细胞与分子免疫学杂志
Chinese Journal of Cellular and Molecular Immunology 세포여분자면역학잡지
- 主管单位： 中国免疫学会；第四军医大学
- 主办单位： 陕西省免疫学会,中国免疫学会
- 影响因子： 0.81
- 审稿时间： 1-3个月
- 国际刊号： 1007-8738
- 国内刊号： 61-1304/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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过表达泛素偶联酶E2C对293T细胞增殖的影响
目的:构建稳定过表达人类泛素偶联酶E2C (uBE2C)的293T人胚肾细胞株,初步探讨其对293T细胞增殖的影响.方法:采用脂质体法将已成功构建的pcDNA3.1(-)/UBE2C真核表达质粒转入293T人胚肾细胞株中,随后经G418筛选4周,得到阳性克隆细胞株;用Western blot技术检测并鉴定UBE2C基因在293T细胞中的表达情况;用MTT法检测UBE2C对293T细胞增殖的影响.结果:Western blot检测显示,转pcDNA3.1(-)/UBE2C组293T细胞的UBE2C蛋白表达水平明显高于转pcDNA3.1(-)组(P＜0.01).MTT法检测结果显示转pcDNA3.1(-)/UBE2C组293T细胞的增殖速度明显快于转peDNA3.1(-)组(P＜0.01).结论:成功建立稳定过表达UBE2C的293T细胞株,过表达UBE2C可促进293T细胞的增殖.
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人sPD-1-Fc融合蛋白的构建及Cos-7细胞的表达
目的:构建重组人pSG5-Fc-hPD-1嵌合基因质粒,并在真核细胞进行表达,得到分泌性的sPD-1-Fc融合蛋白.为PD-1的生物学活性研究奠定基础.方法:从GenBank里查到人PD-J胞外区的基因序列,设计特异性引物,以人淋巴细胞cDNA为模板PCR扩增得到人PD-1胞外区片段.以pSG5-Fc真核表达质粒为载体,构建得到重组质粒pSG5-Fc-hPD-1.脂质体瞬时转染猴肾成纤维细胞(Cos-7),收取72 h的细胞上清.用Western blot鉴定,并与原核表达的人PD-L1蛋白免疫共沉淀检测生物学活性.结果:通过EcoR I/BamH I双酶切及测序证实构建的重组质粒pSG5-Fc-hPD-1正确.重组质粒在Cos-7/细胞中高效表达并分泌融合蛋白sPD-1-Fc到细胞上清,应用Western blot测定到上清中的融合蛋白,且得到的sPD-1-Fc融合蛋白具有与PD-L1结合的生物学活性.结论:通过基因重组方法在真核细胞里得到高效分泌型表达的sPD-1-Fc重组蛋白,为研究PD-1生物学活性奠定了实验基础.
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突变AS3Tα-synuclein基因核输入信号和核输出信号真核载体的构建及表达分析
目的:构建真核表达载体pRK5-A53T-SNCA-NLS、pRK5-A53T-SNCA-NES,瞬时转染SH-SY5Y细胞.方法:PCR 扩增法获得含有Sal I和Not I的目的片段A53T-SNCA-NLS、A53T-SNCA-NES,Sal I、Not I双酶切载体pRK5,线性pRK5与目的片段经ligation high连接,酶切、PCR鉴定重组质粒pRK5-A53T-SNCA-NLS、pRK5-A53T-SNCA-NES.重组质粒通过Lipofactamine2000转染SH-SY5H细胞,免疫荧光法鉴定瞬转细胞.结果:真核表达载体pRK5-A53T-SNCA-NLS、pRK5-A53T-SNCA-NES构建成功,NLS、NES能介导突变基因A53T-SNCA翻译的α-synuclein蛋白在核内表达或胞质表达.结论:基因A53T-SNCA翻译的突变α-synuclein蛋白核内高表达或胞质高表达可能是家族性帕金森氏病发病机制中关键因素之一.
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神经肽Y促进3T3L1前脂肪细胞的增殖和分化
目的:观察神经肽Y对3T3L1前脂肪细胞增殖和分化的影响,并对其机制进行初步探讨.方法:3T3-L1细胞由3-异丁基-1-甲基黄嘌呤(3-isobutyl-1-methylxanthine,IBMX)、胰岛素和地塞米松联合诱导分化,2 d后将细胞分为空白对照组(未加任何诱导剂组)、经典诱导组(胰岛素诱导)和MPY干预组(10-8、10-9、10-10mol/L NPY).培养的第7、12天用相差显微镜观察各组细胞形态的变化,培养第12天用油红O染色观察脂肪细胞分化程度.MTT检测细胞增殖.Western blot检测脂肪细胞分化相关基因过氧化物体增殖剂活化受体-γ(peroxisome proliferator-activated receptor gamma,PPAR-γ)、CAAT/增强子结合蛋白-α(CCAAT/enhancer-binding protein-α,C/EBP-α,)蛋白的表达.结果:10-8mol/L NPY 能促进3T3-L1细胞的分化.10-9mol/L NPY,10-8mol/L NPY 均能促进3T3-L1细胞增殖.10-8mol/L NPY增加C/EBP α、PPARγ的表达.结论:NPY促进3T3L1前脂肪细胞的增殖和分化,其机制可能与上调PPARγ、C/EBP α的表达有关.
