细胞与分子免疫学杂志
Chinese Journal of Cellular and Molecular Immunology 세포여분자면역학잡지
- 主管单位： 中国免疫学会；第四军医大学
- 主办单位： 陕西省免疫学会,中国免疫学会
- 影响因子： 0.81
- 审稿时间： 1-3个月
- 国际刊号： 1007-8738
- 国内刊号： 61-1304/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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阿托伐他汀下调肿瘤坏死因子-α诱导的人脐静脉内皮细胞NF-κB的表达
阿托伐他汀(atorvastatin,AT)作为一种有效的他汀类降血脂药,能够降低血清胆固醇和低密度脂蛋白,近年发现AT在病理生理学方面还具有抗炎、抗氧化及稳定动脉硬化斑块的作用,然而AT稳定动脉硬化斑块的确切机制至今尚未明了.NF-κB是一种重要的炎症、凋亡因子,作为多种炎症、细胞因子的中间环节,参与正负反馈调节机制[1-2],本实验拟研究AT稳定动脉硬化斑块与NF-κB表达、分泌之间的内在联系,探讨AT稳定动脉硬化斑块的作用机制,现报道如下.
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腹腔注射人免疫球蛋白对压力超负荷心力衰竭大鼠心肌纤维化的影响
心肌纤维化是高血压病、冠心病、心肌炎等多种心脏疾病终走向心力衰竭的病理改变,它还可引起心律失常、心源性猝死等严重并发症,因此如何减缓或逆转心肌纤维化已日益成为临床治疗中的关键.心肌纤维化形成的机制与多种因素有关,其中慢性炎症被认为是心肌纤维化进程中重要的因素之一,炎性因子的释放及炎性细胞的聚集可以导致组织损伤、血管再生以及胶原沉积,参与了慢性心力衰竭的病理过程[1].而免疫球蛋白是临床常用的免疫调节剂,它可能通过调节炎性细胞因子、抑制炎症反应等作用干预心肌纤维化的形成[2].因此,本研究旨在探讨免疫球蛋白是否能延缓在压力超负荷心力衰竭情况下心肌纤维化的进程,为今后临床工作中开展应用免疫球蛋白治疗心肌纤维化提供依据.
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大鼠脊髓半切损伤后细胞周期蛋白激酶1的表达增强
细胞周期是受到严格调控,有大量的细胞分子事件参与才能保证细胞完成DNA复制和细胞分裂[1].细胞周期调控依赖于细胞周期蛋白(cyclin)、细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶(cyclin dependent protein kinase,CDK)和细胞周期依赖性蛋白激酶抑制剂(cyclin dependent protein kinase inhibitors,CDKI)的相互作用,三者之间存在复杂而精密的调控网络,控制着细胞周期的进展,参与细胞的生长、发育、分化、衰老及死亡等病理生理过程[2].其中CDK属于丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶家族,必须与cyclin结合后才能发挥作用,是细胞周期调控中的重要因子.目前CDK家族共发现了9种,执行细胞周期任务的只有5种,包括CDK1、CDK2、CDK4、CDK6和CDK7[3].
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新生Wistar鼠母爱剥夺对其成鼠免疫功能的影响
生命早期应激(early life stress,ELS),即在成年前遭遇的负面事件,如儿童早年经历的父母丧失和身体虐待,可以引发重性抑郁症、受伤后应激障碍及精神分裂症等[1].生命早期应激包括生命早期的环境因素及生命早期的生理和心理因素,心理应激引起的生理反应包括机体心理应激时出现免疫系统的变化[2-3],母爱剥夺属于生命早期应激.目前被认可的应用于啮齿类动物的生命早期应激是母爱剥夺模型,它能较好地模拟人类在生命早期母爱的丧失,目前国内外还未见母爱剥夺对成鼠免疫功能影响的报道,本研究建立Wistar鼠母爱剥夺模型,探讨母爱剥夺对机体免疫学功能的影响.
