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原癌基因Wip1在室管膜瘤中表达增加并与P53相关
目的 探讨野生型P53-诱导的蛋白磷酸酶1(Wip1)在室管膜瘤中的表达及其与P53相关性.方法 用免疫组织化学、反转录聚合酶链反应(RT-PCa)和Western blot 方法检测31例室管膜瘤及10例正常脑组织中Wip1mRNA、蛋白表达.并用免疫组化检测P53.同时,回顾性分析临床病理因素与Wipl表达之间的相关性.结果 室管膜瘤中Wipl阳性表达率为19/31(60%),显著高于正常脑组织中的1/10(10%)(P＜0.05).31例室管膜瘤组织中P53阳性2例.Wip1 mRNA在室管膜瘤中表达相对量为0.34±0.07,显著高于正常脑组织的0.05±0.01(P＜0.05).室管膜瘤中Wipl蛋白表达相对量为0.83 4-0.16,显著高于正常脑组织的0.14±0.03(P＜0.05).Wip1表达与肿瘤大小、年龄、性别无关.结论 Wip1在室管膜瘤高表达,对P53表达可能起负反馈抑制作用,Wip1有望成为室管膜瘤预后及治疗的新靶点.
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WIP1对小鼠B细胞及T细胞发育的影响
目的 研究WIP1基因对小鼠骨髓B细胞发育及胸腺T细胞发育的影响.方法 流式细胞术测定小鼠骨髓B细胞及胸腺T细胞发育中各阶段的细胞比例.结果 虽然WIP1缺失小鼠骨髓B细胞发育各阶段比例正常,但骨髓总体B细胞比例下降;WIP1基因敲除小鼠胸腺发育障碍,CD8/CD4双阴性细胞比例增高,CD8/CD4双阳性细胞比例降低.结论 WIP1基因在小鼠骨髓B细胞及胸腺T细胞的发育过程中起重要作用.
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原癌基因Wip1在乳腺癌中的表达及其临床意义
目的 探讨原癌基因Wip1在乳腺癌组织中的表达及其临床意义.方法 应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)、免疫组织化学、Western印迹方法,检测70例乳腺癌组织、癌旁组织、20例正常乳腺组织中Wip1 mRNA和蛋白表达情况,同时对Wip1高表达与临床病理因素的关系进行了比较研究.结果 RT-PCR:乳腺癌组织、癌旁组织、正常乳腺组织Wip1 mRNA的基因表达值分别为:0.715±0.087、0.175±0.021、0.154±0.022.乳腺癌组织比癌旁组织、正常乳腺组织明显升高(P<0.01).免疫组织化学:3种组织中Wip1蛋白高表达率分别为62.9%(44/70)、2.9%(2/70)、0(0/20).乳腺癌组织比癌旁组织、正常乳腺组织明显升高(P<0.01).Western印迹:3种组织Wip1蛋白相对含量分别为0.688±0.151、0.251±0.043、0.234±0.044.乳腺癌组织比癌旁组织、正常乳腺组织明显升高(P<0.01).Wip1高表达与肿瘤大小、年龄、TNM分期、腋窝淋巴结转移、雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)表达无关,与p53表达呈负相关.结论 Wip1 mRNA和蛋白在乳腺癌组织中高表达,促进乳腺癌的发生和发展.Wip1可能成为乳腺癌基因治疗新的靶点.
