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烟草烟雾凝集物对BEAS-2B细胞caspase-1及相关炎性细胞因子表达的影响
目的 观察烟草烟雾凝集物CSC(cigarette smoke condensate,CSC)刺激永生化人支气管上皮细胞(Immortalized human bronchial epithelial cells,BEAS-2B),其caspase-1及相关炎性细胞因子的改变.方法 分别以终浓度为0 mg/ml(空白对照与DMSO溶剂对照)、0.015 mg/ml(1/4 IC50)、0.03mg/ml(1/2 IC50)及0.06 mg/ml(IC50)的CSC溶液作用于BEAS-2B细胞8、16和24 h,检测caspase-1活性,并用ELISA方法检测细胞内caspase-1活性及含量和细胞培养上清液中IL-1β和IL-18的水平.结果 随CSC刺激浓度增加,BEAS-2B细胞抑制率增大,CSC对BEAS-2B细胞的半数抑制浓度约为0.06 mg/ml.不同浓度CSC处理细胞8和16 h后,1/4IC50、1/2IC50与IC50组caspase-1活性和含量以及IL-1β、IL-18水平均高于对照组(P＜0.05),且随染毒浓度增高而增高(P＜0.05);不同浓度CSC处理细胞24h后,各染毒组细胞caspase-1活性和含量以及IL-1β、IL-18水平均高于对照组(P＜0.05),但1/2IC50组与IC50组caspase-1活性及含量差异无统计学意义(P＞0.05).结论 CSC处理BEAS-2B细胞可引起caspase-1活化,且IL-1β、IL-18表达水平增高,提示可能存在caspase-1依赖的细胞焦亡(pyroptosis).
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白术黄芪汤乙酸乙酯提取物对巨噬细胞NLRP3炎症小体的作用研究
目的:观察白术黄芪汤乙酸乙酯提取物对巨噬细胞NOD样受体-3(NLRP3)炎症小体的影响.方法:用佛波酯(PMA) (10 ng·mL-1)刺激U937细胞48 h,诱导其成为巨噬细胞,观察不同剂量白术黄芪汤乙酸乙酯提取物(0,3.125,6.25,12.5,25,50,100 μg·mL-1)对细胞活力的作用,并选择合适的浓度.采用实时荧光定量(RT-PCR)和免疫印迹法(Western blot)测定细胞中NLRP3,半胱天冬酶-1(caspase-1)的含量,采用酶联免疫吸附测定(ELISA)检测细胞上清液中白细胞介素(IL)-1β的含量.结果:细胞计数试剂盒(CCK-8)实验表明,当药物浓度低于25 μg· mL-1时,对细胞活力没有影响,当药物浓度高于50 μg· mL-1时,对细胞活力有抑制作用(P＜0.05),选择25 μg·mL-1浓度进行后续实验.与空白组相比,LPS组细胞中NLRP3,caspase-1表达明显增加(P＜0.01),细胞培养上清中的IL-1β浓度也明显增高(P＜0.01).白术黄芪汤乙酸乙酯提取物作用后,NLRP3,caspase-1,IL-1β表达均明显下降(P＜0.05).结论:白术黄芪汤乙酸乙酯提取物对LPS刺激的巨噬细胞NLRP3炎症小体有抑制作用.
关键词： 炎症小体 白术黄芪汤乙酸乙酯提取物 NLRP3 Caspase-1 IL-1β -
资生肾气丸对痛风性关节炎大鼠IL-1表达水平的影响
目的:观察资生肾气丸对痛风性关节炎大鼠血清中白介素1β(IL-1β)及大鼠滑膜半胱氨酸天冬氨酸特异蛋白酶-1(Caspase-1)的表达水平的影响,探讨资生肾气丸防治痛风性关节炎(GA)的作用机制.方法:将84只SD大鼠随机分为7组:空白组、模型组、中药痛风舒对照组、西药秋水仙碱对照组及资生肾气丸复方低、中、高剂量组,每组12只.采用尿酸钠联合氧嗪酸钾诱导大鼠痛风性关节炎模型,应用ELISA方法检测各组大鼠血清中IL-1β含量,应用免疫组化方法检测大鼠滑膜Caspase-1含量.结果:模型组和空白组IL-1β、Caspase-1含量差异有统计学意义(P＜0.01);西药秋水仙碱对照组、资生肾气丸复方低、中、高剂量组IL-1β和Caspase-1含量与模型组比较差异有统计学意义(P＜0.01);中药中剂量组与痛风舒对照组比较,IL-1β、Caspase-1含量差异有统计学意义(P＜0.01),但与西药对照组比较差异无统计学意义(P＞0.01).结论:资生肾气丸可影响痛风性关节炎大鼠IL-1β和Caspase-1表达,对痛风性关节炎具有防治作用.