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骨髓间充质干细胞Fas/FasL介导的免疫调节在结肠炎治疗中的作用
目的 探索卵巢摘除术(OVx)所致骨质疏松症小鼠骨髓间充质干细胞(BMSC)与假手术组(sham)BMSC治疗结肠炎效果差异,明确Fas/FasL表达水平改变情况及其下游T淋巴细胞趋化及凋亡程度的差异.方法 建立实验性结肠炎模型,OVX小鼠骨质疏松及假手术模型,对比注射OVX组与sham组小鼠BMSC治疗结肠炎的效果,检测2组BMSC对T淋巴细胞趋化及凋亡的差异,采用RT-PCR和Western blot法对BMSC的凋亡相关基因Fas/FasL的表达进行对比.结果 注射雌激素缺乏所致骨质疏松小鼠的BMSC与注射假手术组的BMSC相比,表达Fas/FasL降低,从而使T淋巴细胞趋化及凋亡能力减弱,导致用OVX-BMSC治疗结肠炎效果较差.结论 OVX-BMSC通过降低自身Fas/FasL表达减弱肠炎小鼠T淋巴细胞的趋化和凋亡.
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鸡胚发育中免疫器官肥大细胞类胰蛋白酶的研究
目的 研究不同日龄鸡胚免疫器官中肥大细胞(MC)与类胰蛋白酶阳性细胞(TPC)的形态、分布及出现时间.方法 取不同日龄鸡胚胸腺、脾脏和法氏囊,用Carnoy's液固定,阿尔新蓝-藏红O复染(AB/SO)法与免疫组织化学SABC法观察MC和TPC的分布.结果 13～14日龄鸡胚的胸腺、法氏囊、脾脏中早出现MC.随着日龄的增加,MC数量逐渐增多.16日龄鸡胚胸腺、脾脏和法氏囊组织中早观察到TPC,且与MC的形态与分布十分相似,但出现的时间晚于MC.结论 16日龄以后的鸡胚免疫器官中的MC内含有类胰蛋白酶,主要存在于结缔组织的MC中.
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栀子苷对LPS诱导的RAW264.7巨噬细胞TLR4-NF-κB通路的影响
目的 研究栀子苷对脂多糖(LPS)诱导的RAW264.7巨噬细胞中Toll样受体4(TLR4)表达和NF-κB活性以及前炎症细胞因子(TNF-α、IL-1和IL-6)释放的影响,以探讨栀子苷抗炎免疫的分子机制.方法 LPS处理RAW264.7巨噬细胞系建立炎性细胞模型.细胞分为正常对照组、实验对照组(LPS组)和实验组(LPS联合栀子苷处理组).CCK-8方法检测细胞增殖情况；ELISA检测培养细胞上清TNF-α、IL-1和IL-6的表达；实时定量PCR检测TLR4和P65的表达；Western blot法检测P65、磷酸化的P65 (p-P65)、p-NF-IκB和TLR4蛋白表达.结果 栀子苷对细胞增殖无影响；栀子苷能下调TNF-α、IL-1和IL-6的表达及抑制TLR4表达和NF-κB的活化.结论 栀子苷通过TLR4-NF-κB信号转导通路抑制NF-κB的活化进而控制细胞炎性因子释放而发挥抗炎免疫作用.
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靶向人Ⅰ型胶原蛋白α1链分子的shRNA真核表达载体的构建与鉴定
目的 构建靶向人Ⅰ型胶原蛋白α1链(COL1A1)分子的shRNA真核表达载体并检测其对靶分子的干扰效应.方法根据靶分子COL1A1基因序列,设计、合成编码其shRNA的互补寡核苷酸序列,克隆至线性化的pSilencerTM2.1-U6 neo载体中并对重组质粒进行酶切分析及测序鉴定；脂质体介导重组质粒转染乳腺癌MDA-MB-231细胞,经G418筛选获稳定表达细胞株,RT-PCR及Western blot法检测其对靶分子COL1A1表达的影响.结果 酶切及DNA测序证实重组质粒pshRNA-COL1A1序列正确.与对照组比较,重组表达质粒pshRNA-COL1A1-1和pshRNA-COL1A1-2在mRNA和蛋白水平均能显著抑制COL1A1基因的表达(P＜0.05),抑制率分别为(44.41％±3.90％,63.05％±3.13％)及(45.50％±2.71％,66.98％±2.08％).结论 成功构建靶向人乳腺癌MDA-MB-231细胞COL1 A1基因的shRNA真核表达载体.
