血管内皮生长因子基因转染骨髓间充质干细胞同种异体移植治疗大鼠急性心肌梗死

目的探讨同种异体血管内皮生长因子(VEGF)基因转染的骨髓间充质干细胞(MSCs)在大鼠梗死心脏局部存活、分化及对心功能的影响;明确同种异体干细胞及VEGF基因转染干细胞移植治疗急性心肌梗死(AMI)的可行性及效果.方法雄性SD大鼠30只,随机分为单纯注射培养基对照组、MSCs治疗组及VEGF基因转染MSCs治疗组.分离纯化雄性Wistar大鼠骨髓间充质干细胞(rMSCs),于左冠状动脉前降支结扎1 h后植入到SD大鼠心组织,移植4周后检测心功能并取心脏行组织染色检查.结果异体大鼠MSCs可在梗死心组织定居、生存;免疫组化检测MSCs转化为心肌细胞及血管内皮细胞;与对照组比较VEGF基因转染异体细胞移植组左室射血分数升高(P＜0.05),梗死边缘区心肌面毛细血管数目明显增加(P＜0.05).结论同种异体VEGF基因转染MSCs移植治疗Am可行、有效.

TNF-αⅠ型受体对小鼠脑血管内皮细胞iNOS和HO-1基因表达的影响

目的探讨TNF-αⅠ型受体(TNFR1)对小鼠脑血管内皮细胞iNOS、HO-1基因表达水平的影响.方法体外培养TNFR1基因敲除的小鼠脑血管内皮细胞(BVEC/TNFR1)和野生型小鼠脑血管内皮细胞(BVEC),分别给予5 ng/mLTNF-α刺激24 h后,用实时荧光定量PCR技术及Western blot方法检测两种细胞iNOS基因和HO-1mRNA和蛋白表达量.结果给予TNF-α刺激后,iNOS mRNA和蛋白表达仅在野生型脑血管内皮细胞内明显增高,而在受体敲除脑血管内皮细胞无明显变化.HO-1mRNA和蛋白表达量在野生型小鼠脑血管内皮细胞和受体敲除小鼠脑血管内皮细胞均明显增高.结论TNF-α可能作用于脑血管内皮细胞TNFR1,增加iNOS表达,HO-1表达增高并非由TNFR1介导,而由TNF-α的其他受体介导.

谷氨酰胺减轻离体大鼠心脏内毒素性损伤

目的研究谷氨酰胺抗大鼠离体心脏内毒素性损伤的作用.方法健康SD雄性大鼠24只,随机分成3组:正常对照组,内毒素组,谷氨酰胺+内毒素组,在Langendorff装置上用K-H液对大鼠离体心脏行主动脉逆灌注.连续记录心肌细胞单相动作电位(MAP)、心肌收缩张力曲线;同时在相应的时点分别测定冠脉流出液中的一氧化氮(NO)含量、乳酸脱氢酶(LDH)和肌酸激酶(CK)的活性.结果谷氨酰胺可以减轻内毒素引起的心脏电活动的紊乱和收缩能力的损害,对内毒素引起的心肌细胞单相动作电位幅度减小及MAP D20延长、心肌张力降低、心率变慢等变化有明显的改善作用.谷氨酰胺对内毒素引起的冠脉流出液中一氧化氮含量的剧烈波动(先降低后快速升高)有明显的抑制作用,并且谷氨酰胺+内毒素组冠脉流出液中LDH和CK的活性明显低于内毒素组.结论谷氨酰胺可以对抗内毒素性心肌损伤、改善心功能状态,其机制可能与其抑制内毒素诱导的一氧化氮的剧烈波动、减轻心肌损伤有关.

HLA-DRB基因启动子区多态性与肺结核合并2型糖尿病的相关性

目的研究HLA-DRB基因启动子区序列与肺结核合并2型糖尿病的相关性.方法用PCR-SSP法进行HLADRB基因分型,启动子区扩增产物直接测序.结果病例组DRB1*09等位基因的频率显著高于对照组(P＜0.05).病例组中DRB基因启动子区-65位碱基T和-8位A/G杂合子的频率明显增加(P＜0.05).病例组中DRB1*09阳性标本-65位碱基T的频率明显增加,G明显减少(P＜0.01);+39位碱基C明显增加,T明显减少(P＜0.01).结论DRB1*09等位基因及HLA-DRB启动子区多态性与肺结核合并2型糖尿病密切相关.

