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BMP9促进植入心肌前体干细胞改善心梗大鼠心功能
目的 探讨骨形态形成蛋白9(BMP9)能否促进植入的心肌前体干细胞(CPCs)改善心梗大鼠的心功能.方法 用表达绿色荧光蛋白的AdBMP9腺病毒感染CPCs 24 h后,检测CPCs中BMP9的表达量.并将感染AdBMP9腺病毒的CPCs植人心肌梗死大鼠模型中,超声心动图检测左室心功能参数,Masson染色计算心肌梗死面积及观察植入细胞形态学,免疫荧光检测α-MHC及α-actin蛋白的表达.结果 AdBMP9腺病毒感染CPCs 24 hA,BMP9的表达量较其CPCs本身BMP9的表达虽有显著增高(P＜0.01).术后4周,植入的感染AdBMP9腺病毒的CPCs及未处理的CPCs均能与周围正常心肌组织融合,且均有心肌特异性结构蛋白α-MHC及α-actin的表达,但较周围正常组织表达差(P＜0.05).同时,植入的心肌前体干细胞可以使心肌梗死面积显著缩小(P＜0.05),而BMP9可以加强这一效果(P＜0.01).左室心功能参数结果与梗死面积结果相似.结论 BMP9对移植的心肌前体干细胞改善心梗大鼠心功能有促进作用.
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DLX1联合BMP9促进人骨肉瘤细胞向成骨分化
目的探讨DLX1联合BMP9可否影响人骨肉瘤细胞MG63的成骨分化. 方法用构建有DLX1和BMP9基因的重组腺病毒AdDLX1和AdBMP9,单独或联合感染MG63细胞,分为DLX1组(AdDLX1+AdRFP感染组)、DLX1+BMP9组(AdDLX1+AdBMP9感染组)、BMP9组(AdBMP9+AdRFP感染组)、RFP组(AdRFP感染组).用RT-PCR和Western blot验证DLX1和BMP9的表达情况,Transwell实验检测细胞迁移、侵袭能力;碱性磷酸酶(ALP)染色和读数分析细胞早期成骨能力,茜素红染色检测细胞晚期成骨能力,Western blot检测骨桥蛋白(OPN)蛋白表达水平. 结果AdDLX1和AdBMP9感染MG63细胞后,DLX1和BMP9的表达水平上调(P<0.05);与RFP组相比,DLX1组、DLX1+BMP9组和BMP9组细胞迁移能力和侵袭能力下降(P<0.05),DLX1+BMP9组细胞迁移能力和侵袭能力下降更为明显(P<0.05);ALP活性、钙盐沉积和OPN蛋白表达在DLX1+BMP9组和BMP9组增加(P<0.05),且DLX1+BMP9组较BMP9 组显著增强(P<0.05). 结论DLX1与 BMP9联合作用可抑制骨肉瘤细胞迁移和侵袭,同时可诱导骨肉瘤细胞向成骨分化.
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腺病毒介导的BMP9过表达抑制人骨肉瘤细胞系143B的增殖与迁移
目的 探讨骨形态发生蛋白9(BMP9)过表达对人骨肉瘤细胞系143B的生物学行为的影响.方法 用RTPCR和Western blot检测骨肉瘤细胞系中BMP9的内源性表达,用表达BMP9的腺病毒重组体(adBMP9)感染内源性表达BMP9相对较低的骨肉瘤细胞系,Transwell法检测细胞侵袭,划痕愈合实验检测细胞迁移,MTT法和结晶紫染色法检测细胞的增殖,Hoechst 33258染色法检测凋亡,平板集落形成实验检测集落形成能力.结果 adBMP9可以明显减弱骨肉瘤细胞系143B的增殖、迁移、侵袭及集落形成能力(P＜0.05),并促进细胞凋亡.结论 adBMP9能抑制人骨肉瘤细胞系143B的增殖和迁移,促进细胞凋亡.
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Runx3敲减抑制BMP9诱导小鼠胚胎成纤维细胞iMEFs向成骨分化
目的 研究Runx3敲减对BMP9诱导的小鼠胚胎成纤维细胞iMEFs成骨分化的作用.方法 BMP9腺病毒感染iMEFs,用Western blot检测内源性Runx3蛋白的表达.Runx3 干扰腺病毒ad-siRunx3和BMP9条件培养基共同处理iMEFs,用碱性磷酸(ALP)染色和活性定量测定检测成骨早期指标ALP;用茜素红S染色检测成骨晚期指标钙盐沉积;用RT-PCR检测成骨相关基因Id1、Id2、Id3和Runx2,用Western blot检测成骨相关蛋白Dlx5;用SBE荧光素酶报告质粒检测smad 1/5/8的转录活性.结果 BMP9可以使Runx3表达降低(P＜0.05);干扰Runx3可以抑制早期成骨指标ALP活性(P＜0.05)和晚期成骨指标钙盐沉积;ad-siRunx3抑制BMP9诱导的成骨相关转录因子Id1、Id2、Id3和Runx2基因的表达(P＜0.05)及DLX5蛋白的表达(P＜0.05).结论 敲减Runx3可以抑制BMP9诱导小鼠胚胎成纤维细胞向成骨分化.
