细胞与分子免疫学杂志
Chinese Journal of Cellular and Molecular Immunology 세포여분자면역학잡지
- 主管单位： 中国免疫学会；第四军医大学
- 主办单位： 陕西省免疫学会,中国免疫学会
- 影响因子： 0.81
- 审稿时间： 1-3个月
- 国际刊号： 1007-8738
- 国内刊号： 61-1304/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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连翘提取物对小鼠T淋巴细胞体外活化与增殖的影响
目的:分析连翘(FS)提取物对小鼠淋巴结T细胞的体外活化与增殖的影响,初步探讨其免疫抑制作用机制.方法:无菌分离小鼠淋巴结细胞,加入多克隆刺激剂刀豆蛋白A(ConA)进行刺激,利用荧光标记的单克隆抗体(mAb)染色结合流式细胞术(FCM),检测小鼠T淋巴细胞的表达的活化抗原CD69、CD25、CD71的表达情况;以羧基荧光素乙酰乙酸琥珀酰亚胺酯(CFDA-SE)染色,以FCM分析FS对淋巴细胞体外增殖的影响.结果:终浓度为40、80、160 mg/L的FS均对ConA刺激诱导的T细胞CD69、CD25和CD71的表达有降低作用(P＜0.05).CFDA-SE染色分析显示,上述浓度的FS对ConA诱导的小鼠T淋巴细胞增殖具有抑制作用(P＜0.05).结论:FS对ConA诱导的T细胞早、中、后期活化和体外增殖有抑制作用.
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猕猴骨髓干细胞动员后外周血干细胞、免疫细胞亚群及细胞因子变化
目的:观察GM-CSF动员猕猴骨髓干细胞后外周血干细胞、免疫细胞亚群和细胞因子含量的动态变化,为临床干细胞动员及用于治疗疾病提供参考依据.方法:健康猕猴连续5 d,皮下注射GM-CSF 8 μg/(kg·d),分别于0、2、4、6、8、10 d采集外周血,血细胞分析仪计数白细胞(WBC)总数、淋巴细胞和中性粒细胞比例,流式细胞术(FCM)测定CD34+、CD133+、CD3+、CD4+、CD8+、CD56+细胞比例,酶联免疫分析法测定血清TNF-α、IL-1β、IL-2含量.结果:WBC、中性粒细胞、CD34+、CD133+细胞数量和比例均同步升高(P＜0.01),到动员第6天时达到高峰,细胞数量分别为正常水平的6.4、9.1、117和163.3倍,其中CD34+、CD133+第8天时恢复正常,而WBC、中性粒细胞仍高于正常水平(P＜0.05).CD3+、CD4+、CD8+、CD56+细胞的数量增加,细胞数在第6天时分别为动员前的4.1、4.0、2.9和4.3倍,但比例下降(P＜0.01),到第6天达到低(P＜0.001),随后逐渐升高至正常以上水平并持续至第10天(P＜0.05).TNF-α、IL-1β、IL-2浓度于动员后6 d内明显升高(P＜0.01),其中TNF-α、IL-1β浓度至8 d恢复正常(P＞0.05),IL-2浓度升高幅度较大并至少持续至第10天(P＜0.01).结论:连续5 d动员猕猴骨髓干细胞可使外周血中CD34+、CD133+细胞比率短暂升高,WBC、中性粒细胞比例持续升高,使CD3+、CD4+、CD8+、CD56+细胞绝对数增加,TNF-α、IL-1β、IL-2浓度升高,表明GM-CSF动员猕猴骨髓干细胞可在细胞和免疫调节因子水平提高免疫功能.
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人细胞因子受体样因子3在真核及原核细胞中的表达
目的:观察CRLF3蛋白在293T细胞中的表达及亚细胞定位,并在大肠杆菌中表达和纯化了重组CRLF3蛋白.方法:将真核表达载体pCMV-myc-CRLF3瞬时转染293T细胞,转染24 h和48 h后免疫荧光染色,共聚焦显微镜观察蛋白表达及定位;构建原核表达质粒pGEX-4T-1-CRLF3,实现插入基因的融合表达,经GST亲合层析纯化蛋白.结果:CRLF3蛋白在293T细胞中高效表达,主要分布在细胞质和细胞膜;成功构建了表达CRLF3融合蛋白的原核表达载体,并在大肠杆菌内高效表达,纯化后得到Mr约为74 000的融合蛋白.结论:在真核细胞中过表达的CRLF3蛋白主要定位在细胞质和细胞膜;获得了重组GST-CRLF3融合蛋白,为进一步探讨CRLF3的功能奠定基础.
