细胞与分子免疫学杂志
Chinese Journal of Cellular and Molecular Immunology 세포여분자면역학잡지
- 主管单位： 中国免疫学会；第四军医大学
- 主办单位： 陕西省免疫学会,中国免疫学会
- 影响因子： 0.81
- 审稿时间： 1-3个月
- 国际刊号： 1007-8738
- 国内刊号： 61-1304/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
-
D-半乳糖致衰老小鼠胸腺T细胞重要膜型分子的改变及其意义
目的:建立D-半乳糖亚急性衰老小鼠模型,并探讨其胸腺T细胞重要膜型分子的改变及其意义.方法:8周龄雌性昆明种小鼠,12.5 mL/(kg·d)颈后部皮下注射100 g/LD-半乳糖溶液,连续注射42d;逐日观察小鼠的生存状态和行为变化,并通过对小鼠血清中SOD活力和MDA含量的检测,对此衰老模型进行生物学鉴定；在D-半乳糖亚急性衰老小鼠模型成功建立的基础上,采用免疫荧光标记技术和流式细胞仪检测技术对胸腺T细胞重要膜型分子进行检测分析.结果:造模过程中小鼠逐渐表现出脊椎隆起,体形消瘦,皮肤松弛等衰老体征；血清中SOD活力下降[模型组:(2.16±0.43) mKat/L,对照组:(5.52±1.55) mKat/L,P＜0.01],MDA含量上升[模型组:(4.14±0.82) μmol/L,对照组:(1.24±0.21)μmol/L,P＜0.01]；小鼠胸腺初始T细胞相关分子CD45RA表达下降[模型组:(2.16 +0.47)％,对照组:(2.98±0.53)％,P＜0.05]；小鼠胸腺T细胞活化相关分子CD28[模型组:(91.52±1.68)％,对照组:(95.12±1.21)％,P＜0.05]和CD25[模型组:(7.42±0.75)％,对照组:(8.84士0.58)％,P ＜0.05]表达下降；小鼠胸腺T细胞活化负性调控分子PD-1表达上升[模型组:(21.25±1.95)％,对照组:(12.92±3.28)％,P＜0.01]；小鼠胸腺记忆T细胞相关分子CD196表达上升,但与对照组相比没有显著性差异[模型组:(21.13±1.44)％,对照组:(19.73±2.02)％].结论:成功建立了D-半乳糖亚急性衰老小鼠模型,机体衰老时胸腺中初始和活化T细胞减少,记忆T细胞有增加的趋势.
-
病毒巨噬细胞炎性蛋白ⅡN端肽调控SDF-1α/CXCR4诱导趋化机制
目的:评价病毒巨噬细胞炎性蛋白ⅡN端肽( NT21MP)是否通过干扰SDF-1α/CXCR4信号抑制人乳腺癌细胞株SKBR3细胞的趋化作用.方法:以RT-PCR和免疫组化检测SKBR3和MCF-7两种人乳腺癌细胞中CXCR4的表达；用细胞转移实验检测在NT21MP存在或缺乏的情况下SDF-1α诱导SKBR3细胞的趋化作用；以Fluo3/AM为细胞内游离钙离子的荧光指示剂,用激光扫描共聚焦显微镜测定NT21MP对SDF-1α诱导SKBR3细胞内游离钙浓度的影响；Western blot分析ERK1/2和FAK蛋白的磷酸化水平变化.结果:相对于MCF-7细胞,SKBR3细胞中CXCR4蛋白表达水平较高；经SDF-1α处理后,SKBR3的迁移能力提高,CXCR4抑制剂AMD3100可有效抑制SKBR3细胞的迁移,细胞经NT21MP预处理后,可剂量依赖性地抑制SKBR3细胞的迁移(P <0.05)；NT21MP也可抑制由SDF-1α诱导的细胞内Ca2+峰值(P<0.05),而钙离子浓度升高是SKBR3细胞迁移的重要信号之一；另外,相对于阴性对照组,NT21MP也可下调SDF-1α诱导的SKBR3中信号蛋白ERK1/2和FAK的磷酸化水平(P<0.05).结论:NT21MP可抑制SDF-1α诱导的SK-BR3细胞的迁移,可能与其上游钙离子释放和ERK1/2及FAK磷酸化阻断信号有关.