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健脾清热活血方对溃疡性结肠炎患者疗效及NLRP-6、Caspase-1、IL-8的影响
目的:探讨健脾清热活血方对UC患者NLRP-6、Caspase-1及IL-18的变化.方法:将30例UC患者随机分为治疗组和对照组,治疗组给予健脾清热活血方,对照组给予美沙拉嗪颗粒剂,疗程为12周,应用肠镜下Baron评分、中医证候积分及NLRP-6、Caspase-1、IL-18表达变化评估两组疗效.结果:两组患者总体有效率相当,无显著差异;肠镜下Baron评分治疗后降低,组内前后比较有统计学意义,组间比较无显著性差异;两组患者中医证候积分治疗后均降低,治疗前与治疗后12周组内比有显著性性差异(P＜0.05),组间比较无显著性差异;治疗后两组患者NLRP-6、Caspase-1、IL-18基因及免疫组化阳性细胞分布面积均降低,治疗后组内及组间比较均有统计学差异(P＜0.05).结论:健脾清热活血方可负向调节NLRP-6表达,抑制Caspase-1活化,下调IL-18表达,发挥治疗溃疡性结肠炎效用.
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CCK-8降低LPS诱导的小鼠单核细胞RAW264.7 CHOP／caspase-11／caspase-1的表达
目的：探讨CCK-8对LPS激活RAW264.7细胞CHOP／caspase-11／caspase-1信号通路的影响。方法用LPS和（或） CCK-8和（或） CCK-8的1受体阻滞剂孵育RAW 264.7细胞，用Western blot法检测CHOP、caspase-11蛋白表达，用试剂盒检测caspase-1活性，用ELISA技术检测细胞培养上清中IL-1β水平。结果与对照组相比，LPS组CHOP、caspase-11表达水平均显著升高（ P＜0.05），给予CCK-8可有效抑制LPS诱导的CHOP、caspase-11表达升高（ P＜0.05），而预先给予CCK-8的1受体阻滞剂可明显抑制CCK-8的作用。 caspase-1活性变化、IL-1β含量变化趋势均与CHOP、caspase-11表达水平变化趋势一致（ P＜0.05）。结论 CCK-8通过受体1抑制CHOP／caspase-11／caspase-1表达，减少LPS诱导IL-1β的生成，发挥抗炎作用。
关键词： 胆囊收缩素 脂多糖 C/EBP同源蛋白 caspase-11 Caspase-1 -
细胞焦亡在肾脏炎性损伤中的作用研究进展
细胞焦亡(pyroptoysis)是由活化的caspase-1触发的一种特殊的细胞程序性死亡.肾脏细胞焦亡在肾损伤中发挥着重要的作用.GSDMD切割焦亡关键蛋白caspase-1引起下游炎性反应因子IL-18,IL-1β的成熟和释放引起肾脏炎性反应和细胞焦亡发生.本文从NLRP3激活导致肾脏炎性反应、GSDMD裂解引发细胞焦亡等角度,阐释NLRP3-caspase-1-GSDMD介导的细胞焦亡在肾脏炎性反应中的作用.