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hTERT多表位肽致敏mDC诱导CTL对HLA-A24+肿瘤细胞的特异性杀伤作用
目的:研究人工合成人端粒酶逆转录酶(hTERT)多表位混合肽经髓样树突状细胞(mDC)提呈后,诱导特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)对HLA-A24+肿瘤细胞的免疫杀伤效应.方法:人工合成四分支的树状串联hTERT表位肽(MAPs)及其各单表位多肽.取HLA-A24+健康志愿者的外周血,用免疫磁珠分选并培养mDC.用尼龙毛柱纯化T淋巴细胞并培养.以各表位肽致敏mDC后,诱导特异性CTL增殖,并以表达hTERT且以HLA-A24+肿瘤细胞株SMMC-7721及HLA-A24-肿瘤细胞株SKOV3为靶细胞行杀伤实验.用ELISA法检测不同时间点培养基上清液中IL-12、TNF-α的分泌量;用流式细胞术检测CTL对肿瘤细胞的杀伤效应.结果:以源于hTERT的T淋巴细胞表位I540(ILAKFLHWL)、V461(VYGFVRACL)及L766(LTDLQPYMRQFVAHL)合成4分支MAPs多肽及各单表位混合多肽.以人工合成的hTERT 多表位混合肽致敏mDC后,能刺激CTL增殖,并可诱导对HLA-A24+肿瘤细胞株SMMC-7721的特异性杀伤作用,且MAPs多肽较单表位混合多肽的致敏效果更具显著性(P＜0.05).结论:以人工合成的hTERT多表位混合肽致敏mDC 能激活同源淋巴细胞(CTL),可特异性杀伤HLA-A2A+的肿瘤细胞,在肿瘤免疫治疗中具有重要的意义.
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不同结构形式的HBX蛋白对其在肝细胞癌HepG2中分布的影响
目的:本研究选用不同的真核表达载体,分别克隆并构建了包含HBX基因或其与GFP以不同方式融合表达的重组质粒,探究不同结构的HBX蛋白对其在细胞内定位的影响.方法:以本实验室构建好的pcDNA3.0-HBX质粒为摸板,采用PCR方法扩增Flag-HBX,克隆至pMD-18T载体中,测序正确后,分别亚克隆至不同载体,构建重组质粒pFlag-HBX-IRES2-EGFP,pEGFP-C3-Flag-HBX,pFIag-HBX-EGFP-N3,鉴定正确后瞬时转染肝癌HepG2细胞,通过间接免疫荧光染色显示HBX蛋白的细胞内定位和分布.结果:成功构建出三种Flag-HBX的真核莺组质粒;不同重组质粒转染HepG2细胞后,间接免疫荧光显示与GFP不同融合形式的HBX蛋白在细胞内存在不同的分布特征.结论:为研究HBX在肝癌发生发展中的作用提供了有意义的实验依据,尤其是对体外细胞转染结果的解释提供了借鉴.
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病毒受体拮抗性诱获配体H9的体外活性及其对人趋化因子受体CX3CR1的作用
目的:来源于US28受体N末端的诱惑配体多肽H9,以阐明H9的体外活性及其对细胞表面趋化因子受体CX3CR1内化及调变研究,探讨H9对人趋化因子受体CX3CR1的作用及影响.方法:立足US28的广谱趋化因子结合活性,得到趋化因子受体拮抗性多肽H9.采用趋化抑制实验检测多肽对生理性趋化因子引起的细胞迁移活性的影响,流式细胞术方法(FCM)检测细胞内钙离子浓度变化,利用激光共聚焦显微镜和流式细胞仪分别定性、定量检测CX3CR1的内化,以阐明H9的生物活性及其对人源受体CX3CR1的作用及其机制.结果:多肽H9可以阻断受体结合生理性趋化因子形成的趋化作用,本身不引起趋化运动,不影响胞内信号转导和细胞自然活性;200ng/mL H9在给药后的初50min钟内能使细胞表面受体CX3CR1内化达到大值,内化率约为70%,第100分钟,内化到细胞内的CX3CR1逐渐再循环到细胞表面.证明了H9能引起细胞表面受体CX3CR1内化,内化的受体部分再循环到细胞表面.结论:H9是一种趋化因子受体抑制短肽,影响人受体CX3CR1的内化,但内化后受体再循环到细胞表面,对人受体CX3CR1生理功能没有明显影响,可以作为特异性抗病毒多肽.
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口服Ⅱ型胶原蛋白对血清抗体和派氏集结细胞因子表达的影响
目的:探讨口服Ⅱ型胶原蛋白(cⅡ)对派[伊尔]氏集结(PP结)的形态学、细胞因子表达水平和血清特异性IgG、IgA、IgM含量的影响.方法:连续10 d给小鼠口服不同剂量的CⅡ,第11天和第21天用佐剂或CⅡ进行免疫,分别于第11天、第21天和第31天采集血液和PP结.PP结经HE染色后,镜下观察其增生的情况.用荧光实时定量RT-PCR法,检测PP结中IL-17、TNF-α、IFN-γ和TGF-β1 mRNA 的水平.采用ELISA法检测血清抗CⅡIgG、IgA、IgM的水平.结果:口服CⅡ10 d后,PP结增生活跃,高剂量组可见清晰的帽状结构;血清中出现IgA,未见IgG和IgM水平增加;IL-17、TNF-α、IFN-γ mRNA的表达受到抑制.以CⅡ初次免疫后,实验组IgA、IgM、IL-17的水平均低于对照组(P＜0.05或P＜0.01),TGF-β1的水平显著增加(P＜0.05).以C Ⅱ加强免疫后,高剂量组IgA的水平显著增加(P＜0.05),实验组IgM的水平仍受到抑制(P＜0.05或P＜0.01),TGF-β1的水平高于对照组(P＜0.05).以佐剂免疫时PP结中细胞因子的表达与CⅡ免疫时相似,未见血清抗CⅡ IgG、IgA、IgM 水平的变化.结论:口服CⅡ能使血清中产生特异性IgA,抑制PP结IL-17、TNF-α、IFN-γ的基因表达,对CⅡ免疫后IgA、IgM的产生和IL-17 mRNA的表达具有一定的抑制作用.以上结果表明,血清特异性抗体的水平和细胞因子表达的变化在口服CⅡ诱导免疫耐受对类风湿性关节炎的治疗作用方面发挥着重要的作用.
