VLDL促进脂蛋白脂酶在人肾小球系膜细胞系的表达

目的 探讨人肾小球系膜细胞脂蛋白脂酶(LPL)的表达情况以及极低密度脂蛋白(VLDL)对其表达的影响.方法 用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)、Western blot和放射性间位素标记的脂质体底物法检测人肾小球系膜细胞系(HMCLs)LPL mRNA表达、蛋白合成及酶活性.Western blot检测VLDL对肾小球系膜细胞LPL表达的影响.结果 用HMCLs,在276 bp处可扩增出一条hLPL基因特异的条带;在55 kd处可检测出LPL蛋白特异的条带;经肝素释放后HMCLs培养液中LPL是有活性的,为(0.959±0.022)U/L.VLDL在一定范围内可时间(0～16 h)和剂量(0～100 mg/L)依赖性的刺激HMCLs LPL蛋白表达.结论 在肾小球系膜细胞可表达具有活性的脂蛋白脂酶,且其表达可受VLDL的调节.

FGF23、MEPE和sFRP4在肿瘤性骨软化症发病机制中的作用

目的 探讨成纤维细胞生长因子-23(FGF-23)、细胞外基质磷酸糖蛋白(MEPE)和分泌型卷曲相关蛋白(sFRP4)在肿瘤性骨软化症(TIO)发病机制中的作用.方法 TIO肿瘤8例(T1-T8),其他间叶肿瘤5例(C1-C5),低血磷骨软化症病人行股骨手术,病理为凝血坏死组织1例(P1),正常人骨骼、肌肉组织各2例(B1、B2、M1和M2).RT-PCR检测组织中FGF23、MEPE、sFRP4 mRNA的表达,Western blot检测TIO肿瘤FGF23蛋白的表达.TIO4例(T1、T3、T4和T7)及P1在手术前后分别取血测定血清磷和FGF23(ELISA)水平.结果 TIO肿瘤有数量不等的FGF23和MEPE的mRNA表达,部分肿瘤表达sFRP4的mRNA.7/8例TIO肿瘤有不同强度FGF23蛋白表达.TIO术前血FGF23升高,术后2～24 h降至正常;血磷3～10 d缓慢升至正常,P1病人术后血FGF23无变化,血磷未上升.FGF23与MEPE mRNA正相关(r=0.884,P<0.05),FGF23 mRNA与蛋白表达之间成正相关关系(r=0.921,P<0.05).结论 FGF23是TIO发病的主要原因,MEPE在TIO肿瘤发病中起到一定作用,sFRP4的作用尚不明确.

九种冠状病毒核衣壳蛋白的原核表达及纯化

目的 探索SARS冠状病毒(SARS-CoV)、HCoV-229E、HCoV-OC43、HCoV-NL63、HCoV-HKU1等5种人类冠状病毒以及牛冠状病毒(BCoV)、鼠肝炎病毒(MHV)、猫传染性腹膜炎病毒(FIPV)和禽传染性支气管炎病毒(IBV)4种动物冠状病毒核衣壳(N)蛋白在大肠杆菌中克隆表达及纯化条件.方法 利用原核表达载体pET30a(+)经IPTG诱导表达重组蛋白,并采用离子交换及镍离子螫合亲和层析法对重组蛋白进行纯化,用SDS-PAGE及Westernblot对重组蛋白进行鉴定.结果 成功表达、纯化出9种冠状病毒N蛋白,纯度达90%以上.结论 在原核系统中表达得到了高纯度的9种冠状病毒N蛋白,为相关功能性研究奠定了基础.