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Wip1在甲状腺癌细胞中表达的临床及生物学意义
目的：探讨野生型p53诱导的磷酸酶1（wild-type p53-induced phosphatase 1，Wip1）在甲状腺癌中的表达意义及其导入靶向Wip1的siRNA对甲状腺乳头状癌K1细胞的生物学影响。方法：采用免疫组织化学方法、逆转录聚合酶链反应（reverse transcription polymerase chain reaction，RT-PCR）检测73例甲状腺癌组织及距其癌组织边缘5 cm以上的镜下未见浸润的正常组织中蛋白、mRNA的表达情况。通过脂质体介导将Wip1基因siRNA瞬时转染甲状腺乳头状癌K1细胞，采用RT-PCR及Western blot检测转染后K1细胞内Wip1基因的表达水平，MTT比色法及流式细胞术（FCM）观察细胞增殖、凋亡、周期变化情况。结果：Wip1蛋白在甲状腺癌组织及正常甲状腺组织中的表达阳性率分别为80.8%、9.6%，较正常甲状腺组织明显升高（χ2=47.036，P<0.05）。Wip1 mRNA在甲状腺癌组织及正常甲状腺组织中的表达相对量分别为0.665±0.046、0.225±0.039，较正常甲状腺组织明显升高（t=12.637，P<0.05）。Wip1蛋白、mRNA表达与甲状腺癌患者性别、年龄及肿瘤大小无关（P>0.05），而与淋巴结转移、肿瘤临床分期及肿瘤分化有关（P<0.05）。RT-PCR及Western blot证实，siRNA沉默的K1细胞中Wip1 mRNA、蛋白的表达水平较未转染组明显降低（t=17.039，t=14.637，P<0.05）。MTT、细胞凋亡及周期结果表明，siRNA沉默的K1细胞其增殖能力明显减弱、细胞凋亡明显增加，G0+G1期细胞数比例升高，而G2+M期和S期细胞数比例降低（P<0.05）。结论：甲状腺癌组织中Wip1蛋白和mRNA的表达均升高，且与甲状腺癌淋巴结转移、肿瘤临床分期以及肿瘤分化有关，Wip1参与甲状腺癌细胞增殖、凋亡、周期这一生物学过程。
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Wip1和 P53在非小细胞肺癌中表达和临床意义
目的：探讨 Wip1和 P53在非小细胞肺癌中表达水平和临床意义。方法采用实时荧光定量 PCR 检测方法检测65例非小细胞肺癌组织（鳞癌34例，腺癌31例；高分化15例，中分化30例，低分化20例），按临床 TNM分期（Ⅰ﹢Ⅱ期41例，Ⅲ﹢Ⅳ期24例），淋巴结转移（有淋巴结转移40例，无淋巴结转移25例）和20倒正常肺组织做为对照组，测定2组肺组织中 Wip1/ P53蛋白的表达水平。结果 Wip1 mRNA 在非小细胞肺癌以及正常肺组织中都有表达，非小细胞肺癌组织中 Wip1和 P53的表达率明显高于对照组（P ﹤0.05）；在非小细胞肺癌不同分期之间，Wip1和 P53的表达差异具有统计学差异（P ﹤0.05）；在非小细胞肺癌是否伴随淋巴结转移之间 Wip1和 P53的表达差异具有统计学差异（P ﹤0.05）；Wip1和 P53在非小细胞肺癌组织中的表达呈正相关（P ﹤0.05）。结论 Wip1和 P53在非小细胞肺癌中的表达水平明显较高，能成为确定肿瘤恶性程度的分子生物学参考指标。
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丝/苏氨酸磷酸酶Wip1的研究进展
Wip1(PPM1D)是PP2C磷酸酶家族的一员,并且是一种罕有的致癌的丝/苏氨酸磷酸酶.在细胞损伤修复过程中,Wip1起着重要的作用.实验表明作为DNA损伤应答通路的调控因子,Wip1有去磷酸化P53,ATM等抑癌基因的作用.同时,P53信号通路也是造成Wip1具有致癌性的一个重要组成部分.
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Wip1联合Bmi1参与人椎间盘髓核细胞放射性损伤DNA修复
目的 探讨野生型p53诱导的蛋白磷酸酶1(Wip1)在人椎间盘髓核细胞放射性损伤DNA修复中的可能作用,为椎间盘退行性变的临床诊治提供参考.方法 取人椎间盘髓核细胞体外培养,小干扰(siRNA)技术干扰细胞Wip1表达,放射性照射(4、10、15、25 Gy)髓核细胞,采用彗尾实验观察DNA损伤及损伤修复反应(DNA damage repair,DDR)情况,并与未干扰Wip1髓核细胞作对照;采用免疫共沉淀(Co IP)技术检测Wip1潜在结合蛋白;根据筛选结果采用实时定量RT PCR技术检测病变椎间盘组织Wip1及潜在结合蛋白的表达情况.结果 彗尾实验表明:干扰Wip1表达后,25 Gy剂量射线导致髓核细胞DNA损伤的修复并不受影响,但DDR持续激活,对照组在照射后24 h已经检测不到DNA损伤修复的标识分子,但siRNA干扰Wip1表达组细胞照射后48 h仍可检测到标识分子.Co-IP实验表明:放射性照射正常对照细胞后,Wip1与Bmi1在细胞核内分布重合,而且聚集在DNA损伤位点,而siRNA抑制Wip1表达后,这种结合随即消失.实时定量RT-PCR结果表明:与正常椎间盘组织相比,椎间盘退变组织Wip1、Bmi1基因表达下降,且两者呈正相关(P＜0.05).结论 Wip1通过调控DDR时限参与了人椎间盘髓核细胞放射性损伤DNA修复,Bmi1可能参与此过程.