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独特型TCR Vα1-pIRES-TCR Vβ8表达载体构建及体外表达
目的:构建Jurkat细胞株独特型TCR Vα1-pIRES-TCR Vβ8表达载体,转染后了解其体外表达情况.方法:根据聚合酶链反应-基因扫描(PCR-Genescan)检测Jurkat细胞株TCR Vα及Vβ亚家族表达情况,分别将其所表达的单克隆性的TCR Vα1及TCR Vβ8亚家族基因片段克隆至质粒pIRES的多克隆位点A(MCS A)和多克隆位点B(MCS B)中.通过限制性酶切分析、序列分析、RT-PCR、间接免疫荧光、流式细胞术(FCM)手段鉴定重组表达载体的正确性以及转染A549和Molt4细胞后基因及蛋白的表达情况.结果:构建了2组TCR Vα1-pIRES-TCR Vβ8表达载体,该表达载体转染A549和Molt4细胞后,在mRNA和蛋白水平检测到了TCR Vα1和TCR Vβ8的表达.结论:成功构建了2种独特型Vα1-pIRES-TCR Vβ8真核表达载体,为利用特异性TCR基因修饰T细胞的研究提供方法学依据.
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骨髓间充质干细胞移植对脑梗塞大鼠神经功能恢复及突触素表达的影响
目的:探讨骨髓间充质干细胞(BMSC)移植对脑缺血大鼠神经功能恢复和脑组织中突触素(synaptophysin)mRNA表达的影响.方法:72只清洁级成年雄性SD大鼠,随机分为假手术组(Sham组)、局灶性脑缺血组(MCAO组)、溶剂对照组(vehicle组)和BMSC治疗组(BMSC组),每组18只,采用改良Zea-Longa线栓法制作大脑中动脉栓塞(MCAO)模型,BMSC移植前用DAPI标记,BMSC组于造模成功1 d后经侧脑室注射入BMSC(1×106),vehicle组则注射同等剂量的PBS,术后4 d、7 d和14 d通过平衡木行走、转棒上行走及网屏抓握进行神经功能评估,观察其恢复状况,并断头取脑,免疫组织化学及RT-PCR法检测突触素表达情况.结果:BMSC组缺血周边区脑组织中观察到DAPI染色的阳性细胞.BMSC组术后7 d和14 d神经功能评估明显优于MCAO组和vehicle组(P＜0.05 or P＜0.01);BMSC组术后4 d、7 d和14 d脑组织中突触素表达较MCAO组和vehicle组明显增高(P＜0.01).结论:BMSC移植可以促进脑缺血大鼠神经功能的恢复,促进缺血脑组织中突触素生成,BMSC移植促进脑缺血大鼠神经功能恢复部分是通过促进脑组织中生成突触素发挥作用.
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人SNCA基因真核表达载体的构建及其在PC12细胞中的表达
目的:构建含人野生型及致病突变A30P、A53TSNCA基因的重组真核表达载体pEGFP-C3-SNCA,并通过稳定转染获得过表达人野生型及致病突变A30P、A53T α-synuclein(SNCA)的单克隆PC12细胞株.方法:通过RT-PCR方法扩增SNCA基因,T-A克隆后测序.在此基础上利用单核苷酸差异引物定点诱变法相继构建含SNCA基因编码区EcoR Ⅰ、BamH Ⅰ两酶切位点的同义突变及其致病突变G88C(Ala30Pro)、G209A(Ala53Thr)的重组真核表达载体pEGFP-C3-SNCA,并以PCR、双酶切、测序鉴定.以重组质粒pEGFP-C3-SNCA通过脂质体转染方法转染PC12细胞;以G418进行筛选;以有限稀释法进行亚克隆获得稳定过表达人野生型及致病突变A30P、A53T α-synuclein的单克隆PC12细胞株,并以稳定转染pEGFP-C3的PC12细胞作为对照组细胞,通过RT-PCR、Western blot及荧光显微镜鉴定各单克隆PC12细胞株.结果:PCR、酶切及测序证明重组真核表达载体pEGFP-C3-SNCA构建成功.RT-PCR、Western blot及荧光显微镜确认目的基因序列在PC12细胞稳定过表达.结论:成功地构建SNCA基因WT及A30P与A53T突变型的重组真核表达载体pEGFP-C3-SNCA;成功获得过表达人野生型及致病突变A30P、A53T α-synuclein的单克隆PC12细胞株.