-
1,25(OH)2D3对甲状旁腺素诱导的肾小管上皮细胞转分化和TGF-β1的表达的影响
目的:探讨1,25(OH)2D3对甲状旁腺素(PTH)诱导的肾小管上皮细胞转分化和转化生长因子-β1(TGF-β1)表达的影响.方法:人肾小管上皮细胞(HK-2细胞)培养在含50 mL/L FCS的DMEM/F12培养液中.对照组:加入等体积含50 mL/L FCS的DMEM/F12培养液；PTH刺激组:加入终浓度为10-10 mol/L PTH的含50 mL/L FCS的DMEM/F12培养液；PTH +1,25(OH)2D3干预组:加入10-10 mol/L PTH,同时加入不同浓度( 10-10、10-9、10-8、10-7 mol/L)的1,25(OH)2D3.刺激HK-2细胞48 h.半定量RT-PCR法检测细胞中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和TGF-β1的基因表达；Western blot法检测细胞中α-SMA和TGF-β1的蛋白表达；免疫细胞化学法检测细胞中α-SMA的表达；ELISA法检测细胞培养上清液中TGF-β1的含量.结果:半定量RT-PCR结果显示,对照组HK-2细胞中几乎无α-SMA的mRNA表达,仅有少量的TGF-β1mRNA表达；PTH刺激组α-SMA和TGF-β1mRNA表达量与对照组比较明显增加；PTH +1,25 (OH)2D3干预组表达量比PTH刺激组显著降低,且随着1,25(OH)2D3浓度的升高呈一定的剂量依赖性(P＜0.05).Westem blot结果显示,对照组HK-2细胞中无α-SMA的蛋白表达,仅有少量的TGF-β1蛋白表达；10-10 mol/L的PTH能够明显诱导HK-2细胞中α-SMA的蛋白表达,增加TGF-β1的蛋白表达量；PTH+1,25(OH)2D3干预组,α-SMA和TGF-β1的蛋白表达量比PTH刺激组显著降低(P＜0.05).免疫细胞化学法结果显示,对照组几乎无α-SMA阳性表达的细胞,PTH刺激组可见大量细胞α-SMA表达阳性；PTH +1,25(OH)2D3干预组α-SMA表达阳性的细胞数明显低于PTH刺激组(P＜0.05).ELISA结果显示,对照组细胞上清液中可检测到少量的TGF-β1,PTH刺激组含量显著升高,PTH +1,25(OH)2D3干预组与PTH刺激组比较含量明显降低(P＜0.05).结论:1,25(OH)2D3能够部分拮抗PTH诱导的HK-2细胞转分化和TGF-β1的表达.
-
大鼠Toll样受体2基因siRNA重组腺病毒载体的构建及鉴定
目的:构建特异性抑制大鼠TLR2基因的重组腺病毒载体,并在大鼠嗜铬细胞瘤PC12细胞中进行功能鉴定.方法:体外合成3对大鼠siTLR2的双链DNA序列,经退火定向克隆到穿梭质粒pSES-HUS中获得pSES-HUS-siTR2质粒,PmeI线性化后在BJ5183细菌中与pAdEasy-1骨架质粒进行同源重组获得pAd-siTLR2质粒,脂质体转染HEK293细胞,包装获得Ad-siTLR2腺病毒颗粒,继而感染PC12细胞,通过Real-time PCR和Western blot方法检测3对siRNA对TLR2基因的抑制效率.结果:PCR凝胶电泳和测序结果均证实目的基因正确克隆到腺病毒载体中；Real-time PCR和Western blot结果显示:携带siTLR2的病毒颗粒能够在mRNA和蛋白水平有效抑制PC12细胞中TLR2的表达.结论:成功构建了AdsiTLR2重组腺病毒载体,并在HEK293细胞中包装成重组腺病毒,转染PC12细胞后能有效抑制TLR2基因的表达,为进一步研究TLR2在不同疾病中的免疫调节机制奠定重要基础.
-
超抗原SEA对Molt-4细胞线粒体膜电位的影响
目的:超抗原葡萄球菌肠毒素A(SEA)诱导Molt-4细胞活化与线粒体膜电位变化的关系.方法:应用CCK-8法体外检测不同浓度和时间SEA刺激传代T细胞株Molt-4细胞增殖活性,应用JC-1标记细胞线粒体,利用流式细胞术测定比较不同时间点SEA刺激对Molt-4细胞线粒体膜电位的影响.结果:经CCK-8检测,SEA的浓度在1 mg/L时Molt-4细胞的增殖显著,以该浓度的SEA作用于Molt-4细胞180、60、30、10 min,10 min时间点膜电位升高明显高于其他时间点.SEA刺激10、30 min后线粒体膜电位升高低于有丝分裂原PHA刺激的结果.结论:SEA可诱导Molt-4细胞线粒体膜电位升高,且升高作用主要发生在细胞增殖的早期阶段.其升高作用略低于有丝分裂原PHA.
-
EB病毒融合蛋白ZtaN-p23在大肠杆菌中的表达、纯化及活性鉴定
目的:克隆EB病毒立即早期蛋白ZtaN和衣壳蛋白p23,构建原核表达载体,并在大肠杆菌中表达融合蛋白,为后续利用蛋白进行疾病诊断奠定基础.方法:采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术从B95-8细胞中分别扩增出目的基因BZLF1N和BLRF2,利用融合PCR法将两个基因进行连接,构建重组质粒pGEX- 4T-1-BZLF1 N-BLRF2,并转化大肠杆菌BL21( DE3).加入IPTG诱导表达融合蛋白ZtaN-p23,通过SDS-PAGE和Western blot确定蛋白表达量及活性鉴定.结果:重组质粒pGEX- 4T-1-BZLF1 N-BLRF2经双酶切鉴定和序列分析正确,证实已成功构建原核表达载体；SDS-PAGE显示诱导的蛋白Mr约46 000,与预期值一致；对融合蛋白表达条件进行优化后,发现其主要以包涵体的形式存在于细胞中；亲和层析结果显示纯化后的ZtaN-p23纯度＞95％；Western blot显示ZtaN-p23具有良好的生物活性.结论:成功构建原核表达载体pGEX- 4T-1-BZLF1 N-BLRF2,并在大肠杆菌中进行了表达纯化,融合蛋白显示出良好的活性.