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脾酪氨酸激酶抑制剂对脂多糖诱导巨噬细胞炎症反应的影响及机制
目的 研究脾酪氨酸激酶(Syk)在LPS诱导的Toll样受体4(TLR4)信号转导通路的作用.方法 用100 ng/mL脂多糖和不同浓度Syk抑制剂分别处理RAW264.7巨噬细胞后,采用Alarmarblue方法检测细胞增殖；采用Griess试剂检测细胞培养液中NO的含量；Western blot法检测诱导型一氧化氮合成酶(iNOS)的蛋白表达；ELISA检测巨噬细胞中TNF-α和IL-6含量,RAW-BlueTM巨噬细胞检测核因子κB (NF-κB)和激活子蛋白-1(AP-1)的活化.结果 Syk抑制剂作用于RAW264.7巨噬细胞24h,(0.5～14.0) μmol/L的Syk抑制剂对细胞增殖无明显影响,但当剂量超过1.5 μmol/L时,能显著抑制LPS刺激的RAW264.7巨噬细胞NO的产生和iNOS的蛋白表达,抑制TNF-α和IL-6的产生(P＜0.01)以及NF-κB和AP-1的激活.结论 Syk抑制剂降低LP诱导的巨噬细胞分泌NO和iNOS的蛋白表达及TNF-α和IL-6的释放,通过下调Syk下游TLR4受体信号传导通路的蛋白,进而显著降低转录因子NF-κB和AP-1的激活有关.
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体外雌激素通过调控骨髓间充质干细胞FasL表达介导破骨细胞凋亡
目的 探讨雌激素缺乏对骨髓间充质干细胞(BMSC)表达FasL水平下降对破骨细胞凋亡的影响.方法 建立绝经后骨质疏松模型(去势组,切除双侧卵巢).设立假手术组(sham)组、卵巢切除(OVX)组、OVX后雌激素(OVX+E2)处理组.将破骨细胞与3组分离的BMSC共培养,观察破骨细胞数量的改变；用annexinV-FITC/7-氨基放线菌素D(7-AAD)标记,流式细胞术检测各组破骨细胞凋亡的差异；Western blot法检测OVX组与sham组及OVX +E2组BMSC中FasL的表达情况.结果OVX组中破骨细胞的数量较sham组显著升高,凋亡程度降低.OVX +E2组中破骨细胞数量较OVX组数量显著降低,凋亡细胞比例升高.Western blot法结果显示sham组FasL较OVX组显著升高,OVX+ E2组FasL较OVX组显著降低.结论 雌激素能够降低BMSC中FasL基因的表达,这可能是影响破骨细胞凋亡的因素之一.
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shMRE11质粒转染对BEL7402/5-FU肝癌细胞耐药性的影响
目的 研究减数分裂重组蛋白11(MRE11)基因沉默对5-氟尿嘧啶(5-FU)耐药的肝癌细胞株Bel7402/5-FU的化疗敏感性及耐药相关蛋白1(MRP1)表达的影响,探讨MRE11与肝癌耐药性的关系.方法 采用阳离子脂质体法将shMRE11干扰质粒转染BEL7402/5-FU细胞,实时定量PCR(qRT-PCR)及Western blot法检测沉默效率；MTT法检测转染后BEL7402/5-FU细胞对化疗药物顺铂(DDP)、丝裂霉素(MMC)、阿霉素(ADM)、5-FU的敏感性,qRT-PCR及Western blot法分别检测转染后BEL7402/5-FU细胞中耐药相关蛋白MRP1 mRNA水平及蛋白水平的变化.结果 qRT-PCR及Western blot法检测显示MRE11mRNA及蛋白水平的沉默效率分别为78.0％、56.1％.MTT结果显示,shMRE 11转染BEL7402/5-FU细胞后,shMRE11实验组对DDP、MMC、ADM、5-FU的IC50均低于对照组(P＜0.05).qRT-PCR及Western blot法检测结果显示shMRE11实验组MRP1mRNA及蛋白水平的表达与对照组相比均有所降低(P＜0.05).结论 shMRE11能够提高肝癌耐药细胞BEL7402/5-FU对化疗药物的敏感性,降低耐药相关蛋白MRP1的表达.