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syk真核表达载体的构建及其对人乳腺癌细胞MHC-Ⅰ类分子表达的影响
目的:构建非受体蛋白酪氨酸激酶Syk的真核表达载体,转染人乳腺癌细胞,使其在细胞中稳定表达,以研究Syk对人乳腺癌细胞MHC-Ⅰ类分子表达的影响.方法:以RTPCR法从人乳腺癌细胞株MDA-MB-468扩增出syk编码序列基因片段,将其克隆到真核表达载体pcDNA3.1D/V5-His-TOPO中.对重组质粒进行酶切、PCR及测序鉴定后,以脂质体介导法转染Syk缺失的人乳腺癌细胞MDA-MB-231,经G418筛选,构建syk基因稳定表达的细胞株,通过Western blot、RT-PCR和流式细胞术检测转染乳腺癌细胞Syk、MHC-Ⅰ及ICAM-Ⅰ的表达.结果:构建了hsyk真核表达载体pcDNA3.1D/V5-His-TOPO/hsyk,并在人乳腺癌细胞MDA-MB-231中获得稳定表达.表达Syk的MDA-MB-231细胞同时可以高表达MHC-Ⅰ和ICAM-Ⅰ.结论:成功地构建了syk真核表达载体并在真核细胞中表达,为进一步的肿瘤免疫研究奠定了实验基础.
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可溶性Jagged 1/Fc嵌合蛋白对小鼠淋巴细胞活化、增殖和周期的影响
目的:研究可溶性Jagged 1/Fc嵌合蛋白在小鼠淋巴细胞活化、增殖和周期中的作用.方法:选择有效剂量为500 μg/L Jagged 1/Fc嵌合蛋白(Jagged 1/Fc),以活体染料/羧基荧光素乙酰乙酸琥珀酰亚胺酯染色,建立在多克隆刺激剂刀豆蛋白A(ConA)或佛波醇酯(PDB)加离子霉素(Ion)刺激下评价淋巴细胞增殖的模型,通过流式细胞术分析Jagged 1/Fc对淋巴细胞增殖的作用;采用碘化丙锭染色检测Jagged 1/Fc对PDB加Ion刺激的淋巴细胞周期变化的影响;利用荧光标记的mAb双染技术观察Jagged 1/Fc对T细胞早期和中期活化标志CD69和CD25表达的影响.结果:Jagged 1/Fc对ConA刺激或非刺激的CD3+细胞CD69和CD25的表达无明显影响,对ConA或PDB加Ion刺激或非刺激的淋巴细胞的增殖指数也无明显影响,导致非刺激的淋巴细胞sub-G0期细胞百分比增高,S期细胞百分比降低,但并不影响PDB加Ion诱导的淋巴细胞各期的变化.结论:这些结果提示500 μg/L Jagged 1/Fc对小鼠淋巴细胞活化和增殖无明显作用,对PDB加Ion刺激的淋巴细胞周期也无明显影响,但能促进未受刺激的淋巴细胞凋亡,使细胞停滞于GO/G1期,阻止其进入S期.
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CD59特异位点的短肽封条对HeLa细胞凋亡作用的研究
目的:研究CD59特异位点的短肽封条对HeLa细胞凋亡相关基因(survivin、caspase-3及bax)的表达作用,探讨CD59特异位点的短肽封条促HeLa细胞凋亡的作用机制.方法:将CD59特异位点的短肽封条分别作用于HeLa细胞和转CD59基因的HeLa细胞.作用24 h后,采用MTT的方法来检测细胞增殖抑制率;并利用免疫组织化学方法检测survivin,caspase-3及其bax的表达水平.结果:转CD59基因的HeLa细胞+短肽的细胞组增殖抑制率大于HeLa细胞+短肽组(P＜0.01).转CD59基因的HeLa细胞+短肽组和正常的HeLa细胞+短肽组相比较,survivin表达水平降低(P＜0.05);而caspase-3表达水平增高(P＜0.05);bax的表达量各组比较,差别无统计学意义.结论:CD59特异位点的短肽封条具有下调survivin的表达,活化caspase-3,从而促进HeLa细胞的凋亡.
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人外周血活化淋巴细胞中Survivin蛋白表达的分子机制研究
目的:探讨活化淋巴细胞中Survivin蛋白诱导表达的信号转导通路、分子级联反应和生物效应,揭示Survivin蛋白表达调控的分子机制.方法:用PHA和rhIL-2刺激培养人外周血单个核细胞,附加JAK抑制剂-AG490的处理,以Western blot检测Survivin和相关蛋白的表达;以流式细胞术(FCM)分析细胞周期和细胞分裂增殖.结果:刺激培养的细胞按照时序先后出现的分子和细胞学反应为:Stat3和Stat5磷酸化→CyclinD3、CyclinE蛋白水平上调→细胞进入S期及Survivin蛋白起始表达→细胞有丝分裂及Survivin蛋白表达水平增加.AG490对于上述反应均呈现明显的抑制作用,但对周期抑制蛋白P21和抗凋亡蛋白Bcl-2的表达水平没有影响.结论:Survivin蛋白的表达依赖JAK-Stat信号转导通路的早期活化,通过上调CyclinD3和CyclinE周期蛋白水平,启动细胞周期的运行,诱导Survivin蛋白的周期时相依赖性表达,参与细胞有丝分裂与增殖.
