PDGF受体β亚单位2个不同切割位点核酶的体外切割效率的比较

目的研究针对大鼠PDGF受体β亚单位基因2个不同切割位点核酶的体外切割活性并加以比较.方法应用计算机对大鼠PDGF受体β亚单位mRNA二级结构进行模拟,设计针对PDGF受体β亚单位mRNA 45位CUU和252位CUU的锤头状(Hammerhead)核酶(Ribozyme)基因RZ1和RZ2,定点克隆于自我切割型核酶载体P1.5的5′-cis核酶和3′-cis核酶之间;将大鼠PDGF受体β亚单位cDNA 608 bp的PCR片段克隆于pGEM-T载体T7启动子下游,在T7启动子作用下分别体外转录成RZ1、RZ2和706 nt的PDGF受体β亚单位mRNA,比较RZ1和RZ2对706 nt的PDGF受体β亚单位mRNA的切割活性的差异.结果 RZ1在体外有较高的切割活性,而RZ2在体外无切割活性.结论提示在应用核酶技术进行基因治疗时,应选择有效的核酶切割位点,以达到有效的治疗目的.

维甲酸下调高氧暴露下胎鼠肺成纤维细胞及Ⅱ型肺泡上皮细胞MMP-2表达

目的探讨维甲酸(RA)对高氧暴露下胎鼠肺成纤维细胞(LFs)和肺泡Ⅱ型上皮细胞(AECⅡ)基质金属蛋白酶-2(MMP-2)表达的影响及调控.方法原代培养胎鼠肺LFs及AECⅡ,待其生长至亚汇合状态时,随机分为:空气组、空气+RA组、高氧组和高氧+RA组.于培养2、6、12、24和48(AECⅡ)或72 h(LFs)时,采用半定量RT-PCR方法检测MMP-2和TIMP-2 mRNA表达,应用Western blot检测p38和磷酸化p38(p-p38)蛋白表达水平.结果 (1)与空气组比较,高氧可促进胎鼠LFs、AECⅡMMP-2 mRNA和胎鼠LFs p-p38表达(P＜0.01 或P＜0.05);(2)RA能部分下调高氧诱导的胎鼠LFs、AECⅡMMP-2 mRNA高表达和明显降低胎鼠LFs p-p38表达;(3)高氧、RA对胎鼠LFs、AECⅡ TIMP-2 mRNA和胎鼠LFs p38蛋白表达无明显影响;(4)胎鼠LFs p-p38与MMP-2 mRNA表达呈显著性正相关(r=0.767, P＜0.01, n=18).结论高氧可促进胎鼠LFs、AECⅡMMP-2 mRNA表达;p38通路参与高氧状态下胎鼠LFs MMP-2表达调控;RA可在转录后水平调节p38的活性状态从而实现对MMP-2的表达调控.

CCK-8抑制LPS诱导的大鼠肺间质巨噬细胞TLR4及IL-1β的表达

目的观察八肽胆囊收缩素(cholecystokinin octapeptide,CCK-8)对外源性脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)激活大鼠肺间质巨噬细胞(pulmonary interstitial macrophages, PIMs)Toll 样受体4(Toll like receptor4, TLR4)及IL-1β表达的影响,探讨CCK-8的抗炎作用机制.方法分离培养大鼠PIMs,经LPS、CCK-8及溶剂单独或共同孵育不同时间后,采用Northern blot、ELISA、RT-PCR技术检测TLR4 mRNA 、IL-1β及IL-1β mRNA表达的变化.结果 LPS(1mg/L)刺激可使PIMs中TLR4 mRNA表达明显增强;随着LPS孵育时间的延长,细胞中的IL-1β含量逐渐增多,24 h达高峰,IL-1β mRNA表达水平同时明显升高;CCK-8可剂量依赖性抑制LPS诱导的大鼠PIMs TLR4 mRNA、 IL-1β及 IL-1β mRNA的表达.结论 CCK-8对LPS激活的PIMs TLR4 及IL-1β表达有负性调节作用,是CCK-8抗炎作用机制之一.

