法分析mAb在体外对肿瘤细胞的抑制增殖效应以及PI-annexin V方法进行细胞凋亡测定.结果:获得1株稳定分泌鼠抗人CD40mu mAb的杂交瘤细胞株(命名为10C5),该mAb能特异性地识别人肿瘤细胞株H08910表达的CD40突变体分子,而不识别正常扁桃体B淋巴细胞及血管内皮细胞表达的CD40分子,并且能够在体外促进肿瘤细胞凋亡.结论:成功地研制出1株特异性识别肿瘤细胞上CD40突变体分子的mAb,该mAb具有体外抑制肿瘤细胞生长并促进其凋亡的作用.
-
一株识别CD83单克隆抗体的研制及其生物学特性鉴定
目的:鼠抗人CD83功能性单克隆抗体(mAb)的研制及其生物学特性的鉴定.方法:以人CD83转基因细胞L929/CD83为免疫原,常规免疫6～8周龄的雌性BALB/c小鼠;采用B淋巴细胞融合技术,将免疫小鼠脾脏细胞与Sp2/0融合,以L929/CD83、293/CD83转基因细胞为抗体筛选阳性细胞,经免疫荧光标记分析对杂交瘤进行反复筛选和多次的克隆化培养;采用Ig类和亚类快速定性试纸法、染色体核型分析、竞争结合抑制试验、间接免疫荧光法、Western blot对mAb的生物学特性进行鉴定.结果:获得1株稳定分泌鼠抗人CD83mAb的杂交瘤细胞株(命名为9D8),该mAb能特异性地识别成熟的DC、活化的T细胞及肿瘤细胞株Daudi、8226表达的CD83分子,该mAb识别的位点不同于商品化抗人CD83mAb(HB15e).结论:成功地研制1株鼠抗人CD83mAb,识别位点与HB15e不同,为更好地研究该分子的功能提供良好的物质基础.
-
人CD59基因克隆、原核表达及其多克隆抗体的制备
目的:构建人CD59真核及原核表达质粒,并制备抗人CD59多克隆抗体,以用于研究糖蛋白CD59生物学功能.方法:用RT-PCR技术从人PBMCs中获取hCD59全长及其胞外区hsCD59 cDNA序列,分别克隆至pVAX-1真核表达载体及pGEX-KG原核表达载体.重组融合蛋白GST-hsCD59由经IPTG诱导的大肠杆菌BL21表达后纯化并鉴定.用pVAX-1-hCD59质粒免疫家兔并用纯化的GST-hsCD59融合蛋白加强免疫制备兔抗人CD59多克隆抗体并测定其效价.结果:成功构建人CD59真核表达质粒pVAX-1-hCD59和原核表达质粒pGEX-KG-hsCD59.融合蛋白GST-hsCD59在大肠杆菌中高效表达,表达产物的相对分子质量(Mr)同预期值一致.制备的兔抗人CD59多克隆抗体效价为1:3 200.结论:成功地构建了重组真核表达质粒pVAX-1-hCD59及原核表达质粒pGEX-KG-hsCD59,获得了兔抗人CD59多克隆抗体,这将有助于我们深入研究CD59在人类疾病中的生物学功能.
-
抗人ASGPR大亚基异构体蛋白H1b多克隆抗体的制备和鉴定
目的:制备小鼠抗人ASGPR大亚基异构体蛋白H1b的多克隆抗体,并鉴定其特异性.方法:合成H1b特异性多肽,以匙孔血蓝蛋白(KLH)作为载体构建多肽免疫原,通过致敏小鼠,制备小鼠抗人H1b蛋白的多克隆抗体;ELISA法检测抗体效价,通过Western blot和免疫组织化学检测,鉴定抗体的特异性与适用范围.结果:得到小鼠抗人H1b蛋白的多克隆抗体,效价达1:10~5.纯化后的抗体用于Western blot可高特异性识别真核表达的H1b蛋白,并可用于免疫组织化学实验.结论:成功制备小鼠抗人H1b蛋白的多克隆抗体,该抗体具有较高的效价以及特异性,能区分ASG-PR大亚基的两种剪接异构体,从而为进一步研究H1b蛋白的生理功能及其在人类疾病中的意义提供了有利工具.
-
人类Th17细胞和自身免疫性疾病相关研究进展
近两年来大量研究报道了新近发现的Th17细胞在抗微生物免疫和自身免疫性疾病的小鼠模型中发挥的重要作用.对于类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮、多发性硬化等疾病活性期的患者的血液和组织细胞的研究也发现,在人类同样存在着分泌IL-17为主的CD4~+T细胞,并提示提示人类的Th17在自身免疫性疾病中发挥重要作用.现就目前人类Th17细胞与自身免疫性疾病的研究进展进行综述.
-
免疫抑制剂在非清髓性造血干细胞移植预处理中的应用
非清髓性造血干细胞移植(non-myeloablative stem celltransplantation,NST)已经广泛应用于血液系统恶性疾病、某些实体器官肿瘤以及非恶性疾病的治疗,在某些疾病方面有取代标准移植的趋势.NST的预处理方案中应采用较强的免疫抑制剂,以促进供者细胞的植入,通过移植物抗肿瘤效应(GVT)来清除受者造血细胞及肿瘤细胞~([1]).随着对NST研究的深入,越来越多的免疫抑制剂被用于NST预处理方案中,现就NST预处理中常用的免疫抑制剂的作用机制、研究进展及临床应用、不良反应作一综述.