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黄芪等5种中药对小鼠辐射损伤防护作用的实验研究
随着核工业和放射医学的快速发展,电离辐射对人体的损伤越来越受到重视.大剂量的辐射对人体各系统均有损伤,其中造血系统和免疫系统为敏感.电离辐射为非特异性刺激,作用于机体引起器官、组织、淋巴细胞终导致免疫系统功能下降[1].由于造血系统和免疫系统对电离辐射极为敏感,在辐射防护中增强对造血系统和免疫系统的保护是非常必要的.中医药在辐射损伤的防治中具有一定的作用[2].本实验采用60Coγ射线对小鼠进行一次性大剂量全身照射,观察具有调节免疫功能的5种中药黄芪、熟地、枸杞子、女贞子、菟丝子对辐射损伤小鼠的防护作用,探讨5种中药的抗辐射机制,为辐射防护剂新药的开发提供一定的实验依据.
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脱水淫羊藿素对腹膜炎小鼠的保护作用
目的 研究脱水淫羊藿素(AHI)对酵母多糖诱导的小鼠腹膜炎的影响.方法 采用酵母多糖诱导腹膜炎模型,观察各组小鼠的生存情况,收集腹腔液,分别进行白细胞计数,Griess试剂联合酶标仪检测一氧化氮(NO)、流式细胞术检测小鼠腹腔渗出液中IL-6、IL-10、TNF-α、单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)的水平；采用Fluo4-AM标记,激光扫描共聚焦显微镜实时检测AHI对骨髓巨噬细胞钙离子内流的影响；Western blot法检测AHI对一氧化氮合酶(iNOS)的影响.结果 4 mg/kg体质量的AHI能提高腹膜炎小鼠的存活,减少腹腔白细胞的数量,降低NO、IL-10、TNF-α、MCP-1、IL-6的分泌；5μmol/L的AHI能抑制小鼠巨噬细胞的钙内流和iNOS的表达.结论 AHI对酵母多糖诱导的腹膜炎小鼠具有保护作用,可能与抑制巨噬细胞的钙离子内流、iNOS表达有关.
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噬菌体肽库中小鼠NMDA受体和转铁蛋白受体模拟抗原表位的筛选
N-甲基-D-天冬氨酸受体(N-methyl-D-asparate receptor,NR)是兴奋性氨基酸的一种特异性受体,在中枢神经发育及神经回路行程中发挥关键作用.NR过度激活可导致癫痫发作、痴呆、脑卒中等临床表现,功能降低可出现精神分裂样症状[1]及T细胞或者抗体及补体介导抗NR抗体脑炎[2].NR含有7个亚单位,NR1是其功能亚单位,具有NR的一切电生理学特性和药理学活性[3].选择性阻断NR1活性可能成为相关疾病的治疗手段.转铁蛋白受体(transferrin receptor,TfR)是参与细胞铁摄取和生长调控的跨膜型糖蛋白,其单克隆抗体OX-26可通过类似铁与转铁蛋白受体结合的机制,携带大分子药物通过血脑屏障.因此,设想含有NR1和TfR单克隆抗体(mAb)的B细胞表位的融合蛋白可通过刺激机体产生抗转铁蛋白受体抗体与药物的复合物,与脑毛细血管上的转铁蛋白受体结合,协助NR1抗体透过血脑屏障,实现超早期抑制NR过度激活以调控机体应激、防止兴奋性脑损伤、减缓药物成瘾和治疗疼痛等作用.
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MicroRNA-10a促进人胎盘间充质干细胞向内胚层细胞的分化
目的 研究microRNA-10a(miR-10a)参与的转录后调控,提高人胎盘间充质干细胞(PMSC)向内胚层细胞分化的能力.方法 利用慢病毒过表达miR-10a前体和反义寡核苷酸抑制miR-10a表达,分析miR-10a与其调控的靶基因Hoxa1的表达关系；并采用实时定量PCR(qRT-PCR)和免疫荧光细胞化学染色检测miR-10a过表达后,PMSC向内胚层细胞分化能力的变化.结果 PMSC中过表达和抑制表达miR-10a,能反向调控其靶基因Hoxa1的表达；miR-10a过表达后,内胚层细胞特异性基因FoxA2、Sox-17、Pdx-1和Cdx2的表达量显著上升,FOXA2、SOX-17和PDX-1阳性细胞数量明显增多.结论 miR-10a在化学诱导向内胚层细胞分化的PMSC中呈现高表达；miR-10a可能通过抑制其靶基因Hoxa1的表达,调控下游内胚层基因表达上调,从而促进胎盘间充质干细胞向内胚层细胞分化.