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肾结核病灶中淋巴细胞趋化因子的表达
目的:探讨淋巴细胞趋化因子在正常肾脏和肾结核中的表达以及淋巴细胞趋化因子和浸润CD4+、D8+T细胞在肾脏结核病灶中的分布特点.方法:6例正常肾脏和10例肾结核病变组织,经匀浆后,采用RT-PCR法扩增人淋巴细胞趋化因子(hLptn)的含编码区序列的cDNA;扩增cDNA的克隆至pGM-T Easy T载体,测序;应用免疫组织化学方法检测正常肾脏和肾结核中的hLptn的表达和结核病灶中的CD4、CD8分子的表达.结果:正常肾脏和肾结核组织均表达hLptn mRNA,应用RT-PCR法克隆的cDNA序列与GenBank中U23772的序列一致;hLptn在正常的肾小球、肾小管中和结核病变中残存的肾小球、肾小管中均有表达;结核病变中有散在的CD4和CD8分子阳性细胞,与hLptn的分布无重叠.结论:淋巴细胞趋化因子在肾脏的肾小球和肾小管中呈结构性表达,肾结核肉芽肿中淋巴细胞的募集可能非依赖于hLptn的作用.
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KDR为靶的siRNA抑制乳腺癌细胞增殖的体内外研究
目的:采用化学修饰的小干扰RNA(siRNA)在体内外抑制含激酶插入区受体(KDR)基因表达,探讨化学修饰的siRNA介导的RNA干扰(RNAi)技术在乳腺癌基因治疗的可行性和特异性.方法:采用阳离子脂质体Lipofectamine2000TM作为转染试剂将针对人KDR基因的siRNA转染人类乳腺细胞株MCF-7,诱导RNAi,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法,RT-PCR,Western blot试验等检测KDR基因和蛋白表达及细胞增殖变化.采用阳离子聚合物纳米粒In vivo jetPEITM为转染试剂将siRNA直接注射进裸鼠移植瘤,监测肿瘤生长变化,RT-PCR,免疫组化方法等监测KDR基因和蛋白表达变化.结果:靶向KDR基因siRNA转染MCF-7后,细胞增殖被抑制,KDRmRNA和蛋白的表达明显降低;裸鼠体内实验显示siRNA治疗组瘤组织的增长受到明显抑制;RT-PCR,免疫组化结果同时表明治疗组KDR表达下调.各对照组指标无明显变化.结论:化学修饰的siRNA介导的RNAi在体内外均能成功抑制靶基因的表达和MCF-7细胞增殖,是潜在的肿瘤治疗新方法,而KDR亦可作为肿瘤治疗的新靶点.
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FK506对肝移植受者T细胞亚群上CD152和PD-1的调节研究
目的:动态观察肝移植受者外周血T细胞表面CTLA-4/CD152和PD-1的表达,探讨FK506对负性协同刺激分子的调节作用.方法:采用酶增强免疫分析法测定FK506的血药浓度.外周血T细胞亚群和T细胞表面CD152和PD-1分子的表达利用流式细胞术(FCM)进行检测.结果:各时间组间FK506血药浓度无统计学意义(P＞0.05).随治疗时间延长,CD4+T细胞持续下降,至治疗3月时已明显低于健康对照组(P＜0.05).而各治疗组CD4+T细胞百分率均明显低于疾病对照组(P＜0.05).各时段治疗组CD8+T细胞均明显高于疾病对照组(P＜0.05).肝移植术后,CD4+和CD8+T细胞上CD152的表达较健康对照组升高(P＜0.05),治疗2周和1月组还高于疾病对照组(P＜0.05).治疗2月和3月组CD4+CD152+T细胞的表达较治疗2周和1月组下降(P＜0.05).治疗3月组CD8+CD152+T细胞的表达较治疗2周和1月组降低(P＜0.05).术后T细胞亚群上PD-1的表达有升高趋势.CD4+T细胞上PD-1的表达在治疗2周开始明显高于健康对照组(P＜0.05).CD8+T细胞上PD-1的表达从治疗1月时明显高于疾病对照组(P＜0.05).结论:FK506能上调T细胞表面负性协同刺激分子CD152和PD-1的表达,可能参与抑制效应T细胞的过度增殖与活化,维持移植受者的存活和免疫稳态.