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骨形态发生蛋白9基因修饰人羊膜间充质干细胞体外向韧带成纤维细胞分化研究
目的:探讨骨形态发生蛋白9(BMP9)基因修饰对人羊膜间充质干细胞(hAMSCs)在体外向韧带成纤维细胞(LFs)分化是否有促进作用,并研究其分子机制.方法:体外分离培养hAMSCs及LFs,观察并比较两种细胞形态学差异.经AdMAX系统体外构建BMP9基因腺病毒载体,经提纯及荧光法病毒滴度测定后转染P3代hAMSCs.实验分为三组,A组:携带绿色荧光蛋白(GFP)的空腺病毒载体转染hAMSCs(hAMSCs-GFP);B组:携带BMP9基因的腺病毒载体转染hAMSCs (hAMSCs-BMP9);C组:韧带成纤维细胞组(LFs).于体外分别培养7天后使用荧光定量PCR检测并比较各组韧带相关基因Scleraxis (Scx)、Ⅰ型胶原(Col Ⅰ)、细胞连接素(TNC)、纤维连接蛋白(Fib)及腱调蛋白(Tnmd)mRNA的表达量.使用免疫荧光检测并比较三组细胞体外培养7天后Col Ⅰ的表达量.结果:在倒置相差显微镜下,hAMSCs原代呈多角形贴壁生长,传代后呈长梭状漩涡状生长.LFs原代呈长梭状贴壁生长,传代后呈漩涡状集落样生长.A、B组细胞转染8h、24 h后,生长增殖缓慢,轮廓清晰,细胞形态未发生变化.荧光显微镜观察显示A组在转染8h后可见GFP荧光表达,24 h后表达荧光的数量和强度均增多.实时荧光定量PCR显示,转染7天时B组SCX、Tnmd、Col Ⅰ、Fib及TNC的表达量均高于A组(P＜0.05),而SCX、Fib、TNC及Tnmd的表达量低于C组(P＜0.05),Col Ⅰ的表达量高于C组(P＜0.05).荧光免疫组化显示,转染7天后,B组Col Ⅰ的表达量均高于A组和C组.结论:BMP9基因可促进hAMSCs向LFs定向分化,并促进韧带特异性基因的表达和细胞外基质的产生,为hAMSCs作为韧带组织工程种子细胞提供了实验基础.
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BMP9转染脂肪干细胞联合纳米相羟基磷灰石联合修复下颌骨
目的：评价应用BMP-9基因修饰的ADSCs作为种子细胞，以纳米羟基磷灰石作为载体，构建组织工程化骨来修复大鼠下颌骨骨缺损的效果。方法通过腺病毒转染的方法把BMP9介导到大鼠脂肪干细胞，使细胞均匀分布于纳米羟基磷灰石上。用牙科裂钻在下颌角区制备3 mm ×3 mm的骨缺损区，分别植入纳米羟基磷灰石及BMP9-ADSCs。于术后3个月处死动物，行microCT扫描及组织学检查，评价骨缺损的修复情况。结果实验组A见大量新生骨，可见成熟骨细胞。实验组B较多新生骨形成，骨细胞接近成熟。对照组骨缺损处基本被纤维组织充填，未见新骨生成。结论纳米羟基磷灰石与BMP9转染的大鼠脂肪干细胞复合物植入下颌骨缺损中，可以促进骨缺损修复，增加血管化与骨化。
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p38MAPK通路调控BMP9诱导hPDLSCs成骨分化的体外研究
目的:检测骨形成发生蛋白9 (bone morphogenetic proteins 9,BMP9)对人牙周膜干细胞(human periodontal ligament stem cells,hPDLSCs)的成骨诱导分化能力,并探讨p38 MAPK通路在该成骨分化中的作用.方法:培养hPDLSCs,腺病毒载体(Ad-BMP9)感染hPDLSCs后,通过碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性测定与染色、定量聚合酶链反应(quantitative polymerase chain reaction,qPCR)、钙盐沉积等方法,分别检测ALP、骨桥蛋白(osteopontin,OPN)、骨钙素(osteocalcin,OCN)的表达及钙盐沉积量,评价BMP9诱骨分化的能力.在Ad-BMP9感染hPDLSCs 36 h后,检测BMP9作用hPDLSCs后对p38及MKK3/6磷酸化(p-p38,p-MKK3/6)的影响,以及p38 MAPK通路抑制剂SB203580预处理后BMP9-p38-MAPK通路对hPDLSCs成骨分化的影响.采用SPSS16.0软件包对数据进行统计学分析.结果:在Ad-BMP9作用下,ALP活性、OPN和OCN的表达均显著高于对照组(P＜0.01),ALP染色与钙盐沉积结果与之吻合.Western印迹法检测发现,BMP9可增强p-p38、p-MKK3/6的表达.加入p38MAPK通路抑制剂后,ALP、及OPN、OCN的表达均显著降低(P＜0.01),钙盐沉积、基质矿化也显著减弱.结论:在hPDLSCs的分化过程中,BMP9对其具有诱骨分化能力.MKK3/6-p38 MAPK通路参与了该成骨分化过程且具有正向调节作用.