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瘦素对大鼠气道平滑肌细胞TGF-β1及Ⅰ型胶原蛋白表达的影响
目的 观察瘦素对大鼠气道平滑肌细胞(ASMC)转化生长因子-β1(TGF-β1)及Ⅰ型胶原蛋白表达的影响.方法 贴壁法体外培养大鼠ASMC.不同浓度瘦素刺激体外培养的ASMC,分为空白对照组、不同浓度(50、100、200) μg/L干预组.各组干预24h后RT-PCR法检测各组TGF-β1及Ⅰ型胶原蛋白mRNA表达.将ASMC按5×105接种于6孔板,经上述不同浓度瘦素干预48 h后,收集细胞上清液.各组干预48 h后采用ELISA测定各组上清中TGF-β1及Ⅰ型胶原蛋白水平.结果 与对照组相比,各浓度瘦素处理的ASMC中TGF-β1及Ⅰ型胶原蛋白mRNA和蛋白的表达增加(P＜0.05),并与瘦素浓度呈正相关.结论 瘦素可以增加体外培养的ASMC中的TGF-β1和Ⅰ型胶原蛋白的表达.
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自然戒断期成瘾药物依赖者CD4+CD25+CD127low调节性T细胞的变化特征及意义
目的 研究自然戒断期成瘾药物依赖者外周血CD4+ CD25+ CD127low调节性T细胞(Treg)及外周血单个核细胞(PBMC)中转化生长因β1(TGF-β1) mRNA表达水平的变化,探讨成瘾药物对成瘾药物依赖者体内Treg的影响.方法 采集自然戒断6个月和18个月半的成瘾药物依赖者各40例及30例健康人的外周血,使用流式细胞仪检测Treg,用RT-PCR检测PBMC中TGF-β1 mRNA表达水平.结果 与对照组比较,戒断18个月组Treg、TGF-β1 mRNA含量显著增高,而戒毒6个月组未发现显著性变化.结论 成瘾药物对依赖者Treg的影响是长期性的,其介导的Treg异常,可能是引起成瘾药物依赖者免疫功能紊乱的原因之一.
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类风湿关节炎患者外周血中可溶型HVEM及IL-17和TNF-α的检测
目的 检测类风湿关节炎(RA)患者血清中可溶性单纯疱疹病毒侵入介体(sHVEM)、IL-17和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的水平并探讨其临床意义.方法 用夹心ELISA检测RA患者血清中sHVEM、IL-17和TNF-α水平,并比较患者组与对照组血清sHVEM、IL-17、TNF-α的差异,分析血清sHVEM与IL-17、TNF-α的相关性.分析sHVEM与红细胞沉降率(ESR)、C反应蛋白(CRP)、类风湿因子(RF)、抗环瓜氨酸肽(CCP)抗体和抗角蛋白抗体(AKA)之间的相关性.组间均数的比较采用t检验,数据间的相关性分析采用Sperman等级相关及多元回归分析.结果 RA患者组血清sHVEM、IL-17、TNF-α水平分别为(140.2±47.4) μg/L、(61.4±19.4) pg/mL、(43.6±17.0) pg/mL,与正常人水平(94.4±23.6)μg/L、(30.7±15.1) pg/mL、(14.3±9.0) pg/mL比较均明显升高,差异有统计学意义(P＜0.05).RA患者组血清sHVEM水平与IL-17、TNF-α、CRP、RF、抗CCP抗体呈正相关,与ESR、AKA水平无相关性.结论 RA患者血清中sHVEM含量增高,RA患者血清IL-17、TNF-α水平增高可能与sHVEM异常增高有关.
