基础医学与临床杂志
Basic & Clinical Medicine 기초의학여림상
- 主管单位: 北京市科学技术协会
- 主办单位: 北京生理科学会
- 影响因子: 0.66
- 审稿时间: 1-3个月
- 国际刊号: 82-358
- 国内刊号: 1001-6325
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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JAK/STAT通路调节IL-4诱导的肝星状细胞系LX-2Ⅰ型胶原基因的表达
目的 探讨JAK/STAT通路在IL-4对肝星状细胞(HSC)中Ⅰ型胶原基因表达的影响及其作用机制.方法 用RT-PCR法和ELISA法分别检测不同浓度IL-4对人肝星状细胞系LX-2中Ⅰ型胶原mRNA表达和蛋白合成的影响;用Western blot法和RT-PCR法分别观察JAK1抑制剂AG490对IL-4诱导的JAK1磷酸化以及I型胶原mRNA表达的影响;用Western blot法和RT-PCR法分别观察LX-2转染STAT6-ASON对IL-4诱导的STAT6磷酸化以及Ⅰ型胶原mRNA表达的影响.结果 IL-4诱导LX-2中Ⅰ型胶原mRNA表达及其蛋白的合成,呈剂量依赖性效应,且IL-4浓度为50 μg/L时,胶原mRNA和蛋白水平均开始出现显著差异(P<0.001);与空白对照组相比,JAK1和STAT6磷酸化水平分别约为4.8倍和4.0倍,Ⅰ型胶原mRNA表达则分别为4.0倍和5.2倍;而AG490和LX-2转染STAT6-ASON则可以分别阻断IL-4诱导的JAK1磷酸化和STAT6磷酸化以及相应的I型胶原mRNA的表达.结论 JAK/STAT信号传导通路参与调节IL-4诱导HSC中I型胶原基因表达,并在肝纤维化发生过程中发挥重要的作用.
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氧化应激上调人神经母细胞瘤细胞内β-裂解酶的表达
目的 研究氧化应激对人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)β-裂解酶(BACE1)表达的影响及组蛋白乙酰化、DNA甲基化的改变.方法 采用H2O2处理体外培养的SH-SY5Y,Westem blot法检测细胞的BACE1表达及DNA甲基转移酶(DNMTs)和组蛋白去乙酰化酶(HDAC)的表达;实时定量PCR检测BACE1 mRNA的表达;吸光度值法检测组蛋白3(H3)和组蛋白4(H4)整体乙酰化水平.结果 SH-SY5Y细胞经H2O2处理1和72 h后BACE1 mRNA和蛋白表达均明显增多;H2O2处理72 h后DNMT1、DNMT3A表达均下降,分别是对照组的75%和65%(P<0.01);而组蛋白去乙酰化酶HDAC3的表达增高至对照组的1.6倍(P<0.01);同时,组蛋白H3整体乙酰化水平下降,但H4乙酰化水平无明显改变.结论 氧化应激可能通过改变SH-SY5Y细胞内DNA甲基化水平及组蛋白乙酰化状态调节BACE1的表达,在阿尔茨海默病发病过程中发挥作用.
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骨髓间充质干细胞移植对缺血心肌的血管新生及增殖-凋亡的影响
目的 探讨骨髓间充质干细胞(BMSC)移植对缺血心肌的血管新生及增殖-凋亡的影响.方法 将雄性小鼠BMSC经尾静脉输入异丙肾上腺素性心肌缺血雌性小鼠(BMSC组).另设正常对照组和未治疗组.5周后处死小鼠,荧光定量PCR检测心肌Y染色体鉴别基因(SRY)、血管内皮生长因子(VEGF)的表达.天狼猩红染色分析心肌胶原含量.免疫组织化学染色观察心肌VEGF、核增殖抗原(PCNA)和细胞凋亡蛋白酶(caspase-3)的分布.结果 BMSC组心肌SRY表达明显升高(11.22±0.90 vs 1.05±0.47,P<0.05).与未治疗组相比,BMSC组的心肌胶原沉积减少(3.44 ±0.84 vs 8.44 ±1.09,P<0.05),VEGF(14.19±0.37 vs 11.88 ±0.28,P<0.05)和PCNA(4.08±0.18 vs0.64 ±0.05,P<0.05)表达上调,caspase-3降低(0.46 ±0.11 vs 3.12 ±0.28,P<0.05).结论 BMSC能归巢至缺血心肌并促进微血管新生,改善心肌增殖-凋亡状态.