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Caspase-1介导糖原合酶激酶-3β促进D-氨基半乳糖联合脂多糖诱导的小鼠急性肝衰竭肝损伤
目的：研究半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白水解酶-1(caspase-1)在 D-氨基半乳糖(D-GalN)联合脂多糖(LPS)诱导的小鼠急性肝衰竭(ALF)中的作用及其可能机制。方法以 C57BL/6小鼠为研究对象,通过腹腔注射溶于生理盐水的 D-GalN(450 mg/ kg)联合 LPS(10μg/ kg)构建小鼠ALF 模型；将小鼠分为对照组、氟甲基酮( caspase-1抑制剂,Z-WEHD-FMK)单独处理组、ALF 组、Z-WEHD-FMK 干预组。组织病理学分析及血清转氨酶活性测定观察肝组织损伤严重程度；Western blot 检测肝脏组织中 caspase-1以及糖原合激酶-3β(GSK-3β)磷酸化的表达；qRT-PCR 检测细胞炎症因子基因表达。结果 caspase-1 mRNA 和蛋白水平在急性肝衰竭疾病进展过程中活性升高。给予Z-WEHD-FMK 抑制 caspase-1活性后,可显著改善肝脏病例损伤并且降低血清 ALT、AST 水平[ALT：Z-WEHD-FMK 干预组(479.2±39.5) U/ L,ALF 组(998.5±60.4) U/ L,P<0.05；AST：Z-WEHD-FMK干预组(478.5±28.6) U/ L,ALF 组(1180.7±91.4) U/ L,P<0.05]；此外,Z-WEHD-FMK 干预组炎症因子 TNF-α、 IL-1β、 IL-18、 IL-33的 mRNA 水平表达下调； Western blot 显示 Z-WEHD-FMK 抑制caspase-1活性后,GSK-3β发生磷酸化而活性受抑制。结论急性肝衰竭疾病进展过程中,caspase-1活化提高了 GSK-3β活性,促进炎症反应的发生并导致肝脏组织的损伤。
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选择性Caspase-1抑制剂对BXSB狼疮性肾炎小鼠治疗作用研究
目的研究特异性Caspase-1抑制剂对狼疮性肾炎(LN)的治疗作用及其作用机制.方法应用特异性Caspase-1抑制剂AC-YVAD-CMK处理LN模型BXSB小鼠4周,然后观察此潜在药物对该模型尿蛋白浓度、肾功能和血清自身抗体水平以及肾脏病理形态学的影响,继之检测它对肾脏局部及全身系统Caspase-1活性以及其下游细胞因子IL-18和IFN-γ表达的影响.结果未治疗LN模型血清肌酐(Scr)、血清抗ds-DNA抗体水平以及尿蛋白浓度显著升高(P均＜0.05);肾小球IgG沉积及肾小球病理损伤程度显著较对照小鼠严重(P均＜0.005);肾脏及脾脏Caspase-1活性显著升高(P＜0.01),成熟形式IL-18蛋白表达升高(P＜0.001),IFN-γmRNA表达显著上调(P＜0.05);血清IFN-γ水平也显著升高(P＜0.01).ICE抑制剂处理后Scr、抗ds-DNA抗体水平及尿蛋白浓度显著回降(P＜0.05);肾小球病理损伤较未处理组显著减轻(P＜0.05),但肾小球IgG沉积差异无统计学意义(P＞0.05);肾脏及脾脏Caspase-1活性、成熟IL-18蛋白表达和IFN-γ mRNA表达均有不同程度回降(P均＜0.05),血清IFN-γ水平也显著回降(P＜0.05).结论选择性Caspase-1抑制剂对LN肾损伤具有良好的保护作用,抑制Caspase-1活性,进而抑制IL-18等细胞因子的活化和下游因子IFN-γ等的表达是其主要作用机制.
关键词： 狼疮性肾炎 Caspase-1 白细胞介素-1β转换酶抑制剂 治疗 -
川芎嗪对大鼠惊厥性脑损伤caspase-1 mRNA表达的影响
目的 探讨幼年大鼠反复惊厥后caspase-1 mRNA的表达及川芎嗪对其表达的影响.方法 162只20日龄健康Sprague-Dawley(SD)大鼠随机分为3组:对照组、惊厥组及川芎嗪干预组.通过三氟乙醚反复吸入(连续6次,1次/d)制作发育期大鼠惊厥动物模型.RT-PCR方法检测各组动物反复惊厥后6 h、1 d、3 d、7 d时点的脑组织caspase-1 mRNA的表达,同时观察脑含水量变化及对脑损伤进行神经病理半定量积分.结果 川芎嗪干预组各时间点caspase-1 mRNA表达较惊厥组显著下调、脑含水量和脑损伤积分显著降低(P＜0.01).结论 川芎嗪能有效减轻惊厥性脑水肿和神经元病理损伤,其机制可能与抑制caspase-1mRNA的异常表达有关.