-
pri-miR-21重组腺病毒载体构建及其对TLR4基因调控的研究
目的:构建能高效表达成熟miR-21小分子的腺病毒载体,探讨其对TLR4基因的靶向调控关系.方法:以正常小鼠基因组DNA为模板,PCR扩增pri-miR-21基因,克隆至穿梭载体pAdTrack-CMV中经PCR、酶切及基因测序分析正确无误后,与pAdEasy-1腺病毒骨架质粒进行同源重组,并利用293A细胞,包装成pri-miR-21重组腺病毒感染HeLa细胞,通过Westem blot检测TLR4的蛋白表达水平,验证miR-21与TLR4靶向调控的关系.结果:经PCR、酶切、测序及GFP表达证实,成功构建携带pri-miR-21基因的重组腺病毒载体并制备出高滴度重组病毒.Western blot证实,miR-21可抑制TLR4蛋白的表达.结论:所制备的小鼠pri- miR-21重组腺病毒,可以高效表达成熟miR-21小分子,能够抑制靶基因TLR4的表达.
-
2型猪链球菌胞壁蛋白MRP的截短表达、纯化及抗原保护性评价
目的:扩增猪链球菌2型( Streptococcus suis 2)05ZYH33中的mrp基因,并在大肠杆菌BL21中重组表达,以获得高纯度的重组MRP截短蛋白,验证其抗原保护性.方法:以05ZYH33基因组为模板并设计引物扩增目的片段,构建表达质粒,利用亲和层析对目的蛋白进行纯化,免疫新西兰大白兔制备抗血清并测其效价.通过抗原保护实验及抗血清调理的全血杀伤实验验证重组MRP蛋白抗原保护性.结果:重组MRP蛋白在大肠杆菌中高浓度表达,纯化获得了高纯度的MRP截短蛋白并制备获得了抗血清.经该蛋白免疫过的CD-1小鼠与阴性对照组相比,存活率显著升高.经抗血清调理后,野生株05ZYH33在全血中的存活率显著降低,突变株AMRP无显著变化.结论:MRP蛋白有较高的抗原保护性.
-
设计特异性识别HBV核心启动子的锌指蛋白以抑制HepG2.2.15细胞中HBV的转录
目的:设计特异性结合乙肝病毒核心启动子( HBVCp)的锌指蛋白(ZFP),观察ZFP在体外对HBV转录的抑制情况.方法:利用Zinc finger tools设计特异性结合HBV Cp的ZFP.将ZFP核苷酸序列人工合成后克隆至pEGFP-N1和pcDNA3.1(+),构建真核表达质粒pEGFP-N1/ZFP-Flag和pcDNA3.1(+)/ZFP.通过倒置荧光显微镜、RT-PCR和Western blot鉴定pEGFP-N1/ZFP-Flag在COS-7中的表达情况；将pcDNA3.1(+)/ZFP转入HepG2.2.15细胞后24h,采用ELISA和FQ-PCR检测上清液中HBeAg和HBV DNA含量,RT-PCR检测细胞内HBV mRNA水平.结果:ZFP在COS-7细胞中能正常表达.与空质粒组相比,ZFP组细胞培养上清液中HBV DNA拷贝量和HBeAg含量明显降低(P＜0.05),细胞内HBV mRNA也显著减少.结论:人工设计的ZFP可以在真核细胞内正常表达,并能有效抑制HBV的转录.
-
阳离子脂质体介导IL-15基因治疗小鼠肺转移模型的实验研究
目的:用阳离子脂质体(CL)包裹pcDNA3.1-IL15制备阳离子脂质体质粒DNA复合物CL- IL15,观察其抗小鼠B16-F10肺转移瘤的治疗作用,并初步探讨其作用机制.方法:构建hIL-15真核表达载体,测定脂质体-质粒DNA复合物的佳包封率；将该复合物转染CHO-K1细胞株,Westem blott检测体外转染条件下IL-15蛋白的表达情况,MTT法检测细胞转染上清对CTLL-2细胞株的增殖刺激作用；建立B16-F10小鼠黑色素瘤肺转移模型,尾静脉给药,每隔1d给药1次,共6次,治疗结束24 h后观察各组肿瘤肺转移情况；LDH释放法(乳酸脱氢酶释放法)检测脾淋巴细胞的杀伤作用,冰冻切片免疫荧光法观察NK细胞对肿瘤组织的浸润.结果:成功构建hIL-15表达载体,并验证其与阳离子脂质体的质量比为1:5时,包裹后形成的复合物具有较好的包封率；可以在体外有效转染并表达具生物活性的分泌型IL-15蛋白；CL- IL15复合物治疗小鼠肿瘤肺转移模型,可以显著减少肿瘤肺转移结节数目,提高脾细胞对肿瘤细胞杀伤活性(P＜0.05),增加NK细胞在肿瘤组织中的浸润比例.结论:阳离子脂质体质粒DNA复合物CL- IL15可有效地抑制小鼠B16-F10肺转移瘤,其作用机制可能与IL-15诱导脾细胞对肿瘤细胞的杀伤、激活NK( natural killer)细胞对肿瘤组织的浸润等机制有关.
-
IL-17对心肌细胞单核细胞趋化蛋白-1表达的影响
目的:研究IL-17对原代培养心肌细胞中单核细胞趋化蛋白-1( MCP-1)表达的影响.方法:差速贴壁法分离乳鼠心肌细胞进行原代培养,采用逆转录聚合酶链反应(RTPCR)检测心肌细胞IL-17R和MCP-1基因表达情况,并采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测心肌细胞培养上清中MCP-1蛋白的表达.结果:心肌细胞存在IL-17R的基因表达.IL-17呈浓度依赖式上调心肌细胞MCP-1基因和蛋白的表达水平,与不加刺激因子的对照组相比差异有统计学意义(P＜0.05).心肌细胞MCP-1 mRNA的表达量在IL-17作用4h时达到高峰,随后开始下降,而IL-17作用下心肌细胞MCP-1蛋白的表达呈时间依赖式升高,与对照组相比有显著性差异(P＜0.05).结论:心肌细胞表达IL-17R.IL-17可上调心肌细胞MCP-1的表达,其作用与IL-17的浓度和作用时间有关.