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播散性盘状红班狼疮1例
1 临床资料 患者,男性,38岁.主因颜面、颈前、双上肢红斑、丘疹鳞屑1年余于2007-09就诊.患者2007-06暴晒后双上肢伸侧出现数个散在黄豆大小丘疹,圆形、孤立光滑,边界清楚,自觉瘙痒,当时未介意,之后皮损渐增多,延及颈前、面部,瘙痒加重,在当地医院按"银屑病"治疗(具体不祥),效果不佳,遂来我院.患者病程中无体质量减轻、发热、关节肿痛等症,精神饮食睡眠大小便均正常.既往及家族史无特殊.体格检查:系统检查未见异常.皮肤科检查:颜面、耳后、颈前形状不规则红色斑片,双上肢伸侧钱币大小丘疹,表面鳞屑,呈银屑病样改变,奥氏征阴性(图1).
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IgA肾病小鼠肾组织鞘氨醇激酶、内皮分化基因表达及意义
目的:探讨鞘氨醇激酶(SPK)与磷酸鞘氨醇(SPP)受体EDG3、EDG5在IgA肾病(IgAN)小鼠肾皮质中的基因表达情况.方法:复制IgAN小鼠模型,应用实时荧光定量PCR检测肾皮质SPK与SPP受体EDG3、EDG5的mRNA表达.结果:IgAN小鼠肾皮质中SPK与SPP受体EDG3、EDG5的mRNA均高表达,其中SPK与α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)成正相关.结论:在IgAN肾组织中,SPK、EDG3及EDG5可能在系膜细胞的增殖和发生表型改变的信号转导过程中发挥着重要作用.
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大麻素Ⅱ型受体(CB2)在人皮肤及皮肤恶性肿瘤的组织分布
目的:研究大麻CB2受体在人皮肤及皮肤恶性肿瘤的组织分布.方法:用兔抗人CB2受体抗体做免疫组化,检测人类皮肤及皮肤恶性肿瘤组织CB2受体表达分布情况.结果:CB2受体在人类皮肤及皮肤恶性肿瘤均有表达分布,且皮肤恶性肿瘤的CB2受体过度表达.结论:大麻素受体CB2的表达与皮肤恶性黑素瘤、基底细胞癌、鳞状细胞癌关系密切.
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抗11β-羟类固醇脱氢酶1的单克隆抗体的制备与鉴定
目的:制备抗人11β-羟类固醇脱氢酶1(homo sapiens hydroxysteroid 11-beta dehydrogenase 1,HSD11B1)的单克隆抗体(mAb)并初步鉴定其特性.方法:将正常成人肝组织匀浆离心并分离线粒体,用线粒体总蛋白免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备mAb,并通过间接ELISA法、Western blot、免疫组化的方法对mAb进行特性鉴定,通过免疫沉淀、Uni-ZAP XR肝脏cDNA表达文库筛选鉴定抗原.结果:通过间接ELISA筛选获得1株可稳定分泌抗人HSD11B1 mAb的杂交瘤细胞系.其分泌的mAb的Ig亚类(型)为IgG1(κ),Western blot结果显示该mAb可以特异地识别相对分子质量(Mr)为35 000的蛋白;应用mAb CBF245对人肝脏cDNA表达文库(Uni-ZAP XR)进行筛选,阳性噬菌斑测序结果显示5个阳性克隆插入序列均为HSD11B1.结论:mAb BAD062特异地识别抗原HSD11B1,该mAb可用于ELISA检测、Western blot、免疫组化和免疫沉淀实验,为HSD11B1的研究提供了有力的工具.
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基于可视化蛋白芯片的抗体分析方法研究
目的:建立一种基于蛋白芯片技术的抗体分析新方法.方法:将待分析的抗体制备成抗体芯片,并与生物素标记的抗原反应,然后经银增强法显色,获得可直接观察的微阵列芯片可视化反应结果.结果:实验中分析了10种18株抗体的活性和特异性的强弱,其中6株抗体具有较强的特异性.其中,ⅢC013、HPSⅡB007、HPSⅢB007分别对球蛋白和白蛋白的低检测浓度可达0.4 μg/L.结论:该方法具有通量化前景,且具有微量化、操作简便快捷和结果可视化等特点.
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抗汉滩病毒中和性鼠/人嵌合抗体基因转化拟南芥的初步研究
目的:建立能表达抗汉滩病毒中和性鼠/人嵌合抗体基因的转基因植株,为汉坦病毒基因工程抗体的研究提供实验基础.方法:将构建的含抗汉滩病毒中和性鼠/人嵌合抗体基因的植物抗体表达质粒3G1MH-pCAMBIA2301,用TSS冻融法导入农杆菌GV3101,利用农杆菌介导的抽真空转基因技术转化野生型拟南芥,获得转基因植株.用PCR、Northern blot检测转基因植株.结果:经PCR分析表明,拟南芥的基因组中有抗汉滩病毒中和性鼠/人嵌合抗体基因整合,并成功获得7株T0代转基因拟南芥.植株提取RNA,经Northern blot分析可见约1 500 bp及800 bp处的目的条带,为编码重、轻链的目的基因.结论:成功地构建了含抗汉滩病毒中和性鼠/人嵌合抗体基因的拟南芥植株,为进一步利用植物表达治疗性抗体奠定了基础.