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GITRL在内毒素诱导的Kupffer细胞凋亡中的作用研究
目的:探讨糖皮质激素诱导的肿瘤坏死因子相关蛋白配体(GITRL)在脂多糖(LPS)诱导的Kupffer细胞(KCs)凋亡中的作用.方法:分离BAI,B/c小鼠的KCs,转染对照siRNA或者GITRL siRNA 24 h后,分四组培养,分别为对照(Control)组:仅加入培养液;地塞米松(Dex)组:加入Dex 10 μmol/L;LPS组:加入LPS 1 mg/L;LPS+Dex组:加入LPS 1 mg/L和Dex 10 μmol/L.24 h后用免疫细胞化学法检测GITRL蛋白的表达,应用Annexin V/PI双染标记和流式细胞术检测KCs的凋亡率.结果:LPS刺激增加了KCs GITRL 的表达(P＜0.05),然而地塞米松处理降低了LPS诱导的GITRL表达.LPS刺激诱导了KCs的凋亡,但是沉默GITRL 基因或者地塞米松处理抑制了LPS诱导的凋亡(P＜0.05).结论:LPS可以诱导小鼠KCs的凋亡,其作用可能依赖于GITRL信号的转导.
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Nrf2在不同肝癌细胞株中的表达及定位
目的:观察红系衍生的核因子2相关因子2(Nrf2)在肝癌细胞株(HepG2、Hep3B、SMMC-7721)中的表达及分布情况.方法:应用流式细胞术测定Nrf2阳性细胞的比例,激光共聚焦观察Nrf2在3种细胞株中的定位情况,通过Wostern blot测定Nrf2在不同细胞胞质及胞核中的表达差异.结果:流式细胞术测定Nd2在HepG2、Hep3B和SMMC-77213种细胞中表达率分别为99.39%、99.94%和99.98%,激光共聚焦观察到Nd2在3种肝癌细胞株胞质胞核中均有分布,但不同细胞的分布规律各不相同,Western blot结果显示:Nrf2在HepG2中以胞质分布为主,在Hep3B中胞质、胞核分布相当,在SMMC-7721中以胞核分布为主.结论:Nrf2在3种肝癌细胞株(HeqG2、Hep3B、SMMC-7721)中均有表达,且在胞质胞核中均有分布,但在不同细胞中的分布规律各不相同,为下一步探讨肝癌细胞耐药机制的相关研究奠定了基础.
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RNA干扰对肝癌细胞株SMMC7721中STAT3基因表达的抑制作用
目的:研究小片段干扰RNA(siRNA)对肝癌细胞系SMMC7721的化疗敏感性.方法:根据信号转录及转录活化因子3(STAT3)基因设计siRNA序列,通过经脂质体LipofectamineTM2000以siRNA转染SMMC7721细胞.用实时定量PCR检测SMMC7721细胞中STAT3基因表达的抑制.将细胞以10 μmol/L 5-氟脲嘧啶(5-Fu)作用后,用MTT比色法检测细胞生长的抑制率.结果:成功地构建针对STAT3基因的siRNA表达载体.实时定量PCR检测结果显示,SMMC7721细胞经特异性siRNA转染后,STAT3基因的表达受到抑制.RNA干扰(RNAi)能特异、有效地抑制SMMC7721细胞中STAT3基因的表达.MTT比色法检测结果显示,经siRNA作用后SMMC7721细胞抑制率明显增加.结论:设计合成的siRNA表达载体能有效抑制STAT3基因在肝癌细胞系SMMC7721中表达,增强其对化疗药物5-FU的敏感性,为肿瘤的生物学治疗提供了实验依据.
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Th17细胞及其分泌的IL-17在自身免疫性溶血性贫血患者中的变化及意义
目的:观察辅助性17 T细胞(Th17)及其分泌的细胞因子IL-17在自身免疫性溶血性贫血(AIHA)患者中的变化并探讨其临床意义.方法:应用流式细胞术(FCM)检测治疗前与糖皮质激素治疗后AIHA患者和健康人外周血中Th17细胞的比率,同时用ELISA法检测血浆中IL-17的水平.结果:治疗前AIHA患者外周血中Th17细胞比率和血浆中IL-17的水平分别为(2.78±0.59)%和(126.4±11.6)ng/L,较健康对照[分别为(0.59±0.15)%和(52.3±4.8)ng/L]显著增高(P＜0.01);治疗后,外周血中Th17细胞比率和血浆中IL-17的水平[分别为(1.05±0.28)%和(78.5±6.4)ng/L]较治疗前下降(P＜0.01).结论:AIHA患者外周血中Th17细胞的比率及其IL-17的水平均高,用糖皮质激素治疗后可下调Th17细胞的比率及IL-17的水平,有效地缓解AIHA.
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哮喘患者外周血IgE和IL-25水平的检测分析
支气管哮喘是一种气道炎症性疾病,有众多的炎性介质和前炎症细胞等所参与.是呼吸系统疾病中一种多发病常见病.作为一种免疫调节异常的疾病已经取得了普遍的共识,为了进一步了解免疫球蛋白E(IgE)和白细胞介素25(IL-25)在支气管哮喘患者外周血中分布水平及其相互联系,现将我科住院支气管哮喘患者外周血中IgE和IL-25水平进行检测,以探讨其临床意义.
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正畸力作用下人龈沟液MMP-9及TIMP-1的水平变化及意义
目的:探讨正畸力作用下龈沟液内基质金属蛋白酶-9(MMP-9)及金属蛋白酶组织抑制因子-1(TIMP-1)水平的动态变化及其临床意义.方法:选择口腔科门诊就诊接受正畸治疗的患者20例.随机分成2组(A、B组),每组10人.分别施加100 g、250 g的远中移动的初始力,在加力前0周及加力后1、2、3、4、5、6、7周收集两组患者龈沟液(GCF),应用ELISA法测定GCF中MMP-9和TIMP-1的含量.结果:A 组患者GCF中MMP-9浓度在加力后均持续增高,于3周时升至高峰,4周开始逐渐下降,7周时基本恢复到基线水平;TIMP-1的浓度在加力后1、2、3周均出现增高,4周时开始下降,5周时停止下降,6、7周均维持在高于加力前的水平.B 组患者GCF中MMP-9浓度在加力前后未出现明显变化,无显著性差异(P＜0.05);TIMP-1的浓度在加力后1周时已出现显著增高,于3周时升至高峰,4至7周持续维持在高水平.A组加力后各时间点GCF中MMP-9浓度明显高于B组(P＜O.05);而TIMP-1的浓度则明显低于B组(P＜0.05).结论:MMP-9和TIMP-1在维持牙周组织健康及促进ECM的改建过程中具有重要的调节作用.