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创伤弧菌鞭毛蛋白单克隆抗体的制备及在食品检测中的应用
目的 制备创伤弧菌鞭毛蛋白单克隆抗体(mAb)并建立双抗夹心ELISA.方法 采用差速离心法提取创伤弧菌ATCC 1.1758菌株的鞭毛蛋白,并以此为抗原免疫BALB/c小鼠,抗血清效价达到1∶32 000时,取脾细胞与生长良好的对数期Sp2/0骨髓瘤细胞进行融合.采用杂交瘤技术和ELISA制备并筛选分泌mAb的杂交瘤细胞株,有限稀释法对阳性孔克隆化培养.制备腹水,纯化以得到抗体.结果 获得5株持续、稳定分泌抗创伤弧菌鞭毛蛋白mAb的杂交瘤细胞株,命名为VVNo.1～VVNo.5,抗体效价高达1∶(2×106).SDS-PAGE结果显示,提取出的鞭毛蛋白相对分子质量(Mr)为44 000并且纯度较高.采用VVNo.5抗体建立了创伤弧菌双抗夹心ELISA,该方法的检测灵敏度达到103 CFU/mL菌液,通过采用12株创伤弧菌和130株非创伤弧菌进行特异性实验,12株创伤弧菌呈阳性反应,130株非创伤弧菌呈阴性反应,结果表明WNo.5抗体具有良好的特异性.在基质添加试验中,通过增菌,低检出限为2 CFU/25 g样品.结论 成功制备了创伤弧菌鞭毛蛋白单克隆抗体,并将其应用于双抗夹心ELISA,该方法的检测灵敏度达到1×103 CFU/mL菌液,与所测试的非目标菌没有交叉反应.
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定点突变和随机突变PCR构建噬菌体突变次级抗体库方法的比较
目的 以突变TomlinsonⅠ库中筛选的抗细胞黏附分子L1的胞外区单链抗体为例,对定点突变和随机突变两种构建噬菌体抗体次级库的方法进行比较.方法 设计定点突变和随机PCR引物在基因水平经PCR、酶切、连接将已有噬菌粒引入突变后转染大肠杆菌构建噬菌体次级抗体库；之后使用噬菌体ELISA确定阳性单克隆比例,采用皮尔森x2检验进行比较.结果 两种方法构建的次级抗体库库容分别为1.4×106 pfu/mL和2.5×106 pfu/mL,两库阳性单克隆比例分别为32.5％和35.5％,二者相比差异无统计学意义(P＞0.05).结论 两种突变方法都有望获得高亲和力的抗体.
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Th17细胞与移植物抗宿主病关系的研究进展
Th17细胞是一种新发现的不同于Th1、Th2的CD4+T细胞亚群,IL-17是其主要的效应分子,已被证实在多种自身免疫病和炎性疾病中发挥关键作用.移植物抗宿主病(GVHD)是异基因造血干细胞移植术后主要和严重的并发症之一,是供者T细胞介导的组织炎性损伤,CD4+T细胞是启动GVHD的关键.近年来关于Th17细胞在GVHD发生过程中发挥作用的研究得出了不一致的结论,深入研究Th17的作用将可能为GVHD的临床治疗提供新的路径.现就CD4+T细胞和Th17细胞与GVHD关联性的研究进展进行综述.
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白介素25在过敏性疾病中的研究进展
白介素25(IL-25)为IL-17家族新成员,主要由活化的Th2细胞和上皮细胞产生,通过诱导Th2型细胞因子(IL-4、IL-5、IL-13)的表达,促进Th2型免疫反应的发生,从而在过敏性疾病(哮喘和特应性皮炎)的发病中发挥重要作用.本文将对IL-25调节Th2型免疫反应及在过敏性疾病的作用进行介绍,并进一步阐述可能相关的细胞和分子机制.
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低氧对肿瘤干细胞增殖及耐药作用的分子机制
低氧是多种肿瘤存在的基本生物学现象,参与构成复杂的肿瘤发展和侵袭的微环境.低氧环境下,低氧诱导因子(HIF)及其相关信号通路通过调节细胞的增殖、生存和代谢,精确的调控了肿瘤的侵袭、转移和化疗抵抗.同时也解释了肿瘤干细胞通过HIF依赖的方式获得自我更新的干细胞特性以及上皮间质转化特征.本文讨论了低氧及HIF信号通路参与调节肿瘤干细胞增殖和耐药的分子机制,及其在防治肿瘤复发、转移中的意义.
