细胞与分子免疫学杂志
Chinese Journal of Cellular and Molecular Immunology 세포여분자면역학잡지
- 主管单位： 中国免疫学会；第四军医大学
- 主办单位： 陕西省免疫学会,中国免疫学会
- 影响因子： 0.81
- 审稿时间： 1-3个月
- 国际刊号： 1007-8738
- 国内刊号： 61-1304/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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Gαs慢病毒载体的构建、鉴定与表达
目的:构建Gαs慢病毒表达载体并检测其表达性能,以便应用过表达技术进一步研究Gαs功能.方法:设计针对人Gαs DNA序列的带酶切位点引物,PCR扩增获得双链DNA后,与酶切后的FUW载体片段进行连接、转化,酶切及DNA测序鉴定重组克隆.提取阳性克隆质粒,转染293T细胞.用293T细胞制备慢病毒颗粒,感染293T细胞后收集细胞全蛋白,用QPCR、Western blot检测慢病毒系统过表达效果.结果:证实人Gαs正确插入慢病毒载体,人Gαs慢病毒过表达质粒及相应病毒颗粒能有效过表达Gαs.结论:人Gαs慢病毒表达系统的成功建立,为应用过表达技术研究人Gαs慢病毒功能打下了基础.
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慢病毒载体抑制FOXM1对卵巢癌SKOV3细胞增殖的影响与分子机制
目的:研究靶向转录因子FOXM1 shRNA慢病毒载体抑制FOXM1表达对人卵巢癌SKOV3细胞增殖的影响及其分子机制.方法:应用感染复数(MOI)为20的靶向FOXM1shRNA慢病毒颗粒感染人卵巢癌SKOV3细胞,MTT比色法检测感染后SKOV3细胞的生长曲线；流式细胞术分析感染72 h后细胞周期变化；实时荧光定量PCR及Western blot法分别检测感染72 h后FOXM1、Cyclin D1、PLK1等基因mRNA及蛋白表达变化.结果:MOI为20的靶向FOXM1 shRNA慢病毒颗粒能显著抑制SKOV3细胞生长,并将细胞阻滞在G0/G1期而S期细胞减少(P＜0.01)；显著下调FOXM1、CyclinD1、PLK1等基因mRNA及蛋白表达.结论:抑制FOXM1表达对人卵巢癌SKOV3细胞具有显著的增殖抑制作用.其作用与下调Cyclin D1、PLK1等蛋白的表达将细胞阻滞在G0/G1期有关.
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金荞麦提取物对WM239迁移的抑制作用及WM239与Huvec共培养体系N-Cadherin磷酸化的影响
目的:探讨金养麦提取物对WM239细胞穿越内皮细胞过程中N-钙黏附分子的影响.方法:采用苏木素方法测定金养麦提取物对HUVEC和WM239细胞增殖的影响,筛选合适的金养麦提取物浓度；利用Transwell迁移实验,测定金养麦提取物对WM239细胞迁移能力的影响；流式细胞术(FCM)测定金荞麦提取物对HUVEC和WM239细胞共培养体系N-cadherin表达的影响；免疫共沉淀实验测定金荞麦提取物对N-cadherin胞内段磷酸化及其与β-catenin结合的影响；Westem blot检测金荞麦提取物对Src活化的影响.结果:金荞麦提取物浓度在25～100mg/L之间对WM239和HUVEC的增殖无明显抑制作用.金荞麦提取物在此药物浓度范围内可对WM239细胞的迁移能力有较强的抑制作用.金养麦提取物对共培养细胞N-cadherin表达量几乎没有影响,但可导致p-Src蛋白的表达减少,N-cadherin胞内段的磷酸化减低,引起N-cadherin与β-catenin的解离减少.结论:金荞麦提取物可抑制WM239的增殖和迁移能力,减少Src蛋白的活化,降低N -cadherin胞内段磷酸化水平及N-cadherin与β-catenin的解离.
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人胎盘源间充质干细胞对脐血CD8+T细胞活化及周期和IL-17分泌的影响
目的:探讨人胎盘源间充质干细胞(hPMSCs)对脐血CD8+T细胞活化、周期及IL-17分泌的调节作用,为其在临床细胞治疗中的应用提供理论依据.方法:应用消化法分离、培养hPMSCs,体外扩增培养3代后用于实验；应用免疫磁珠法分选脐血CD8+T细胞；应用流式细胞术(FCM)分析hPMSCs对植物血凝素(PHA)刺激下脐血CD8+T细胞早期表型CD25、CD69表达和细胞周期的影响；佛波酯(PMA)刺激下脐血CD8+T细胞对IL-17分泌的影响.结果:hPMSCs体外可使脐血CD8+T细胞滞留于细胞周期的G0/G1期,下调活化脐血CD8+T细胞早期表型CD25、CD69的表达,上调其IL-17的分泌.结论:hPMSCs体外可通过对脐血CD8+T细胞周期的影响抑制其活化,并且上调脐血CD8+T细胞IL-17的分泌.