DNA聚合酶β基因在鼻咽癌中的突变

目的探讨鼻咽癌中DNA聚合酶β(DNA polymeraseβ, polβ)的变异情况.方法采用RT-PCR法(逆转录-DNA聚合酶链反应)、PCR-SSCP(聚合酶链-单链构象多态性分析)、DNA序列分析法对26例鼻咽癌组织及癌旁组织标本进行polβ基因突变研究.结果在26例癌旁组织标本中polβ无突变;26例鼻咽癌组织标本中存在polβ基因变异的有8例,突变率为30.8%.polβ基因变异的鼻咽癌标本测序结果显示:核苷酸序列有多种形式的改变.结论在鼻咽癌中存在多种形式的polβ突变,导致氨基酸序列、二级空间结构的改变.这些突变可能在肿瘤的发生过程中起重要作用.

NS-398对结肠癌细胞系HT-29超微结构的影响

目的选择性环氧合酶-2抑制剂NS-398可抑制结肠癌细胞系HT-29的体外侵袭力,本研究进一步观察其对HT-29细胞超微结构的影响.方法通过扫描电镜观察细胞表面微绒毛,通过激光共聚焦显微镜观察细胞骨架成分F-actin.结果未处理的HT-29细胞表面微绒毛和丝状伪足较多,其末端有分叉现象,NS-398处理后,细胞表面的微绒毛减少、皱缩呈小球样改变,以10 μmol/L处理组明显.荧光标记的F-actin较集中地分布于HT-29细胞核周围,呈现"环状"结构,10 μmol/L NS-398处理后细胞核周围的"环状"结构消失,荧光强度减弱.结论 NS-398可显著改变HT-29细胞的超微结构,这可能是其抑制HT-29侵袭力的机制之一.

小鼠骨髓间充质干细胞生物学特性和体外诱导分化

目的研究小鼠骨髓间充质干细胞的生物学性状和多系分化潜能.方法取Balb/c小鼠骨髓单个核细胞在低糖的培养液中培养出贴壁生长的细胞,进行形态学观察、细胞周期和免疫表型分析;在不同的因子作用下诱导向成骨细胞、软骨细胞,脂肪细胞分化,并检测诱导后细胞相应的基因表达.结果小鼠骨髓间充质干细胞贴壁生长后形态较均一,增殖能力随着传代逐渐增强,但从第8代后增殖能力明显减退.细胞表达CD29, CD38, CD44, CD106等标记,但CD34和H-2k表达阴性.在不同的诱导培养体系里间充质干细胞能分化为成骨细胞、软骨细胞和脂肪细胞,相应的骨钙蛋白基因,Ⅱ型胶原基因,脂蛋白脂酶基因表达都明显增强.结论从小鼠骨髓可以分离培养出间充质干细胞,在体外有效扩增和诱导分化.表明可以以小鼠为模型研究间充质干细胞在组织工程、细胞移植、基因治疗等领域的运用.

高糖诱导人内皮细胞凋亡及其JNK、AKT信号途径的作用机制

目的探讨高糖诱导人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)凋亡的JNK及AKT信号途径作用机制.方法 HUVECs细胞分别在生理浓度葡萄糖(5 mmol/L)(NG)、高葡萄糖(30 mmol/L)(HG)、高糖加JNK特异性阻断剂SP600125(10 μmol/L)(HG+I)条件下培养72 h.Hoechst 33258染色,荧光显微镜观察细胞凋亡的形态学改变;annexin V-FITC试剂盒染色,流式细胞仪进行细胞凋亡定量;Western blot 方法测定细胞p-JNK、p-c-JUN、p-AKT水平.结果高葡萄糖培养72 h,内皮细胞凋亡率为13.31%,显著高于对照组5.69% (P＜0.01).高糖条件下内皮细胞p-JNK、p-c-JUN水平较对照组显著增加(P＜0.05),而p-AKT显著降低(P＜0.01).SP600125应用后,与高糖组比较p-JNK无显著变化、p-c-JUN含量降低(P＜0.05),而p-AKT升高(P＜0.01),高糖诱导的内皮细胞凋亡被抑制(8.38%, P＜0.01).结论高糖可诱导内皮细胞凋亡,其机制可能是激活JNK及其下游c-JUN,而抑制AKT的活化,而JNK活化程度对AKT信号通路可能存在调节作用.