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抗CMTM4多克隆抗体的制备、纯化和鉴定
目的:制备抗CMTM4的多肽抗体并鉴定其性能.方法:通过TMHMM、DNAStar等软件对CMTM4的3种剪接体,CMTM4-v1,v2和v3的蛋白序列进行分析,选取了4段序列合成多肽并与钥孔戚血蓝素(KLH)偶联.其中第1、2、3条多肽为3种剪接体共有,混合后免疫家兔,制备Ab1;而第4条多肽为CMTM4-v1所特有,单独免疫家兔,制备Ab2.ELISA法检测抗体效价.免疫亲和层析法纯化后,进行Western blot和免疫组织化学检测,鉴定这2种抗体的特异性与适用范围.结果:得到兔抗人CMTM4多肽抗体Ab1和Ab2,效价分别达1:105和1:106.纯化后的Ab1用于Western blot可特异识别超表达的CMTM4-v1和v2,并可用于免疫组织化学实验;而Ab2仅可用于Western blot,特异性识别超表达的CMTM4-v1.Ab1还可特异识别小鼠内源性Cmtm4.结论:用多肽免疫家兔制备的2种抗CMTM4抗体不仅具有较高的效价以及特异性,并且Ab1还可以特异识别小鼠Cmtm4,为CMTM4的功能研究提供了有力的支持.
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Clusterin抗原的表达、抗体制备及其初步鉴定
目的:制备Clusterin(CLU)多克隆和单克隆抗体(mAb),并进行特性鉴定.方法:以成人肝cDNA表达文库为模板,构建重组表达质粒pGEX-4T-1-CLU和PET-32a-CLU.GST-CLU融合蛋白在大肠杆菌中表达,被作为免疫原制备兔多抗和鼠mAb.采用ELISA法和Western blot鉴定抗CLU抗血清在重组蛋白和天然蛋白中的特异性.采用Western blot,间接免疫荧光,免疫组化鉴定mAb的特异性.结果:GST-CLU融合蛋白在相对分子质量(Mr)约54 000处呈现明显表达条带.Western blot鉴定表明,制备的抗CLU兔多克隆抗体可特异地识别成人肝总蛋白中Mr约52 000和58 000的CLU蛋白.获得9株可稳定分泌抗CLU的杂交瘤细胞株可识别重组人CLU蛋白,其中有2株可特异性结合HepG2细胞质中的蛋白,4株可特异性结合成人肝脏组织肝细胞质中的蛋白.结论:成功地制备出兔抗人CLU抗血清和9株抗CLU的mAb,为进一步研究CLU在肿瘤中的功能奠定了实验基础.
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可溶型HLA-G在试管婴儿技术中的研究进展
胚胎的成功植入是人类生殖关键的因素.在过去10年里,尽管试管婴儿(in vitro fertilization,IVF)技术取得长足地发展,但植入率低的问题一直无明显改善.
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Th17细胞与TGF-β1相关性的研究进展
近来,证实TGF-β1为分泌IL-17 T细胞亚群(Th17细胞)分化的关键因子,拥有众多功能作用[1].TGF-β调控着生物学的进程,包括炎症、组织修复和肿瘤发生及其发展进程.
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CIITA调控MHC-Ⅱ类分子表达分子机制的研究进展
MHC-Ⅱ类分子抗原处理、提呈通路在调控CD4+T细胞激活及特异性应答的过程中发挥重要的作用,T细胞的功能在很大程度上取决于MHC-Ⅱ类分子的表达水平.
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VEGF与DC在肿瘤发生发展中的作用及关系
异常活跃的血管发育是恶性肿瘤生长的一个重要条件.血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)是目前活性强、专属性高的血管生成因子,在肿瘤血管生成中处于核心地位.
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用MTT比色法建立B型CpG ODN活性检测标准
目的:B型CpG ODN,BW006作为疫苗佐剂已进入临床试验阶段,所以需要建立稳定、安全、简便易行的活性检测方法以控制不同批次BW006的生产质量.方法:根据BW006具有刺激人PBMC和小鼠脾细胞增生的特点,选择无放射性污染的MTT比色法作为首选检测方案.用BW006刺激BALB/c小鼠脾细胞作为筛选平台,确定如下反应条件:脾细胞用量、培养板形状、BW006浓度、培养液体积和培养时间以及如何优化MTT检测过程以提高反应灵敏度.结果:用3 mg/L BW006与96孔平底板中含100 mL/L FBS的200μL无酚红RPMI1640培养的6×105个小鼠脾细胞在37℃含50 mL/L C02孵箱中共孵育36 h.随后每孔弃100 μL上清,加入MTT(5 g/L)10 μL,37℃避光孵育4 h使各孔充分形成甲瓒颗粒.每孔加入DMSO 150 μL,经平板振荡器振荡20 min至颗粒完全溶解,在酶标仪上检测A578值即可.结论:建立了无污染、造价低、可操作性强的BW006活性检测方法.