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人CD3ξRNAi逆转录病毒载体的构建及鉴定
目的:利用RNAi表达载体法构建并筛选携带针对CD3ξ基因的pSUPER retro RNAi逆转录病毒载体及稳定产毒的细胞克隆.方法:利用.DNA重组技术,设计3条60bp能转录产生靶向CD3ξ小发卡RNA(shRNA)的寡核苷酸序列,以pSUPER.retro.neo+ gfp质粒作为空载体经限制性核酸内切酶酶切后与RNAi序列进行重组,构建CD3ξ-pSUPER retro RNAi逆转录病毒载体,脂质体法转染包装细胞系PA317,建立产生逆转录病毒的细胞克隆.结果:重组载体经限制性核酸内切酶酶切、PCR和测序鉴定表明CD3ξ-pSUPER retroRNAi 重组质粒构建成功；脂质体法将重组载体转染包装细胞系PA317,表达绿色荧光蛋白,表明包装成功.结论:成功地构建了特异性沉默CD3ξ基因的pSUPER retroRNAi逆转录病毒载体及稳定产毒的细胞系,为后续研究CD59与CD3ξ在T细胞内信号转导的相互作用提供理论和实验依据.
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鼻咽癌细胞中ezrin基因启动子上游序列转录调控特性的研究
目的:研究鼻咽癌细胞中ezrin基因启动子上游序列的转录调控特性.方法:构建一系列携带ezrin基因-1541/- 706序列的报告基因表达载体,ezrin基因- 1541/-706序列以正向和反向分别连接至不含启动子的报告基因上游、ezrin启动子上游、SV40启动子上游、ezrin启动子或SV40启动子控制的报告基因下游,将质粒转染CNE2细胞,检测荧光素酶活性.结果:CNE2细胞中,当-1541/-706序列正向位于报告基因上游时表现出启动子活性,其转录激活作用约为ezrin启动子的50％；反向连接时无启动子活性.而且,当- 1541/-706序列正向位于ezrin启动子或SV40启动子上游时,显著提高荧光素酶表达；当反向位于启动子下游、正向或反向位于启动子控制的报告基因下游时,转录增强作用消失.结论:CNE2细胞中ezrin基因启动子上游序列具有转录激活和转录增强作用,这种作用具有DNA序列位置和方向依赖性.
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槲皮素对人胃癌MGC-803细胞中瘦素、瘦素受体表达及JAK-STAT通路的影响
目的:研究槲皮素对人胃癌MGC-803细胞中瘦素、瘦素受体表达及JAK-STAT传导通路的影响.方法:实验分组为胃癌细胞组(只加入MGC-803细胞)、槲皮素处理组(40μmol/L槲皮素)和阳性对照组(40 μmol/L AG490,AG490为JAK2激酶抑制剂).采用免疫组织化学法和Western blot法检测槲皮素对胃腺癌MGC-803细胞中Leptin、Leptin receptor 和P-STAT3蛋白阳性表达率的影响.应用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)的方法,检测槲皮素对Leptin、Leptin receptor mRNA表达水平的抑制作用.采用流式细胞术(FCM)测定槲皮素对MGC-803细胞的周期阻滞.应用AnnecxinV标记检测细胞凋亡率.结果:槲皮素处理MGC-803细胞后Leptin、Leptinreceptor、P-STAT3蛋白水平减少,Leptin、Leptin receptor mRNA水平减少,与对照组相比差异均有统计学意义(P＜0.05),瘦素和P-STAT3蛋白之间呈直线相关关系(r=0.741,P＜0.05),瘦素受体和P-STAT3蛋白之间也呈直线相关关系(r=0.693,P＜0.05)；FCM显示细胞周期阻滞于G2/M期,凋亡率明显增加；随着槲皮素浓度升高,凋亡细胞和坏死细胞比例增加.结论:槲皮素可能通过JAK-STAT途径有效的下调胃癌中瘦素、瘦素受体和P-STAT3表达而发挥抑制细胞增殖和诱导细胞凋亡的作用.
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mTOR/p70s6k参与巨核细胞多倍体化调控
目的:研究巨核细胞多倍体细胞周期调控的机制.方法:Western blot分析多倍体细胞模型中mTOR/p70s6k通路信号分子表达和磷酸化修饰位点的变化,流式细胞仪双荧光分析S6K1不同结构域磷酸化位点修饰与细胞周期各时相的关系.结果:诺考达唑诱导的Dami细胞可作为相对同步化的多倍体细胞周期模型,mTOR表达增加及第2448位丝氨酸位点磷酸化,发生在G1期进入S期,S6K1的第421位苏氨酸/第424位丝氨酸位点磷酸化发生在G2/M期.结论:mTOR/S6K1通路参与巨核细胞多倍体细胞周期的调控.
