内皮祖细胞的体外培养

目的 建立一个体外培养脐血来源内皮祖细胞(EPC)的培养体系.方法 脐带血经密度梯度离心获得单个核细胞,按本室已建立的培养体系培养细胞,免疫细胞化学和流式细胞术对培养7 d后的细胞进行CD34、CD133、vWF、CD146及CD144鉴定.结果 接种后前5 d为生长的潜伏期,细胞开始贴壁,无明显扩增.第6天平均每个视野下细胞数目为287±45;第9天细胞数为282±46;第12天开始,细胞进入对数生长期,细胞数为805±67(P＜0.05);第19天细胞继续增殖,细胞数为1 115±182(P＜0.05);第23天时,细胞进入凋亡期,数量明显减少,为265±61(P＜0.05).vWF、CD146、CD144表达阳性.流式细胞术结果表明,梭形样细胞群体中,CD34阳性率为88.98%±5.15%(P＜0.05),CD133阳性率为1.20%±1.44%(P＜0.05).结论 利用本实验室的培养体系成功培养出内皮祖细胞.

BMP9促进植入心肌前体干细胞改善心梗大鼠心功能

目的 探讨骨形态形成蛋白9(BMP9)能否促进植入的心肌前体干细胞(CPCs)改善心梗大鼠的心功能.方法 用表达绿色荧光蛋白的AdBMP9腺病毒感染CPCs 24 h后,检测CPCs中BMP9的表达量.并将感染AdBMP9腺病毒的CPCs植人心肌梗死大鼠模型中,超声心动图检测左室心功能参数,Masson染色计算心肌梗死面积及观察植入细胞形态学,免疫荧光检测α-MHC及α-actin蛋白的表达.结果 AdBMP9腺病毒感染CPCs 24 hA,BMP9的表达量较其CPCs本身BMP9的表达虽有显著增高(P＜0.01).术后4周,植入的感染AdBMP9腺病毒的CPCs及未处理的CPCs均能与周围正常心肌组织融合,且均有心肌特异性结构蛋白α-MHC及α-actin的表达,但较周围正常组织表达差(P＜0.05).同时,植入的心肌前体干细胞可以使心肌梗死面积显著缩小(P＜0.05),而BMP9可以加强这一效果(P＜0.01).左室心功能参数结果与梗死面积结果相似.结论 BMP9对移植的心肌前体干细胞改善心梗大鼠心功能有促进作用.

PGC-1β调节大鼠ALAS-1基因表达机制的初步探讨

目的 检测PGC-1β在人肝癌细胞(Hep G2)和大鼠肝原代细胞中调节大鼠ALAS-1基因表达.方法 在Hep G2细胞中瞬时转染PGC-1β,用双荧光报告系统检测过表达PGC-1β时大鼠ALAS-1启动子报告基因的活性变化.同时构建了5'端顺式元件系列截短和突变的ALAS-1启动子报告基因,检测并分析介导PGC-1β作用的转录因子结合元件.分离肝原代细胞并检测PGC-1β对ALAS-1转录的影响.构建干扰NRF-1基因的siRNA腺病毒,证明NRF-1介导PGC-1β激活ALAS-1启动子转录的作用.结果 在Hep G2细胞中,过表达PGC-1β显著促进ALAS-1表达.分别构建了FoxA2和NRF1结合元件突变的ALAS-1启动子,发现PGC-1β对NRF1突变的ALAS-1启动子的激活作用显著下降,而FoxA2作用不明显.在肝原代细胞中过表达PGC-1β促进了ALAS-1的转录.当用小RNA干扰NRF-1的表达后,则抑制了PGC-1β对ALAS-1转录的促进作用.结论 在Hep G2和大鼠肝原代细胞中,PGC-1β能够促进ALAS-1基因的表达,并且这种作用是通过NRF-1介导完成的.

人Ⅱ型CD74基因胞外端片段在昆虫细胞中的表达

目的 建立应用昆虫杆状病毒表达系统表达人Ⅱ型CD74胞外端片段的技术平台.方法 运用分子克隆技术,分别将CD 74胞外端全长(73～232aa)和与MIF结合的核心区(109～192aa)片段置于表达载体pFastBacDual的PPH启动子下,重组质粒转入含有Bacmid的大肠杆菌DH10Bac后与病毒基因组重组,提取重组病毒杆粒基因组,转染Sf-21细胞系.用RT-PCR检测目的 基因mRNA,用SDS-PAGE和Western blot分析重组蛋白的表达.结果 CD74胞外端全长(73～232 aa)可实现在昆虫细胞中的表达,目的 蛋白可被His标签抗体和CD74抗体识别;在细胞感染72 h、病毒接种滴度MOI为8时,目的 蛋白可实现大表达量.CD74与MIF结合的核心区(109～192 aa)片段在mRNA可实现转录的情况下未实现目的 蛋白表达.结论 成功建立人Ⅱ型CD74胞外端全长在昆虫细胞Sf-21中的表达平台,并获得了目的 蛋白表达的优化条件.

