白细胞介素12在细胞免疫中的作用

肝癌生物治疗的研究进展

近年来,由于分子生物学的迅猛发展,以及基因重组技术的深入开展,使肿瘤的生物治疗成为继手术、放疗和化疗之后的第4种肿瘤治疗模式.现就近年来国内外有关肝癌免疫化学治疗、基因治疗,以及针对AFP异常的药物治疗进行综述.

具有GPX活性的单克隆抗体可变区基因的克隆和序列分析

目的利用分泌具有GPX活性的单克隆抗体(mAb)的杂交瘤细胞3G5,克隆其mAb体的可变区基因.方法提取杂交瘤细胞的总RNA,分离mRNA,反转录合成cDNA.经PCR扩增VH基因和VL基因,将VH基因和VL基因与载体pGEM-T连接后,进行酶切鉴定和序列分析.结果构建了2个分别含有VH和VL基因的重组质粒.序列分析表明,VH和VL分别属于ousc heavy chain subgroupIII和mouse light chain subgroupV亚群,长度为372和324bp,编码124和108个氨基酸,在高变区分别有4和2个丝氨酸.结论克隆的VH和VL基因符合功能性重排的鼠抗体可变区基因特征,为将来制备具有GPX活性的单链抗体提供了可靠的基因材料.

IL-1β诱导类风湿性关节炎滑膜细胞MAPKs通路的活化

目的研究类风湿性关节炎(rheumatoidarthritis,RA)成纤维样滑膜细胞(fibroblast-likesynoviocyte,FLS)信号转导中,IL-1β介导的丝裂原活化的蛋白激酶(mitogen-activated-proteinkinaseMAPKs)的激活情况.方法原代培养RFFLS;应用Westernblot检测IL-1β对于RAFLS蛋白质酪氨酸磷酸化状态的影响,及其对MAPKs家族成员活化的浓度效应和时相特点.结果IL-1β可以瞬时增加RAFLS蛋白质酪氨酸磷酸化的程度,并在短时间内激活MAPKs通路(以ERK2,JNK2和P38为主).不同浓度的IL-1β对MAPKs的活化无明显差异,但ERK2,JNK2和P38的活化分别在IL-1β作用后5min,15min和1min明显.结论IL-1β在RAFLS信号转导中,可以瞬时导致蛋白质酪氨酸化的程度增加,并同时激活MAPKs3条通路;但MAPKs3个亚家族成员的活化具有异质性.

抗胃癌单克隆抗体识别的噬菌体呈现肽与天然抗原的关系

噬菌体呈现的随机肽库已成功地用于筛选B细胞或T细胞表位.为进一步研究胃癌相关抗原与相应单克隆抗体(mAb)结合的结构基序及其相互作用,我所通过两株胃癌mAbMG7和MGb2筛选噬菌体呈现的随机九肽库,获得一些可与mAb结合的噬菌体呈现肽.我们采用竞争抑制实验,研究了这些肽与天然胃癌相关抗原的关系.

IFN-α/HBVPreS2融合基因表达载体的构建和表达

目的构建IFN-α/HBVPreS2融合基因表达载体并进行表达.方法采用PCR技术分别扩增IFN-α2b和HBVPreS2编码基因片段,并经分步克隆获得IFN-α/HBVPreS2融合基因.然后将其插入质粒pBV220,构建重组表达载体pBV-IFN-PreS2.结果经转化E.coli后,诱导表达出相对分子质量(Mr)为27000的融合蛋白.SDS-PAGE分析显示,表达量占菌体总蛋白质的15%.Westemblot分析表明,表达蛋白能与抗IFN-α2b抗体结合.结论 IFN-α/HBVPreS2融合基因表达载体的构建,为进一步探讨HBV感染的特异性免疫治疗提供了实验依据.