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IL-15增强小鼠卵透明带3DNA疫苗的滴鼻免疫效果
目的:观察以细胞因子IL-15作为DNA疫苗的免疫佐剂,壳聚糖作为发送载体,增强经滴鼻途径接种的小鼠卵透明带3(mZP3) DNA疫苗的免疫效果.方法:将壳聚糖包裹的mZP3 DNA疫苗(pcD-mZP3)单独或IL-15+ pcD-mZP3通过滴鼻途径免疫雌性C57 BL/6 36只小鼠后.用ELISA法检测小鼠体内特异性抗mZP3抗体IgG和sIgA的水平.免疫后的雌鼠和有生育能力的雄鼠合笼后进行生育实验.观察小鼠免疫和生育后的肺脏和卵巢病理切片.结果:ELISA法检测结果显示,IL-15能够增加免疫小鼠抗mZP3 IgG的水平,生育率有一定的下降.结论:IL-15与壳聚糖可以增强mZP3DNA疫苗诱导的抗体水平,可一定程度上降低小鼠的生育率.
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腺病毒介导Gax基因对血清刺激后兔血管平滑肌细胞增殖和凋亡的影响
目的:通过腺病毒介导人生长终止特异性同源异形盒基因(Gax)转染体外兔血管平滑肌细胞(VSMCs),观察人Gax基因过表达对血清刺激后兔VSMCs增殖和凋亡的影响,为Gax基因成为理想的静脉桥再狭窄基因治疗的候选基因提供实验基础.方法:Ad5-hGax重组腺病毒载体转染兔VSMCs后,采用Western blot检测不同时间细胞中hGax蛋白的表达；MTT法检测Ad5-hGax对血清刺激后兔VSMCs的体外增殖抑制情况；转染72 h后流式细胞术检测Ad5 -hGax诱导血清刺激后VSMCs的凋亡率.结果:转染后1d、3d、5d,Ad5-hGax组细胞中的hGax蛋白均有明显表达；MTT法检测显示hGax基因过表达能明显抑制血清刺激后兔VSMCs的增殖；流式细胞术检测显示转染72 h后,hGax过表达能显著诱导血清刺激后兔VSMCs的凋亡.结论:hGax基因过表达能有效抑制血清刺激后VSMCs的增殖,并促进其凋亡,为腺病毒介导Gax基因治疗静脉桥再狭窄提供重要的实验基础.
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银杏内酯B对小鼠腹膜巨噬细胞体外增殖、吞噬及产生NO和ROS的影响
目的:银杏内酯B(GB)是已知的天然而强效的血小板激活因子(PAF)受体(PAFR)拮抗剂,本研究中GB对小鼠腹膜巨噬细胞的增殖、吞噬及产生NO和ROS的影响,初步探讨其潜在的免疫调节作用与机制,从而为临床应用提供可靠的实验依据.方法:分离纯化小鼠腹膜巨噬细胞(PM),以不同浓度的GB(1.25 ～20 μmol/L)预孵后加以脂多糖(LPS)刺激并继续培养至相应时间点；以MTT法检测GB对PM活力及LPS诱导的增殖的影响；以荧光微球的摄入结合流式细胞术评价PM的吞噬作用；以Griess法检测GB对LPS诱导的NO释放的影响；以H2DCFDA标记结合流式细胞术检测PM的ROS水平.结果:LPS刺激后24h时PM吞噬能力增强,ROS水平显著上升,并释放大量NO,至48 h时PM增殖明显,而经终浓度为5、10、20 μmol/L GB在LPS刺激前对PM进行4h预孵处理可以大幅下调PM对荧光微球的吞噬作用,显著降低PM的ROS水平及NO释放量,并能有效抑制PM的增殖.结论:GB能有效抑制LPS诱导的细胞增殖、吞噬作用、产生NO和ROS的水平,凭借GB对巨噬细胞的体外行为和功能的出色调节作用,理应将其作为天然的免疫抑制剂候选者进行更深入的研究.