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诱导性多能干细胞的表观遗传学调控差异及其与诱导移植排斥的关系
表观遗传学主要研究DNA甲基化、组蛋白修饰和非编码RNA等不涉及DNA序列改变的可遗传表型变化对细胞生物学行为的调控问题.诱导性多能干细胞(iPS细胞)是体细胞经过重编程后形成的类似于胚胎干细胞(ESC)的“全能型”细胞,可以被诱导分化为多种类型的组织、细胞用于细胞治疗或构建人工组织、器官.iPS细胞可以从自体获得,有望实现组织、器官的“同基因移植”,避开移植排斥这个大的难题.但体细胞经过重编程后,表观遗传学特性发生了很大变化,iPS细胞的同基因移植是否就真的能回避移植排斥成为新的研究热点.
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microRNA在哮喘气道炎症中作用机制及应用前景
支气管哮喘是常见的气道慢性非特异性炎症性疾病.吸入糖皮质激素是目前有效的治疗方法,但激素抵抗及长期大剂量使用激素所引发的副作用仍不能解决.以microRNA (miRNA)为靶点的治疗药物代表着一种新治疗策略,它是一类内源性非编码RNA,近年来发现miRNA与哮喘气道炎症关系密切,通过基因水平调控哮喘发生发展,日益引起研究者重视.
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全细胞差减筛选法筛选与人卵巢癌细胞特异性结合的短肽
目的 全细胞差减法筛选人源性卵巢癌HO8910细胞株特异性结合短肽,为卵巢癌的靶向药物治疗提供理想的载体.方法 以人卵巢癌HO8910细胞为靶细胞,人正常卵巢上皮细胞为吸附细胞,对噬菌体随机环7肽库进行4轮差减筛选；ELISA验证阳性噬菌体克隆；对获得的阳性克隆进行DNA测序及生物信息学分析,采用免疫荧光细胞化学方法鉴定噬菌体阳性克隆(phage1)与HO8910细胞的特异性结合.结果 经过4轮筛选后,噬菌体在靶细胞HO8910上出现了明显的富集现象；ELISA对20个随机挑选的克隆进行鉴定,12个可与HO8910特异性结合；DNA测序后得到一段与卵巢癌细胞特异性结合的7肽(SWQIGGN),免疫荧光细胞化学结果显示phage1能特异性结合HO8910细胞.结论 采用全细胞差减法成功筛选到与卵巢癌细胞特异性结合的7肽.
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体外合成EGFP的mRNA转染人脐带间充质干细胞的稳定性研究
目的 鉴定人脐带间充质干细胞(hUCMSC),通过体外修饰增加体外合成mRNA转染hUCMSC的稳定性.方法 流式细胞仪检测hUCMSC免疫表型,油红O和碱性磷酸酶染色分别进行成脂、成骨分化鉴定.体外合成EGFP的mRNA经polyA尾、帽子结构及碱基等方面的修饰转染hUCMSC,流式检测荧光强度.Trypan blue染色观察mRNA转染对细胞活性的影响.结果 hUCMSC高表达CD29、CD44、CD105,低表达CD34、CD45、HLA-DR,且向成脂、成骨方向分化.通过一系列修饰体外合成EGFP的修饰mRNA稳定性更好,且mRNA转染与DNA相比对细胞毒性更小.结论 体外合成的mRNA经一系列的修饰后稳定性大大提高,可进入hUCMSC翻译成蛋白.