汉坦病毒核蛋白基因片段真核表达载体的构建及鉴定

目的确定特定小鼠MHCI类分子H-2d限制性加工提呈的汉坦病毒核蛋白(NP)抗原表位.方法在计算机预测的基础上,以编码NP的S基因为模板,合成了3个相互重叠的基因片段,构建了以携带GFP报告基因的pEGFP-N2为载体的重组质粒,并进行了初步表达及鉴定.结果目的基因片段已插入质粒载体,并在转染的真核细胞内成功表达.结论汉坦病毒核蛋白片段能够被细胞加工提呈.

小鼠凋亡相关新基因TFAR15的克隆和序列分析

目的克隆人白血病细胞凋亡相关新基因TFAR15的小鼠同源序列,并比较其在不同种属间的序列同源性.方法利用EST(expressedsequencetag)拼排、RT-PCR、DNA序列测定和计算机分析技术,对小鼠TFAR15进行研究.结果首次成功地进行了小鼠TFAR15全长cDNA的克隆和序列分析,发现小鼠TFAR15与小鼠其它cDNA没有明显的同源性,因此提交GenBank并被收录,登录号为AF159368.小鼠TFAR1 5和人FAR15在核苷酸水平上有92.3%的同源性,在氨基酸水平上有高达98.6%的同源性;同时发现小鼠TFAR15在氨基酸水平上与线虫C14A4.11蛋白质有38%的同源性.功能区分析发现,小鼠TFAR15cDNA序列含编码212个氨基酸的开放读码框架,有2个可能的N-糖基化位点,3个可能的caseinkinaseII磷酸化位点,4个可能的PKC磷酸化位点,并且可能是一种胞浆蛋白(cytoplasmicprotein).结论小鼠TFAR15是进化上高度保守的新基因,可能具有重要的功能.

日本血吸虫病患者血清对噬菌体随机7肽库的免疫筛选

目的从噬菌体随机多肽文库中,筛选出能与慢性血吸虫病患者血清特异性结合的短肽分子.方法采用慢性血吸虫病患者血清免疫球蛋白(Ig)作为配基,免疫筛选以融合蛋白形式在丝状噬菌体M13外壳蛋白III表达的随机7肽文库.按吸附-洗脱-扩增的淘筛过程,经3轮免疫淘筛后,随机挑取噬菌体克隆用ELISA检测其特异性,并用斑点ELISA分析其诊断血吸虫病的价值.结果经3轮免疫淘筛后,特异性结合的噬菌体富集增加近100倍.用ELISA检测第3轮筛选后随机挑取的30个噬菌体克隆,有26个克隆能与慢性血吸虫病患者的血清Ig产生特异性反应,其中A值高的2个克隆具有诊断血吸虫病的潜在价值.结论噬菌体随机肽库技术,可应用于分析、鉴定血吸虫抗原表位,继而为获得亚单位表位水平的诊断试剂和抗血吸虫病的短肽疫苗提供依据.

地高辛标记的血小板T细胞活化抗原1cRNA探针的制备与鉴定

目的制备用地高辛(digoxigenin,Dig)标记的血小板T细胞活化抗原1(plateletandTcellactivationantigen1,PTA1)cRNA探针.方法构建重组质粒pGEM-3ZF(+)-PTA1,并做序列分析证实PTA1基因的插入方向正确后,用EcoRI消化得到线性DNA片段,再用SP6RNA聚合酶转录合成带有Dig标记的高比活度的单链cRNA探针.结果经斑点杂交证实,该探针敏感性高、特异性强.结论地高辛标记PTA1cRNA探针的制备,为进一步研究PTA1mRNA在组织、细胞的表达和分布提供了有效的工具.

单纯疱疹病毒糖蛋白C模拟表位mgC真核表达载体的构建和表达

目的为鉴定单纯疱疹病毒(HSV)糖蛋白C(gC)一个短肽模拟表位mgC基因作为HSVDNA表位疫苗的可能性,需构建含此表位的真核载体.方法合成编码该表位的单链DNA,经不对称PCR扩增后,克隆入真核表达载体pcDNA3.1中,并在CHO细胞中表达.用RT-PCR法鉴定mRNA的表达.结果含mgC基因的真核表达载体在哺乳动物细胞中可以在mRNA水平表达外源蛋白.结论成功地构建了HSVgC中短肽模拟表位mgC基因的真核表达载体,为进一步探讨该HSV模拟表位的功能奠定了基础.