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肾透明细胞癌中AnnexinⅡ的表达及其临床意义
目的:探讨AnnexinⅡ在人肾透明细胞癌和癌旁组织样本中的表达情况及其临床意义.方法:采用Western blot方法检测29例新鲜肾透明细胞癌及相应癌旁组织中Annexin Ⅱ蛋白的表达；采用免疫组织化学方法检测120例肾透明细胞癌及相应癌旁组织中AnnexinⅡ的表达情况,并将结果与患者的临床病理参数及预后进行相关性分析.结果:AnnexinⅡ在肾透明细胞癌及相应癌旁组织中均有表达,前者的表达水平较后者显著升高(P＜0.01)；免疫组织化学显示肾透明细胞癌组织中,ArnexinⅡ的阳性表达率高达67.5％,与癌旁组织存在明显差异(P＜0.01)；AnnexinⅡ在肾透明细胞癌组织中以胞膜表达为主,其表达状况与肾透明细胞癌患者的临床分期(P＜0.05),组织学分级(P＜0.05),肾被膜受侵(P＜0.0l)和远地转移(P＜0.01)紧密相关；并且AnnexinⅡ的表达状况与肾透明细胞癌患者的5年生存率显著相关.结论:AnnexinⅡ在肾透明细胞癌组织中过表达,其与肾癌的发展密切相关,在肾癌的侵袭及转移过程中可能发挥重要作用.
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自身免疫性肝病的电镜诊断与鉴别诊断
自身免疫性肝病的诊断和鉴别诊断目前还主要是依赖于临床表现、实验室检查(肝功能化验、自身抗体和免疫球蛋白检测)以及肝穿的光镜病理活检,电镜在自身免疫性肝病诊断中的价值还没有得到应有的重视.透射电镜检查不仅可以确诊很多代谢性肝病、对于病毒性乙型肝炎、药物性肝病等疾病与自身免疫性肝病的鉴别诊断都具有独特价值;对于原发性胆汁性肝硬化以及自身免疫性肝炎本身的诊断也具有一定特异性.因此,有条件的单位应尽早和尽可能开展肝脏的超微结构检查,将电镜用于自身免疫性肝病的诊断和鉴别诊断.
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GnRHa对子宫腺肌病在位内膜细胞凋亡及VEGF分泌的影响
目的:探讨促性腺激素释放激动剂(GnRHa)对子宫腺肌病(AM)在位内膜细胞凋亡及血管内皮生长因子(VEGF)分泌的影响.方法:取32例AM患者在位内膜细胞及20例对照组正常子宫内膜细胞进行体外培养,并予不同浓度GnRHa处理细胞,分别作用24、48、72 h后,用末端转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL)及流式细胞仪检测各组细胞的凋亡率；采用ELISA法检测细胞培养上清液中VEGF的含量.结果:(1)镜下可见两组部分细胞固缩、漂浮、核浓缩、碎裂,呈典型的凋亡小体；(2)不含GnRHa培养的AM在位内膜细胞凋亡率在各时间点均低于对照组,且两组都随时间的延长凋亡率增加(P＜0.01)；(3) GnRHa作用后,两组的凋亡率高于作用前,且均随浓度的增加而增加,且实验组各时间点、各浓度AM在位内膜细胞凋亡率均显著高于同时间、同浓度的对照组(P＜0.0l)；(4)VEGF在AM在位内膜细胞中的分泌高于正常子宫内膜细胞(P＜0.05),且GnRHa呈剂量依赖方式抑制AM在位内膜细胞及正常子宫内膜细胞VEGF的分泌.结论:(1)在位内膜细胞凋亡率异常可能是AM发病机制之一.GnRHa可能以自分泌或旁分泌机制直接作用于在位内膜细胞,提高了AM在位内膜细胞的凋亡率.(2) VEGF可能与子宫腺肌病的发生发展有关.GnRHa对子宫内膜细胞有直接作用,可能通过抑制VEGF的分泌,阻碍血管生成,从而达到抑制子宫内膜在子宫肌层内异位种植和生长的目的.
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HIF-1α对食管癌Eca109细胞体内外侵袭转移的影响及其分子机制
目的:采用RNA干扰技术(RNAi)观察低氧诱导因子-1α(HIF-1α)对食管癌Eca109细胞及其裸鼠移植瘤侵袭转移的影响及其作用机制.方法:CoCl2模拟肿瘤低氧微环境,分别用RT-PCR和免疫细胞化学法检测体外低氧条件下Eca109细胞中HIF-1α、E-钙黏蛋白及基质金属蛋白酶-2(MMP-2) mRNA及蛋白的表达.RT-PCR检测RNAi沉默HIF-1α对E-钙黏蛋白及MMP-2 mRNA表达的影响.通过细胞划痕试验和TransweU试验检测RNAi对Eca109细胞侵袭和转移能力的影响.建立Eca109细胞裸鼠移植瘤模型,观察HIF-1α对肿瘤生长及淋巴结转移的影响；采用Western blot 检测各组移植瘤中HIF-1α、E-钙黏蛋白及MMP-2的表达,分析HIF-1α在离体和在体对肿瘤生长、侵袭及转移的影响.结果:低氧诱导Eca109细胞的HIF-1α蛋白表达升高,E-钙黏蛋白的mRNA及蛋白表达降低和MMP-2 mRNA及蛋白表达升高,但对HIF-1 αmRNA无明显影响.用RNAi能有效沉默HIF-1α,并可逆转低氧导致的E-钙黏蛋白及MMP-2的降低及升高,使Eca109细胞迁移速度减慢,侵袭穿膜细胞数减少(P＜0.05)；在体内使移植瘤生长减缓,淋巴结转移率降低(P＜0.05).结论:HIF-1α在体内外通过影响E-钙黏蛋白和MMP-2表达,来影响食管癌Eca109细胞的生长、侵袭和转移.