新疆维吾尔族人自然长寿与HLA-DRB、ACE基因的关联分析

目的探讨人类白细胞抗原(HLA)-DRB基因及血管紧张素转换酶(ACE)基因多态性与新疆维吾尔族人自然长寿的关系.方法研究样本分为4组:第1组年龄≥100岁;第2组年龄为90～99岁;第3组年龄为70～90岁;第4组为65-70岁自然死亡者.分别应用聚合酶链反应-序列特异引物法(PCR-SSP)、单链构象多态性(SSCP)分析和直接测序技术对各组进行基因分型.结果百岁组HLA-DR1的频率明显高于对照组(分别为9.5%和1.9%,P＜0.05);HLA-DR6(14)的频率也明显高于对照组(分别为9.5%和0.9%,P＜0.05);HLA-DR6的频率明显高于其余3组;HLA-DR4的频率明显低于对照组(分别为9.5%和23.6%,P＜0.05);HLA-DR9的频率明显低于对照组(分别为1.2%和9.4%,P＜0.05).相关分析显示:HLA-DR1及ACE基因的D等位基因与长寿呈正相关,而HLA-DR9呈负相关.结论HLA-DRB基因的DR1等位基因和ACE基因的等位基因D对长寿可能有保护作用;HLA-DRB基因的DR9等位基因可能是不利于长寿的危险因素,HLA-DRB基因多态性和ACE基因多态性相互作用对长寿有协同作用.

CML患者骨髓单个核细胞基因表达谱分析

目的探讨慢性髓细胞性白血病(CML)的基因表达变化.方法分别从正常人和CML患者骨髓样品中抽取骨髓单个核细胞,分离出cDNA片段,然后再逆转录成cRNA并标记后,与人的全基因组表达谱芯片杂交,ABI 1700芯片分析系统进行分析基因表达谱的差异.结果总共发现差异表达的基因有6706个,其中与CML相关的差异基因有75个(上调19个,下调56个).结论全基因组寡核苷酸基因芯片在分析基因表达谱差异研究中具有广泛的应用价值.

北京地区青少年心脏功能参数的检测与分析

目的为了构建"人体生理常数数据库".方法应用NCCOM-3无创血流动力学心功能监护仪对北京地区429名10～22岁健康青少年学生进行多项心功能参数的无创检测.结果心输出量(CO)在男性随年龄增长而增大,16～22岁年龄组高;女性随年龄的增长CO值变化不大,稍有降低,以10～15岁年龄组高.每搏输出量(SV)男、女均随年龄的增长而增大,16～22岁年龄组高.心指数(CI)和射血速度指数(EVI)则以10～15岁市区女性高,市、郊区女性CI和EVI值均高于同年龄组男性.射血时间(VET)在男、女各组间差别不明显.结论调查提示青少年的心功能参数不同程度地呈现出性别、年龄和地域的差别,值得我们关注.

重组变构人TRAIL对非小细胞肺癌细胞的体外抑制作用

目的研究重组变构人TRAIL(rmhTRAIL)对人非小细胞肺癌(NSCLC)细胞和人正常细胞的生长、抑制作用及其与化疗药的联合作用.方法采用四唑盐(MTT)和集落形成试验法检测细胞的生长,并观察了与顺铂(DDP)联合应用对细胞生长的作用.结果rmhTRAIL对多种NSCLC细胞有显著的抑制作用,而对人正常细胞无影响;rmhTRAIL与DDP联合应用具有协同或增强对NSCLC细胞的抑制作用,而且对正常人细胞不表现毒性.结论rmhTRAIL是一种安全、有效的抗肿瘤生物制品.

β3受体激动剂BRL-37344促进大鼠心力衰竭及可能的作用机制

目的观察β3肾上腺素能受体激动剂(BRL-37344)对血浆TNF-α、AngⅡ和ET-1水平及心肌重构的影响.方法用异丙肾上腺素(isoproterenol,ISO)诱导心力衰竭大鼠模型.随机分为心衰组(CHF)和BRL组,BRL组给予BRL-37344尾静脉注射,同时另设对照组.结果2和6周时CHF组和BRL组大鼠血浆TNF-α、AngⅡ、ET-1均明显高于对照组(P＜0.01),相同时间点BRL组ET-1水平均高于CHF组(P＜0.01),6周时BRL组AngⅡ也明显高于CHF组(P＜0.01).6周时BRL组上述指标均高于2周时水平(P＜0.01),而CHF组只有TNF-α高于2周时水平(P＜0.05).心衰大鼠心肌细胞破坏和胶原纤维组织增生明显,β3受体蛋白在心衰和应用BRL-37344的大鼠心肌表达很明.显.结论BRL-37344能升高心衰大鼠血浆TNF-α、AngⅡ和ET-1含量,并且能促进左室重构,使心衰恶化.