表皮生长因子、转化生长因子-α及其受体在人垂体腺瘤组织中的表达

目的探讨表皮生长因子(EGF)、转化生长因子-α(TGF-α)和表皮生长因子受体(EGFR)在垂体腺瘤发生、发展过程中的作用.方法应用放射性原位分子杂交法,观察上述3种分子的表达.结果在检测的22例垂体腺瘤组织中,分别有17例(77%)、12例(55%)和20例(91%)显示有EGF,TGF-α和EGFRmRNA的过度表达,它们在正常垂体组织中的阳性率分别为42%,25%和42%.不同的垂体腺瘤组织中3种mRNA的表达强度有差异.结论垂体腺瘤中存在着EGF/EGFR或/和TGF-α/EGFR自分泌系统,该系统在垂体腺瘤的分化及增殖过程中可能起着重要的作用.

肺癌细胞相关蛋白分子N35的实验研究

目的分析肺癌相关蛋白N35的有关特性,探讨其潜在的临床应用价值.方法以抗人肺癌mAbN-35作为免疫探针,用免疫沉淀和免疫印迹法,测定其相关抗原在肺癌组织、肺癌细胞系GLC-82,宫颈癌细胞系HeLa,肝癌细胞系HepG-2,乳腺癌细胞系PMC,正常人心脏及肺组织的存在与分布情况;用N聚糖酶酶解方法确定肺癌相关蛋白N35与糖蛋白分子的关系;用差速离心技术分离出肺腺癌细胞系GLC-82亚细胞结构中的胞膜、胞核及线粒体成分,经免疫印迹法测定相关蛋白N35在亚细胞结构中的分布状况;用免疫荧光技术检测肺癌相关蛋白N35在肿瘤细胞有丝分裂过程中的功能结构定位.结果肺癌相关蛋白N35是一种糖蛋白分子,不存在于正常人心脏及肺组织蛋白组分中,而是以不同分子质量的形式分布于GLC-82,HeLa,HepG-2和PMC细胞蛋白中;在亚细胞结构中主要分布于胞核,线粒体次之,胞膜上分布少,不支持其以膜蛋白或跨膜蛋白的形式存在;在肿瘤细胞有丝分裂进入S至G2期时,明确地定位于中心粒(centriole)结构上,提示其功能可能与肿瘤细胞的无限制增殖有关.结论肺癌相关蛋白N35是一种只存在于肿瘤细胞并与其无限增殖密切相关的蛋白分子,有可能具有调节肿瘤细胞生长的作用.

FITC标记的抗Brdu单克隆抗体的研制

利用溴化脱氧尿嘧啶(Brdu)作为胸苷类似物可掺入到新合成的DNA中的特点,通过检测Brdu标记的细胞便能定性、定量地反映细胞的增殖状态[1].我们已筛选出分泌特异性抗Brdu单克隆抗体(mAb)的杂交瘤细胞株[2].为制备荧光素标记的抗BrdumAb用于流式细胞术定量检测增殖细胞,参考有关文献,用亲和层析纯化小鼠IgG亚类的方法,从腹水中纯化了抗BrdumAb,并用FITC荧光素进行标记.经初步用于体外检测Brdu标记细胞的数量,取得较好的结果.

抗迟缓爱德华菌单克隆抗体的制备及鉴定

迟缓爱德华菌(Edwardsiella tarda)是爱德华菌属中对人和鱼类均具有致病性的病原体,经口或创伤感染后肾损害.目前,对该菌所致疾病的诊断主要靠临诊观察和细菌学检查,难以做到准确、及时.鉴于国内外尚未见抗该菌单克隆抗体(mAb)的报道,我们制备了抗该菌的mAb,以为临床诊断和保护水产资源提供新的检测方法.