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血清反应因子参与单侧输尿管结扎大鼠肾小管上皮间充质转分化
目的:探讨血清反应因子(SRF)在肾小管上皮细胞间充质转分化(EMT)过程中的作用和可能机制.方法:将54只清洁级(SPF级)SD大鼠中36只行单侧输尿管结扎(UUO组),另外18只为假手术组(Sham组).在UUO术后3d和14 d分别处死18只大鼠并留取肾脏组织,应用免疫组织化学方法检测肾小管上皮细胞中SRF、E-cadherin、α-SMA和Snail的表达变化.结果:UUO组3d和14 d的肾组织中SRF、α-SMA和Snail表达显著增高(P＜0.05),其中SRF在3d和14 d的阳性率分别为83.3％、94.4％,假手术组为5.56％；E-cadherin表达显著下降(P＜0.05).结论:SRF可能参与了单侧输尿管结扎大鼠肾小管上皮间充质细胞转分化的过程.
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多发性骨髓瘤相关基因MMSA-1的表达及定位研究
目的:研究多发性骨髓瘤(MM)相关基因MMSA-1的表达谱,蛋白表达水平与细胞增殖的关系及其细胞定位.方法:应用实时荧光定量PCR检测MMSA-1基因在MM、白血病、非肿瘤疾病患者及正常人中的表达水平,并同DKK1基因进行相关比较.使用不同浓度伊班磷酸对骨髓瘤RPM18226细胞进行处理,流式细胞术(FCM)检测处理后8226细胞细胞周期的变化及早期凋亡情况,免疫组化法检测8226细胞MMSA-1蛋白表达水平的变化.构建pCMV-Myc真核表达载体,采用抗体免疫组化法确定MMSA-1蛋白的细胞定位.结果:MMSA-1基因在MM、白血病、非肿瘤疾病及正常人中均有表达,在MM细胞中mRNA表达显著高于其他组；MMSA-1与DKK1基因在MM中的高表达具有一致性,且含量呈正相关.伊班磷酸可以使8226细胞生长受阻于S期,并减少细胞成熟促进因子的释放,从而使细胞周期停滞,促进其早期凋亡,同时可以下调MMSA-1蛋白的表达.MMSA-1主要表达于细胞膜上,但在细胞质内也可见少量蛋白.结论:MMSA-1与MM细胞增殖和溶骨破坏密切相关,为进一步研究其功能及基于该抗原的免疫治疗奠定了基础.
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抗人GCRG213单克隆抗体的制备与鉴定
目的:制备G CRG213单克隆抗体(mAb)并进行初步鉴定.方法:在大肠杆菌中表达HIS-GCRG213融合蛋白,并以所获蛋白作为免疫原制备鼠mAb.采用ELISA、Western blot法鉴定抗体的效价及特异性.免疫组化染色观察GCRG213在胃癌和正常组织中的表达.结果:HIS-GCRG213融合蛋白在大肠杆菌中获得高效表达,经常规的细胞融合和筛选获得2株可稳定分泌抗GCRG213的杂交瘤细胞株.ELISA法检测腹水的效价可达到1∶106,Western blot证实该抗体可与重组HIS-G CRG213蛋白特异性结合.免疫组化染色显示GCRG213在胃癌组织中的表达明显强于正常胃黏膜组织.结论:成功地制备出2株抗GCRG213的mAb,为进一步研究GCRG213的生物学功能提供了有效的工具.
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抗多菌灵单克隆抗体的制备、纯化及初步鉴定
目的:制备抗多菌灵小鼠单克隆抗体(mAb),并初步鉴定其特性,为快速检测蘑菇、干菇类中残留的多菌灵提供基础.方法:将小分子的多菌灵交联在大分子载体匙孔嘁血蓝蛋白(KLH)和牛血清白蛋白(BSA)上,KLH交联物用于免疫BALB/c小鼠,采用B细胞杂交瘤技术,通过融合,筛选制备抗多菌灵mAb,并通过ELISA方法测定抗体亲和力,检测mAb的交叉反应,及初步竞争抑制检测.结果:通过ELISA筛选出7株稳定分泌特异性抗体的杂交瘤细胞株,其亚型均为IgG1.与同属于苯并咪唑类杀菌剂的苯菌灵和甲基硫菌灵没有交叉反应.竞争抑制检测结果显示MC-3细胞株竞争效果较好.结论:获得1株高特异性、高亲和力、能稳定分泌抗多菌灵抗体的杂交瘤细胞株,为进一步研发多菌灵残留免疫检测技术和产品奠定基础.