原发性中枢神经系统恶性淋巴瘤MR表现及其病理学基础

目的研究原发性中枢神经系统恶性淋巴瘤(PCNSL)的MR表现及其病理学基础.方法分析13例手术病理证实的原发性中枢神经系统恶性淋巴瘤的临床病理及MR表现.结果13例中单发肿瘤4例,多发肿瘤9例,共计36个病灶.13例病变均累及幕上,其中8例病灶位于深部脑白质近脑室旁.肿瘤平均大径为3.2 cm.T1 WI略低信号28个,T2 WI等信号24个.28个病灶呈均匀强化.肿瘤水肿及占位效应相对较轻.2例PCNSL行MR动态增强扫描,早期强化均不明显,时间-信号强度曲线呈缓慢上升型.病理上肿瘤细胞弥漫分布,瘤细胞大小较一致,细胞质少,细胞核大,染色质颗粒粗,可见瘤细胞围绕血管呈袖套样浸润,少见明显的出血及片状坏死,未见钙化,病理均为非霍奇金淋巴瘤.结论原发性中枢神经系统恶性淋巴瘤的病理基础决定其MR增强形态、占位程度以及肿瘤发生部位具有一定特征,运用不同的MR影像学检查方法和技术,在多数情况下可以做出术前正确诊断.

兔左室跨壁心肌细胞快钠电流和瞬间外向钾电流的异质性

目的进一步了解心室跨壁电生理异质性的细胞学机制.方法以酶解法分离兔左心室心外膜(Epi)、中层(M)和心内膜层(Endo)心肌细胞,应用膜片钳技术研究左心室钠电流(INa)和瞬间外向钾电流(Ito)的跨壁异质性.结果①三层细胞的INa均呈电压依赖性,当电压相同时M细胞的电流密度较大;M细胞的INa失活快,与Epi、Endo相比P＜0.05;三层细胞的INa灭活后再恢复曲线无明显差异.②三层细胞的Ito均呈电压依赖性激活过程,当电压相同时Epi细胞的电流密度较大;Epi的失活较快,M细胞的Ito灭活后再恢复未见明显变化.结论兔左室游离壁三层心肌细胞INa和Ito的分布及动力学特性存在异质性,这可能是动作电位形态差异及折返性心律失常发生的离子基础.

PIM-1蛋白激酶在前列腺癌组织中的表达

目的观察原癌基因PIM-1表达产物PIM-1蛋白激酶在前列腺癌组织、良性前列腺增生组织及正常前列腺组织中的表达.方法应用免疫组织化学方法测定37例前列腺癌组织、26例良性前列腺增生组织及12例正常前列腺组织中PIM-1蛋白激酶的表达.结果PIM-1蛋白激酶在前列腺癌组织、良性前列腺增生组织及正常前列腺组织中的阳性表达例数分别是29例(78.38%),11例(42.31%)和3例(25.00%).前列腺癌组PIM-1的表达显著高于良性前列腺增生组及正常前列腺组(P＜0.001).结论原癌基因PIM-1及其产物PIM-1蛋白激酶有可能在前列腺癌的发生发展中发挥重要作用.

肝移植术后早期巨细胞病毒感染的先驱性治疗

目的通过临床病例对照研究,寻求肝移植术后防治巨细胞病毒(CMV)感染的较好方法.方法将63例原位肝移植患者分为预防性治疗组与先驱性治疗组,术后3个月内定期进行CMV-PP65定性和CMV-DNA定量检测,预防性治疗组均在术后2周时给于静脉更昔洛韦治疗,先驱性治疗组仅在检测阳性时给予更昔洛韦治疗.结果预防性治疗组中17%(5/35)出现了CMV感染;先驱性治疗组中36%(10/28)出现了CMV感染.两组中全部病例均未发生CMV病.结论肝移植术后早期采用先驱性治疗不增加巨细胞病毒病的发生率.

植物雌激素α-玉米赤霉醇对HUVEC组织因子基因表达的转录调控作用

目的探讨植物雌激素a-玉米赤霉醇(ZAL)影响血管内皮细胞组织因子(TF)基因表达的转录调控机制,并与内源性动物类雌激素17β联雌二醇(17β联estradiol,E2)进行比较分析.方法进行人脐静脉内皮细胞(HUVECs)原代培养,利用基因重组技术构建4个含人TF基因5'上游不同长度序列的荧光素酶报告基因质粒,用脂质体转染法分别转入以下6组细胞:①正常对照组;②10-7mol/LE2刺激组;③10-7mol/LZAL刺激组;④10-6mol/LAngⅡ刺激组;⑤10-7mol/L E2+10-6mol/L AngⅡ刺激组;⑥10-7mol/L ZAL+10-6mol/L AngⅡ刺激组;测定细胞裂解液中荧光素酶比活性(relative luciferase activity,RLA)的变化.结果转染pGL3-TF-171/+71的各组细胞RLA均较低,不同刺激组之间无显著差异;AngⅡ可使质粒pGL3-TF-593/+71,pGL3-TF-316/+71,pGL3-TF-236/+71荧光素酶表达大量增加,E2、ZAL均可不同程度地抑制AngⅡ的上述效应,2者间无显著差异.结论含有1个NF-κB位点和2个AP-1位点的-236 bp～-171 bp区域在E2或ZAL影响TF基因转录中有重要作用.