葛根素预处理对大鼠缺血再灌注心肌细胞凋亡的影响

目的观察葛根素(Pur)预处理对缺血再灌注(I/R)心肌细胞凋亡的干预作用,并探讨其作用的可能机理.方法将原代培养的新生大鼠心肌细胞随机分为(1)正常对照组及正常+Pur组;(2)模拟缺血组及缺血+Pur组;(3)模拟再灌注组及再灌注+Pur 组.末端标记法( TUNEL法)检测心肌细胞凋亡,流式细胞仪检测细胞凋亡百分率,透射电镜观察心肌细胞凋亡的形态学特征、免疫组织化学法检测Bcl-2/Bax蛋白表达,并检测胞内Ca2+浓度.结果 (1)心肌细胞I/R后电镜观察到典型的凋亡超微结构特征;TUNEL染色可见心肌细胞凋亡阳性反应;免疫组化检测发现Bcl-2蛋白表达下调,Bax蛋白表达上调;胞内明显 Ca2+超载.(2)葛根素可显著降低I/R心肌细胞内Ca2+浓度、降低凋亡指数和凋亡百分率、上调Bcl-2蛋白表达、下调Bax蛋白表达.结论葛根素具有抗心肌细胞凋亡的作用,其机理可能与抑制胞内Ca2+超载,干预Bcl-2/Bax蛋白表达有关.

醛固酮降低新生大鼠心肌成纤维细胞iNOS表达和NO含量

目的为探讨醛固酮诱导心肌成纤维细胞(CFs)增殖及其对诱导型一氧化氮合酶-一氧化氮(iNOS-NO)系统活性的影响.方法用胰酶消化法分离、培养新生SD大鼠CFs, 采用MTT比色法、硝酸还原酶法、分光光度法和半定量RT-PCR技术,观察不同浓度醛固酮对CFs的增殖、NO含量、iNOS活性和iNOS mRNA表达的影响.结果醛固酮(10-11～10-7mol/L)能剂量依赖性促进CFs的增殖,降低CFs的NO含量、iNOS活性及iNOS mRNA的表达(均P＜0.05),且螺内酯能逆转醛固酮的上述作用.醛固酮干预下CFs增殖数目与NO含量和iNOS活性呈显著负相关(r分别为-0.942、-0.978,均P＜0.01).结论醛固酮能剂量依赖性降低CFs的iNOS-NO系统活性,促进CFs增殖;螺内酯能逆转此作用.

不同浓度1,6-二磷酸果糖对IL-1β损伤的乳鼠胰岛细胞功能的影响

1,6-二磷酸果糖(Fructose-1,6-Disphosphate,FDP)能在分子水平上调节细胞代谢中若干酶活性,恢复和改善细胞代谢,对多种组织细胞有明显的保护功能.本实验室已报道5～10 mmol/L FDP对白介素-1β(IL-1β)损伤的胰岛有保护作用[1],但是笔者也发现低浓度和高浓度的FDP不具相同作用.提示应用FDP需注意剂量对其效应的影响.

乌司他汀对先天性心脏病肺动脉高压患者围术期黏附分子的抑制作用

中性粒细胞表达的黏附分子CD11/CD18家族和内皮细胞表达的细胞间黏附分子-1(intercellular adhesion molecule-1,ICAM-1)在与体外循环有关的炎症反应过程中起重要作用.本研究通过观察乌司他汀(Ulinastatin,UT)对先天性心脏病合并肺动脉高压患者CD11b/CD18 和ICAM-1的影响作用,探讨先天性心脏病合并肺动脉高压患者围术期黏附分子的变化,为体外循环导致的全身炎症反应寻求一种有效的防治措施.