2型糖尿病患者的高密度脂蛋白和乏脂血清对细胞内胆固醇外流的影响

目的 研究2型糖尿病患者高密度脂蛋白(HDL)及乏脂血清(LPDS)介导的细胞内胆固醇外流变化.方法 选取2型糖尿病患者13例和正常对照组17例,分离HDL和LPDS.利用人皮肤纤维母细胞(HSF)和人肝癌细胞(HepG2细胞)为实验细胞系,测定ATP结合盒受体A1(ABCA1)、ATP结合盒受体G1(ABCG1)和清道夫受体B1(SR-B1)的mRNA和蛋白表达.以HDL、LPDS为接受体测定3H胆固醇在上述细胞的胆固醇流出率.结果 HepG2细胞高表达SR-B1;HSF经22-羟基胆固醇刺激后高表达ABCA1.2型糖尿病患者的HDL诱导HepG2细胞的胆固醇流出率显著低于对照组(P<0.001);而LPDS介导的HSF细胞的胆固醇外流率在两组间无显著差异.结论 2型糖尿病患者的HDL诱导HepG2细胞的胆固醇外流功能明显降低,提示HDL功能异常在糖尿病患者的细胞内胆固醇积聚及动脉粥样硬化发展过程中发挥重要作用.

脂肪MSCs分泌的DKK-1抑制慢性粒细胞白血病细胞K562的增殖

目的 研究间充质于细胞(MSCs)抑制慢性粒细胞白血病细胞K562增殖的分子机制,为临床治疗提供理论依据.方法 利用脂肪来源的MSCs与慢性粒细胞白血病细胞K562共培养,通过中和抗体实验、3H-TdR掺入法、细胞周期流式分析、RNA干扰和定量PCR等技术,分析K562细胞增殖能力、WNT信号通路的基因表达变化.结果 与MSCs共培养后,K562的增殖减少了77%(P<0.05),处于G0/G1期的细胞比例为62.1%±5.8%,明显高于K562单独培养时的45.2%±6.9%(P<0.05).当用Transwell隔开MSCs和K562细胞后,上述抑制作用仍然存在.利用中和抗体实验发现MSCs抑制K562增殖是通过分泌DKK-1.将MSCs表达的DKK-1用RNA干扰敲低后,再与K562共培养,可重新增加K562细胞WNT信号通路中β-CATENIN、C-MYC和CYCLIN D2的表达,减弱了对K562增殖的抑制作用.结论 脂肪来源的MSCs可以通过分泌可溶性分子DKK-1抑制白血病细胞K562的WNT信号通路,将其细胞周期阻滞在G0/G1期,从而抑制其增殖.

儿茶酚胺氧位甲基转移酶基因Ala22/72Ser多态性与精神分裂症的相关性及初步功能学探索

目的 研究儿茶酚胺氧位甲基转移酶(COMT)基因单核苷酸多态性(SNP)位点Ala22/72Ser与北方汉族人群精神分裂症(SCZ)之间的关系.方法 在506例SCZ患者中,用聚合酶链式反应(PCR),对COMT基因Ala22/72Ser位点进行基因分型;用阳性与阴性症状量表(PANSS)对患者的精神病性症状的严重程度进行评分;同时用Real-Time PCR测定COMT基因的表达量.结果 在SCZ患者中,携带Ser等位基因和Ser/Ala基因型的患者的阳性症状总分和一般精神病理症状总分显著升高(P<0.01),而且COMT基因的表达量显著降低(P<0.01).结论 COMT基因的Ala22/72Ser多态性与SCZ患者的阳性症状和一般精神病理症状的严重程度相关,而且与COMT基因表达量相关.

NSPc1是维持HeLa细胞正常增殖的必要因子

目的 研究多梳蛋白家族成员NSPc1对HeLa细胞增殖的影响.方法 运用生物信息学设计并合成敲低NSPc1表达的siRNA序列,用半定量RT-PCR、Real-time PCR及Western blot等检测siRNA序列在HeLa细胞中敲低NSPc1的有效性;将相应有效序列构建到pSUPER载体中,观察其瞬时转染对HeLa细胞BrdU掺入的影响;用G418筛选并建立稳定敲低NSPc1的HeLa细胞系,观察敲低NSPc1对HeLa细胞体外增殖能力的影响.结果 (1)设计的siRNA序列可显著敲低NSPc1的表达;(2)瞬时敲低NSPc1阻碍了HeLa细胞BrdU的掺入;(3)成功构建稳定敲低NSPc1的HeLa细胞系,其增殖速度较对照组明显变慢.结论 NSPcl的正常表达是维持HeLa细胞正常增殖能力所必需的,稳定敲低NSPcl的HeLa细胞群可作为进一步研究NSPc1相关信号通路的有效模型.