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低温对失血性休克炎症小体活化的影响研究
目的 探索治疗性低温对失血性休克(hemorrhagic shock,HS)大鼠肺组织炎症小体活化的影响.方法 本研究将24只SD大鼠随机(随机数字法)分成3组:假手术组,常温液体复苏(normothermia resuscitation,NR)组,低温液体复苏(hypothermia resuscitation,HR)组.各组通过股动脉放血到平均动脉压达40 mmHg(1 mmHg=0.133 kPa)保持1h建立HS模型,随后NR组和HR组通过液体复苏使平均动脉压达90 mmHg,维持1h,4h后通过放血处死各组大鼠,留取大鼠肺组织.经苏木精-伊红(HE)染色于光镜下观察肺组织的损伤程度,使用于湿比重法检测肺组织水肿情况,采用RT-PCR和Western blotting检测肺组织炎症小体NLRP-3、Caspase-1、IL-1βmRNA和蛋白表达水平.多组间比较采用方差分析,组间两两比较采用SNK-q检验,以P＜0.05为差异具有统计学意义.结果 (1) HE染色结果示,与NR组相比,HR组急性肺损伤程度明显较低.(2)肺组织湿/干比重与HR组相比NR组肺水肿显著降低,HR组(5.85 ±0.10);NR组(6.47±0.17),t=3.14,P＜0.05;(3)与NR组相比,HR组的NLRP-3和Caspase-1的蛋白表达均显著减少;(4)与NR组相比,HR组的NLRP-3 mRNA表达水平显著降低,HR组(1.027±0.143),NR组(1.349 ±0.163),t=4.36,P＜0.05;HR组的IL-1β mRNA表达水平显著降低,HR组(1.623±0.125),NR组(2.388±0.229),t=7.72,P＜0.05.结论 治疗性低温能够降低炎症小体信号通路的活化,从而减弱HS诱导的肺组织损伤.
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Caspase-1和IL-1β在老年精神分裂症患者血清中的表达
目的:探讨Caspase-1和IL-1β与老年精神分裂症之间的关系.方法:运用ELISA法检测27例老年精神分裂症患者(分裂症组)、19例同胞组(老年精神分裂症患者的直系亲属)及18例正常老年组血清中Caspase-1与IL-1β的表达,统计比较相关检测数据.结果:分裂症组血清中Caspase-1和IL-1β明显高于正常组和同胞组(P<0.05);同胞组与正常组比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论:Caspase-差1和IL- 1β的高表达与老年精神分裂症的发病有关,且其表达与遗传因素无关.
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急性缺血-再灌注肾损伤小鼠肾组织Caspase-1蛋白表达及酶活性变化
目的 探讨急性缺血-再灌注肾损伤时caspase-1蛋白表达及酶活性变化.方法 复制急性缺血-再灌注肾损伤小鼠模型,应用全自动生化分析仪测定血尿素氮(BUN)及血清肌酐(Scr)水平,应用免疫组化及荧光标记法分别测定肾组织caspase-1蛋白表达水平以及其酶活性的变化.结果 模型组Scr和BUN水平均较假模组显著升高;模型组肾组织caspase-1表达强度较假模组显著升高;模型组肾组织caspase-1酶活性也较假模组显著升高.结论 Caspase-1产生及活性升高参与急性缺血-再灌注肾损伤,抑制该酶活性,从而控制其下游炎症因子的过度活化可能对肾脏急性缺血-再灌注具有保护作用.
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焦亡的研究进展及胰腺腺泡细胞焦亡的研究现状
焦亡是一种caspase-1/4/5/11介导的程序性细胞死亡方式,腺泡细胞死亡方式是急性胰腺炎(acute pancreatitis,AP)早期重要的病理学变化,不同的死亡方式可影响AP病情发展.目前大部分学者认为凋亡腺泡细胞比例增加可以减轻AP病情,而坏死则相反.我们前期实验中用电镜观察AP腺泡细胞的形态,发现许多细胞非常符合焦亡特点,免疫组织化学结果发现AP腺泡细胞存在caspase-1活化.提示焦亡可能参与的炎症反应.因此了解细胞焦亡的发生和调控,分析和探讨AP腺泡细胞可能发生焦亡的机制及临床意义,有助于为AP的临床诊治提供新思路.但其深层机制仍需进一步实验证明.