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幽门螺杆菌诱导人胃上皮细胞系(GES-1)发生自噬
目的 观察幽门螺杆菌感染人胃上皮细胞后自噬的发生及变化情况,为进一步研究幽门螺杆菌感染后诱发自噬反应的相关研究奠定基础.方法 采用中性红摄入法确定H.pylori感染GES-1细胞的浓度,并以此浓度感染GES-1细胞不同时间.通过Western blot检测感染不同时间点GES-1中LC3Ⅰ/Ⅱ或P62蛋白表达,免疫荧光染色观察自噬体的出现.在使用自噬抑制剂3MA、E64d、pepstatin A处理被感染的GES-1后,利用上述方法监测细胞自噬变化情况.结果 H.pylori(22695)感染GES-1细胞佳浓度为m.o.i =400.在GES-1细胞被感染后2h即可观察到自噬的发生,且呈时间依赖性,于8 h到达高峰,24h开始恢复基础水平.使用3MA处理细胞后自噬水平降低,自噬体明显减少.使用E64d和pepstatin A阻断被感染细胞中自噬溶酶体的形成,LC3Ⅰ/Ⅱ与P62蛋白因无法通过自噬途径降解而较未处理组增加.结论 H.pylori(22695)能够诱导人胃上皮(GES-1)发生自噬,且能被自噬调节剂调控.
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赖氨大黄酸抑制p-EGFR诱导宫颈癌CaSki细胞系细胞凋亡
目的 研究赖氨大黄酸(RHL)对人宫颈癌CaSki细胞增殖、凋亡的影响及EGFR信号通路在其中的作用.方法 应用MTT法检测RHL对CaSki细胞增殖的影响;应用流式细胞仪检测细胞凋亡,应用Western blot检测EGFR信号通路蛋白表达水平及其蛋白磷酸化水平.结果 RHL能有效抑制宫颈癌CaSki细胞增殖,48和72 h的ⅠC50值分别是84.57 μmol/L和74.79μmol/L,RHL能诱导CaSki细胞凋亡,随药物浓度的增加,细胞凋亡率也逐渐升高;RHL能够抑制EGFR、AKT蛋白磷酸化,并显著下调NF-κB、BCL-2及Survivin蛋白的水平(P<0.01),同时RHL还上调BAX蛋白的表达(P<0.01).结论 RHL可能通过EGFR/AKT/NF-κB/Survivin信号通路诱导CaSki细胞凋亡.
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体外模拟肿瘤微环境中致大鼠MSCs瘤化因子分析
目的 探讨模拟肿瘤微环境中骨髓间充质干细胞(MSCs)肿瘤转化的发生与肝细胞生长因子、白介素6、碱性成纤维生长因子的关系.方法 实验组为C6胶质瘤与MSCs间接共培养模拟肿瘤微环境下MSCs的生长,对照组为星型胶质细胞与MSCs间接共培养模拟正常微环境下MSCs的生长,空白对照组MSCs单独培养;荧光定量聚合酶链反应,免疫荧光检测各组的P53和MDM2的基因和蛋白的表达;ELISA检测各组HGF、IL-6、BFGF的表达;免疫荧光检测对应升高的细胞因子作用于MSCs后的STAT3蛋白的表达.结果 实验组的MSCs形态肿瘤化;MSCs的MDM2 mRNA相对表达量是1.56±0.21,显著高于对照组(P<0.05),MDM2蛋白表达率比对照组升高90%±7%(P<0.01);MSCs的P53的mRNA相对表达量是0.55±0.10,而P53突变蛋白表达率比对照组升高87%±5%(P<0.01);HGF、IL-6水平比对照组中表达水平升高(P<0.05);过量IL-6处理组的MSCs的STAT3激活蛋白表达率比正常量IL-6处理组明显升高(P<0.01).结论 IL-6参与MSCs在肿瘤微环境下的肿瘤转化的发生.