乙肝病毒X蛋白对人肝细胞内β-catenin定位及转录活性的影响

目的 研究HBx对Wnt/Wingless信号传导通路中主要信号分子β-catenin的影响,探讨HBV相关性HCC的发生机制.方法 Ad-HBx转染人肝细胞系L02细胞,免疫细胞化学和Luciferase检测细胞中β-catenin细胞定位及活性变化.结果 免疫细胞化学:转染苇组HBx腺病毒前L02细胞中β-catenin仅在细胞质有少量表达,转染后胞质表达明显增强,并出现胞核的大量积聚;Luciferase检测:实验组TOP荧光素酶活性与对照组及空白组相比明显增强,为阴性对照的11倍(P<0.05),Ad-HBx感染后24 h和36 h的TOP荧光素酶活性无显著差异.结论 Ad-HBx重组腺病毒在体外能有效转染人肝细胞系L02细胞,受感染细胞能有效表达HBx蛋白,HBx影响了人肝细胞系L02细胞中β-catenin的细胞定位及转录活性.

锌通过调节Th1/Th2平衡及抗氧化降低哮喘大鼠气道炎症

目的 探讨锌对哮喘大鼠气道炎症的影响及机制.方法 建市哮喘大鼠模型,SD大鼠32只,按体质量随机分为4组,A组为缺锌饲料+卵清蛋白(OVA)激发组;B组为补锌饲料+OVA激发组;C组为正常锌饲料+OVA激发组;D组为正常锌饲料+生理盐水激发组.诱喘后24 h取右肺HE染色,观察气道壁细胞成分;取左肺制备肺组织匀浆检测γ干扰素(IFN-γ)、白细胞介素4(IL-4)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)水平.结果 与C组相比,A组大鼠支气管壁中嗜酸粒细胞、中性粒细胞、巨噬细胞数及肺组织匀浆中MDA均明显增加(P<0.05),而IFN-γ、IFN-γ/IL-4、SOD及GPX均明显减少(P<0.05);B组大鼠上述炎性细胞及MDA均明显减少(P<0.05),而IFN-γ、IFN-γ/IL-4、SOD及GPX均明显增加(P<0.05);IL-4含量两组无明显变化.结论 锌可能通过调节Th1/Th2平衡及抗氧化降低哮喘大鼠气道炎症.

Dravet综合征患者SCN1A基因启动子区突变位点的检测及分析

目的 对Dravet综合征患者SCN1A基因启动子区突变位点进行筛查及分析,预测其致病易感性.方法 收集24例Dravet综合征患者及100例正常人的外周血,抽提基因组DNA,PCR扩增SCN1A基因启动子区序列并测序;用生物信息学方法 分析了SCN1A启动子区变异位点邻近序列的保守性及潜在的结合元件,推测其致病易感性.结果 从患者中发现两个突变位点-244 C>T和-662 G>-,都来自父亲,而没有血亲关系的正常人中没有发现;-244和-662突变位点在哺乳动物中高度保守(100%);人与其他哺乳动物之间-244突变位点邻近序列(位点上、下游20个碱基)的平均同源率高达90%,而-662突变位点邻近序列的平均同源率只有60%;含-244位点的序列分别能预测到4种不同的转录因子结合元件,而含-662位点的序列均未能预测剑.结论 这两个突变与疾病存在一定程度的相关性,其致病的机制有待于实验证实.