宫颈癌细胞系SiHa中HPV16E6,E7蛋白的表达

我们应用免疫荧光染色结合激光扫描共聚焦显微镜(laser scanning confocal microscope,LSCM),观察了宫颈癌细胞系SiHa中HPV16型(human papillomavirus type16)E6,E7基因区产物E6,E7蛋白的表达.

抗肿瘤相关糖抗原sTn单克隆抗体的制备及鉴定

细胞发生转化时,经常伴随着细胞膜表面糖脂或糖蛋白糖链的改变[1].在肿瘤细胞,特别是腺癌细胞,其表面粘蛋白分子的糖链经常由于合成不全而缩短,形成肿瘤相关的简单粘蛋白糖抗原,sTn即为其中的一种[2].

抗人F蛋白单克隆抗体的制备和鉴定

F蛋白是存在于哺乳动物肝细胞质中的一种水溶性不稳定的单链蛋白质,相对分子质量(Mr)为44000.正常人肝组织中大约含F蛋白274mg/g[1,2],而血清中仅含0.2mg/L,提示血清F蛋白作为判断肝损伤程度的可能性.为对F蛋白进行深入研究,并提高对其检测的灵敏度,1995年以来,我们先后制备了3株抗人F蛋白的单克隆抗体(mAb),并进行了初步鉴定.

抗人肝癌mAbHAb18F(ab′)2半成品的制备与质量控制

目的制备符合人用标准的抗人肝癌mAbHAb18F(ab′)2片段.方法用胃蛋白酶消化经硫酸铵盐析的腹水抗体,然后在快速蛋白液相色谱(FPLC)上用Phenyl-SepharoseHP疏水柱纯化并进行质检.结果经Phenyl-SepharoseHP疏水柱纯化后,F(ab′)2片段的纯度可达98.8%;回收率大于50%;免疫活性为1∶8000;细菌、热原质检测均呈阴性.结论本制备工艺周期短、易于质控,适宜进行中试放大及半成品生产.

血清CA125及CA19-9水平诊断子宫内膜癌的价值

CA125是卵巢上皮性癌的相关抗原,作为卵巢癌的肿瘤标志物已被广泛应用于临床诊断、化疗疗效观察和疾病复发的监测[1],尤其对尚缺乏理想肿瘤标志物的子宫内膜癌可协助诊断.为此,我们检测了子宫内膜癌患者血清CA25及CA19-9的含量,以探讨子宫内膜癌评估和监测的价值与临床预后因素的关系.

肝癌细胞稳定转染B7.1后的免疫学特性

目的探讨赋予肝癌细胞第二信号分子B7.1、增强癌细胞与淋巴细胞之间的识别与激活作用,从而达到增强淋巴细胞对肝癌细胞的杀伤或抑制作用.方法利用逆转录方法,转染B7.1分子至包装细胞系PA317.筛选获得高滴度的克隆后,以病毒上清感染肝癌细胞,使其表达B7.1分子,后以LDH释放法测定LAK细胞的细胞毒活性.结果肝癌细胞可稳定表达B7.1分子,阳性率达94.3%,未转染的细胞无表达;其所诱发的LAK细胞的细胞毒活性明显强于未转染的肝癌细胞组(P∨0.01).结论 B7.1分子在淋巴细胞与癌细胞之间的识别过程中起着重要作用,可介导淋巴细胞对癌细胞的粘附和识别,从而增强淋巴细胞的杀伤作用.这一结果可为今后进一步深入研究B7.1的作用机制,以及与其它细胞因子、粘附分子的相互作用打下基础.