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靶向沉默Wip1基因协同替莫唑胺抑制脑胶质瘤细胞增殖的作用
目的：研究靶向沉默Wip1基因对增敏替莫唑胺（ TMZ）抑制脑胶质瘤细胞增殖作用的影响。方法体外培养人胶质瘤细胞株U-87MG，将携带Wip1基因RNA干扰载体的慢病毒感染U87-MG细胞。使用TMZ干预胶质瘤细胞，MTT法检测细胞的增殖，流式细胞术Annexin-V （ APC染色）检测细胞的凋亡情况，流式细胞术PI染色法检测细胞周期。实验数据采用SPSS 16．0软件进行统计学分析。结果 Wip1基因沉默的胶质瘤细胞与空载体慢病毒对照组细胞对TMZ的作用对比，3 d后细胞增殖率较对照组下降57．7％；Wip1基因沉默组TMZ处理5 d后细胞凋亡率为15．3％，空载体对照组为5．65％；Wip1基因沉默组细胞凋亡率明显要高（ P＜0．05）；细胞周期结果显示Wip1基因沉默组G2细胞为63．0％，而空载体对照组为23．8％，Wip1基因沉默组表现为G2／M期细胞明显增多（P＜0．05）。结论靶向沉默Wip1基因可以显著增加TMZ对胶质瘤细胞增殖的抑制作用。
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非小细胞肺癌组织中P53和Wip1的表达及临床意义
目的 探讨非小细胞肺癌组织中P53和Wip1的表达及临床意义.方法 58例手术切除且经病理确诊非小细胞肺癌患者作为观察组,将同期正常肺组织58例作为对照组,采用荧光定量PCR方法对两组进行P53和Wip1指标的检测.结果 Wip1蛋白在NSCLC和正常肺组织中均有表达,观察组中Wip1和P53的表达率明显高于对照组(x2=1.748,均P＜0.05)；观察组不同分期之间,Wip1和P53的表达差异有统计学意义(x2=1.047,均P＜0.05)；观察组中是否伴随淋巴结转移之间Wip1和P53的表达差异有统计学意义(x2=2.374,均P＜0.05)；Wip1和P53在NSCLC组织中的表达呈正相关(r=0.598、0.086,均P＜0.05).结论 P53和Wip1在非小细胞肺癌组织中呈过表达,可以作为患者预后的参考指标和基因治疗的可能靶点.
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靶向沉默Wip1基因表达对胶质瘤细胞增殖及放疗敏感性的作用
目的探讨靶向沉默Wip1基因表达对脑胶质瘤细胞增殖及放疗敏感性的影响.方法体外培养人胶质瘤细胞株U251,用携带Wip1基因RNA干扰载体的慢病毒感染U251细胞沉默Wip1基因表达,然后对U251胶质瘤细胞进行放疗干预.根据对U251细胞处理方法分为4组:Wip1基因沉默后放疗组(IR+Wip1组)、单纯Wip1基因沉默组(Wip1组)、单纯放疗组(IR组)和NC组(空载体病毒感染U251细胞).CCK-8法检测细胞的增殖,实时定量PCR检测细胞Chk1、Chk2 mRNA表达,免疫印迹检测细胞Chk1、Chk2蛋白表达.结果U251细胞慢病毒感染后3~4 d,采用荧光显微镜观察,根据绿色荧光蛋白阳性表达判定感染效率,结果显示感染效率均90%以上.放疗后24、48、72、96、120 h,IR组和Wip1组增殖率均显著低于NC组(P<0.05),而IR+Wip1组细胞增殖率明显低于IR组和Wip1组(P<0.05).放疗后24 h,IR+Wip1组Chk1 mRNA表达明显低于Wip1组(P<0.05),明显高于IR组和NC组(P<0.05);IR+Wip1组Chk2 mRNA表达明显低于其他3组(P<0.05).IR+Wip1组Chk1蛋白表达明显低于IR组和NC组(P<0.05),Chk2蛋白表达低于其他3组(P<0.05).结论靶向沉默Wip1基因表达可抑制胶质瘤细胞的增殖,并可能通过抑制Chk1、Chk2的蛋白表达增加胶质瘤细胞对放疗的敏感性.