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脂多糖刺激下大鼠腹膜间质细胞IL-18、IL-6的表达和氧化应激的影响
目的:研究脂多糖刺激下大鼠腹膜间皮细胞(BPMC)IL-18、IL-6和氧化应激产物丙二醛(MDA)的表达.方法:原代培养RPMC,用不同浓度脂多糖(1、10、100 mg/L)刺激RPMC 6 h;10 mg/L脂多糖刺激RPMC 3、6、12、24 h.用real time-PCR法检测IL-18mRNA的表达,ELLSA法检测细胞上清液中IL-18和IL-6的蛋白水平,硫代巴比妥酸法检测细胞中MDA的含量.结果:与正常对照组比较,脂多糖刺激下RPMC IL-18、IL-6和MDA的表达明显增加(P＜0.05),且呈浓度依赖性;随着刺激时间的延长,上述指标呈递增趋势,IL-18于12 h达高峰.结论:脂多糖刺激下RPMC促炎症因子IL-18、炎症因子IL-6及氧化应激产物MDA的表达均增加,引起持续放大的炎症氧化反应,损伤腹膜导致超滤失败.
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巴戟天多糖对梗阻性黄疸大鼠T细胞免疫平衡影响研究
目的:研究巴戟天多糖对梗阻性黄疸大鼠T细胞免疫平衡的影响,为临床用药提供依据.方法:将30只Wistar 大鼠随机平均分成3组,每组10只,假手术组(S组),胆总管结扎手术组(D组),巴戟天多糖注射+胆总管结扎组(B 组).手术15 d后处死大鼠,进行穿刺心脏取血,用流式细胞术检测各标本血液中的T淋巴细胞(CD4+、CD8+)分类及胆红素的含量.结果:胆总管结扎后10 d,大鼠血胆红素升高显著,CD4+减少,CD4+/CD8+下降;巴戟天多糖注射+胆总管结扎组的CD4+、CD4+/CD8+下降不明显,与胆总管结扎组比较有统计学差异(P＜0.01).结论:巴戟天多糖对梗阻性黄疸大鼠T细胞免疫功能具有改善作用,从而为临床上巴戟天的合理用药提供实验依据.
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多囊卵巢综合征患者卵巢颗粒细胞凋亡基因的研究
目的:探讨多囊卵巢综合征(PCOS)患者卵巢颗粒细胞凋亡相关基因表达的差异性.方法:将PCOS患者和对照组各6例共分为3组,应用凋亡基因芯片技术,以体外受精-胚胎移植后的PCOS患者和对照组取卵后剩余的卵泡颗粒细胞为研究对象,分别检测其凋亡基因,并对基因芯片数据进行处理和生物信息学分析.结果:PCOS 3组中均明显差异表达的凋亡基因有18个,其中11个上调,7个下调,上调显著基因有Mcl-1(myeloid cell leukemia-1)基因和肿瘤坏死因子受体超家族基因.结论:PCOS患者卵巢颗粒细胞部分凋亡基因表达紊乱,提示颗粒细胞在PCOS发病中起重要的作用.
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缺血性脑血管病患者颈动脉粥样硬化斑块类型与血清MMP-8、TIMP-1表达的相关性研究
目的:探讨缺血性脑血管病患者颈动脉粥样硬化斑块的类型与血清基质金属蛋白酶-8(MMP-8)及其抑制剂TIMP-1的关系.方法:选择191例缺血性脑血管病患者及50例健康查体者,所有研究对象均行颈动脉彩色多普勒超声检查,并采用ELISA法检测血清MMP_8、TIMP-1的水平.结果:脑梗死、腔隙性脑梗死及短暂性脑缺血发作患者血清MMP-8水平均高于对照组,而TIMP-1水平均低于对照组,具有显著统计学意义(P＜0.01).不稳定斑块组的MMP-8水平高于稳定斑块组和颈动脉内膜中层厚度(IMT)增厚组,稳定斑块组MMP-8水平高于IMT增厚组(P＜0.05);而不稳定斑块组的TIMP-1水平低于稳定斑块组和IMT增厚组,稳定斑块组TIMP-1水平低于IMT增厚组(P＜0.05).血清MMP-8水平与IMT值、Crouse积分均呈正相关(r=0.65,0.71,P＜0.05);血清TIMP-1水平与IMT值、Crouse积分均呈负相关(r=-0.45,-0.39,P＜0.05).结论:血清MMP-8及其抑制剂TIMP-1水平与缺血性脑血管病患者颈动脉粥样硬化斑块不稳定性密切相关.
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七氟烷和丙泊酚麻醉对肺癌患者围术期细胞因子平衡的影响
目的:探讨七氟烷单纯吸入麻醉和丙泊酚全凭静脉麻醉对肺癌患者围术期细胞因子平衡的影响.方法:选择90例择期开胸行单纯性肺叶切除术的肺癌患者,随机分为两组:A组采用七氟烷单纯吸入麻醉;B组采用丙泊酚全凭静脉麻醉,每组45例.分别于麻醉诱导前即刻(T0)、单肺通气开始前即刻(T1)、单肺通气结束前即刻(T2)、手术关胸后即刻(T3)、术后24 h(T4)5个时间点抽取两组患者的静脉血,采用双抗夹心ELISA法测血清中细胞因子IL-6、IL-8、IL-10及TNF-α浓度.结果:(1)两组血清IL-6浓度在T1时均明显上升,与术前水平相比均有显著差异(P＜0.05),T2及T3时IL-6水平继续升高,至T4时有所下降,但仍维持在一个较高的水平,与术前相比差异有统计学意义(P＜0.05).组间比较,B组T1和T2时IL-6浓度低于A组(P＜0.05).(2)两组血清IL-8浓度在T1、T2及T3时进行性上升,与术前水平相比均有显著差异(P＜0.05).T4时两组血清IL-8浓度较术中明显降低,但与术前比较仍有显著差异(P＜0.05).组间比较,B组在T1、T2及T3时IL-8浓度低于A组(P＜0.05).(3)两组血清IL-10浓度在T1时开始明显上升,与术前水平相比有显著差异(P＜0.05).T2及T3时IL-10水平继续升高,至T4时两组血清IL-10浓度较术后有所回落,但仍维持在较高水平.组间比较,B组T1到T4时IL-10浓度明显高于A组(P＜0.05).结论:丙泊酚全凭静脉麻醉可减轻肺癌患者围术期不良炎症反应,更有利于围术期细胞因子平衡的维持,其效果优于七氟烷单纯吸入麻醉.