氧化应激对小鼠NKG2D配体表达的影响

目的 分析氧化应激时小鼠免疫器官和免疫组织的NKG2D配体MULTI和Rael表达的变化,研究氧化应激对免疫系统的影响.方法 给小鼠吸入适量的臭氧,建立动物氧化应激模型;利用real-time PCR和免疫组织化学方法检测小鼠胸腺、脾脏、淋巴结和小肠MULT1和Rael的表达.用流式细胞仪检测胸腺、脾脏的淋巴细胞和小肠上皮间淋巴细胞表面的MULT1和Rael的表达.结果 氧化应激组小鼠胸腺中MULT1表达降低而Rael表达升高;脾脏的Rael表达略有提高,MULT1的表达变化不明显;淋巴结中MULT1的表达变化不明显,Rael表达降低;小肠的MULT1和Rael表达均明显上调,多集中于小肠绒毛的上皮层.结论 MULT1和Rael的表达在体内受到严格的调控.应激分子MULT1和Rael可以作为检测体内应激状态的参考指标.

黑龙江省成人不同肥胖类型与心室复极不一致性的关系

目的 探讨以腰围(WC)和腰臀比(WHR)为评价指标的中心性肥胖和以体重指数(BMI)为评价指标的全身性肥胖与心室复极不一致性的关系.方法 使用Philips Trim Ⅱ型静息心电图仪,测量2 045名黑龙江省普通成人的标准12导联心电图,用Bazett公式计算校正的QT间期(QTc),设定QTc>440 ms为异常.结果 QTc和异常率在男性和女性中都存在随年龄和各项肥胖指标值增大而增加的趋势.女性显著大于男性.Logistic分析显示,年龄、性别、心率和收缩压对OTc异常有显著影响;体重指数、腰围和腰臀比也分别对QTc异常有显著影响,腰围对模型的贡献大.结论 肥胖是影响QTc以及异常率的独立显著性因素,与心室复极不一致性有显著相关.中心性肥胖相对全身性肥胖在衡量成人心室复极不一致性上更有优势.

HIF-1α和HIF-2α在胃癌中的表达及意义

目的 探讨胃癌中低氧诱导因子HIF-1α和HIF-2α的表达及其临床意义.方法 用免疫组化SP法检测组织中HIF-1α、HIF-2α及VEGF的表达;用Western blot法检测组织中HIF-1α、HIF-2α的表达.结果 胃癌中HIF-1α、HIF-2α和VEGF的阳性表达率分别为61.5%、36.5%和61.5%,均显著高于正常对照组的11.1%、0和0;HIF-1α表达与VEGF及胃癌的淋巴结转移密切相关.胃癌组织中HIF-1α和HIF-2α蛋白的表达显著高于癌旁正常胃黏膜组织.结论 低氧诱导因子的表达可能在胃癌的发生、发展中具有重要作用.

ER和PR在甲状腺乳头状癌的表达及意义

目的 探讨雌激素受体(ER)和孕激素受体(PR)在甲状腺乳头状癌中的表达,以及ER、PR与肿瘤生物学特征的关系.方法 取新鲜甲状腺乳头状癌标本69例,结节性甲状腺肿7例,用免疫组织化学方法检测ER、PR的表达.分析受体与肿瘤生物学特征的关系.结果 在甲状腺乳头状癌中,ER和PR的表达率分别为52.17%和46.38%,结节性甲状腺肿没有ER和PR表达,ER和PR的表达与患者性别、肿瘤大小以及MACIS评分无关,但是PR与肿瘤浸润甲状腺包膜以及淋巴结转移成正相关(P＜0.05),ER与患者年龄成负相关.结论 甲状腺乳头状癌中ER、PR的表达高于结节性甲状腺肿,甲状腺乳头状癌中PR的表达反映肿瘤浸润甲状腺包膜和淋巴结转移情况,ER表达随着患者年龄增加而减少.