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Wip1和p53在喉鳞状细胞癌组织中的表达及临床意义
野生型p53诱导的磷酸酶1(wild-type p53-induced phosphatase 1,Wip1)是近年来新发现的一种原癌基因.研究发现,Wip1基因在多种人类肿瘤组织中高表达,且被认为与肿瘤的发生、发展有关[1].p53是一种重要的抑癌基因,约50％的人类肿瘤的发生与p53基因的突变及失活相关[2].大量研究认为,肿瘤的发生、发展与原癌基因的激活及抑癌基因的失活密切相关.喉鳞状细胞癌(laryngeal squamous cell carcinoma,LSCC)是头颈部常见的恶性肿瘤之一,其发病率呈逐年上升趋势,而目前Wip1在LSCC中的表达及其与p53的相关性研究尚未见报道.本研究观察了LSCC组织中Wip1和p53的表达变化,并探讨其临床意义.
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Wip1在肺癌细胞中的作用机制初探
目的:检测Wip1及相关蛋白在肺癌细胞中的表达情况,探讨Wip1在肺癌发生中的作用机制.方法:Western blotting检测各种细胞(肺腺癌细胞A549、肺鳞癌细胞NCI-1299、大细胞肺癌细胞 NCI-H460和正常支气管上皮细胞HBE)中Wip1、p53、p-p53、p38 MAPK和p-p38 MAPK蛋白的表达.结果:A549、NCI-1299和H460细胞中Wip1蛋白的表达均高于HBE细胞(P<0.05);各种肺癌细胞间Wip1蛋白的表达无明显差异(P>0.05);p-p53和p-p38 MAPK蛋白在肺癌细胞中的表达低于HBE细胞(P<0.05);肺癌细胞中Wip1表达增加,p-p38 MAPK和p-p53表达降低,存在着Wip1-p38 MAPK-p53信号通路的失衡.结论:肺癌细胞(A549、NCI-1299、H460)中存在Wip1-p38 MAPK-p53信号通路的失衡.这可能是Wip1在肺癌中的致癌机制之一.
关键词： 肺癌细胞 Wip1 Wip1-p38 MAPK-p53通路 -
Wip1相关研究进展
Fiscella 等[1] 首次通过γ射线或UV 射线诱导发现了野生型p53 诱导的磷酸酶1(wild-type p53-inducedphosphatase 1,Wip1),并且证实Wip1 的表达依赖于p53.编码Wip1 蛋白的基因称为PPM1D,定位于人染色体17q23 和小鼠第11 号染色体上,PPM1D 编码的mRNA 在很多器官组织包括睾丸和心脏中表达[2].
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原癌基因Wip1的研究进展
细胞DNA总是受到来自环境和内源性致突变因素攻击.为保持基因组的完整性和抑制肿瘤发生,细胞在长期检查点机制.
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脑胶质瘤Wip1基因与DNA损伤修复关系的研究
目的 研究U251脑胶质瘤细胞Wip1基因对DNA核苷酸切除修复酶XPA、XPC的影响.方法 体外培养人胶质瘤细胞株U251,wip1(-)组采用携带Wip1基因RNA干扰载体的慢病毒沉默Wip1基因,经实时定量PCR验证.对照组(NC组)采用阴性对照病毒感染.使用替莫唑胺(temozolomide,TMZ)进行干预,将细胞分为NC组、NC+TMZ组、Wip1(-)组和wip1 (-)+TMZ组.CCK-8法检测各组细胞的增殖,实时定量PCR检测细胞XPA、XPC mRNA表达,免疫印迹检测细胞XPA、XPC蛋白表达.结果 TMZ干预后48 h、72 h、96 h、120h、144h,Wip1 (-)+TMZ组细胞增殖率低于其他3组(P＜0.05).TMZ干预48 h后,NC+TMZ组细胞XP和XPC mRNA表达远远高于NC组(P＜0.05),同时XPA和XPC蛋白表达远远高于NC组(P＜0.05).TMZ干预48 h后,Wip1(-)+TMZ组细胞XPC mRNA和XPA蛋白表达水平明显高于Wip1(-)组(P＜0.05).结论 Wip1基因与U251脑胶质瘤细胞DNA损伤修复有关,可通过调节下游产物XPA与XPC参与细胞核苷酸切除修复过程.