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敲减PTGS2对皮肤成纤维细胞基因表达谱的作用
目的 研究敲减PTGS2对成纤维细胞全基因组表达谱的影响,在基因水平上探索防治瘢痕疙瘩的新途径.方法 运用RNAi干扰正常皮肤成纤维细胞前列腺素内过氧化物合酶2(PTGS2)基因的表达,利用real time RT-PCR 验证siRNA沉默效果;应用全基因组芯片检测基因表达谱变化.结果 成纤维细胞的PTGS2基因经siRNA干扰后,其mRNA表达水平明显下调;全基因组芯片表达谱检测到的差异表达基因,按1.5倍差异共189个(115个上调,74个下调),按2倍差异共14个(9个上调,5个下调);基因表达谱的变化与瘢痕疙瘩基因表达谱的变化相吻合,可能促使正常皮肤成纤维细胞向瘢痕疙瘩方向进展.结论检测到与PTGS2基因相关的、在瘢痕疙瘩形成中可能共同发挥作用的相关基因,证明PTGS2与瘢痕疙瘩的发病机制有着密切的关系,为治疗瘢痕疙瘩提供了一个潜在的候选靶点.
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Islet-1在乙酰化调控网络中特异性辅助C3H10T1/2细胞向心肌样细胞分化
目的 筛选并分析转染Islet-1慢病毒载体的C3H10T1/2细胞转化为心肌样细胞过程中与Islet-1相互作用的组蛋白乙酰化酶(HATs)和组蛋白去乙酰化酶(HDACs),明确Islet-1在C3H10T1/2细胞分化为心肌样细胞乙酰化调控网络中的关键枢纽作用.方法 培养转染Islet-1慢病毒载体的C3H10T1/2细胞,观察细胞形态.免疫荧光和免疫印迹检测Islet-1的表达部位和高表达时间点.免疫共沉淀与Islet-1结合的蛋白.免疫印迹验证Islet-1相互作用的HATs和HDACs.结果 诱导组细胞形态出现心肌样细胞改变.各组Islet-1主要在胞质表达.诱导组Islet-1表达量在诱导后3周高(0.782 ±0.015).诱导组Islet-1表达量显著高于空白对照组和C3H10组(分别为0.819±0.026,0.127±0.006和0.126 ±0.001)(P<0.05),免疫共沉淀技术可行.与Islet-1相互作用的HATs和HDACs有GCN5、P300/CBP和HDAC4.结论 Islet-1与GCN5、P300/CBP和HDAC4相互作用特异性辅助C3H10T1/2细胞向心肌样细胞分化.
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293-siDrosha稳定细胞系模型的建立及microRNA相关功能的检测
目的 利用RNAi实验方法构建293-siDrosha稳定细胞系,并探讨该稳定细胞系在microRNAs功能研究中的应用.方法 将质粒pSicoR-human Drosha1转人人胚肾293细胞,用G418筛选2~3周后,获得293-siDrosha#3稳定细胞系,并用RT-PCR、Western blot、real-time PCR等方法检测293-siDrosha#3稳定细胞系中Drosha基因mRNA和蛋白质表达情况.并用poly(A)实时定量RT-PCR法检测野生293细胞,Mix细胞(未克隆的293-siDrosha细胞),293-siDrosha#3细胞(克隆的293-siDrosha细胞)中内源hsa-miR-491-5p的表达情况.结果 构建了293-siDrosha#3 稳定细胞系,与对照组相比,293-siDrosha#3细胞中Drosha基因的mRNA和蛋白质表达水平均显著下降.检测内源性hsa-miR-491-5p在对照组和293-siDrosha#3细胞中表达,结果表明对照组细胞中表达的hsa-miR-491-5p是293-siDrosha#3细胞的近120倍.结论 成功构建了293-siDrosha稳定细胞系,并且证明此稳定细胞系可以作为研究一些microRNAs相关功能的模式细胞系.