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人脐带间充质干细胞的原代培养及多向分化潜能的研究
目的 探讨人脐带间充质干细胞(hUCMSC)的体外分离培养鉴定方法及多向分化潜能.方法 应用Ⅱ型胶原酶和透明质酸酶联合消化法及组织贴块培养法对hUCMSC进行体外培养.在倒置显微镜下观察不同方法获得的hUCMSC的生长特点；台盼蓝法测定细胞传代成活率；采用生长曲线、MTT法测定hUCMSC的增殖、流式细胞术(FCM)测定细胞周期变化及细胞免疫表型变化；采用相应试剂盒鉴定其向成脂细胞、成骨细胞的分化,采用免疫荧光细胞化学技术检测向成心肌样细胞的分化、采用荧光标记技术检测hUCMSC向血管内皮细胞的分化.结果 酶消化法分离培养的细胞1d后,在倒置相差显微镜下可见细胞贴壁呈圆形生长,4d后生长迅速呈长梭形,7d后由中心向周围生长且增殖明显,10 d后达80％融合即可传代；贴块法培养的细胞7d后,可见细胞从组织块边缘长出,10 d后细胞数量逐渐增多,16 d后细胞生长迅速呈单层致密排列即可传代,细胞传代成活率均为96％以上.2种方法获得的第3代细胞生长曲线近似“S”形、MTT法显示3～5d细胞增殖较明显；酶消化法培养的细胞G0/G1期和S+G2/M期所占比例分别为88.78％和10.21％,组织贴块法培养的细胞G0/G1期和S+G2/M期所占比例分别为84.82％和13.87％,细胞DNA周期无明显差异；2种方法获得的细胞经FCM检测CD90、CD105、CD73阳性率均为99％以上为高表达；CD45、CD34、CD14、CD11b、CD79a、CD19、HLA-DR低表达；2种方法获得的细胞在体外诱导都能向成骨细胞、成脂细胞、成心肌样细胞及血管内皮细胞分化,其诱导阳性率均为90％以上.结论 酶消化法和贴块法均可高效获得hUCMSC,与贴块法培养相比较,酶消化法能更有效的获得扩增迅速、细胞成分单一的细胞.
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携带p53AIP1基因的重组复制缺陷型腺病毒载体的构建、鉴定及其在人宫颈癌细胞系HeLa中的表达
目的 构建携带外源性p53调节的凋亡诱导蛋白1 (p53AIP1)基因重组复制缺陷型腺病毒载体,观察其在HeLa细胞中的表达.方法 设计针对p53AIP1基因序列并插入特定酶切位点的特异引物,通过PCR扩增p53AIP1基因序列,利用DNA重组技术将p53AIP1基因定向插入到腺病毒穿梭载体pDC316,构建穿梭质粒pDC316-p53AIP1；在LipofectamineTM 2000介导下穿梭载体pDC316-p53AIP1和腺病毒骨架载体pBHGlox△E1,3Cre共转染进HEK293细胞；通过Cre-loxP重组酶系统,使Shuttle质粒和辅助大质粒发生定点重组从而包装产生携带目的基因p53AIP1的复制缺陷型重组腺病毒(Ad-p53AIP1).将Ad-p53AIP1和Ad-null按MOI=100感染HeLa细胞,应用Western blot法检测蛋白水平的表达.结果 基因片段成功连入pDC316载体上,对所构建新载体分别行PCR扩增、酶切、测序鉴定,与预计一致.Western blot法检测证实,Ad-p53AIP1感染HeLa细胞后蛋白有表达.结论 成功构建携带p53AIP1基因的重组复制缺陷型腺病毒载体,并且有较强的感染能力.
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白念珠菌磷酸甘油酸激酶1的原核表达及免疫原性分析
目的 构建白念珠菌基因磷酸甘油酸激酶1(PGK-1)基因的原核表达质粒并诱导其表达,对其免疫原性进行分析.方法 PCR法获取白念珠菌SC5314的PGK-1基因,插入原核表达载体pET30a中,以重组质粒转染感受态细胞E.coli BL21,经IPTG诱导表达后,SDS-PAGE检测蛋白的表达情况,并用Western blot法验证.用纯化获取的重组蛋白免疫BALB/c小鼠,ELISA对蛋白的免疫原性进行评价.结果 成功构建原核表达质粒pET-30a-pgk-1,诱导后表达的重组蛋白相对分子质量(Mr)约为54 810.ELISA检测抗体效价约为1∶1 024.结论 成功获得白念珠菌PGK-1重组蛋白,该蛋白具有良好的免疫原性.
| 年 | 期数 |
| 2018 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2017 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2016 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2015 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2014 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2013 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2012 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2011 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2010 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2009 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2008 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2007 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2006 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2005 | 01 02 03 04 05 06 z1 |
| 2004 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2003 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2002 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2001 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2000 | 01 02 03 04 05 06 |
| 1999 | 01 02 |
| 1995 | 01 02 03 |
| 1994 | 01 02 |
| 1993 | 01 02 03 04 |
| 1992 | 01 02 03 04 |
| 1991 | 01 02 03 04 |
| 1990 | 01 02 |
| 1989 | 01 02 03 04 |