卒中患者血清同型半胱氨酸水平与大动脉病变的关系

目的 确定急性缺血性卒中患者中同型半胱氨酸(Hcy)水平与脑血管粥样硬化病变程度的关系.方法 采用经颅多普勒(TCD)、头核磁血管成像(MRA)或脑血管造影(DSA)评估152名患者颅内外病变血管数,用狭窄或闭塞的脑血管数来反映颅内外大动脉粥样硬化程度.结果 低同型半胱氨酸组83人,Hcy为(15.31±3.08)μmol/L,病变血管数量:(1.86±1.51)支;高间型半胱氨酸组69人,Hcy为(34.47±21.38)μmol/L,病变血管数量为:(1.52±1.46)支.两组间病变血管数量没有差异.Spearman相关分析显示,同型半胱氨酸与颅内外大血管病变无关.结论 高同型半胱氨酸与缺血性卒中患者颅内外大动脉粥样硬化病变严重程度无关.同型半胱氨酸可能只是血管病变过程中的标志物.

Par6A cDNA的克隆与表达

目的 探讨Par6A基因的克降表达及功能.方法 用RT-PCR从大鼠L6骨骼肌细胞扩增出Par6A的cDNA,利用分子克隆的方法 构建Par6A的克隆载体以及真核表达载体,在293细胞中进行表达,通过免疫共沉淀初步研究Par6A的功能.结果 成功扩增出Par6A cDNA,片断大小约1 kb,并构建了真核重组表达质粒pDsRed-Express-N1-Par6A.在转染293ET细胞24 h后,荧光显微镜下可见红色荧光的表达.免疫共沉淀实验表明Par6A与PKCζ存在相互作用.结论 成功扩增出大鼠骨骼肌的Par6A cDNA,为研究Par6A的相关功能奠定了基础.

Hedgehog信号传导通路在乳腺癌中表达增强

目的 研究乳腺癌细胞中,Hedgehog信号传导通路是否表现为持续的激活状态.方法 用免疫组化方法 在64例乳癌标本中检测决定Hedgehog信号传导通路的组成部分,包括Shh,patched1和Gli1,SMO的表达.结果 在64例肿瘤样本中,强阳性表达Shh,Ptch1和Gli1,Smo的分别为64(100%),61(95.3%),62(96.9%)和61(95.3%),相反,各自对应相邻的正常乳腺上皮在可探测到的水平上不表达或低表达的这些蛋白,乳腺癌中的Hh通路的激活状态是普遍的,与病人的淋巴结转移无关,与癌肿的大小也无关.但与乳腺癌的特殊的病理类型可能有关.所有的64例肿瘤标本与周围正常组织相比都表现为Gli1强阳性染色,核染色Gli1阳性/所有的肿瘤细胞的百分比从2%～95%不等,中位数为40.87%.Gli1的核染色与雌激素受体阳性相关(P<0.05),与孕激素受体阳性无关.结论 Hedgehog(Hh)信号传导通路可以作为潜在的乳腺癌治疗的新靶点.

Livin反义寡核苷酸对人HL60细胞增殖和凋亡的影响

目的 探讨Livin mRNA反义寡核苷酸(ASODN)对人白血病细胞(HL60)增殖及凋亡的影响.方法 用免疫组织化学检测Livin蛋白表达,设计合成特异性的Livin硫代磷酸ASODN及其对照错义寡核苷酸(MSODN),脂质体转染HL60细胞.用四甲基偶氮唑盐光吸收法(MTT)检测细胞增殖,反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测LivinmRNA的表达,原位末端标记技术(TUNEL)、电镜检测细胞凋亡率和形态学改变.结果 Livin ASODN在终浓度为600 nmol/L作用HL60细胞48 h时,能明显地抑制其增殖,降低Livin mRNA的表达,HL60细胞在形态学上出现明显的凋亡改变,细胞凋亡率显著增加(P<0.01).结论 Livin ASODN可有效抑制HL60细胞的增殖,下凋Livin基因表达,并促进H160细胞凋亡,在诱导肿瘤细胞凋亡、抑制增殖中发挥重要作用.