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siRNA抑制SKOV-3细胞Her2/neu表达及细胞增殖的动物实验研究
目的:通过卵巢癌细胞株SKOV-3细胞增殖及动物荷瘤实验探讨siRNA沉默Her2/neu基因的表达效果.方法:靶向Her2/neu的siRNA经脂质体LipofectAMINE2000介导转染到SKOV-3中,通过嘌呤霉素筛选得到稳定抑制Her2/neu基因表达的SKOV-3/siRNA细胞株,通过RT-PCR和免疫组化方法检测Her2/neu基因抑制效果,运用四甲基偶氮唑蓝(MTT)检测各组细胞增殖水平并将SKOV-3/siRNA细胞接种到裸鼠皮下检测荷瘤情况.结果:建立了稳定抑制Her2/neu基因表达的细胞株SKOV-3/siRNA,RT-PCR和免疫组化结果显示Her2/neu基因表达受到较强抑制,MTT检测结果显示SKOV-3/siRNA组细胞增殖较SKOV-3明显下调(P＜0.05),其接种在裸鼠皮下形成的肿瘤生长速度明显减慢(P＜0.05).结论:靶向Her2/neu基因的siRNA可以抑制卵巢癌细胞株SKOV-3在体外和体内增殖,有望成为卵巢肿瘤治疗的新途径.
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HER2/neu和GM-CSF共转染树突状细胞的免疫杀伤研究
目的:探讨HER2/neu蛋白细胞胞外段的基因重组腺相关病毒(rAAV-HER2/neu)和粒-巨噬细胞集落刺激因子重组腺相关病毒(rAAV-GM-CSF)共转染树突状细胞(DC)诱导的细胞免疫应答.方法:成熟的DC通过淋巴细胞分离液分离培养获得,流式细胞技术分析HER-2/neu以及细胞表面标志CD1a、CD83、CD80、CD86和HLA-DR的表达,MTT检测混合淋巴反应,3H-TdR释放法检测CTL杀伤活性,RT-PCR检测FasL表达.结果:共转染组(CT)、单独转染组(ST)和未转染组(UT)3组DC的细胞表面标志表达无统计学意义(P＞0.05),共转染组中HER2/neu和FasL的表达比单独转染组高,共转染组中可以检测到更强的混合淋巴细胞反应和CTL杀伤活性.结论:HER2/neu蛋白细胞外段的基因通过DC的抗原提呈作用可以诱导出免疫应答,其免疫应答作用与FasL表达相关,而GM-CSF可以增强其免疫应答作用.
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醛固酮对肾小球系膜细胞纤溶酶原激活物抑制物1基因表达的影响
目的:探讨醛固酮(ALD)对大鼠肾小球系膜细胞纤溶酶原激活物抑制物l(PAI-1)基因表达的影响.方法:(1)以不同浓度的ALD(10-11、10-10、10-9、10-8、10-7 mol/L)刺激肾小球系膜细胞72 h后,用半定量RT-PCR法检测该细胞中PAI-1 mRNA的表达.(2)以10-7 mol/L的ALD刺激肾小球系膜细胞不同时间(12、24、48、72 h)后,用半定量RT-PCR法检测该细胞中PAI-1 mRNA的表达.结果:半定量RT-PCR结果显示,ALD促进培养的大鼠肾小球系膜细胞PAI-1mRNA的表达,且具有浓度依赖性和时间依赖性的特点.结论:ALD促进大鼠肾小球系膜细胞PAI-1 mRNA的表达,从而抑制细胞外基质的降解,促进肾小球疾病进展.