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ciglitazone对巨噬细胞CD36表达及胆固醇流入的影响
目的:观察过氧化物酶体增殖物激活型受体γ(PPARγ)的激动剂ciglitazone对THP-1巨噬细胞CD36表达及细胞胆固醇流入的影响.方法:以THP-1巨噬细胞为研究对象,用50 mg/L氧化低密度指蛋白(oxLDL)分别与不同浓度的PPAγ激动剂ciglitazone(0、5、10、15 μmol/L)共同孵育THP-1巨噬细胞24 h后,采用液体闪烁计数法检测[3H]胆固醇流入,采用逆转录-聚合酶链式反应和Western blot分别检测CD36的表达.结果:oxLDL及不同浓度的ciglitazone 与THP-1巨噬细胞共孵育后,与对照组比较(20.3%),加ciglitazone的处理组胆固醇流入随着浓度的增加而依次增加,分别为28.6%、37.2%、44.3%、48.7%,细胞CD36的表达上调.结论:ciglitazone可上调THP-1巨噬细胞CD36的表达,并增加细胞胆固醇流入.
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非小细胞肺癌生存分析及预后相关因素研究
目的:探讨影响非小细胞肺癌(NSCLC)患者生存与预后因素的关系.方法:调查研究本院从2005-01/2010-09治疗的275例NSCLC患者的临床资料,并对其年龄、病理类型、临床分期、淋巴结中的微转移灶和治疗方式对预后的影响进行调查,并分析其对患者的预后因素.结果:本组患者在家族史、临床分期等因素为患者治疗后较差的生存预后因素,而治疗方式的选择为大影响因素.本组患者选用手术+化疗,化疗+放疗,单纯化疗和对症治疗4组,在生存率比较中四组患者存在统计学差异(P＜0.05).而患者的年龄、临床分期、淋巴结中的微转移灶、病理类型对患者预后的影响有统计学意义.结论:治疗方式是影响NSCLC预后的重要因素.
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原发性肝癌患者体内调节性T细胞的生成和数量增加与疾病进展相关分析
目的:观察原发性肝癌(HCC)患者外周血和肝脏CD4+ CD25+ FoxP3+ 调节性T细胞(Treg)的频率、表型和分布特点.方法:应用流式细胞术分析30例原发性肝癌患者、30例健康人的外周血或HCC组织中肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)和非肿瘤浸润淋巴细胞(NIL),Treg细胞的特点,并分析其临床意义.结果:结果表明HCC患者外周血Treg细胞(7.49±2.87)%明显高于健康对照组(4.36%±1.61%,P＜0.01);肝癌组织中Treg细胞频率(23.48%4±27.82%)明显高于癌旁组织(6.19%±3.10%,TILvs NIL,P＜0.05).此外,我们观察到TIL中CD4+ CD25low和CD4+ CD25-细胞亚群的表达FoxP3蛋白的水平显著升高.结论:在HCC患者外周血及肝脏肿瘤区Treg细胞频率均明显升高,可能与体内Treg来源增加有关,而增加的Treg通过进一步抑制宿主免疫应答而加快肝癌的临床进展.
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RUNX3依赖的维生素D3抑制肾小管上皮细胞纤维化的研究
目的:探讨维生素D3抑制肾小管上皮细胞纤维化的作用和可能的机制,为临床有效防治肾小管上皮细胞纤维化提供理论基础.方法:低氧处理后Western blot检测肾小管上皮细胞系HKC细胞中E-cadherin,α-SMA的表达.不同浓度维生素D3作用于HKC细胞,real time PCR及Western blot 检测的HKC细胞中Runx3的mRNA表达水平和蛋白表达水平.构建RUNX3基因的小干扰RNA载体并将其转染HKC 肾小管上皮细胞,经G418筛选获得稳定表达的细胞系.Western blot检测维生素D3对转染后的低氧处理的HKC细胞EMT的影响.结果:低氧处理后的HKC细胞上皮标志物Ecadherin表达显著下降,而间皮标志物α-SMA的表达显著增加,提示HKC细胞发生EMT.不同浓度的维生素D3作用HKC中Runx3的mRNA水平和蛋白水平表达逐渐增加.成功构建了RUNX3的小干扰RNA载体并将其转染HKC细胞;筛选到稳定的敲除RUNX3的肾小管上皮细胞系.结果显示,与对照组相比,维生素D3不能抑制敲除RUNX3的HKC细胞的EMT的发生.结论:维生素D3通过翻译水平正性调控RUNX3的表达进而抑制肾小管上皮细胞的EMT,从而抑制肾脏纤维化的发生.
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DC-CIK细胞协同索拉菲尼对肝癌细胞的杀伤作用
目的:观察DC-CIK共培养细胞(DC-CIK)联合索拉菲尼( sorafenib)对肝癌细胞BEL-7402的体外杀伤效应.方法:取健康人外周血单个核细胞,加入不同细胞因子促进DC及CIK细胞成熟后混合共培养.MTT法检测用药后BEL-7402细胞增殖的情况CCK8试剂盒检测DC-CIK共培养细胞联合索拉菲尼对BEL-7402细胞的体外杀伤效应,Annexin V-F ITC试剂盒检测两者联合对肝癌细胞凋亡率的影响.结果:索拉菲尼与DC-CIK细胞联合在一定浓度及效靶比时表现出对肝癌细胞的抑制作用明显增强,其中以索拉菲尼20.8 μmol/L联合DC-CIK效靶比40:1时杀伤率高,达(72.24 4-2.42)%,是DC-CIK组的1.8倍,是索拉菲尼单药组的2.13倍,是CIK 组的1.6倍(P＜0.01).索拉菲尼与DC-CIK细胞联合组诱导肝癌细胞凋亡率高,达(77.36±1.92%(P＜0.05).结论:DC-CIK共培养细胞联合索拉菲尼在体外可显著抑制肝癌细胞的生长,分子靶向治疗联合细胞免疫治疗可能成为肝癌综合治疗的方法之一.