白介素-1受体相关激酶-2调控白介素-1诱导的NF-κB活化

目的研究白介素-1(IL-1)受体相关激酸-2(IRAK-2)在IL-1诱导NF-κB活化中的作用.方法分别以逆转录PCR法和Western杂交法,检测lipofectin介导的反义IRAK-2寡核苷酸转染的人脐静脉内皮细胞中,IRAK-2mRNA和蛋白表达水平.用夹心ELISA法检测NF-κB的活化.结果反义IRAK-2寡核苷酸可阻断IRAK-2mRNA的翻译,从而抑制IRAK-2蛋白的表达,抑制率达45%;反义IRAK-2寡核苷酸抑制IL-1诱导的NF-κB活化,具有剂量和时间依赖性,3μg与8h时的抑制效果好.结论 IRAK-2 可调控IL-1诱导的NF-κB活化.

PTA1参与活化内皮细胞和淋巴细胞间粘附的形态学观察

血小板T细胞活化抗原1(platelet and T cell activation antigen1,PTA1)是1997年基因克隆的新分子,主要表达于血小板、活化T细胞和NK细胞表面,参与血小板的凝集、CTL的分化和NK细胞的杀伤等功能[1].

鼻咽癌抗独特型抗体诱导的体液和细胞免疫应答

目的探讨抗独特型抗体(Ab2)2H4和5D3模拟抗原诱导免疫应答的能力.方法用Ab2免疫Balb/c小鼠获得抗血清,以ELISA检测其Ab3,WesternBlot分析其识别抗原的分子质量.用迟发型超敏反应(DTH)和淋巴细胞增殖试验,检测Ab2诱发细胞免疫反应的能力.结果 2H4,5D3免疫同系动物产生的含有抗抗独特型抗体(Ab3)的抗血清,可特异性地与靶细胞结合.FC2(Ab1)和经2H4免疫的Ab3可识别相对分子质量(Mr)相同约68000的抗原,且不同于HNL5(Ab1)和5D3免疫的Ab3所识别的抗原(Mr80000).在DTH试验中,所致小鼠足垫肿大的程度,2H4和5D3实验组均显著高于对照组.而在淋巴细胞增殖试验中,Ab2免疫鼠脾T细胞在体外对靶细胞或Ab2的再次刺激呈现明显的细胞增殖反应,而无关肿瘤细胞或抗体的刺激则不能引起细胞增殖.结论抗独特型抗体2H4和5D3具有鼻咽癌相关抗原的内影像,能模拟不同分子质量的鼻咽癌相关抗原诱导体液和细胞免疫应答.

扁桃体细胞的表型及其自然杀伤功能

目的比较腭扁桃体细胞(PTC)与外周血单个核细胞(PBMC)的表型,观察IL-2刺激前后PTC的杀伤活性,探讨扁桃体的免疫功能.方法用流式细胞仪分别检测扁桃体与PBMC表面CD3,CD4,CD8,CD20,PTA1及9.1C3的表达情况.用4h51Cr释放实验检测静止时及IL-2刺激后PTC中NK细胞杀伤K562活性的改变.结果 PTC中CD20的表达率为71.2%,PBMC为15.5%,且PTC中的平均荧光强度(MFI)明显高于PBMC.静止的扁桃体细胞杀伤功能非常低,经IL-2刺激后杀伤功能显著提高,效靶比为200∶1时达到61.5%.CD3阳性率在PTC和PBMC中分别为32.8%和57.7%;CD4/CD8的比值分别为6.97和1.11.两种新分子血小板T细胞活化抗原1(PTA1)和9.1C3在扁桃体中均有表达.结论扁桃体单个核细胞中B细胞占多数,而且CD20的表达密度明显高于外周血B细胞;在T细胞中以CD4+细胞为主;IL-2活化后PTC有较高的自然杀伤活性;与CTL和NK细胞相关的膜标记PTA1和9.1C3有表达.