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抗BAFF单克隆抗体轻链和重链可变区基因的克隆及鉴定
目的:在本实验室成功制备小鼠抗人BAFF单克隆抗体的基础上,通过分子克隆方法获得该抗体可变区基因序列.方法:从1株小鼠抗人BAFF单克隆抗体杂交瘤细胞FMMUB4中提取总RNA,以此为模版反转录成cDNA,用针对小鼠单克隆抗体重链和轻链可变区基因序列的特异性引物分别进行PCR反应,PCR产物连接人载体,经筛选阳性克隆、酶切鉴定后送测序,测序结果进行生物信息学分析.结果:成功克隆了抗BAFF单克隆抗体FMMUB4重链和轻链可变区基因,测序结果证实序列正确.结论:获得了抗BAFF单克隆抗体FMMUB4重链和轻链可变区基因序列,为下一步构建相关基因工程抗体打下良好基础.
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骆驼重组SpaA-N单域抗体的制备与性质研究
目的:获得特异识别SpaA-N的单域抗体.方法:用His-SpaA-N重组抗原从新疆双峰驼单域抗体噬菌体展示文库中,筛选SpaA-N的结合子.经测序后亚克隆至pET30a并在E coli BL21高表达,用镍离子亲和层析柱纯化.ELISA分析重组单域抗体的热稳定性,Western blot检测结合特异性.结果:经His-SpaA-N筛选富集后,筛选得到2个目的克隆.构建至pET30a,PCR和酶切鉴定目的基因大小与预计相符.SDS-PAGE显示,Mr29 000和23 000有特异性目的条带.ELISA检测显示,抗SpaA-N的VHH对SpaA-N重组蛋白具有很好的结合活性；VHH热变性后,经室温复性均可以恢复其抗原结合活性.Western blot显示,重组VHH在Mr66 000处可以识别丹毒丝菌中存在的表面蛋白.结论:获得了具有热稳定性和特异结合SpaA-N的单域抗体,为进一步研究spaA抗原在丹毒丝菌感染免疫中的作用提供了基础.
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T淋巴细胞归巢过程中分子机制的研究进展
肠道、呼吸道、泌尿生殖道与皮肤组成机体内环境与外界相互作用的界面.免疫系统在这个界面内发挥了重要的作用.肠道、呼吸道、泌尿生殖道存在黏膜相关淋巴组织( Mucosa-associated lymphoid tissue,MALT),它是机体免疫系统中一个特殊的组成部分.皮肤在机体抵御有害因素侵袭的过程也起着不容忽视的作用.淋巴细胞归巢是机体免疫系统中的重要过程,尤其是T淋巴细胞的归巢,现就影响T淋巴细胞归巢到黏膜及皮肤的因素做一综述.
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Toll样受体与系统性红斑狼疮和动脉粥样硬化
目前,越来越多的研究表明Toll样受体信号通路在系统性红斑狼疮(SLE)和动脉粥样硬化(AS)等疾病的发病中发挥着重要作用.同时,SLE患者早发动脉粥样硬化发病率显著增高,提示两者的发病存在相关性.SLE多见于年轻女性,其发生心血管事件的概率高达同年龄组正常人群的50倍.现就Toll样受体介导的信号传导通路在SLE和动脉粥样硬化发病机制中的可能作用及两者之间的相互联系作一综述.
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CD4+杀伤性T细胞在病毒感染和肿瘤性疾病中的研究进展
CD4+杀伤性T细胞是一群表达颗粒酶和穿孔素并通过其释放发挥直接杀伤作用的CD4+T细胞群.早期关于CD4+杀伤性T细胞的研究主要集中于体外培养环境中诱导出的杀伤性细胞.但是近年来逐渐发现其在很多病毒感染性疾病和肿瘤性疾病中发挥着重要作用.更好的理解其功能特点和作用机制,将为研发新的抗感染和抗肿瘤疫苗和新的免疫治疗策略提供思路.
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一种新的免疫抑制性受体TIGIT
T细胞表面具有很多重要的膜分子,它们对于T细胞的活化、增殖和分化以及效应功能的发挥具有重要的作用.根据功能的不同,主要可以分为以下几类:(1) TCR-CD3复合物,使T细胞能够识别抗原提呈细胞上抗原肽-MHC分子复合物,并向细胞内传递活化信号;(2)CD4分子和CD8分子:分别辅助CD4+和CD8+T细胞的TCR识别抗原和参与T细胞活化信号的传导;(3)协同刺激分子:如CD28、CTLA-4、ICOS和PD-1等,为T细胞传递第二信号;(4)其他表面分子,主要包括与T细胞活化、增殖和分化相关的细胞因子受体,以及细胞间相互作用的黏附分子.