-
TRBP分子克隆及其功能初步研究
目的:构建TRBP原核表达载体,评价表达的重组TRBP蛋白对双链RNA的结合能力.方法:利用RT-PCR扩增小鼠TRBP基因双链RNA结合区,构建其与His标签融合的表达载体,转化E coli BI21( DE3)菌株,利用Ni-NTA磁珠对重组蛋白进行分离纯化；体外转录合成小鼠肝脏miR-122前体RNA Pre-miR-122,分别利用PAGE电泳和等温量热滴定仪检测TRBP与Pre-miR-122的结合能力.结果:分离纯化得到的重组TRBP蛋白为可溶蛋白,Mr为32 400,结合在NINTA磁珠上的TRBP能有效的结合Pre-miR-122.结论:成功建立了TRBP原核表达系统,初步研究了TRBP重组蛋白与双链RNA的结合能力.
-
D-半乳糖致衰老小鼠模型脾脏B细胞的改变
目的:运用D-半乳糖建立亚急性衰老小鼠模型,在对其进行生物学鉴定的基础上,分析脾脏B细胞表面重要膜型分子的改变及其意义.方法:健康昆明鼠,颈后部皮下注射100 g/L D-半乳糖溶液,0.25 mL/20 g,1次/d,连续42 d.逐日观察动物的生存状态和生物学行为并定期称量其体质量动态变化.小鼠衰老模型的生物学鉴定采用血清中超氧化物歧化酶(SOD)活力、丙二醛(MDA)浓度的测定；脾脏细胞表面与活化、记忆相关的重要膜型分子的分析采用免疫荧光和流式细胞术；血清中细胞因子IL-4的分析采用ELISA法.结果:成功建立亚急性衰老小鼠模型.免疫荧光和流式细胞术分析模型组小鼠脾脏细胞上CD20+为56.8％,CD40+为43.6％, CD20+ CD45RA+B为14.04％,CD40+ CD45RA+B为35.4％, CD20+ CD86+B为2.25％.CD40+ CD86+B为4.38％,CD20+ CD196+B为10.68％,CD40+ CD196+B为10.98％.ELISA法检测结果显示模型组小鼠血清中IL-4的平均水平为7.93 ng/L.经统计学分析模型组小鼠脾脏细胞CD20、CD40、CD45RA、CD86的表达及血清中IL-4的水平均低于对照组(P＜0.05),CD196高于对照组(P＜0.01).结论:在机体衰老过程中,脾脏B细胞表面与活化、记忆相关的重要膜型分子的表达发生改变,活化细胞减少,记忆细胞增多,血清中IL-4的表达下降,导致免疫系统功能紊乱.
-
CTLA4.FasL双功能融合基因真核表达载体的构建与表达
目的:构建携带CTLA4.FasL双功能融合基因的真核表达质粒,并在HEK293细胞中表达.方法:PCR扩增得到CTLA4和FasL胞外区编码序列,后用重叠PCR的方法将该两段序列融合,且在两者间插入接头序列(编码一柔性短肽GGSGG),所得的基因片段命名为CTLA4.FasL.Xho Ⅰ/Kpn Ⅰ双酶切后,定向克隆至质粒pcDNA3.1(-),构建成真核表达载体pcDNA3.1(-)-CTLA4.FasL.转染入HEK293细胞,RT-PCR和Western blot验证融合基因的表达.结果:重叠PCR扩增获得CTLA4.FasL融合基因.真核表达载体pcDNA3.1(-)-CTLA4.FasL成功构建,并在HEK293细胞表达.结论:成功构建了携带双功能融合基因的真核表达载体,为利用CTLA4.FasL基因修饰肝干细胞用于同种细胞移植治疗奠定了基础.
-
乙型肝炎疫苗联合B7-H1蛋白疫苗对HBV转基因小鼠抗HBsAg免疫应答的影响
目的:研究B7-H1蛋白疫苗对HBV转基因小鼠免疫应答的影响,探索治疗慢性乙型肝炎的新方法.方法:用不同剂量的乙型肝炎疫苗和B7-H1蛋白疫苗联合免疫HBV转基因小鼠,应用ELISA法检测转基因小鼠在不同时间点血清抗B7-H1抗体滴度,同时在免疫后第14周末处死小鼠取脾细胞,检测不同的免疫方法对小鼠脾细胞产生HBsAg特异性Th1类细胞因子(IFN-γ及IL-2)、对HBsAg特异性分泌IFN-γT细胞数量及对小鼠淋巴细胞增殖的影响.结果:成功完成小鼠的免疫计划,5周起血清中即能测到B7-H1抗体,同一时间点各组之间的抗体滴度值并无明显差异.加B7-H1蛋白免疫各组与相同剂量单用HBsAg蛋白免疫各组相比:IL-2均明显减低(P＜0.05),分泌IFN-γ T的T细胞数量下降,但脾淋巴细胞分泌IFN-γ的水平各组间无明显差异；MTT法测定的淋巴细胞增殖能力各组间也无明显变化.结论:B7-H1蛋白疫苗可诱导HBV转基因小鼠产生明显的抗B7-H1抗体应答,但不能增强抗HBsAg的免疫应答.较小剂量的HBsAg即可引起HBV转基因小鼠Th1类细胞因子(IFN-γ及IL-2)的分泌以及淋巴细胞增殖.