HSP90β反义核酸载体转染细胞HSP90β蛋白的表达

目的了解HSP90β反义核酸转染细胞中HSP90β蛋白的表达.方法通过lipofectamine介导将HSP90β反义核酸重组子pcDNA-HSP90转染人胃癌细胞系SGC7901、人胃癌多药耐药细胞系SGC7901/VCR、人肝癌细胞系HCC7402及人食管癌细胞系Ec109.经用G418进行筛选,对筛选出的阳性克隆用Western blot检测HSP90β蛋白的表达.结果 pcDNA-HSP90转染人胃癌细胞系SGC7901,人胃癌耐药细胞系SGC7901/VCR,人肝癌细胞系HCC7402及人食管癌细胞系Ec109后,用G418筛选出的阳性克隆,分别被命名为:AH-SGC7901,AH-SGC7901/VCR,AH-HCC7402及AH-Ec109.Westernblot检测结果表明,AH-SGC7901,AH-SGC7901/VCR,AH-HCC7402及AH-Ec109表达的HSP90β蛋白低于其亲本细胞.结论 HSP90β反义核酸可封闭HSP90βmRNA,使pcDNA-HSP90转染的细胞AH-SGC7901,AH-SGC7901/VCR,AH-HCC7402及AH-Ec109表达的HSP90β蛋白减少,为研究HSP90下调对肿瘤细胞生物学活性的影响提供了实验材料.

9.1C3分子对人NK细胞和T细胞细胞毒作用的抑制效应

目的探讨9.1C3分子是否作为抑制型受体调节NK细胞和T细胞的杀伤功能.方法用抗CD56抗体和羊抗鼠IgG免疫磁珠分离混合淋巴细胞培养中活化的淋巴细胞,分选CD56+细胞和CD56-细胞分别作为效应细胞.采用重导向杀伤实验(redirected killing assay,RKA)观察抗9.1C3抗体对效应细胞杀伤小鼠肥大细胞瘤细胞P815作用的影响.结果发现人NK细胞和T细胞对P815细胞均有一定的杀伤作用,在效靶比为4∶1,2∶1和1∶1时,NK细胞和T细胞的杀伤率分别为:6.4%,3.4%,1.1%和21.2%,16.7%,6.5%.用抗CD16和抗CD3抗体分别刺激NK细胞和T细胞时,它们对P815细胞的细胞毒作用显著增强;在相同的效靶比例,它们对P815的杀伤率分别为:47.1%,32.2%,19.1%和64.4%,50.3%,39.5%.但用抗9.1C3抗体刺激效应细胞时,不仅NK细胞的杀伤作用完全被抑制,CD16介导的NK细胞的杀伤作用也被明显下调,其杀伤率仅为18.5%,9.7%和7.0%;但对CD3介导的T细胞的杀伤作用只轻度被抑制.结论 9.1C3分子可能是一种新的抑制型杀伤细胞受体,对NK细胞和T细胞细胞毒作用的负调节可能有所不同.

IFN-γ诱导人正常皮肤表达银屑病皮损的表型

目的观察IFN-γ能否在正常皮肤诱导表达银屑病皮损的病理表型,以及这一过程中IFN-γ和表皮内源性白细胞介素-1(IL-1)系统的相互影响.方法采用跨膜器官培养和多种细胞因子刺激培养的皮肤,用免疫染色方法分析比较一系列代表银屑病免疫病理特征的多种蛋白分子的表达情况.结果 IFN-γ可诱导培养的正常皮肤表达角蛋白17,I型转谷酰胺酶(transglutaminasetypeI),细胞间粘附分子-1(ICAM-1)和HLA-DR.IL-1受体拮抗剂(IL-lra)或抗IL-1抗体,均可显著抑制IFN-γ诱导的角蛋白17和I型转谷酰胺酶表达,而对IFN-γ诱导ICAM-1和HLA-DR的表达则无抑制作用.结论 IFN-γ可诱导人正常皮肤表达银屑病皮损的免疫病理表型,其中对角蛋白17和I型转谷酰胺酶的表达可通过表皮IL-1系统发挥影响.这项研究揭示,Th1型细胞因子(IFN-γ)和表皮IL-1系统在银屑病皮损形成中具有内在的联系.