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Rh血型弱D和DEL表型的基因突变分析
目的 研究Rh血型弱D和DEL表型的基因突变基础.方法 用间接抗人球蛋白方法(IAT)和吸收放散的血清学方法鉴定弱D表型和DEL表型,然后用RHD基因特异的聚合酶链反应-序列特异性(PCR-SSP)和序列分析方法鉴定Rh血型弱D和DEL表型RHD基因的外显子中可能存在的变异.结果 Rh血型弱D表型个体的第6外显子有845G>A突变,Rh DEL表型个体的第9外显子有1227G>A突变.结论 所应用的RHD基因测序方法可以用于弱D和DEL表型分子基础的研究,并为发现新的D变异表型和新的RHD等位基因奠定基础.
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川芎嗪对大鼠急性脊髓损伤模型NF-κB及I-κBα表达的影响
目的 观察川芎嗪对大鼠急性脊髓损伤模型损伤段NF-κB及Ⅰ-κBα表达的影响.方法 SD大鼠110只,随机分为正常对照组、单纯脊髓损伤组和川芎嗪处理组.采用改良ALLEN氏打击法建立大鼠急性脊髓损伤模型.采用改良Rivlin斜板实验、BBB评分对大鼠脊髓功能进行行为学评分.在建模后1、3、6、12 h,1、3、5、7、14和21d获取损伤段脊髓标本,HE染色观察其组织病理变化;免疫组织化学染色检测NF-κB及Ⅰ-κBα表达.结果 随着时间推移,术后斜板临界度数和BBB评分值均逐渐升高,CBS评分值逐渐降低,且术后7、14和21 d川芎嗪处理组斜板临界角度数均较单纯脊髓损伤组高(P<0.05),术后5、7、14和21 d实验组BBB评分值均较单纯脊髓损伤组高(P<0.05),而术后5、7、14和21 d,川芎嗪处理组CBS评分值均较对照组低(P<0.05).术后1、3、5和7d,川芎嗪处理组NF-κB阳性细胞表达数较单纯脊髓损伤组低(P<0.05),Ⅰ-κBα阳性细胞表达数较单纯脊髓损伤组高(P<0.05).结论 川芎嗪能够促进大鼠急性继发性损伤后脊髓组织中Ⅰ-κBα的表达,抑制NF-κB的表达,从而起到促进脊髓功能恢复的作用.
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继发于恶性肿瘤的腹膜后纤维化临床和影像学特征分析
目的 探讨继发于恶性肿瘤的腹膜后纤维化(RPF)的临床和影像学特征.方法 分析北京协和医院1992年7月-2010年1月住院的RPF患者共106例,以其中继发于恶性肿瘤的RPF8例为研究对象,收集患者的临床资料并进行随访,每3个月随访1次.结果 8例恶性RPF中男性5例,女性3例,平均年龄59.6岁.原发肿瘤来源:生殖系统4例,消化系统2例,血液系统及恶性神经鞘瘤各1例,其中1例同时患胃癌和膀胱癌.恶性RPF的临床症状与良性者比较并无特异,诊断主要依据影像学和病理特征.恶性RPF计算机X射线断层造影(CT)的特点:通常肿物体积更大,包绕的腹主动脉、下腔静脉可发生背离脊柱方向的移位,输尿管可能发生向外侧移位;肿物边缘多呈结节或分叶状;肿物的中心多偏向髂血管方向.CT还可评价疗效和提示预后.结论 恶性RPF临床症状无特异性,但影像学表现有一定特征,有鉴别诊断意义.