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CD105、BMP9在绒癌组织中的表达及其临床病理意义
目的:研究绒癌化疗前后组织中CD105和BMP9的表达及其临床意义,为绒癌患者的个性化治疗和预后提供判断依据.方法:收集2010年1月至2015年12月于北京协和医院妇产科诊治的绒癌患者的石蜡组织标本41例,其中化疗前(初治组)标本8例,化疗后(化疗组)标本33例.免疫组化法检测CD105和BMP9在绒癌组织中的表达,分析CD105和BMP9表达与绒癌患者临床病理参数之间的关系.结果:初治组中CD105在细胞型、合体型滋养细胞中呈强阳性,在中间型滋养细胞中呈阴性或弱阳性表达;BMP9在中间型滋养细胞中呈强阳性表达,在细胞型、合体型滋养细胞中呈中等阳性表达.不同患者化疗前绒癌组织中CD105、BMP9表达具有相似性.化疗后,CD105、BMP9表达均减弱,表达水平与患者年龄、术前血清β-HCG、是否转移等无关,与患者复发呈正相关.细胞型和合体型滋养细胞中CD105和BMP9表达呈显著相关性(P<0.05).结论:CD105和BMP9在绒癌化疗后组织中表达下调,其表达水平可能与患者化疗耐药的产生和不良预后有关.
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BMP9对C3H10T1/2干细胞向心肌样细胞分化的影响
目的:研究骨形态形成蛋白9(Bone morphogenetic proteins 9,BMP9)在C3H10T1/2干细胞向心肌细胞分化过程中的影响.方法:以高滴度(2.67 ml/L)pAdEasy-BMP9重组腺病毒质粒转染C3H10T1/2干细胞,1周后应用RT-PCR方法及激光共聚焦方法分别检测C3H10T1/2干细胞中心肌特异转录因子及特异性蛋白的表达变化.2周后应用电子显微镜观察细胞超微结构的改变.结果:C3H10T1/2干细胞经pAdEasy-BMI9重组腺病毒质粒诱导1周后,细胞体积明显变大,排布走向趋于一致,细胞间连接紧密,折光性增强;细胞中开始出现心肌特异性转录因子NKx 2.5、GATA-4、MEF2C及心肌特异性表达蛋白连接蛋白43(Connex-in43,Cx43)和心肌特异性肌钙蛋白T(Cardiac isoform ofTropnin T,cTnT)的表达;出现心肌特异性超微结构肌丝和闰盘结论:BMP9可影响体外培养的C3H10T1/2干细胞定向分化为心肌样细胞.
关键词： BMP9 C3H10T1/2干细胞 分化 心肌细胞 -
外源性BMP9对骨肉瘤细胞MG63的影响与Wnt/β-catenin信号通路的关系
目的 研究外源性骨形态发生蛋白9(bone morphogenetic protein 9,BMP9)过表达对骨肉瘤细胞的影响与Wnt/β-catenin信号通路的关系.方法 用携带人BMP9基因的重组腺病毒AdBMP9转染人骨肉瘤细胞MG63,上调MG63中BMP9的表达水平;MTT法检测细胞增殖能力的变化,Hochest染色法检测细胞凋亡的变化,Transwell实验检测细胞迁移能力的变化;实时定量PCR和Western blot分别检测Wnt/β-catenin信号通路中相关分子β-catenin、c-myc、cyclinD1和E-cadherin在mRNA和蛋白水平表达的变化.统计分析实验结果.结果 获得了过表达BMP9的MG63细胞;BMP9能促进MG63细胞的增殖、迁移和凋亡;MG63细胞中BMP9的过表达增强了Wnt/β-catenin信号通路中相关分子β-catenin、c-myc、cyclinD1的表达,减弱了E-cadherin的表达.结论 BMP9对于骨肉瘤细胞MG63具有正性调节作用,该调控作用可能与Wnt/β-catenin信号通路相关.
关键词： BMP9 骨肉瘤 MG63 Wnt/β-catenin信号通路