-
hCAP基因真核表达载体的构建及蛋白的表达和定位
目的:构建hCAP真核表达载体并检测融合蛋白在细胞内的表达及定位.方法:提取工具细胞CV-1的mRNA,反转录为cDNA.PCR扩增hCAP基因的cDNA全长,并将其克隆至pEGFP-C1表达载体中.进一步将构建的重组载体进行酶切和测序鉴定,并转染到工具细胞COS-7中,提取细胞蛋白进行Western blot.后利用激光共聚焦显微镜观察pEGFP-hCAP在NIH3T3成纤维细胞内的定位.结果:hCAP基因cDNA全长克隆到了真核表达载体pEGFP-C1中,酶切鉴定片段为3 879 bp,测序证实成功.Western blot检测GFPhCAP融合蛋白表达,相对分子质量(Mr)约为169 000.pEGFP-hCAP在NIH3T3细胞中主要定位于细胞周边.结论:成功构建了真核表达载体pEGFP-hCAP,融合蛋白在NIH3T3细胞中主要定位于细胞周边.
-
不同输液方式复苏产兔失血性休克对肠黏膜屏障的影响
目的:观察不同输液方法复苏非控制性失血性休克产兔对血清二胺氧化酶(DAO)活性、D-乳酸水平的影响,探讨限制性输液复苏对休克后肠黏膜屏障的保护作用.方法:将30只产后6h的新西兰大白兔随机分成3组,①假休克组(P组)、②传统液体复苏组(PNL组)、③限制性液体复苏组(PLH组),建立非控制重度失血性休克模型,分别于休克30min后接受不同复苏方案,于休克后90 min接受手术止血和输血输液治疗.于0 min、90 min、180 min、4h抽血检测各组血清二胺氧化酶(DAO)活性、D-乳酸水平.结果:失血性休克时缺血再灌注损伤导致血清DAO活性、D-乳酸水平显著增高,其中DAO活性、D-乳酸水平PNL组、PLH组显著高于P组,PNL组显著高于PLH组(P＜0.05).结论:限制性输液复苏较传统液体复苏能显著降低肠黏膜通透性,保护肠黏膜屏障.
-
白介素和FgBβ-1420G/A、-993C/T、1689T/G、BsmAIG/C、I6I/D、345C/T、HinfIA/C基因多态性与血浆Fg浓度及分子功能的相关性研究
目的:分析白介素(IL)等细胞因子与纤维蛋白原(Fg) Bβ链- 1420G/A、- 993C/T、1689T/G、BsmAIG/C、I6I/D、345C/T、HinfIA/C 7个基因多态性位点的关系及其对血浆Fg浓度和分子活性系列指标的影响.方法:采用整群抽样方法选取开滦集团离退休职工864人进行体检和问卷调查,抽取静脉血检测血生化及血高敏C反应蛋白(hsCRP)、肿瘤坏死因子(TNF-α)和IL-6、IL-8、IL-1O,同时测定血浆Fg浓度和纤维蛋白单体聚合反应速率(FMPV)、大光密度(Amax)、FMPV/Amax等反映Fg分子聚合功能指标,并应用等位基因特异性聚合酶联反应(AS-PCR)和限制性内切酶片段长度多态性技术及直接基因测序分析检测上述7位点的基因多态性.结果:FgBβHinfI为AC+ CC型人群TNF-α水平高于AA人群(P＜0.05),其他细胞因子在各位点野生基因型与变异基因型组间均无显著性差异(P＞0.05).以FMPV/Amax为因变量进行多元逐步回归分析,依次筛选出年龄、HDL、UA、hsCRP、口服阿司匹林,标准回归系数(β)为-0.089、-0.094、-0.098、0.091、-0.081 (P ＜0.05)；以IL-6为因变量则筛选出IL-8、性别、糖尿病史、TNF-o及HinfI基因型,β分别为0.277、-0.136、0.134、0.125、-0.088(P＜0.05)；以TNF-α为因变量,则筛选出IL-10、IL-6、BsmAI、UA、1689位点,β分别为0.157、0.127、0.202、0.089、-0.130(P ＜0.05).结论:白介素、TNF-α等细胞因子水平与FgBβ链基因多态性具有很强的关联性,它们可以通过影响FgBβ链某些位点的白介素反应元件而具有潜在的调节人类血浆Fg浓度和分子活性表达水平的作用.
-
可溶性细胞间黏附分子-1在原发性肝癌患者血清中的表达及其与肝纤维化的关系
目的:探讨可溶性细胞间黏附分子-1( sICAM-1)在原发性肝癌(PHC)患者血清中的水平及其与肝纤维化的关系.方法:采用ELISA方法测定45例PHC患者、30例良性肿瘤患者和35例健康查体者血清sICAM-1和肝纤维化四项( PCⅢ、Ⅳ-C、LN、HA)水平,并分析sICAM-1与肝纤维化之间的关系.结果:PHC组血清sICAM-1和肝纤维化四项(PCⅢ、Ⅳ-C、LN、HA)水平均显著高于良性肿瘤组和正常对照组,相比较有显著性差异(P＜0.05)；而良性肿瘤组和正常对照组各指标比较差异无统计学意义(P＞0.05)；血清sICAM-1含量与PCⅢ、Ⅳ-C、LN、HA含量呈显著正相关性(r=0.683、0.575、0.573、0.539,P＜0.05).结论:检测血清sICAM-1的水平对判定PHC患者的病情、为肝癌的早期诊断和治疗有着重要的临床意义.