广西3个少数民族17个Y-STR位点的遗传多态性

目的 研究广西侗、苗、壮3个少数民族17个Y-STR基因座的多态信息及其在法医学应用价值.方法 少数民族口腔拭子用磁珠法提取DNA后用Yfiler复合扩增试剂盒扩增,3100XL型遗传分析仪进行基因分型.计算基因频率,多样性和遗传距离.结果 获得3个少数民族309名男性17个Y-STR基因座的等位基因频率分布资料,3个少数民族单倍型共观察到275种.单倍型多样性:侗族为0.9972,苗族为0.9966,壮族为0.9964;遗传距离中苗族跟侗族的遗传距离近.结论 由17个Y-STR位点组成的单倍型多样性在种族鉴别,父权鉴定和群体遗传学等方面有很高的应用价值

携带增强绿色荧光蛋白基因的人PRKCB1真核表达载体构建、转染及活性鉴定

目的 构建携带增强绿色荧光蛋白基因的人PRKCB1真核表达载体并转染人脐静脉内皮细胞,鉴定所表达蛋白活性.方法 从pMD18-T-PRKCB1质粒中,扩增出人PRKCB1并与带有增强绿色荧光蛋白的真核表达载体pReceiver-M29酶切后连接、转化,所获重组体酶切鉴定及测序.按优化的转染参数,将pReceiver-M29-PRKCB1转染人脐静脉内皮细胞,观察荧光蛋白表达,随机视野下计数转染效率.测定激光共聚焦显微镜下胞膜与胞质的荧光强度比值,鉴定其活化转位.结果 构建的真核表达质粒测序与GenBank公布的序列一致.转染后48 h,荧光蛋白表达佳,转染率为18.6%±1.6%.从胞膜与胞质的荧光强度比值,观察到蛋白的活化转位.结论 成功构建真核表达质粒并转染人脐静脉内皮细胞,观察到绿色荧光蛋白表达及蛋白的转位,为筛选稳定表达人蛋白激酶Cβ2的内皮细胞株,及其蛋白复合体分离提供分子工具.

广西壮族自治区体循环血管阻力异常人群的分布及心脏功能分析

目的 分析体循环血管阻力(SVR)异常在健康人群中的分布特点及心脏功能参数的相关变化.方法 用Bioz.com数字化无创血液动力学监护仪,观察919名健康人体循环血管阻力及平均动脉压(MAP)、心输出量(CO)、心脏指数(CI)、搏出量(SV)、搏出指数(SI)、左心做功量(LCW)等心功能参数.结果 体循环血管阻力异常在低年龄段和高年龄段发生率均较高;女性显著高于男性(P<0.001).相关因素分析显示,体循环血管阻力与平均动脉压(MAP)、脉压(PP)和左心射血时间(LVET)呈正相关;而与心输出量、心脏指数、搏出量、搏出指数、左心做功量及动脉顺应性(AC)呈负相关.结论 广西壮族自治区人群体循环血管阻力异常与年龄、性别及血压水平密切相关,体循环血管阻力升高,心输出量和心指数降低,心脏泵功能减弱.

人SREBP-1c启动子报告基因的构建和功能验证

目的 构建人SREBP-1c启动子的荧光素酶报告基因载体并进行功能的初步验证.方法 提取人血基因组DNA,PCR扩增SREBP-1c的启动子,构建SREBP-1c启动子双荧光素酶的报告基因载体;用双荧光素酶活性检测其功能.Western blot检测FoxO1对SREBP-1c蛋白的抑制作用.结果 成功构建了pGL3-Basic-SREBP-1c-promoter的报告基因载体,共转染FoxO1明显抑制了人SREBP-1c启动子的活性,同时过表达FoxO1抑制了SREBP-1c的蛋白表达.结论 FoxO1通过抑制SREBP-1c的转录来抑制SREBP-1c的表达.

2型糖尿病蛋白质组学研究进展

通过2型糖尿病患者与正常个体的对比研究以及动物模型的使用,研究者检测出一些疾病相关蛋白以及疾病检测标志物,建立了一些新的检测方法 ,为我们研究2型糖尿病提供了新的视角.本文对其目前的研究情况和未来的发展方向进行初步的探讨.