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人脑胶质瘤组织中转化生长因子β1表达与Treg浸润的关系
目的:检测胶质瘤组织中转化生长因子β1(TGF-β1)表达,并分析其与CD4+ FOXP3+ 调节性T细胞(Treg)浸润的关系,探讨Treg浸润的临床意义.方法:采用免疫组织化学双标记的方法检测135例胶质瘤组织(WHO I 18,WHO Ⅱ45,WHO Ⅲ53,WH0Ⅳ19)、15例正常脑组织中TGF-β1、Treg (CD4+ Foxp3+)的表达.结果:胶质瘤组织中TGF-β1高表达77例,低表达58例,高表达率57.03%,正常脑组织中未见表达.胶质瘤组织中Treg细胞平均密度为2.031个/HP,正常脑组织中未见表达.胶质瘤组织中TGF-β1与Treg细胞表达呈正相关(r=0.294,P＜0.01).高级别胶质瘤组织中TGF-β1,Treg的表达明显高于低级别.胶质瘤组织中Treg细胞表达与患者年龄呈正相关而与性别、KPS评分无关.胶质瘤组织中TGF-β1表达高、低水平组患者总生存率差异有统计学意义(P＜0.05),TGF-β1高水平组患者的总生存率低于低水平组(25.97% vs 36.21%).多因素Cox回归模型分析显示TGF-β1表达、Treg细胞数量不是影响胶质瘤患者预后的独立危险因素(P＞0.05).结论:胶质瘤组织中Treg浸润可能与TGF-β1表达有关.高级别胶质瘤组织中TGF-β1,Treg的表达显著高于低级别,高表达组的总生存率显著低于低水平组,但TGF-β1,Treg不能做为影响胶质瘤生存时间的独立预后因素.
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抗胰岛素样生长因子I型受体单克隆抗体的制备及鉴定
目的:制备和鉴定抗胰岛紊样生长因子I型受体(IGF-IR)单克隆抗体(mAb),为深入研究肿瘤细胞中IGF-IR 功能及致病机制奠定基础.方法:用脂质体法将制备的重组慢病毒载体三质粒pWPXL-IGF-IR、PMD2G、PAX2共转染包装细胞293T,将上清病毒转染目的细胞NIH-3T3,通过Western blot检测稳转NIH-3T3细胞中IGF-IR的表达.将细胞株NIH3T3-IGF-IR免疫BALB/c小鼠,提取小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞Sp2/0进行杂交融合,筛选出针对IGF-IR的特异性杂交瘤细胞株,Western blot鉴定单克隆细胞株的特异性.并检测其免疫球蛋白亚类及mAb效价.结果:通过细胞融合和克隆化,筛选出1株持续分泌抗IGF-IR mAb的杂交瘤细胞株9F3.该抗体能与IGF-IR特异性结合,经鉴定该抗体属于IgG1亚类.结论:成功地制备了抗IGF-IR mAb,为研究IGF-IR在肿瘤中的生物学功能奠定了基础.
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抗人Glypican3N端融合蛋白单克隆抗体研制及特性鉴定
目的:制备抗人磷脂酰蛋白聚糖3(Glypican3,GPC3)N端蛋白的单克隆抗体(mAb),并进行特性鉴定.方法:以纯化的GPC3 N端融合蛋白免疫BALB/c小鼠,应用淋巴细胞杂交瘤技术制备抗人GPC3N端mAb并进行纯化.经Western blot和ELISA方法鉴定其特异性、Ig亚类和效价.结果:获得2株可稳定分泌抗人GPC3N端mAb的杂交瘤细胞株(Ⅲ4B,Ⅻ6C).两株mAb均为Ig1亚类,其腹水mAb的效价分别为1:9 600及1:7 200,均可特异性地识别GPC3蛋白.结论:成功地建立可稳定分泌抗人GPC3N端mAb的杂交瘤细胞株,其分泌的mAb特异性强、效价高.
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重组牛白细胞介素4的原核表达及其单克隆抗体研制
目的:原核表达重组牛白细胞介素4(rBoIL-4)并制备针对抗rBolL-4的单克隆抗体(mAb).方法:通过PCR从重组质粒pSP73-BOIL-4中扩增BoIFN-γ基因,分别克隆入表达载体pGEX-6p-1和pET-30a(+)中,构建重组菌并对其进行诱导表达、纯化和鉴定.以纯化的融合蛋白rHis-BoIL-4为免疫原,用纯化的rGST-BoIL-4为筛选抗原,应用淋巴细胞杂交瘤技术,研制抗rBoIL-4的mAb.结果:获得表达BOIL-4基因的重组菌BL21(pGEX-6p-1-BOIL-4)和BL21(DE3)(pET-BOIL-4),重组蛋白相对分子质量(Mr)的大小分别为39 000和19 000,且以包涵体的形式存在.获得7株可稳定分泌抗rBoIL-4 mAb的细胞株,命名为2B8、4A10、5D6、5D8、7G10、8B7和10F8,这些mAb腹水的效价依次为5 000、160 000、10 000、640 000、5 000、40 000和40 000,mAb亚类均为IgG1.Dot-ELISA的结果表明,7株mAb只与融合蛋白rHis-BoIL-4和rGST-BolL-4起反应,而不与其他重组细胞因子和对照细菌起反应,显示出良好的特异性.Western blot试验显示,7株mAb均能与相应的融合蛋白发生反应,出现特异性条带.同时7株mAb均能与BoIL-4的标准品起反应.结论:7株抗rBoIL-4的mAb均具有高度的特异性,为进一步研究其在牛的免疫调控、牛疫病的致病机制及其诊断中的应用奠定了基础.