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实验性重症急性胰腺炎Caspase-1激活的细胞因子的表达
目的研究实验性重症急性胰腺炎(SAP)Caspase-1激活的细胞因子的表达.方法SD大鼠32只,随机分4组:正常对照组(HC组)、SAP 6 h组、SAP 12 h组、SAP 18 h组.采用5%牛磺胆酸钠逆行注入胰胆管诱发大鼠SAP模型.通过HITACHI-7150型自动生化分析仪检测大鼠血清淀粉酶;采用ELISA法测定血清IL-1β水平;酶化学法测定胰腺MPO活性;半定量RT-PCR检测胰腺Caspase-1、IL-1β及IL-18 mRNA的表达;免疫组织化学方法检测胰腺IL-1β蛋白的表达.结果SAP各组血清淀粉酶和IL-1β水平显著升高,并伴有胰腺组织髓过氧化物酶(MPO)显著增加,与HC组相比,其差异均具有显著性意义(P＜0.01).HC组胰腺组织内可见Caspase-1 mRNA表达,但IL-1β及IL-18 mRNA的表达较弱SAP各组胰腺组织内Caspase-1、IL-1β及IL-18 mRNA的表达显著上调(P＜0.01).SAP各组IL-1β蛋白表达显著增强,与HC组比较差异具有显著意义(P＜0.01),而且与SAP严重程度相一致.结论Caspase-1激活的细胞因子IL-1β及IL-18的过度表达在SAP发病机制中发挥重要的作用.
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caspase-1激活的细胞因子与急性胰腺炎(文献综述)
促炎症细胞因子白细胞介素1-β(IL-1β)在急性胰腺炎发病过程起着关键性作用.本文综述cas-pase-1激活的细胞因子IL-1β、IL-18在急性胰腺炎发病机制中的作用及caspase-1抑制剂的研究进展.
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新生大鼠缺氧缺血性脑损伤Caspase-1mRNA的表达变化
目的研究新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(HIBD)后Caspase-1mRNA的表达变化.方法制备新生大鼠左脑HIBD模型,用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)测定HIBD 12、24、72,96 h不同时点脑皮质Caspase-1mRNA的表达,同时观察光镜下神经元坏死情况.结果假手术对照组有少量Caspase-1mRNA表达,HIBD 12 h Caspase-1mRNA的表达仍较少,与对照组相比无显著性差异(P＞0.05),HIBD 24～96 h Caspase-1mRNA的表达逐渐增多,达高峰,同其他各组相比均有显著性差异(P<0.05).光镜下HIBD 24～96 h神经元坏死明显加重.结论新生大鼠HIBD可诱导Caspase-1mRNA的表达,可能参与了新生儿HIBD的形成.
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Caspase-1抑制剂对实验性重症急性胰腺炎的治疗作用
目的评价Caspase-1抑制剂在实验性重症急性胰腺炎(SAP)中的治疗作用.方法采用5%牛磺胆酸钠逆行注入胰胆管诱发SAP模型.SD大鼠42只,随机分3组:健康对照组(HC组, n＝6);SAP造模+腹腔注射生理盐水组(SAP-S组,n＝18);SAP造模+Caspase-1抑制剂组(SAP-ICE-I组,n=18).SAP-S组于造模后2h腹腔注射生理盐水1ml,12h后重复1次;SAP-ICE-I组于造模后2h腹腔注射ICE抑制剂.HC组模拟胰胆管穿刺操作,但不注射药物.SAP-S组与SAP-ICE-I组于6、12、18h腹主动脉取血测血清淀粉酶、IL-1β水平,留取标本测胰腺内Caspase-1、IL-1β、IL-18 mRNA表达情况并行病理组织学观察,将结果与HC组进行比较.另取大鼠24只,随机均分SAP-S组和SAP-ICE-I组,观察24h死亡率.结果与HC组比较,SAP-S组与SAP-ICE-I血清淀粉酶和IL-1β水平显著升高(P<0.01),SAP-S组SAP-ICE-I组又显著高于(P<0.05或0.01).HC组胰腺组织内可见Caspase-1及IL-18 mRNA表达,但IL-1β mRNA表达很弱;与HC组比较,SAP-S组胰腺组织内Caspase-1、IL-1β及IL-18 mRNA的表达显著增强(P<0.0);SAP-ICE-I组与SAP-S组比较,IL-1β及IL-18 mRNA的表达显著减弱(P<0.01),而Caspase-1 mRNA表达无显著改变(P>0.05).应用Caspase-1抑制剂,可减轻胰腺组织的病理损害程度,并使24h动物死亡率由91.7%降低到41.7%.结论 Caspase-1激活的细胞因子IL-1β及IL-18在SAP发病机制中起重要作用;抑制Caspase-1可减轻胰腺组织病理损害的程度,降低动物24h死亡率.