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不同刺激因子对小胶质细胞系N9极化的影响
目的:揭示不同的炎症因子在体外培养的条件下,对小胶质细胞系N9不同极化方向的影响.方法:将小鼠小胶质细胞系N9细胞分为四组:空白对照组(正常培养基)、LPS组、LPS+ INF-γ组、IL-4组.各组细胞在上述刺激条件下培养24h,以及撤去上述刺激条件,继续培养24h后,分别提取各组细胞总RNA,利用荧光实时定量PCR的方法检测各组N9细胞表达的细胞因子在mRNA水平的变化；利用Western blot检测各组N9细胞极化相关蛋白的变化.结果:在LPS以及LPS+ INF-γ刺激条件下培养24h,M1型巨噬细胞特异性标记物iNOS和CD86的mRNA及蛋白表达水平在N9细胞中明显升高,并且LPS+ INF-γ刺激组升高更为明显；而撤除LPS+ INF-γ刺激因子后继续培养24h,N9细胞表达的iNOS和CD86 mRNA的水平均有下调,但仍明显高于对照组.在IL-4刺激条件下培养24h,M2型巨噬细胞特异性标记物Arg1和CD206的mRNA及蛋白表达水平均在N9细胞中明显上调；同样撤除IL-4刺激因子后,继续培养24h,N9细胞表达的ArgⅠ和CD206的mRNA水平均有明显下调,但仍然高于对照组.此时ArgⅠ的蛋白表达变化也与其mRNA水平的变化相符.结论:小胶质细胞的分型分化具有明显的细胞因子依赖性,LPS和LPS+ INF-γ可使N9小胶质细胞向M1型巨噬细胞方向极化；IL-4可促使N9小胶质细胞向M2型巨噬细胞方向极化；LPS与IFN-γ二者在极化N9小胶质细胞中具有协同作用.极化后的N9细胞在去除刺激因子后,仍可在一定程度上维持其极化状态.
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人可溶性B7-H3酶联试剂盒的研制及在肝病患者血清中水平的检测
目的:建立定量检测人的可溶性B7-H3( sB7-H3)酶联检测试剂盒,并分析肝病患者外周血中sB7-H3水平及其临床意义.方法:在已获得2株识别位点不同的小鼠抗人B7-H3单克隆抗体(4H7和2E6)基础上,采用单抗4H7为包被抗体,以经生物素标记的抗体2E6为检测抗体,以重组人可溶性B7-H3为标准品,建立可溶性B7-H3分子的酶标检测方法.在此基础上对健康献血者和不同肝病患者的血清样本进行了检测并分析其临床意义.结果:研制了sB7-H3酶联检测试剂盒,检测的线性范围是8.192～2 000 ng/L,批内、批间变异系数分别为3.35％和6.97％.酶标检测板在4℃放置1个月,变异系数(CV％)＜±8.6,回收率为94％～117％,特异性试验显示无交叉反应,提示该检测试剂盒具有良好的灵敏度、稳定性和特异性.用该试剂盒分析不同肝病患者外周血sB7-H3水平后发现,(1)乙肝患者以及乙肝合并肝硬化或肝癌患者与健康对照组之间并不存在差异(P＞0.05)；(2)重症肝炎患者血清B7-H3水平低于健康对照组(P =0.0183)；(3)血吸虫性肝硬化患者血清B7-H3水平显著高于健康对照组(P＜0.01).结论:建立了灵敏、特异的人sB7 -H3酶联检测试剂盒,对肝病患者检测的结果表明,不同的肝病患者外周血sB7-H3表达水平不同,显示该试剂盒具有潜在的应用价值.
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干涉lncRNAsHOTAIR对人乳腺癌细胞MDA-MB-231的影响
目的:探讨利用RNA干涉沉默HOTAIR基因对人乳腺癌细胞MDA-MB-231的影响.方法:利用脂质体转染MDA-MB-231细胞；qPCR检测HOTAIR基因的表达；检测EMT相关的Snail蛋白水平的表达；流式细胞术检测凋亡率；MTT法检测细胞增殖.结果:干涉HOTAIR基因后细胞中Snail蛋白表达水平下降,细胞凋亡增加.结论:靶向HOTAIR的序列特异性siRNA可显著抑制HOTAIR基因的表达；干涉HOTAIR基因表达可抑制细胞增殖,促进细胞凋亡.