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HPV-16E1蛋白的表达、纯化及其抗体制备
目的:在原核细胞中表达、纯化人乳头状瘤病毒16型(HPV-16)E1蛋白并制备HPV-16 E1特异性抗体.方法:PCR扩增HPV-16 E1基因,将其构建至原核表达载体pMAL-p2x,转化大肠杆菌BL-21菌株.通过改变诱导温度与IPTG 浓度优化HPV-16 E1蛋白可溶性表达的条件,并用麦芽糖亲和层析法纯化该蛋白.纯化蛋白经皮下及足垫免疫新西兰白兔制备抗血清,ELISA和Western blot检测血清效价和特异性.结果:酶切和测序结果表明HPV-16 E1基因已克隆入pMAL-p2x.经优化筛选出HPV-16 E1融合蛋白诱导表达的佳条件为28℃,IPTG浓度0.5 mmol/L.经麦芽糖亲和层析法纯化获得了HPV-16 E1可溶蛋白,纯度达到95.7%.Western blot检测证明制备的抗血清能与HPV-16 E1蛋白特异性结合,ELISA检测表明获得的抗血清效价达到1:640 000以上.结论:在大肠杆菌中表达并纯化获得了HPV-16 E1蛋白,该蛋白免疫新西兰白兔制备了高效价的HPV-16 E1蛋白抗血清,为HPV-16 E1功能研究提供了抗原和检测用抗体.
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抗血小板膜糖蛋白Ib单克隆抗体的制备、鉴定及其功能的初步研究
目的:制备抗人血小板膜糖蛋白Ib(GPIb)单克隆抗体(mAb),并进行生化鉴定与初步探讨其临床应用.方法:采用血小板免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与骨髓瘤细胞融合.经间接ELISA法筛选和克隆化培养,获得1株抗人GPIb mAb的杂交瘤细胞,纯化其腹水获得mAb;免疫双扩散鉴定其抗体亚类;流式细胞术和免疫放射法鉴定其识别的抗原;ELISA法检测该抗体对血浆血管性血友病因子(vWF)的瑞斯托霉素辅因子活性的影响.结果:成功制备了1株抗人GPIb mAb,命名为SZ-151.ELISA法测定其腹水效价为1:20 000,免疫双扩散鉴定其为IgG1亚类.免疫放射法和流式细胞术检测结果证实SZ-151和mAb SZ-2识别同一抗原GPIb,且作用位点不同.ELISA结果显示,SZ-151对瑞斯托霉素辅因子活性无抑制作用.结论:获得1株新的抗血小板膜糖蛋白Ib 的mAb,可用于血浆vWF的瑞斯托霉素辅因子活性检测,为血管性血友病的诊断和分型提供了有效的工具.
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兔抗重组人钙网蛋白抗体的制备及其特性鉴定
目的:制备兔抗人钙网蛋白抗体并进行特性鉴定.方法:用PCR法扩增人钙网蛋白(CRT)基因,并克隆至pET32a表达载体中.以重组质粒pET32a/hCRT转化大肠杆菌BL-21(DE3),用IPTG诱导重组蛋白的表达,通过Ni2+-NTA琼脂糖凝胶柱亲和层析纯化目的蛋白.以纯化的hCRT 为免疫原免疫新西兰大白兔制备抗体,用ELISA法、Western blot和免疫组化染色法检测抗体的效价和特异性.结果:成功地表达并纯化hCRT重组蛋白.以纯化的重组hCRT免疫新西兰大白兔制备的抗体,ELISA检测其效价为1:51 200,Western blot分析显示,该抗体能与hCRT特异性结合.免疫组化染色法检测结果表明,该抗体能识别天然的hCRT.结论:以重组hCRT为免疫原,成功地制备效价高、特异性好的兔抗hCRT抗体,为进一步进行钙网蛋白的检测及其临床应用研究奠定了基础.
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猪新基因P58IPK的分子克隆、原核表达及其多克隆抗体的制备
目的:分子克隆出猪P58IPK新基因,制备其多克隆抗体,为下一步研究流感病毒与宿主相互作用机制提供条件.方法:根据猪EST数据库,利用生物信息学方法,电子克隆猪P58IPK新基因;采用RT-PCR方法从猪淋巴组织分子克隆P58IPK基因完整开放阅读框(ORF),全长1 518 bp,编码505个氨基酸(GenBank登录号:HQ287801),并对其进行初步生物信息学分析;构建P58IPK原核表达载体pET-P58IPK,诱导表达并纯化重组的his-P58IPK融合蛋白,后免疫兔子制备多克隆抗体.结果:成功制备P58IPK多克隆抗体,通过双向琼脂扩散实验检测抗体有活性,ELISA鉴定血清中多抗效价达到1:20 000,Western blot与免疫荧光检测反应特异性良好.结论:成功克隆猪新基因P58IPK,并制备了其多克隆抗体.
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Toll样受体介导的先天性抗病毒免疫反应研究进展
TLRs是先天性免疫系统重要的模式识别受体,通过识别病毒的PAMPs/DAMPs,活化依赖和非依赖于MyD88的信号通路,诱导I-IFN、炎性因子和趋化因子等的释放,发挥抗病毒作用.现就TLRs的基本概况、结构特征、抗病毒信号通路及对不同病毒的天然免疫反应等相关研究进展进行简要综述.
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MDSCs为靶点的肿瘤治疗策略研究进展
髓系衍生抑制性细胞(myeloid-derlved suppressor cells,MDSCs)是一群缺乏淋巴系标志具有多方向分化潜能和免疫抑制功能的异质性细胞,它包括未成熟树突状细胞(DCs)、巨噬细胞、粒细胞和其他早期分化阶段的髓系细胞.MDSCs 的共同特性是它们的髓系来源、未成熟状态及对T细胞应答的显著抑制作用,荷瘤宿主体内MDSCs大量蓄积是造成肿瘤免疫无应答的主要原因之一.因此,以MDSCs为靶点的免疫治疗方法为抗肿瘤免疫治疗提供了新的治疗策略,逐渐成为研究热点.现就MDSCs在抗肿瘤免疫治疗中的作用的研究进展作一综述.