-
食管鳞癌患者肿瘤微环境中Th17细胞的表达及临床意义
目的:了解Th17细胞在食管鳞癌患者肿瘤微环境中表达水平,探讨其在食管鳞癌进展中的作用.方法:收集健康人外周血、食管鳞癌患者外周血、癌旁组织、癌组织标本,流式细胞术检测Th17细胞水平；实时荧光定量聚合酶链反应(QRT-PCR)检测RORγt、IL-17a mRNA表达水平.结果:食管鳞癌患者外周血、癌旁组织、癌组织中Th17细胞水平和RORγt、IL-17a mRNA表达水平较健康人外周血均升高,且癌组织＞癌旁组织＞患者外周血＞健康人外周血,差异有统计学意义(均P ＜0.05).食管鳞癌患者外周血中Th17细胞水平升高与患者性别、年龄、肿瘤大小无明显关系,但与有无淋巴结转移和TNM分期有关(P＜0.01).结论:食管鳞癌患者肿瘤微环境中Th17细胞水平和RORγt、IL-17a mRNA表达水平均升高,Th 17细胞可能通过RORγt和IL-17a参与食管鳞癌进展过程.
-
AQP-1和AQP-5在结直肠癌中的表达及其临床意义
目的:检测水通道蛋白-1,5( AQP-1,5)在结直肠癌组织中的表达情况,分析其在大肠癌发病中的临床意义.方法:采用免疫组织化学的方法检测确诊为结直肠癌的80患者癌组织及80例癌旁正常组织中AQP-1及AQP-5的表达情况.结果:AQP-1及AQP5在结直肠癌组织表达丰富(分别为68.75％及60％),高于癌旁正常组织的表达(38.75％及16.25％),两者差异有统计学意义(P＜0.05).AQP-1及AQP-5的表达与肿瘤的浸润深度、淋巴结转移及分化程度相关(P＜0.05).结论:AQP-1及AQP-5在结直肠癌组织中高表达,其在结直肠癌的发生、发展及转移过程中可能起重要作用.
-
制备单克隆抗体检测PES1的表达
目的:制备PES1单克隆抗体(mAb)并用所制备的抗体检测PES1在多种肿瘤细胞中的表达及其在成年大鼠不同组织中的表达分布.方法:纯化GST-PES1 (1-322aa)融合蛋白后注入小鼠进行免疫,经过细胞融合、筛选以及用Western blot进行特异性鉴定后获得mAb.再用制备的mAb检测PES1在不同的人肿瘤细胞和大鼠不同组织中的表达.结果:所制备的PES1 mAb能特异地识别PES1.用所制备的mAb检测发现,在所检测的人乳腺癌、卵巢癌、肝癌以及肺癌等细胞中均有不同程度的表达；PES1类似物pescadillo在大鼠的乳腺和卵巢组织中表达,但在其他组织中没有被检测到.结论:成功地制备了PES1的mAb.PES1可能与肿瘤的发生发展有一定的关系；由于PES1明显表达于雌激素重要的靶器官,所以可能参与雌激素信号通路.
-
H1亚型流感病毒HA蛋白单克隆抗体的制备及部分特性鉴定
目的:制备针对H1亚型流感病毒HA蛋白的单克隆抗体(mAb),并分析其反应特性.方法:分别以2009年甲型H1N1、季节性A1流感病毒裂解疫苗为免疫原,常规法免疫、融合、克隆化,获得各抗原特异性mAb.应用ELISA、HI试验和Western blot等技术研究mAb的反应性和特异性.结果:获得稳定分泌抗H1亚型流感病毒HA蛋白的杂交瘤细胞97株.其中株特异性mAb39株,29株具有HI活性；亚型特异性mAb7株,5株具有HI活性；2009年流行株与季节性A1、A3流行株共同抗原的mAb16株,9株具有HI活性；针对流感病毒共同抗原mAb35株,22株具有HI活性.结论:两种疫苗均具有较好的免疫原性和免疫保护活性,这些mAb的获得为流感病毒株特异、亚型特异性诊断试剂盒及流感病毒通用诊断试剂盒的制备提供了实验资料,为进一步研究H1N1流感病毒HA的抗原表位奠定了基础.
-
结核分枝杆菌调节蛋白RelA的原核表达及多克隆抗体制备
目的:克隆编码结核分枝杆菌调节基因RelA并在大肠杆菌中表达,纯化后制备兔抗RelA的抗体.方法:利用PCR从结核分枝杆菌H37Rv株中扩增RelA基因,构建重组表达质粒pET-32a(+ )-RelA；以重组质粒转化大肠杆菌BL21( DE3),筛选阳性重组菌株,IPTG诱导目的蛋白表达,在变性条件下对目的蛋白进行镍离子亲和层析纯化,通过SDS-PAGE和Westem blot鉴定目的蛋白的表达及反应原性；以表达的RelA蛋白免疫家兔,制备抗RelA的多克隆抗体并进行效价及特异性鉴定.结果:扩增了RelA基因,克隆于表达载体pET-32a(+)中,PCR筛选和酶切鉴定获得阳性克隆,测序证实正确.经诱导在大肠杆菌中表达出相对分子质量(Mr)为120 000的目的蛋白；纯化的RelA免疫家兔后,能有效地刺激特异性抗体的产生,抗血清的效价达到1:6 400以上,且具有良好的特异性.结论:已成功构建RelA基因的原核表达载体,并在大肠杆菌中获得高效表达；制备出兔抗RelA抗体,效价及特异性均良好,为进一步研究RelA蛋白在结核病中的致病机制奠定了基础.