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P53 shRNA对肝癌细胞增殖的影响
目的 观察用RNA干扰(RNAi)下调SMMC-7721人肝癌细胞系P53表达后对细胞增殖及P21蛋白表达的影响.方法 设计合成P53基因的短发夹RNA(shRNA),并构建pGPU6/GFP/Neo-P53 shRNA重组质粒.重组质粒转染SMMC-7721细胞,经G418抗性筛选获得阳性克隆.克隆形成实验观察细胞的增殖,RT-PCR法及Western blot 法分别检测P53、P21的mRNA及蛋白表达.BALB/c裸鼠皮下注射SMMC-7721细胞,建立移植瘤模型,瘤部位多点注射pGPU6/GFP/Neo-P53 shRNA,观察瘤体积变化和瘤重.结果 P1、P2、P33条P53 shRNA均可明显降低P53mRNA水平(P<0.05,P<0.05,P<0.01);干扰P53表达明显升高SMMC-7721细胞克隆形成率(P<0.05),P21mRNA和蛋白的表达均随着P53的沉默而显著降低(P<0.05).P53 shRNA明显增加裸鼠移植瘤的体积和重量(P<0.05).结论 shRNA干扰P53基因可抑制P53和P21蛋白表达,使癌细胞恶性增殖.
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EKLF转录激活miR-96在红系分化过程中表达
目的 研究红系分化过程中,红系分化特异转录因子EKLF对miR-96的表达调控.方法 氯化高铁血红素(Hemin)诱导人K562细胞(人红白血病细胞系)向红系分化,real-time PCR检测miR-96表达.生物信息学分析miR-96转录起始点上游可能的EKLF结合位点.并经染色质免疫共沉淀(ChIP)与双荧光报告基因实验验证EKLF与这些位点结合的生物学意义.结果 Hemin诱导K562细胞向红系分化过程中,miR-96表达显著升高,且在48h表达高(3.94±0.64,P<0.05).生物信息学分析显示miR-96转录起始位点上游2.0 kb内含有多个EKLF结合位点.经ChIP验证这些位点有EKLF的结合,且EKLF与这些位点结合能募集RNA聚合酶Ⅱ(PolⅡ)结合,起始转录.进一步的双荧光报告基因实验也证明EKLF对miR-96转录起始点上游序列具有转录激活作用.结论 EKLF转录激活miR-96在红系分化过程中的表达.
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FGF10及其受体FGFR2Ⅲb在小鼠肾脏发育中的表达
目的 观察FGF10及其受体FGFR2Ⅲb在小鼠肾脏发生发育中的表达和分布,探讨其在肾脏发生发育中的作用.方法 选取胚龄12、14、16及18 d和出生后1、7、14、21及42 d小鼠肾组织,用免疫组织化学和Western blot,检测FGF10和FGFR2Ⅲb的表达.结果 胚龄12 d组FGF10及FGFR2Ⅲb开始在输尿管芽微弱表达;随着肾脏发育成熟,FGF10及FGFR2Ⅲb主要表达于远端小管和集合管;FGF10在近曲小管表达,近直小管无表达;FGFR 2Ⅲb在近端小管无阳性表达;生后肾组织及发育各阶段肾小体未见FGF10及FGFR2Ⅲb表达.Western blot显示随着胚(日)龄的增加,FGF10及FGFR2Ⅲb在肾脏的表达量先增后减.结论 FGF10和FGFR2Ⅲb在肾脏发生发育过程中发挥重要作用.
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急、慢性应激对大鼠海马BDNF表达的影响
目的 观察急性应激和重复低强度强迫游泳应激后大鼠海马BDNF mRNA及蛋白在不同时间点的动态表达;观察慢性应激条件下动物行为改变.方法 用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法和Western blot检测海马BDNFmRNA及蛋白表达.结果 急性应激导致海马BDNF mRNA及其产物表达增加,3 h表达高峰(7.4147 ±0.6821,P<0.01);慢性应激后BDNF蛋白表达降低,并在180和720 min两个时间点显著低于急性应激组(3.6581 ±0.2561;3.6051 ±0.4453,P<0.05).结论 不同强度及时程应激对BDNF mRNA及蛋白表达有差异;慢性应激组大鼠BNDF mRNA表达存在一定适应现象.
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肿瘤干细胞在肿瘤转移中作用与相关机制的研究进展
目前国内外对肿瘤转移的机制已进行了系统而深入的探索.随着肿瘤干细胞概念的提出和相关领域的深入研究,肿瘤干细胞作为肿瘤转移的佳候选细胞的观点正逐渐被人们接受.目前和肿瘤转移过程相关的分子细胞机制包括:上皮间质转变(EMT)、肿瘤微环境及血管生成机制等.近年来许多研究成果显示上述机制在肿瘤干细胞转移过程中起到不可低估的作用.本文就肿瘤干细胞转移相关机制的进展做一简要综述.