过敏性紫癜患儿血清TNF-α,IL-6和IL-8变化的意义

TNF-α,IL-6和IL-8是具有多种生物学活性的细胞因子,也是重要的炎症因子,可参与许多变态反应性疾病和自身免疫性疾病的发病机制.我们对68例过敏性紫癜(HSP)患儿血清TNF-α,IL-6和IL-8水平的变化及相关性进行了研究,旨在探讨它们在HSP的毛细血管炎和过敏性紫癜性肾炎(HSPN)形成中的作用.

带状疱疹患者可溶性IL-2R和T细胞亚群的变化

带状疱疹是水痘-带状疱疹病毒引起的一种急性疱疹性皮肤病,患者常伴有细胞免疫功能的低下.我们检测了带状疱疹患者血清sIL-2R及T细胞亚群(CD3+,CD4+和CD8+),旨在探讨带状疱疹患者的细胞免疫功能状态.

整合素β1与胶质瘤侵袭性的相关性研究

目的探讨整合素β1在人脑胶质瘤细胞粘附和侵袭过程中的作用.方法用免疫组化SABC法,检测整合素β1在人脑胶质瘤细胞SHG44中的表达;用细胞粘附实验检测其在SHG44细胞粘附中的作用.结果整合素β1可在人脑胶质瘤细胞SHG44中表达,抗整合素β1抗体可明显抑制人脑胶质瘤细胞SHG44对胶原蛋白I和胶原蛋白IV细胞外基质蛋白的粘附.结论整合素β1在人脑胶质瘤细胞的粘附和侵袭过程中必不可少,抑制其在人脑胶质瘤细胞中的表达,有助于阻止胶质瘤细胞的侵袭性生长.

DNA测序中去除过量链终止剂的方法比较

美国Perkin-Elmer(PE)公司生产的373A型DNA自动测序仪的原理,是通过测序反应生成荧光素标记的寡核苷酸,然后进行电泳分离,计算机依据荧光素颜色的不同自动进行实时检测、识别,并分析出所测模板中的每一个碱基.

联用两种检测抗结核杆菌抗体的方法诊断结核病

目前,通过检测抗结核杆菌的抗体(IgG)诊断结核病时有报道,已商品化的试剂盒也较多.采用的方法包括:EIA、胶体金标记的免疫层析法和胶体金标记的渗滤法等,采用的抗原也各不相同.这些方法单独使用时,其检测的特异性和灵敏度都有些缺点.为了探讨较理想的结核病的辅助诊断方法,我们将包被抗原为结核杆菌外膜蛋白的金标渗滤试剂和包被抗原为PPD的快速ELISA诊断试剂,两种检测抗结核杆菌抗体的方法联合应用,观察了其对结核病的诊断价值.

重链可变区基因随机CDR3ScFv噬菌体抗体库的构建及筛选

目的构建VH基因随机CDR3ScFv噬菌体抗体库,并筛选抗HFRS病毒NP抗原的噬菌体抗体.方法采用随机引物PCR法扩增抗HFRS病毒mAb1A8的VH基因,并与1A8VL基因共同克隆入噬菌粒表达载体pHEN1后,构建VH基因随机CDR3ScFv基因库.继用辅噬菌体VCSM13超感染后得到噬菌体抗体库,然后用HFRS病毒抗原进行筛选.随机挑取筛选的菌落超感染,用夹心ELISA检测超感染上清.结果获得库容量约为107噬菌体抗体库.夹心ELISA的结果表明,筛选出的噬菌体抗体可与HFRS病毒NP抗原特异性结合.结论成功地构建了库容量较高的ScFv噬菌体抗体库,并获得可与HFRS病毒NP抗原结合的噬菌体抗体.

流式细胞仪国产鞘液的研制

流式细胞仪(FCM)已成为当代分析细胞学领域检测细胞分子特征的主要工具之一,在医学、生物学和肿瘤学等学科中得到广泛应用[1,2].

参考文献类型及其标识