-
树突状细胞在HCV感染中的作用研究进展
丙型肝炎病毒(HCV)感染慢性化的机制还不十分清楚,其中T细胞抗病毒免疫应答减弱和多种负性调节因子(受体)的作用增强,以及抗原提呈细胞的功能障碍可能是抗病毒免疫应答下调的基础,而树突状细胞(DC)作为有效的抗原提呈细胞,其功能障碍可能在HCV特异性T细胞应答和病毒持续感染中扮演了重要角色.本文中对DC的功能及其在HCV感染者中的作用予以综述.
-
微管微丝交联因子1与细胞骨架
微管微丝交联因子1( MACF1)是一种在哺乳细胞中普遍表达的细胞骨架蛋白,既能与微管交联,又能与微丝交联.MACF1在细胞极化、细胞迁移、信号转导以及维持组织的完整性中发挥着重要作用.本文基于MACF1能够与微丝微管交联的特点,就其通过细胞骨架间的相互作用对细胞生理功能的调节做一综述.
-
抗肿瘤单链抗体融合蛋白的研究进展
尽管有手术、放疗和化疗等综合治疗手段,在过去20多年,恶性脑胶质瘤特别是多形胶质母细胞瘤的预后并无明显改善.然而,在成人颅内恶性肿瘤中,多形胶质母细胞瘤每年的发病率占到50％以上[1].虽然常规手术配合放化疗可以延长患者的生命,但是浸润性生长的特性决定了上述方法都无法有效清除肿瘤细胞,导致肿瘤在短时间内复发,患者的中位生存期一般不超过15个月[2].免疫治疗通过激发和补充机体的抗肿瘤免疫能力来杀灭肿瘤细胞,具有特异性强、毒副反应轻和长期记忆等特点,对于靶向清除侵润的残余肿瘤细胞是一种较理想的辅助治疗策略.过去认为中枢神经系统是免疫豁免区,免疫治疗难以奏效,但近年来越来越多的证据提示中枢神经系统并非免疫豁免区,有研究证实被激活的淋巴细胞可以穿过血脑屏障[3].这使针对胶质瘤的免疫辅助治疗成为可能.
-
NKT细胞亚群及其功能研究进展
NKT细胞是一群兼具NK细胞和T细胞特征的免疫细胞.根据其表达的TCR类型及发育是否依赖于CD1d分子,可将其分为三类:Ⅰ型NKT细胞、Ⅱ型NKT细胞和NKT样细胞.NKT细胞活化后,能够迅速产生IFN-γ、IL-4等多种细胞因子,并正向或负向调节免疫应答.由于NKT细胞数量较少且功能复杂,对NKT细胞亚群及其功能认识的不足成为制约其临床应用的瓶颈.本文对NKT细胞亚群及其功能进行综述,阐明了NKT细胞在免疫应答和免疫调节中发挥的重要作用,并指出某些NKT细胞亚群研究的不足.随着人们对NKT细胞亚群及其功能的深入研究,以NKT细胞为主体的免疫治疗具有巨大的临床应用前景.
-
信号分子TRIF的研究进展
Toll样受体(TLRs)作为连接天然免疫和获得性免疫的桥梁,其介导的信号转导通路及其作用一直是人们研究的焦点.由髓样分化因子88( myeloid differentiation primary response protein 88,MyD88)承接的转导途径称为MyD88依赖途径,是几乎所有TLRs信号转导的共同通路(TRL3除外),由β干扰素TIR结构域衔接蛋白(TIR-domain-containing adaptor inducing interferon-β,TRIF)联接的信号通路被称为Myd88非依赖途径,主要存在于TLR3和TLR4通路中,TLR3可以直接绑定TRIF,TLR4则以TRIF相关接头分子(Trif-related adaptor molecule,TRAM)作为桥梁间接招募TRIF.虽然人们对TRIF依赖途径的认识比MyD88依赖途径晚一些,但近年来关于TRIF途径的相关研究使人们对TLRs在免疫反应中的作用以及许多疾病的发生和发展有了更新更深刻的认识,也为临床相关疾病的治疗提供了新的靶点.现对TRIF分子及其作用的研究进展作一介绍.
-
人二型大麻受体激动剂高通量筛选模型的建立
目的:基于二型大麻受体( CB2)的信号传递通路,建立体外高通量筛选CB2受体激动剂的药物模型.方法:将目的基因质粒pIRES2-EGFP-CB2、报告基因质粒pGL4.29[ luc2P/CRE/Hygro]、内参质粒PRL-TK共转染CHO细胞,通过检测双荧光素酶报告基因的表达水平变化来筛选人CB2受体的激动剂.并对加入激动剂的浓度和作用时间进行优化及考察模型的稳定性.结果:给予10 μmol/L JWH-015 6 h后能取得大相对诱导率.成功建立CB2受体激动剂的高通量筛选模型,筛选模型Z'因子为0.81,表现为良好的稳定性.结论:成功地建立了CB2受体激动剂的筛选模型,为从中药中高通量筛选有效物质奠定了良好的基础.