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检测肌糖蛋白C夹心ELISA方法的建立及初步应用
目的:以已经制备的抗肌糖蛋白C(TN-C)的单克隆抗体(mAb)为基础,建立能定量检测肌糖蛋白C浓度的夹心ELISA方法,并初步于临床血清标本检测.方法:将3株mAb(克隆号分别为:1A8、3H7和4D6)制备腹水后纯化,分别与辣根过氧化物酶交联后,两两配对,以重组肌糖蛋白C 蛋白为检测抗原,分析抗体之间佳组合;利用建立的夹心ELISA方法检测收集的临床骨肉瘤患者和正常人血清标本.结果:包被1A8 mAb,HRP-4D6配对敏感性高;骨肉瘤患者血清中肌糖蛋白C浓度明显高于正常人.结论:成功建立检测肌糖蛋白C的夹心ELISA方法,并利用其检测到肌糖蛋白C在骨肉瘤患者中的浓度异于正常人.
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PKCθ激活γδT细胞转录因子NF-κB的作用
目的:探讨经T细胞受体(TCR)途径激活人γδT细胞时,新型蛋白激酶PKCθ在促进转录因子NF-κB活化中的作用.方法:常规分离健康人外周血单个核细胞(PBMC),用结核杆菌耐热性多肽抗原(MtbAg)诱导扩增,获得Vγ9Vδ2 T细胞富集的细胞群(MtbAT).PKCθ抑制剂(Rottlerin)预处理MtbAT,抗CD3单克隆抗体(mAb)刺激后收集细胞,通过电泳迁移率变动分析(EMSA)检测转录因子NF-κB活性变化;经流式细胞术(FCM)检测T细胞活化分子CD69的表达情况.结果:γδT细胞经抗CD3 mAb刺激,NF-κB活性增强;Rottlerin预处理使抗CD3 mAb诱导的NF-κB活化程度显著减弱,并抑制T细胞活化分子CD69的表达.结论:PKC0在人γδT细胞经TCR途径激活NF-κB过程中具有重要作用.
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不同浓度纳米银对血管内皮细胞增殖作用的影响
目的:观察不同浓度纳米银对体外培养血管内皮细胞增殖的影响.方法:取3只5 d龄SD大鼠,分离心脏,在体外酶消化法分离血管内皮细胞并进行培养,第3代细胞用于实验.除空白对照组外,血管内皮细胞分别于含0.5,0.25,0.125,0.0625,0.03125 g/L纳米银的培养基中进行培养.24 h后倒置显微镜下观察细胞形态并进行细胞计数,采用甲基噻唑基四唑比色法和流式细胞术检测血管内皮细胞的增殖情况,并采用LDH法检测急性细胞毒性.结果:与空白对照组比较,不同浓度的纳米银组血管内皮细胞细胞数减少,纳米银浓度为0.25 g/L时,对血管内皮细胞的抑制作用明显,其他浓度彼此间无统计学差异.不同浓度纳米银对血管内皮的增殖均有一定抑制作用,但并没有急性细胞毒性.结论:纳米银对体外培养的血管内皮细胞有明显的抑制增殖作用,其作用与纳米银的剂量有关.
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海枫藤水煎液对小鼠免疫功能的影响
目的:观察海枫藤水煎液对小鼠免疫功能的影响.方法:采用碳粒廓清法、2,4-二硝基氟苯(DNFB)诱导小鼠迟发型超敏反应法和正常小鼠免疫器官测定法.结果:海枫藤水煎液2.5 g/kg能明显降低碳粒廓清指数(K)和吞噬系数(α),抑制单核巨噬细胞的吞噬功能;10.0、5.0、2.5 g/kg均能显著降低小鼠耳廓肿胀度,抑制二硝基氟苯(DNFB)诱导的小鼠迟发型超敏反应;对正常小鼠的脾系数和胸腺系数无明显影响.结论:提示海枫藤水煎液对非特异性免疫和细胞免疫有抑制作用,而对正常小鼠的免疫器官系数无明显影响.
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互动式教学的实践探索和思考
德国著名教育家第斯多惠在<德国教员教育指南>曾这样写到:"教学的艺术不在于传授本领,而在于启发、激励、唤醒".由此可见,教育本身应该注重对学生求知欲望的激发,让学生能够提出问题、思考问题和解决问题,进而形成严谨求实的科学思维和敏锐的洞察力,促进实践能力和创新能力的培养.我们在<神经生物学>近几年的教学实践中,逐步摒弃传统灌输式的教学模式,摆脱书本的束缚,尊重学生认知规律和学生主观能动性,通过互动式教学方法,注重对学生兴趣的培养,引导他们自主学习,鼓励他们勤于思考,勇于发问,努力营造有力于培养学生科学素养和创新意识的教学环境.
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医学免疫学双语教学的实践与体会
所谓双语教学(bilingual teaching),即运用两种不同语言进行学科教育的教学活动,一般是指在用母语进行教学的同时,用非母语进行部分或全部非语言学科的教学模式,其终目标是学习者能同时使用母语和非母语(一般指英语)进行思维,能在这两种语言之间根据交际对象和工作环境的需要进行自由切换,成为既懂专业又懂外语的国际性人才.尽管我校病理学等学科的双语教学已经开展数年,但由于医学免疫学的学科特点,我们自今年才开始尝试在五年制和八年制临床及口腔专业中进行双语教学,既取得了一些经验,也发现了一些亟待解决的问题.本文中介绍了我校医学免疫学双语教学的实践和一些体会.
| 年 | 期数 |
| 2018 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2017 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2016 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2015 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2014 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2013 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2012 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2011 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2010 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2009 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2008 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2007 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2006 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2005 | 01 02 03 04 05 06 z1 |
| 2004 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2003 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2002 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2001 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2000 | 01 02 03 04 05 06 |
| 1999 | 01 02 |
| 1995 | 01 02 03 |
| 1994 | 01 02 |
| 1993 | 01 02 03 04 |
| 1992 | 01 02 03 04 |
| 1991 | 01 02 03 04 |
| 1990 | 01 02 |
| 1989 | 01 02 03 04 |