人脂肪组织源性间充质干细胞分离与体外培养

各种疾病所导致的器官衰竭严重地危害着人类的健康,降低了患者的生活质量.干细胞所具有的自我复制和多向分化能力使它成为挽救器官衰竭、进行组织修复的理想种子细胞.在特定的条件下它可以分化为中胚层起源的多种组织细胞,如成骨细胞、软骨细胞、肌腱、脂肪细胞、血管内皮细胞、肌细胞及神经星状细胞等.目前干细胞主要来源于骨骼肌卫星细胞、骨髓干细胞、胚胎干细胞等,近几年国外有研究显示脂肪组织中也含有大量具有多向分化潜能的干细胞(adipose tissue-derived mesenchymal stem cells, ADMSCs),而目前国内应用脂肪组织分离及培养干细胞的报道极少.本研究拟将对ADMSCs进行分离和体外培养,并对其生长方式进行观察.

原代培养大鼠海马细胞随培养时间早期凋亡和死亡增加

神经细胞在原位组织已经完成分裂和分化,培养的神经元将不会分裂、增殖,其数目也会随着培养时间的延长而减少,但目前还没有见到对原代培养过程中神经细胞凋亡以及死亡情况的研究.利用Annexin Ⅴ-PI双染法可以将凋亡早期与凋亡晚期和死亡细胞区分开,本研究将分别收获第0、1、3、5、8、11及18d细胞进行Annexin Ⅴ-PI染色,利用流式细胞仪来研究在原代培养过程中神经元的早期凋亡和死亡.

应用生物信息学方法分析人HCA56基因

目的利用生物信息学对新克隆的人ligatin 样基因HCA56的基因和蛋白序列进行分析,探讨生物信息学在新基因研究中的作用.方法以人类基因组数据库为基础,利用电子PCR和SAGE数据库对HCA56进行染色体定位和组织表达分布分析;BLAST程序进行HCA56的基因结构分析和相似序列搜索;ORF finder和Gene Runner3.05程序对HCA56编码蛋白进行序列预测和功能分析.结果得出HCA56的全长cDNA为2 021 bp,定位于染色体1q31-q32,其长的开放读码框架为1 755 bp,编码584个氨基酸,编码氨基酸含有一个亮氨酸拉链和一假定的RNA结合保守序列.相似性搜索发现HCA56基因片段与人ligatin基因片段具有很高的相似性(99%).SAGE结果显示HCA56在多种组织中都有表达.结论生物信息学是进行新基因研究的有效方法;HCA56很可能是ligatin的全长编码基因.

两种不同培养体系培养人角朊细胞的特征

目的对比有饲养层的有血清培养体系(feeder layer,serum-containing medium,FSCM)和无血清培养体系(serum free medium, SFM)培养人角朊细胞(keratinocyte,KC)的特征.方法以两种不同培养体系培养人KC,比较24 h细胞贴壁数、完全汇合时间和终分化形式.结果 KC在两种不同培养体系中的形态、24 h细胞贴壁数和完全汇合时间无统计学差异.FSCM体系能促使角朊细胞发生终末分化;SFM体系内角朊细胞增殖较FSCM体系快,但未发生终末分化.结论有饲养层的有血清培养体系培养人角朊细胞形成复层膜片,适合临床应用;无血清培养体系培养人角朊细胞形成单层细胞,适合KC生物学性征的实验研究.

腹膜后纤维化的CT诊断

研究腹膜后纤维化的CT表现.分析经临床病理证实的9例腹膜后纤维化的CT表现,其中男性4例、女性5例,平均年龄53.7岁;特发性6例,继发性3例.9例均行CT平扫及增强检查.9例中CT平扫表现为腹膜后间隙或盆后间隙的低密度、不均匀密度或等密度弥漫性浸润病变4例,不规则肿块样病变5例,增强检查病变显示不同程度强化,多数病例伴有肾盂及输尿管扩张积水.因此,CT能很好显示腹膜后纤维化病变的各种表现,腹膜后间隙出现弥漫浸润性或不规则肿块样病变,并合并肾盂及输尿管扩张积水时应考虑到本病诊断.