二甲基亚砜通过激活caspase-3以及抑制PARP-1引起A549细胞凋亡

目的 检测肺上皮癌细胞A549经二甲基亚砜(DMSO)诱导发生凋亡后聚腺苷二磷酸核糖聚合酶-1(PARP-1)的活性是否受到抑制.方法 通过MTT法检测caspase-3的活性升高以及TUNEL等方法验证DMSO可引起A549细胞凋亡后,采用Western blot验证PARP-1是否被切割成两个片段.结果 DMSO可诱导A549细胞发生凋亡,凋亡过程中easpase-3的活性上调,其下游底物PARP-1被大量切割成小片段.结论 DMSO诱导的A549细胞凋亡受到caspase-3-PARP-1信号分子的调节.

成人AB型血清取代胎牛血清在体外有效扩增骨髓间充质干细胞

目的 找到一种合适的胎牛血清的替代品,可以在体外有效扩增间充质干细胞.方法 比较骨髓间充质干细胞(BMSCs)在健康成人AB型血清、AB型脐带血清和胎牛血清培养体系中的不同代次的细胞形态、免疫表型、周期、生长曲线等生物学特性.结果 骨髓间充质干细胞在3种不同血清的培养体系中的生物学特性无明显差异.结论 AB型血清可以取代胎牛血清在体外扩增骨髓间充质干细胞.

MicroRNA-205对人皮肤上皮细胞迁移能力的调控

目的 观察micmRNA-205(miR-205)在人皮肤上皮细胞中的表达抑制和过量表达对于该类细胞迁移能力的影响.方法 使用体外合成的miR-205抑制剂(antagomir-205)处理人皮肤上皮细胞并检测抑制效果,观察其对皮肤上皮细胞迁移的影响.在293TN细胞中包装并收获能过表达成熟miR-205的重组慢病毒颗粒,感染人皮肤上皮细胞并检测过表达效果,进一步观察其对皮肤细胞迁移的影响.结果 成功使用miR-205抑制剂实现对人皮肤上皮细胞内源性miR-205的抑制,证实其抑制了皮肤上皮细胞的迁移.成功获得过表达miR-205的重组慢病毒颗粒,证明miR-205可促进皮肤上皮细胞的迁移.结论 miR-205可以促进皮肤细胞的迁移.

Akt/mTOR信号通路在海人酸损伤大鼠海马组织中的激活

目的 研究Akt/mTOR信号通路在海人酸(KA)诱导的大鼠海马神经元损伤中的激活和HIF1α的表达情况.方法 成年SD大鼠随机分为3组,其中2组接受脑室注射,1组为假手术组.大鼠麻醉后颅骨钻孔但侧脑室注射KA 1.0μg(KA组)或等体积生理盐水(NS组)或相应位置颅骨钻孔但不予注射(假手术组).8和16 h及1、3和5 d后,用Western blot观察Akt和mTOR的表达及其磷酸化水平,用免疫组化观察HIF1α的表达情况.结果 尼氏染色显示,KA组大鼠海马CA3区1 d时即开始有死亡,5 d时累及CA1区.Akt在KA损伤16 h后就开始激活并持续至第5天;mTOR于第1天开始激活,第3天时达峰值.CA3区的HIF1α于第1天明显升高,CA1区的HIF1α表达则于3 d时明显升高.NS组和假手术组上述各指标变化均不明显.结论 KA诱导激活大鼠海马中Akt/mTOR通路,可能调节神经元的存活.

体外不同诱导条件对大鼠骨髓间充质干细胞分化为心肌细胞的影响

目的 研究不同方法诱导骨髓间充质干细胞(MSCs)分化为心肌细胞(CM)的能力及表达心肌细胞特异性标记物的差别.方法 分离培养MSCs及CM,第3代MSCs经DAPI标记后分别进行5-aza诱导、与CM共培养或单独培养.1、2、3和4周观察细胞形态变化及免疫细胞化学鉴定cTnT和Cx43.结果 单独培养未见有细胞收缩,cTnT和Cx43表达阴性;诱导组和共培养组,培养至4周时细胞排列方向一致,成肌性排列,诱导1周时cTnT和Cx43表达阴性,而共培养组第5天cTnT和Cx43即开始表达,随着时间延长,两组cTnT和Cx43表达逐渐增加;相同周数内,共培养组的表达阳性率均高于诱导组(P＜0.01).结论 MSCs经5-aza诱导和与CM共培养,可转化为心肌样细胞并表达cTnT和Cx43,且共培养MSCs分化为心肌细胞的能力比5-aza诱导强.