-
小鼠嗅鞘细胞培养的初步研究
目的:研究小鼠嗅鞘细胞(OECs)体外培养的不同方法,为获取数量多、活性好、形态优的嗅鞘细胞提供一定的实验基础.方法:4只出生2～3个月的BALB/c小鼠,经枕骨大孔取嗅球,剥离嗅球外周两层制成细胞悬液.采取未纯化培养对照组、一次差速贴壁结合阿糖胞苷( Ara-c)纯化与多聚左旋赖氨酸包被培养板培养组(纯化包被组)和一次差速贴壁结合Ara-c纯化与未用多聚左旋赖氨酸包被培养板培养组(纯化未包被组)分别培养小鼠OECs,观察其原代和传代培养的细胞生长状况及形态,并进行免疫细胞化学鉴定.结果:纯化未包被组OECs早中期无论数量还是形态都优于纯化包被组,而未纯化对照组的OECs早中期数量明显优于纯化组.结论:一次差速贴壁结合Ara-c纯化未包被进行小鼠OECs培养是一种简捷有效地方法.
-
miR-152在脊髓损伤后表达变化及其真核表达载体的构建
目的:观察脊髓损伤后miR-152的表达变化；构建miR-152真核表达载体并观察其在细胞中的表达.方法:利用原位杂交技术观察miR-152在脊髓损伤过程中的变化及细胞水平分布.根据miR-152的基因序列,设计引物,经PCR扩增后连接到pCIG质粒,构建含有EGFP报告基因的pCIG-miR-152真核表达载体；将pCIG-miR-152载体转染HeLa细胞,通过观察EGFP报告基因的表达以及qPCR方法鉴定miR-152可在真核细胞中过表达；通过生物信息学的方法预测miR-152的靶基因.结果:miR-152在正常脊髓中表达水平低,而在脊髓损伤后表达水平逐渐升高,尤其是在损伤后第14天和第21天.在损伤的脊髓中miR-152主要分布在损伤区周围的神经元中.成功构建了带有EGFP报告基因的miR-152真核表达质粒pCIG-miR-152,并能在真核细胞中高表达miR-152.结论:miR-152在损伤的脊髓神经元中高表达；成功构建了高表达的miR-152真核表达载体.
-
退变髓核细胞与正常髓核细胞体外培养的生物学特性对比
目的:比较体外培养的退变髓核细胞与正常髓核细胞生物学特性的差异.方法:将成年新西兰大白兔以纤维环穿刺法椎间盘造模法处理,4周后取退变以及正常髓核细胞,进行细胞形态及电镜观察、MT法试验,检测细胞周期及主要细胞外基质相关基因表达情况.结果:细胞生长曲线显示,传4代细胞第5天开始出现生长减慢,传5～7代细胞均在接种后第2～3天细胞数量明显减少(P＜0.05)；退变髓核细胞传3代细胞第4天开始出现生长减慢(P＜0.05),传5代时即出现生长滞缓,传7代时出现生长停滞.髓核软骨样细胞MTI摄取实验,传4～7代细胞的吸光度值明显低于传1代(P＜0.05).正常和退变髓核细胞细胞所处生长分裂期对比中,正常和退变髓核细胞G1期细胞所占比例具有统计学差异(P＜0.05).结论:大白兔正常髓核细胞持续增殖能力、蛋白聚糖和Ⅱ型胶原DNA的含量均较退变髓核细胞高,能为椎间盘组织工程学、细胞生物学疗法等提供理论基础.
-
醛糖还原酶在小鼠损伤脊髓小胶质/巨噬细胞中的表达及其作用
目的:观察小鼠在脊髓损伤(SCI)后,醛糖还原酶(AR)在脊髓损伤后修复过程中的作用及可能的机制.方法:采用C57BL/6-ar+/+(B6野生型小鼠)和C57BL/6-ar-/-(B6-AR基因敲除)小鼠,建立脊髓重度夹伤模型.首先分析了AR分子在损伤脊髓中的细胞表达类型及脊髓损伤后AR分子mRNA的表达水平变化情况；通过BBB运动学分析,比较AR基因敲除小鼠和野生型小鼠脊髓损伤后运动功能恢复情况,对比损伤区面积变化；通过qRT-PCR方法,检测对比M1/M2型巨噬细胞特异分子iNOS和Arg Ⅰ的表达变化.结果:AR分子在野生型小鼠损伤脊髓中的小胶质/巨噬细胞中高表达；qRT-PCR研究发现:脊髓损伤后AR表达逐渐升高,在损伤后第3天达到高峰.AR敲除小鼠在脊髓损伤后,其运动功能恢复好于野生型小鼠(P＜0.05),同时损伤区面积也小于对照组.AR基因缺失后,损伤脊髓中的小胶质/巨噬细胞通过高表达Arg I向M2型巨噬细胞方向极化.结论:AR通过调节脊髓中小胶质/巨噬细胞的极化来影响脊髓损伤后的修复.
| 年 | 期数 |
| 2018 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2017 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2016 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2015 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2014 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2013 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2012 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2011 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2010 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2009 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2008 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2007 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2006 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2005 | 01 02 03 04 05 06 z1 |
| 2004 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2003 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2002 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2001 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2000 | 01 02 03 04 05 06 |
| 1999 | 01 02 |
| 1995 | 01 02 03 |
| 1994 | 01 02 |
| 1993 | 01 02 03 04 |
| 1992 | 01 02 03 04 |
| 1991 | 01 02 03 04 |
| 1990 | 01 02 |
| 1989 | 01 02 03 04 |