-
姜黄素对耐药细胞株K562/ADM的耐药逆转作用研究
目的:研究姜黄素对慢性粒细胞白血病多药耐药细胞株K562/ADM中多药耐药基因mdrl表达的下调作用.方法:采用RT-PCR和Western blot方法检测各处理组K562/ADM细胞株中mdrl基因表达;利用MTT试验检测姜黄素处理后K562/ADM细胞株对阿霉素敏感性的改变.结果:姜黄素抑制了K562/ADM细胞株中多药耐药基因mdrl的表达,姜黄素明显增加K562/ADM细胞株对阿霉素的敏感性.结论:姜黄素通过抑制P-gP的药物外排作用有效逆转K562/ADM细胞株的多药耐药性.
-
骨髓活检组织印片在白血病细胞分型中的应用
MHO(2001)造血与淋巴组织肿瘤新分类中将骨髓活检作为重要的检测内容,并且病理形态学技术结合免疫学、细胞遗传与分子遗传技术在血液诊断中的应用已经或正在成为常规诊断技术,从而改变了近百年诊断血液病单纯依靠骨穿细胞分类的传统模式,但骨髓活检的免疫组化步骤繁琐、且易受到一些干扰,我们在工作中对骨髓活检组织印片做细胞免疫表型做了一些研究,简单易行、抗原不受损害,效果好.
-
人IL-1β的克隆及其高效可溶性表达
目的:从人淋巴细胞中克隆白介素-1β(IL-1β)cD-NA,通过原核可溶性表达纯化,获得具有生物活性的可溶性IL-1β,为深入研究和利用IL-1β基因奠定基础.方法:从人PBMC中克隆出人成熟IL-1β基因,并插人到原核表达载体pSUMO中SUMO标签的下游,构建重组表达载体pSUMO-hIL-1β.将该载体转化大肠杆菌Rosetta(DE3),IPTG诱导表达hIL-1β/SUMO融合蛋白,经Ni-NTA Agaroae纯化后,表达产物用SDS-PAGE和Western blot进行鉴定.用protease-1切去SUMO标签,用Real time-PCR鉴定其对人T细胞表达的细胞因子的影响.结果:SDS-PAGE分析表明表达产物的相对分子质量(Mr)为37 000,成熟蛋白Mr为17 000,与理论值相符.灰度扫描分析融合蛋白的表达量占菌体蛋白总量的约30%左右,主要以可溶形式存在.Western blot证实该蛋白为hIL-1β.成熟蛋白纯化产物纯度超过90%以上.通过RT-PCR检测证明其具有刺激人T细胞大量表达多种细胞因子(IL-1β,IL-4,IL-10,IL-18,IFN-γ,TGF-β,TNF-α)的活性.结论:利用大肠杆菌表达系统完全可以高效可溶性表达较高纯度的具有生物活性的hIL-1β蛋白.
-
Fas在缺氧心肌细胞中的表达及其意义
目的:利用体外培养心肌细胞缺氧模型,观察不同缺氧时间心肌细胞凋亡的发生及与Fas表达的关系.方法:原代培养乳鼠心肌细胞,随机分为对照组、缺氧1 h、2 h、3 h、4 h组,构建心肌细胞缺氧模型,应用膜联蛋白-Ⅴ与溴化丙啶双染法与Hoechst 33258染色法检测缺氧心肌细胞凋亡,应用免疫组化法检测Fas在心肌细胞上表达.应用West-ern blot检测Fas在心肌细胞表达.结果:膜联蛋白-Ⅴ与溴化丙啶双染法检测发现对照组、缺氧1 h、2 h、3 h和4 h组细胞凋亡率分别为(0.20±0.15)%,(4.32±0.56)%,(6.32±1.22)%,(8.32±1.19)%,(5.01±1.56)%(P<0.05);Hoechst 33258染色显示,与对照组比较,缺氧1 h、2 h、3 h和4 h组细胞的凋亡率明显升高;免疫组化与对照组比较,缺氧1 h、2 h、3 h、4 h组阳性细胞数明显升高(P<0.05),缺氧3 h组高,缺氧4 h组略下降;Western blot检测结果提示对照组与4 h组Fas表达减弱,缺氧1 h、2 h和3 h组Fas表达上调.结论:缺氧可诱导心肌细胞的凋亡,缺氧时间延长引起凋亡率逐渐上升,至4 h时凋亡率开始下降,Fas表达量的变化趋势与凋亡率的变化趋势一致,Fas可能介导了缺氧诱导的心肌细胞凋亡.
| 年 | 期数 |
| 2018 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2017 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2016 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2015 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2014 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2013 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2012 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2011 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2010 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2009 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2008 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2007 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2006 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2005 | 01 02 03 04 05 06 z1 |
| 2004 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2003 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2002 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2001 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2000 | 01 02 03 04 05 06 |
| 1999 | 01 02 |
| 1995 | 01 02 03 |
| 1994 | 01 02 |
| 1993 | 01 02 03 04 |
| 1992 | 01 02 03 04 |
| 1991 | 01 02 03 04 |
| 1990 | 01 02 |
| 1989 | 01 02 03 04 |