G-CSF及与辛伐他汀联合应用对大鼠急性心肌梗死后细胞凋亡的影响

随着凋亡相关研究的进展,心肌细胞凋亡与心肌梗死(acute myocardial infarction,AMI)的关系逐渐受到重视.本实验联合应用粒细胞集落刺激因子(granulocyte-colony stimu-lating factor,G-CSF)和辛伐他汀动员干细胞修复AMI后的梗死心肌,通过流式及免疫组化法检测细胞凋亡率和BCL-2/BAX比值,评价其干细胞动员作用对梗死后心肌细胞凋亡的影响.

脑出血患者犬尿氨酸代谢产物与超敏C反应蛋白的关系

色氨酸(TRP)作为人体的必需氨基酸之一,在体内可在吲哚氨2,3-双加氧酶(IDO)的作用下降解为犬尿氨酸(KYN),KYN可在犬尿氨酸氨基转移酶(KAT)作用下生成犬尿喹啉酸(KYNA),或在犬尿氨酸羟化酶作用下生成喹啉酸(QA).QA可产生神经毒性作用,而KYNA可有效地拮抗兴奋性氨基酸对脑组织的损伤.脑出血患者体内KYN与KYNA的代谢情况国内未见报道,本研究旨在探讨脑出血患者体内犬尿氨酸代谢变化情况及其与炎性标志物超敏C反应蛋白(hsCRP)之间的相互联系.

缬沙坦对小鼠支气管哮喘气道重塑的干预作用

道重塑是支气管哮喘除气道慢性炎症之外的另一个重要特征.它不仅导致不可逆性的气流阻塞,还影响平喘药物的疗效,从而加重气道高反应性和肺功能低下.我们曾经报道TGF-β1和CTGF参与哮喘气道重塑的发生,并在哮喘气道重塑的发病机制中起重要的作用[1].

大鼠心肌微血管内皮细胞的体外原代培养

目的 体外原代培养大鼠心肌微血管内皮细胞(MMVECs),并观察其生长特性.方法 采用酶蛋白消化法培养大鼠MMVECs,用差速贴壁法和亚细胞克隆法纯化细胞,用第Ⅷ因子相关抗原和CD31相关抗原鉴定细胞,倒置相差显微镜下观察细胞生长状态.结果 成功培养出纯度很高的MMVECs,可用于MMVECs相关实验研究.结论 此原代培养MMVECs的方案具有较好的可操作性和可重复性.

神经外科术后无症状肺血栓栓塞症的诊断及处理

目的 探讨神经外科术后无症状肺血栓栓塞症,提高术后深静脉血栓及无症状肺血栓栓塞症的诊断及治疗水平.方法 分析我院神经外科诊断并治疗的2例无症状肺血栓栓塞症患者的临床资料,通过D-dimer、超声、CTPA进行筛查及诊断,明确诊断后予以肝素及低分子肝素抗凝治疗,后期行华法林抗凝,其中1例在抗凝治疗前急诊行下腔静脉永久滤网植入术.结果 本组D-dimer 1例正常,1例稍高于参考值上限;超声证实2例患者均有下肢静脉血栓;CTPA明确诊断为肺血栓栓塞症.抗凝治疗后复查CTPA,肺血栓栓塞症有明显改善.2例患者出院后继续华法林抗凝治疗.结论 临床工作中应重视发生肺血栓栓塞症的各种危险因素,及早对高危人群进行筛查,制定围手术期的整体预防和治疗方案.

无明显器质性疾病成人巨细胞病毒病38例分析

目的 总结并分析无明显器质性疾病成年人巨细胞病毒(CMV)感染的临床特点及实验室检查特点.方法 回顾性收集1995年3月至2008年3月间在北京协和医院住院的无明显基础疾病成人CMV感染病例38例.分析其临床症状、体征、实验室检查、T细胞亚群、影像学特点、病理学特点、治疗及预后.结果 无明显器质性疾病成人的巨细胞病毒感染临床表现多种多样,发热是常见的症状,占68.4%,其他为淋巴结肿大(28.9%)、肝大(34.2%)、脾大(44.7%)、外周血异型淋巴细胞比例增高(55.2%)等,以及非特异性呼吸道、胃肠道症状;实验室检查血常规白细胞升高病例占20.8%,白细胞降低病例占37.5%;多数病例淋巴细胞百分比升高(65.0%),肝功能异常也较常见(66.7%).急性期T淋巴细胞亚群的改变表现为CD4/CD8+T淋巴细胞比例降低,CD8+T淋巴细胞激活亚群(CD8+CD38+)数量明显增多(P＜0.01)以及NK细胞数量的减低(P＜0.01).经更昔洛韦为主的抗病毒治疗,多数患者恢复.结论 无明显器质性疾病的成人感染巨细胞病毒临床表现多种多样,部分病情严重,临床工作中需要警惕CMV病.CD8+T淋巴细胞是人体针对CMV感染的主要效应细胞,检测T细胞亚群的变化有助于CMV感染的诊断和判断预后.