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IL-23/IL-17轴在银屑病免疫发病机制中的作用
银屑病是一种以T淋巴细胞异常活化和浸润为主要特征的慢性炎性反应皮肤病.Th17细胞及IL-23/ IL-17轴在银屑病的发病机制中可能处于关键地位,并成为新的治疗靶标.IL-23诱导Th17细胞分化增殖,分化成熟的Th17可以分泌IL-17、IL-21、IL-22等多种细胞因子,Th17类细胞因子在银屑病等多种自身免疫疾病和炎性疾病中起重要作用.
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肾混合性上皮和间质肿瘤1例
肾混合性上皮和间质肿瘤(mixed epithelial and stromal tumor,MEST)是发生在肾脏的一种罕见的良性肿瘤,以往曾被称为肾盂囊性错构瘤、成人中胚层细胞肾瘤.因其发病率低,病理、影像学及临床医师诊断经验较少,容易造成误诊.现报道1例MEST,结合影像学表现及病理特征讨论该疾病特点,以提高对MEST的认识.
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错配修复基因hMLH1在雌激素诱导结肠癌细胞HCT116凋亡中的作用
目的 探讨错配修复基因hMLH1在雌激素诱导结肠癌细胞凋亡中的作用.方法 将含野生型hMLH1-cDNA的质粒转入hMLH1缺陷的人结肠癌细胞株HCT116,在不同浓度的雌激素干预下,分别以流式细胞仪和活细胞计数试剂盒检测转染后细胞的凋亡率和活性.结果 与空载组相比,转染hMLH1后雌激素能诱导HCT116细胞活性为0.34±0.06,显著低于空载组的0.77±0.17(P<0.001),而凋亡率由9.75 ±0.53增加至45.20±2.63(P<0.001).结论 hMLH1参与雌激素诱导的结肠癌细胞株HCT116凋亡.
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敲低错配修复基因hMLH1可导致人胚肾细胞株293t的微卫星不稳定
目的 探讨人胚胎肾细胞株293t中错配修复基因hMLH1的表达量与微卫星稳定性的关系.方法 构建针对hMLH1基因的shRNA表达载体,并干扰293t细胞hMLH1的表达,评价敲低hMLH1前后293t细胞微卫星状态的变化.结果 干扰组293t细胞相比对照组hMLH1表达明显敲低,微卫星状态由稳定变为不稳定.结论 敲低hMLH1可导致293t细胞的微卫星不稳定.
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错配修复基因hMLH1启动子萤光素酶报告基因载体的构建与鉴定
目的 构建含hMLH1启动子片段的萤光素酶报告基因载体,并检测其在雌激素诱导下的转录活性.方法 以正常人基因组DNA为模板,PCR扩增hMLH1启动子片段(-1 953/+53),插入萤光素酶报告基因载体pGL3-Basic,将重组质粒转入HEK293细胞,检测在有和无雌激素诱导下萤光素酶的活性变化.结果 酶切和测序结果证实重组萤光素酶报告基因载体pGL3-Promoterl-luc构建成功.转染pGL3-Promoterl-luc后,雌激素诱导的萤光素酶活性为7.45 ±0.81,显著高于无水乙醇组的3.28 ±0.19(n =3,P<0.001).结论 hMLH1启动子片段存在与雌激素相关的调控序列.
年 | 期数 |
2019 | 01 02 03 |
2018 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2017 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2016 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2015 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2014 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2013 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2012 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2011 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2010 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2009 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2008 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2007 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2006 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2005 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2004 | 01 02 03 04 05 06 |
2003 | 01 02 03 04 05 06 z1 |
2002 | 01 02 03 04 05 06 |
2001 | 01 02 03 04 05 06 z1 |
2000 | 01 02 03 04 05 06 |
1999 | 03 04 05 06 Z1 |