维生素D的发现

质子治疗的物理与生物学基础

近几十年来质子治疗在临床上取得了巨大成就,这是因为质子束在物理学和生物学上具有独特的优势.在肿瘤治疗学上质子比常规射线(60Co、X射线、电子)有两个主要优势:(1)可根据肿瘤在体内的深度,使质子束精确地定位在肿瘤病灶处,以使肿瘤受到大的照射剂量而不伤害健康组织,从而达到适形治疗.(2)可根据肿瘤的形状改变质子在微观尺度能量沉积的形状,实现辐射生物学效应的改变.基于此,对于形状较复杂的大实体瘤,质子治疗比常规治疗有更高的精度.质子的这些在治疗学上特异的可能性是由其剂量学和辐射生物学特性决定的.剂量学的性质与能量在宏观尺度的沉积特征有关,作为带电粒子,质子在介质中有确定的射程和相对小的散射歧离,此外在射程前端剂量相对较小,而到射程末端剂量达到大,形成一个尖锐的Bragg峰,基于这些特点使得肿瘤受到高剂量的照射而周围的健康组织受到很小的伤害;相对生物学效应与能量在微观尺度的沉积特征有关,与重离子相比虽然质子属于低LET射线,但就其能量在微观尺度沉积的性质与常规射线相比质子是致密电离辐射,因此目前已有实验证实质子治疗比常规射线治疗增加了相对生物学效应,然而目前对能量的微观沉积与生物学效应关系的原理仍需要进一步从理论上和实验上研究证明.文中分析了质子与介质的作用过程、以及传能线密度(LET)、相对生物学效应(RBE)、氧增比(OER)等放射治疗学的一般概念,讨论了质子用于肿瘤治疗的物理学与生物学性质.

质子和其他放射治疗肿瘤的比较

质子加速器是目前世界上先进的放射治疗设备.本文对质子和目前各国常用的常规射线(兆伏特级的光子和电子),在肿瘤的放射治疗方面进行了比较.并复习了世界各国用质子治疗肿瘤的经验,介绍质子治疗肿瘤的优点、发展历史以及发展前景. 质子束进入人体组织时,其大量的能量集中在接近射程终点,称为Bragg峰 .放射治疗医生可以通过调节质子加速器能量的方式,使高能量区集中在病人体内一定的区域;在此高量区的后方,放射剂量骤降为零.因此,医生可以使放射线的高剂量区集中在靶区(肿瘤区),避免周围正常组织部受到照射.而用常规射线照射时,周围正常组织仍受到较高量的照射.用目前先进的三维适形放射治疗和调强放射治疗技术,只需用少数的照射野,即可达到非常满意的放射剂量分布.到2004年2月,世界上已有11个国家正在开展质子治疗工作;已用质子治疗病人35838例. 所治疗的肿瘤有眼葡萄膜黑色素瘤、中枢神经系统肿瘤、颅底肿瘤、前列腺癌、非小细胞肺癌、胃肠道肿瘤、鼻咽癌、乳腺癌和宫颈癌等,均取得较好的效果.目前已引起世界各国放射治疗学界的重视.

质子治疗设备的现状和发展

为了实现质子治疗, 必须有一套比常规电子直线加速器更复杂, 规模更大的质子治疗设备与系统. 本文首先简要地介绍质子治疗装置的系统原理, 基本结构和当前国际上的质子治疗装备的商品供应概况. 在此基础上进一步论述国际质子治疗装置的现状和当前的质子治疗装置研制发展. 在文的后再简要地介绍当前国际上的已有的专用质子治疗中心近况.

肿瘤质子治疗技术研究进展

质子治疗技术已经在肿瘤领域里获得了积极的肯定,尤其是当质子治疗肿瘤的病例数超过4万,部分肿瘤的局部控制率和生存率获得了显著提高时,世界各国都在积极研发和引进质子治疗技术.本文将阐述质子治疗技术及其现状,介绍当前世界质子技术的研究进展,为我国引进和发展这一技术提供一些有用的信息.

质子治疗的疗效与适应症分析

通过对医学文献进行分析后发现,质子治疗的适应症与常规X(γ)射线放疗相似,由于具有物理剂量学的特性,因而在治疗某些关键器官或临近关键器官的病变时具有显著优势.然而尚需进行大量临床研究,特别是前瞻性随机分组试验,以明确这种治疗的优越性.

口腔及外阴糜烂、纵隔肿物、呼吸衰竭

1 病历摘要患者女性,18岁,因"口腔、外阴糜烂1年,伴咳嗽、憋气3个月"入院.