供者特征对rhG-CSF动员的外周血和骨髓混合移植物中免疫细胞组成的影响

近,我们采用GIAC(即G,粒细胞集落刺激因子+I,强的免疫抑制+A,抗胸腺细胞球蛋白+C,外周血与骨髓联合)技术体系成功跨越了HLA不合屏障,从根本上解决了异基因造血干细胞移植(Allo-HSCT)供者来源缺乏的问题[1-2].大量资料显示,供者特征影响移植物的细胞组成,后者又与Allo-HSCT的预后密切相关[2-3].我们从供者的年龄、性别、体重等方面研究供者特征对粒细胞集落刺激因子(G-CSF)动员的外周血和骨髓混合移植物中免疫细胞组成的影响.

诱导小鼠原始生殖细胞向肝细胞样细胞分化的新方法

目的 探索诱导小鼠原始牛殖细胞向肝细胞样细胞定向分化的有效方法 .方法 分离孕13 d昆明小鼠的原始生殖细胞(PGC),体外培养扩增后,向其培养液中加入新生鼠肝组织提取液和包被有胎肝细胞的微囊共培养,利用微环境诱导法使PGC定向分化,然后免疫细胞化学法标记α-1-抗胰蛋白酶(AAT)和白蛋白(ALB).结果 在微环境的诱导作用下,可见PGC分化成卵圆形或星形肝细胞样细胞,并且分化细胞的数量随诱导时间延长而增多,培养2周时分化率可达70%以上.分化的肝细胞样细胞中,AAT和ALB均呈阳性表达.结论 应用新生小鼠肝组织提取液和包被有胎肝细胞的微囊构成的微环境,可有效诱导PGC向肝细胞方向分化.

1例成人垂体柄孤立性朗格汉斯细胞组织细胞增多症

目的 探讨罕见孤立部位受累的朗格汉斯细胞组织细胞增多症(组织细胞增多症X)的临床特点、诊治方法 .方法 报道1例成人孤立性垂体柄受累的朗格汉斯细胞组织细胞增多症,通过内分泌学、影像学、病理组织学、免疫组织化学方法 的实验室检查,结合文献复习,探讨其病理、临床、诊断、治疗特点.结果 患者头颅MRI示为垂体柄区域直径9 mm占位性病变,能够均匀强化.相关检查显示无其他系统、部位受累.进行了经右侧翼点入路、垂体柄区占位性病变切除术.病理诊断为朗格汉斯细胞组织细胞增多症.术后予以激素替代治疗,密切随访中.结论 孤立性成人垂体柄朗格汉斯细胞组织细胞增多症极为罕见,应加深对其的认识以避免漏诊和误诊.

皮下脂膜炎样T细胞淋巴瘤6例临床病理分析

目的 观察皮下脂膜炎样T细胞淋巴瘤的临床、病理及免疫表型特点,总结其鉴别诊断要点.方法 对6例SPTCL进行临床、病理及免疫表型观察及分析,并复习相关文献.结果 患者均表现为不同部位皮下结节和/或硬结性红斑,未见明显淋巴结肿大.其中1例出现皮肤溃疡,5例伴有发热,所有患者均有典型的病理学改变,2例伴有较明显的噬血细胞综合征,瘤细胞均表达T细胞标记.2例于诊断后9～16个月死亡,4例经化疗后缓解,其中2例又有新发结节.结论 SPTCL为一种少见的原发于皮下的外周T细胞淋巴瘤,具有相对特征性的临床及病理学表现,应与脂膜炎及其他类型的皮肤淋巴瘤相鉴别.

A型H1N1流感简介

消瘦、腹胀、发热

患者,男,44岁,因"消瘦、腹胀1年,发热1月"入院.1 病历摘要1.1 病史2006年5月,患者无诱因在1～2月内体重下降15 kg,腹胀明显.当地腹部B超、增强CT:腹腔大量积液.行诊断性腹穿:血性腹水,黎氏反应(+),涂片见较多RBC,少量淋巴细胞;诊断"结核性腹膜炎?".予抗结核治疗(6月上旬开始,自述三联,具体不详;其间曾因肝功能异常停药约2周,后复用),同时呋塞米口服及保肝治疗.