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关键词：
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五味子甲素对NLRP3炎性小体活性的抑制作用及机制初步研究
探讨五味子甲素(deoxyschizandrin,schisandrin A)对小鼠骨髓来源巨噬细胞(BMDM)中NLRP3 (NOD-like receptor family,pyrin domain containing 3)炎性小体活性的抑制作用及初步机制.CCK-8法检测细胞毒性,根据细胞存活率确定给药浓度.通过Western blot方法检测细胞培养上清中IL-1β和caspase-1的表达,分析不同浓度的五味子甲素(25、50、100和200 μmol·L-1)对尼日利亚菌素(nigericin,Nig)和三磷酸腺苷(adenosine triphosphate,ATP)诱导的NLRP3炎性小体活化的影响,检测细胞中pro-caspase-1、pro-IL-1β、ASC和NLRP3等蛋白的表达变化;免疫荧光技术分析NF-κB (p65)的入核情况.根据CCK-8法的结果,确定了五味子甲素的给药浓度范围为6.25～400 μmol·L-1.在25～200 μmol·L-1浓度内,五味子甲素能够抑制Nig和ATP引起的NLRP3炎症小体活化,进而抑制IL-1β的分泌.免疫荧光和Westem blot实验结果显示,五味子甲素对NLRP3炎症小体活性的抑制作用不依赖于NF-κB通路活性及其诱导的NLRP3、ASC和pro-IL-1β等炎性小体蛋白的表达.综上,本实验首次证实,五味子甲素在一定浓度范围内通过阻断caspase-1活化,抑制caspase-1对pro-IL-1β的剪切活化,进而抑制NLRP3炎性小体的活性,减轻免疫炎症反应.本研究为五味子甲素防治NLRP3炎性小体相关的疾病提供了参考依据.
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Caspase-1抑制剂对实验性急性胰腺炎肾损害的治疗作用
目的:评价Caspase-1抑制剂对实验性急性胰腺炎(AP)肾损伤的治疗作用.方法:SD大鼠 42 只,随机分为 3 组:正常对照组(HC组, n=6);AP造模+生理盐水组(AP-S组, n=18);AP造模+ICE抑制剂组(AP-ICE-I组, n=18).以5%牛磺胆酸钠逆行注入胰胆管诱发AP模型,造模后 2 h 腹腔注射生理盐水和Caspase-1抑制剂,12 h 后重复一次;HC组模拟胰胆管穿刺操作,但不注射药物.分别在各时间点将存活的大鼠处死,留取标本. 结果:AP-S组血清尿素氮(BUN)、肌酐(Cr)水平显著升高(P<0.01 vs HC);AP-ICE-I组在12 h 和 18 h 其水平显著降低(P<0.01 vs AP-S).AP-S组血清IL-1β水平显著升高(P<0.01 vs HC);AP-ICE-I组其水平显著降低(P<0.01 vs AP-S).HC组肾内可见Caspase-1及IL-18 mRNA表达,但IL-1βmRNA表达较弱;AP-S组其表达水平显著上调(P<0.01 vs HC);AP-ICE-I组IL-1β及IL-18 mRNA的表达显著下调(P<0.01 vs AP-S),而Caspase-1 mRNA表达无显著改变(P>0.05).Caspase-1 抑制剂治疗对肾脏病理改变影响不明显. 结论:Caspase-1 激活的细胞因子IL-1β及IL-18在AP肾损害过程中发挥重要的作用;ICE抑制剂可有效地改善肾功能损害.