成人原发性肾肉瘤的临床诊治

目的 探讨成人原发性肾肉瘤的诊断、治疗和预后.方法 收集1985年～2009年收治的成人肾脏肿瘤1 654例,对其中17例原发性肾肉瘤进行回顾性分析.结果 17例患者中,10例以腹部肿块为首发症状.患者均行手术治疗.术后病理:平滑肌肉瘤7例,横纹肌肉瘤2例,恶性纤维组织细胞瘤2例,低分化肉瘤2例,脂肪肉瘤、纤维肉瘤、胚胎性横纹肌肉瘤及平滑肌肉瘤合并嫌色细胞瘤各1例.术中死亡1例,15例患者规律随访5～60个月,目前1例无瘤存活9个月,死亡14例,14例患者术后平均生存期18(5～60)个月;平滑肌肉瘤组28(11～60)个月,2例恶性纤维组织细胞瘤分别存活4个月和8个月.结论 原发性肾肉瘤临床症状与晚期肾细胞癌类似,总体预后较差,肿瘤分期、病理类型及术后有无残余瘤是决定预后的重要因素.

静脉内心电图引导中心静脉置管新技术的临床应用

目的 评估新型心电图(ECG)引导中心静脉置管技术的有效性和安全性.方法 80例临床拟行中心静脉置管的择期手术全麻患者,根据置管方式分为颈内静脉(组1)和锁骨下静脉(组2)两组,每组各加例.导管深度和方向的确定依据ECG中Ⅱ导P波的变化.记录置管深度、中心静脉压(CVP)以及相关并发症.导管固定后采用X线(后前位胸片)确定导管位置.结果 采用ECG引导方式,其置管成功率为98.7%(77/78).同时,其置入深度较传统方式浅(P＜0.05).结论 新型静脉内ECG引导中心静脉置管技术可有效提高中心静脉置管到位率,指导置管方向,提高安全性并降低相关费用.

膈肌生物反馈训练联合抑酸治疗胃食管反流相关性咳嗽患者疗效的初步观察

目的 观察膈肌生物反馈训练(DBT)联合质子泵抑制剂(PPI)治疗胃食管反流(GER)相关性咳嗽的效果.方法 11例GER相关性咳嗽患者,填写问卷后学习DBT方法,同时服用PPI(雷贝拉唑10 Mg,每日2次),每2周随访1次,第8周末完成健康相关生活质量调查表(SF-36),第12周末接受电话随访.结果 DBT联合PPI治疗后2周,反流症状总评分(TRSS)和咳嗽评分(SC)改善均>50%;治疗8周,疗效稳定,生活质量中生理职能、活力、精神健康、社会功能、躯体疼痛及总体健康这6个维度的评分显著提高(P＜0.05).第12周末随访,PPI减量后患者症状稳定.结论 DBT联合PPI治疗GER相关性咳嗽,能在短期内改善患者症状及生活质量,提供了新的治疗途径.

孕激素治疗子宫内膜不典型增生患者的剂量选择

目的 探讨孕激素治疗子宫内膜不典型增生的疗效及不同程度子宫内膜不典型增生应用孕激素的剂量选择.方法 回顾性分析2002年1月～2006年6月25例不同程度子宫内膜不典型增生的患者应用不同剂量孕激素治疗的疗效.结果 (1)25例患者经大剂量孕激素保守治疗后,19例(75%)在3～36个月内缓解,23例(92%)有效,2例(8%)无效.(2)对于轻度及中度不典型增生患者,采用125～250 mg/d孕激素,其缓解率分别可达87.5%(7/8)及66.7%(6/9),且随着孕激素剂量的增加,其缓解时间呈缩短趋势;对于重度患者,采用250～500 mg/d的剂量,其缓解率可达75%(6/8).结论 对不同程度的子宫内膜不典型增生患者应用大剂量孕激素治疗,随着孕激素剂量的增加,其有效率及缓解率有所增加,且缓解时间缩短.

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