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人类白细胞抗原-G5慢病毒表达载体构建与病毒包装
目的:构建人类白细胞抗原G5(HLA-G5)的表达载体,并进行慢病毒包装,为进一步研究HLA-G5功能提供基础工具.方法:人工合成HLA-G5全长序列经测序正确后,定向接入真核表达载体pCDH-CMV-MCS-EF1-copGFP,转化人大肠杆菌,酶切鉴定并测序正确后进行慢病毒包装和滴度测定.结果:经琼脂糖凝胶电泳鉴定、PCR鉴定及测序,HLA-G5表达质粒质量合格,序列比对与设计序列符合率100％,HLA-G5慢病毒滴度测定为7.06×108.结论:成功地构建了HLA-G5表达载体并完成了慢病毒包装,为今后的研究工作提供了基础工具.
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禽流感病毒(H5N1)血凝素蛋白真核表达载体的构建与表达
目的:构建禽流感病毒(H5N1)血凝素蛋白HA真核表达载体并表达其编码蛋白(转染293T细胞).方法:从江苏H5N1流感病毒毒株(A/Jiangsu/07-4(H5N1))提取病毒RNA,采用RT-PCR技术扩增HA全长基因,将其克隆至pMD18-T Vector中构建pMD18-T-HA质粒,双酶切pMD18-T-HA与PXJ40-MYC后,构建真核表达载体PXJ40-MYC-HA,经酶切及测序鉴定后将质粒转染到293T细胞中,通过Western blot鉴定HA蛋白的表达.结果:经双酶切、测序鉴定证实HA基因的真核表达载体构建成功.Western blot法可见HA基因编码蛋白的成功表达.结论:成功构建了H5N1血凝素真核表达载体,该表达载体的构建为后期建立稳定表达HA蛋白的细胞模型和HA蛋白功能研究奠定了基础.
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HER2靶向免疫促凋亡蛋白e23sFv-Fdt-tBid真核表达载体的构建及其稳定表达细胞株的建立
目的:构建HER2靶向免疫促凋亡蛋白e23sFv-FdttBid真核表达载体,并运用Flp-InTM定点整合表达系统建立稳定表达该细胞的CHO工程细胞株.方法:应用PCR技术以pcMV-e23sFv-Fdt-tBid为模板扩增e23sFv-Fdt-tBid片段,并将其克隆入pcDNA5/FRT载体中；通过Flp-InTM定点整合表达系统将e23sFv-Fdt-tBid整合入Flp-lnTM CHO细胞的基因组中一个单拷贝位点上,以适当的潮霉素B筛选定点整合e23sFv-Fdt-tBid cDNA的细胞克隆；通过基因组PCR技术和Westemblot技术检测e23sFv-Fdt-tBid基因的整合及该蛋白表达.结果:成功构建了pcDNA5/FRT-e23 sFv-Fdt-tBid表达载体；成功通过Flp-InTM定点整合表达系统建立稳定表达e23sFv-Fdt-tBid蛋白的CHO工程细胞株；成功通过基因组PCR技术及基因组PCR技术和Western blot技术检测了e23sFv-Fdt-tBid基因的整合及该蛋白表达.结论:成功地构建了HER2靶向免疫促凋亡蛋白e23sFv-Fdt-tBid真核表达载体并建立了稳定表达该蛋白的CHO工程细胞株,为该蛋白的应用研究奠定了重要基础.
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揭示免疫识别的奥秘——2011年诺贝尔生理学或医学奖简介
斯德哥尔摩时间2011 -10-03 -11:30(北京时间2011 - 10 -03- 17:30),瑞典卡罗琳医学院诺贝尔生理学或医学奖评审委员会宣布,2011年度诺贝尔生理学或医学奖授予美国科学家布鲁斯·博伊特勒(Bruce A.Beutler)、生于卢森堡的法国籍科学家朱尔斯·霍夫曼(Jules A.Hoffmann)和加拿大籍科学家拉尔夫·斯坦曼(Ralph M.Steinman).其中,奖项的一半授予布鲁斯·博伊特勒和朱尔斯·霍夫曼,以表彰他们发现了可识别致病微生物并激活固有免疫系统的受体蛋白;另一半则授予拉尔夫·斯坦曼,以表彰他发现树突状细胞并证实其在激活和控制适应性免疫应答中发挥重要作用.
| 年 | 期数 |
| 2018 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2017 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2016 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2015 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2014 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2013 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2012 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2011 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2010 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2009 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2008 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2007 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2006 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2005 | 01 02 03 04 05 06 z1 |
| 2004 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2003 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2002 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2001 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2000 | 01 02 03 04 05 06 |
| 1999 | 01 02 |
| 1995 | 01 02 03 |
| 1994 | 01 02 |
| 1993 | 01 02 03 04 |
| 1992 | 01 02 03 04 |
| 1991 | 01 02 03 04 |
| 1990 | 01 02 |
| 1989 | 01 02 03 04 |