HIV感染者长期不发病机制探讨

在HIV感染者中,有一个极其特殊的群体,称为疾病的长期不进展者(LTNP).近20年,他们一直是科学界研究的重点和人类关注的对象.本文就20年来的研究成果,阐述病毒因素及宿主因素对这部分人的疾病进展的影响.其中,宿主因素主要指目前已经发现的某些影响疾病进展的遗传特性,包括两方面:(1)HIV-1相关的辅助受体及趋化因子的多态性;(2)HLA-Ⅰ类基因的多态性.

APP17肽对SAM鼠脑内Bcl-2和Caspase-3凋亡相关因子的影响

APP17肽是产生老年斑的主要成分β-淀粉样前体蛋白中具有促进神经轴突生长、突触形成作用的一个肽段.本课题组曾将APP17肽作用于D-半乳糖脑老化模型,结果发现其具有防止或逆转处于凋亡过程中的神经元恢复或接近正常状态的功能[1],对Aβ25-35诱导的神经细胞凋亡也有保护作用[2];将APP17肽直接作用于糖尿病大鼠,发现其可以改善末梢神经的脱髓鞘,抑制神经元胞质内钙离子浓度的升高,从而保护神经细胞免受钙离子中介谷氨酸的毒性[3].

转FL基因基质细胞对脐血造血干细胞的作用

造血干细胞不足,限制了造血干细胞移植在临床的应用.我们曾探讨了持续稳定表达人FL(FLT3配体)和GM-CSF(粒-巨噬细胞集落刺激因子)的转基因基质细胞系对CD34+细胞具有扩增作用[1],而在CD34+细胞中只有CD34+、CD38-细胞才可使造血功能重建.本实验拟通过已建立的持续稳定表达人FL转基因基质细胞系,进一步探讨FL基因修饰的骨髓基质细胞对人脐血造血干细胞的体外扩增作用.

质粒纯化利用离子交换柱的再生方法

目的为提高质粒大量提取纯化柱的使用率,降低实验成本.方法用0.5 mol/L HC1和0.5 mol/L NaOH溶液处理已使用过的一次性纯化柱,使之再生,继而被重复利用.结果再生纯化柱所提纯的质粒DNA经PCR扩增和琼脂糖凝胶电泳分析证实DNA纯度高,无不同质粒间污染.结论此方法操作简便、快捷,具有较高的实用价值.

小鼠主动脉平滑肌细胞的培养

目的建立一种小鼠主动脉平滑肌细胞体外培养方法,为相关疾病的研究提供实验材料.方法采用组织贴块法、胰酶消化法进行细胞原代及传代培养,综合运用自然纯化、机械刮除、差异贴壁法进行细胞纯化,并通过形态学特征及免疫细胞化学染色对细胞进行鉴定.结果90%的组织块接种存活,第5代的平滑肌细胞纯度达98%以上.相差显微镜下培养细胞呈典型的"谷峰状"生长,免疫细胞化学染色显示特异的α平滑肌肌动蛋白阳性表达.结论本法简便、可靠,培养的平滑肌细胞纯度高、性能好.

人类干细胞克隆研究进展加速

微小球蛋白ADDLs可能是阿尔茨海默病病因的关键

长期以来,科学家一直认为阿尔茨海默病的病因是Alois Alzheimer在1907年鉴定的一种蛋白质团块或缠结,它们可能通过杀灭神经元而致病.而现在,一些研究者将目光投向了一种更微小的蛋白质ADDLs.ADDLs可通过黏附于神经元、干扰神经元之间的信号传递而产生明显的记忆缺陷.抗ADDLs的抗体可破坏这种微小蛋白、从而预防阿尔茨海默病的发生,甚至逆转其早期症状.

清除自由基健康又长寿

中国艾滋病知多少 --中国艾滋病流行趋势预测的影响因素

自1985年中国大陆发现首例艾滋病病毒(HIV)感染者以来,艾滋病流行日益严重,及时采取有效的控制措施成为遏制艾滋病流行的当务之急.但是有效防控措施的制定是以客观分析和预测艾滋病流行趋势为基础的.本文从我国艾滋病的流行现状及其影响因素人手,阐述与艾滋病流行相关的数据来源并评价其质量,提出中国艾滋病流行趋势预测的障碍及建议.

乏力、胸闷、气短、双下肢浮肿

1病历摘要患者女性,54岁.因"乏力、胸闷、气短18个月,双下肢浮肿6个月"人院.1.1病史患者于18个月前无诱因感乏力,并出现活动后胸闷、气短,无头晕、头痛、咳嗽、咳痰、胸痛症状,予扩冠治疗,效果不佳.