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BrdU掺入与T细胞的活化和细胞因子表达的关系
目的:探讨利用流式细胞术(FCM)检测细胞增殖(BrdU掺入)与T细胞的活化及细胞因子表达的关系.方法:正常人PBMC经PMA+Ionomycin刺激不同时间,在培养结束前1 h加入BrdU,利用抗BrdU以及多种抗细胞表面和抗细胞因子抗体标记,FCM检测.结果:体外刺激PBMC 48 h后,可见T细胞有BrdU掺入,但随着时间的延长,掺入率没有明显增加.对比分析BrdU掺入与活化分子表达的关系表明,CD69在刺激后8 h达高峰,而CD25则需要24 h后达到高峰.另外,BrdU掺入与细胞因子表达没有明显关系,当PBMC刺激后8 h,即有大量IFN-γ的表达,而当培养时间延长到24、48和72 h后,IFN-γ的表达没有明显改变.OKT3+antiCD28刺激T细胞后BrdU的阳性率高于PMA+Ionomycin刺激的T细胞,CD8+T细胞掺入率高于CD4+T细胞.结论:利用FCM检测BrdU+细胞可以用于评价T细胞的增殖反应,但在多克隆刺激的条件下,只有少数细胞发生增殖,并且BrdU掺入率受刺激剂种类和时间的影响,BrdU掺入与活化分子和细胞因子的表达均没有明显关系.
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结合RNAi技术的三重表达HCV DNA疫苗的构建及其在HepG2细胞中的表达
目的:构建多表位抗原基因、hIL-12、小分子干扰RNA(siRNA)共质粒表达的新型复合丙型肝炎DNA疫苗并在HepG2细胞中表达.方法:设计并合成复合多表位丙肝抗原基因,将其与加强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因融合克隆进真核表达载体pVAX1的多克隆位点中;利用pVAX1载体上卡那霉素抗性基因与复制起始位点之间的非功能区域,将带CMV启动子的hIL-12表达单元克隆进该区域的BspH Ⅰ位点中;同时将8组针对丙肝的siRNA表达单元分别克隆进载体复制起始位点下游非功能区域的Mlu Ⅰ位点上,构建三重表达的HCV DNA疫苗pVAX1-HC-EGFP-hIL12-siRNA.以该重组质粒转染人肝癌细胞系HepG2,通过EGFP的荧光标记观察多表位抗原的表达;以靶向EGFP的siRNA做为对照验证siRNA的表达及其干扰效果;ELISA测定培养细胞上清中hIL-12的表达.结果:经酶切鉴定和测序证实三重表达的复合HCV DNA疫苗构建成功.在转染细胞中检测到绿色荧光,证实抗原表达;靶向EGFP的siRNA亦能显著抑制EGFP的表达;转染后48 h hIL-12的检出量为1 289 ng/L细胞上清,72 h检出量为1 712 ng/L细胞上清.结论:成功地构建多表位抗原基因、hIL-12和siRNA共质粒表达的丙肝DNA疫苗,并能在真核细胞中有效表达抗原基因、hIL-12并介导RNA干扰效应.为进一步研究该DNA疫苗抗HCV的免疫治疗和基因治疗效果打下基础.
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高氧液预处理对大鼠肝内胆管缺血再灌注损伤的保护作用
目的:观察高氧液预防大鼠肝内胆管缺血再灌注损伤的效果,探讨高氧液对缺血再灌注损伤的作用机制.方法:大鼠70%缺血再灌注动物模型,缺血90 min,再灌注后8 h、24 h取材.40只SD大鼠随机分成实验组与对照组,每组再分8 h和24 h两组,每组10只.在缺血再灌注前10 min经门静脉注射高氧液(20 mL/kg);对照组为生理盐水对照.在对应时间点取材,观察血清ALT、AST、GGT变化,酶组织化学检测过氧化氢酶表达变化,光镜观察肝组织病理改变,电镜观察肝内胆管上皮细胞的超微结构变化.结果:对照组GGT、ALT、AST活性均明显高于实验组(P＜0.01);过氧化氢酶活性则明显低于实验组(P＜0.05);实验组光镜下病理改变及电镜超微结构检查相比对照组明显减轻.结论:高氧液预处理对大鼠肝内胆管缺血再灌注损伤具有保护作用.
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新分子,新细胞亚群,新认识——追踪细胞和分子免疫学研究的新进展
进入21世纪以来,细胞和分子免疫学研究有了新的突破.纵观其发展过程,我们不难发现,每项重大的突破无不包含着新的分子(细胞因子、膜受体、转录因子)、新的细胞亚群和新的免疫功能之间密切的联系,使我们从整体水平不断深入地去认识免疫系统和功能及其复杂的免疫网络.
| 年 | 期数 |
| 2018 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2017 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2016 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2015 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2014 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2013 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2012 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2011 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2010 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2009 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2008 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2007 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2006 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2005 | 01 02 03 04 05 06 z1 |
| 2004 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2003 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2002 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2001 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2000 | 01 02 03 04 05 06 |
| 1999 | 01 02 |
| 1995 | 01 02 03 |
| 1994 | 01 02 |
| 1993 | 01 02 03 04 |
| 1992 | 01 02 03 04 |
| 1991 | 01 02 03 04 |
| 1990 | 01 02 |
| 1989 | 01 02 03 04 |