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Wip1基因在人脑胶质瘤细胞恶性增殖中的作用及其机制
目的 研究Wip1基因在人脑胶质瘤细胞增殖的作用及机制.方法 构建人Wip1基因RNA干扰(RNAi)慢病毒载体,有效沉默胶质瘤细胞U251及U87-MG细胞的Wip1基因表达,检测细胞增殖能力.流式细胞术PI单染法检测Wip1基因沉默后细胞周期分布.实时定量PCR法及Western blotting分别检测差异性基因mRNA及蛋白表达.结果 胶质瘤细胞Wip1基因表达被有效沉默.Wip1基因沉默的胶质瘤细胞增殖变慢,在U87-MG细胞更加明显.细胞周期分析显示:Wip1基因沉默对U251细胞周期无明显影响,而U87-MG细胞则在10d时出现明显S期增多和G1、G2期细胞减少.Wip1基因沉默后,U251细胞中CDKN2A和p14ARF基因表达下调,而在U87-MG细胞中表达均上调.Western blotting结果显示:在U251与U87-MG胶质瘤细胞中p 38MA PK表达均上调.在U87-MG细胞中p53及p-p53 (Ser 15)表达均上调,但在U251细胞中无明显变化.结论 Wip1对胶质瘤细胞增殖具有重要作用.在U87-MG细胞增殖作用主要与其调节p53功能有关.
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microRNA16可能通过调控Wip1抑制U87细胞增殖和侵袭
[目的]探讨microRNA 16(miR16)对胶质母细胞瘤细胞株U87的生物学行为的影响以及对Wip1表达水平的影响.[方法]实验分组:miR16上调组(mimic组)和阴性对照组(NC组),每种实验重复3次.利用miR16过表达的细胞模型,通过克隆形成实验和流式细胞技术检测瘤细胞增殖和凋亡能力及细胞周期分布,Transwell实验检测瘤细胞侵袭能力.qRT-PCR检测miR16和Wip1 mRNA表达,Western blot检测Wip1和p53的蛋白表达.[结果]qRT-PCR显示转染mimic组miR16表达显著升高;miR16 mimic组和NC组细胞增殖率分别为(7.64±0.61)％,(21.47±0.61)％;克隆形成率分别为(19.17±0.76)％,(33.83±3.75)％;早期凋亡率分别为(5.01±0.64)％,(2.37±0.82)％;S期:(23.66±0.39)％,(28.98±0.08)％;200×镜下,平均每视野侵袭细胞数分别为(74.33±2.52),(137.67±9.61).过表达miR16后,U87细胞增殖和侵袭能力下降,早期凋亡率增加,且Wip1蛋白表达明显减少,P53蛋白的表达增加.[结论]miR16可能通过调控靶基因Wip1抑制U87细胞的增殖和侵袭.
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siRNA沉默Wip1基因对人肺腺癌细胞的影响
目的 向肺腺癌A549细胞中导入靶向Wip1的siRNA,研究其对肺腺癌细胞生物学活性的影响.方法 设计并合成Wip1基因特异性的siRNA,通过脂质体介导将siRNA瞬时转染肺腺癌A549细胞,用荧光定量PCR检测转染后细胞内Wip1基因的表达水平,流式细胞学检测A549细胞凋亡、增殖以及用划痕实验和Transwell实验检测细胞迁徙的情况.结果 特异转染组中Wip1 mRNA表达明显降低,并且处于G1期细胞比例增加,S期细胞比例降低,侵袭细胞数及迁移率均明显低于非特异转染组,细胞凋亡未见差异性改变.结论 靶向Wip1基因的siRNA能有效降低目的 基因mRNA的表达水平,抑制A549细胞的生长并引起细胞侵袭力及迁移力下降.
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Wip1、Shh、Gli1蛋白在皮肤恶性黑色素瘤细胞中的表达及临床意义
目的:探讨Wip1、Shh、Gli1蛋白在皮肤恶性黑色素瘤(CMM)中的表达及其临床意义.方法:免疫组化法检测Wip1、Shh、Gli1蛋白在31例CMM与混合痣中的表达,分析各蛋白表达之间的关系,及其与CMM肿瘤临床分期、复发、转移的关系.结果:Wip1、Shh、Gli1蛋白在CMM中的阳性表达率均显著高于混合痣组(P＜0.05).在CMM中,Wip1、Gli1蛋白阳性表达率与肿瘤临床分期、复发、转移均呈正相关(P＜0.05),Wip1蛋白与Gli1蛋白阳性表达率呈正相关(P＜0.01);Shh蛋白阳性表达率与肿瘤转移呈正相关(P＜0.05),与Gli1蛋白表达无明显相关.结论:Wip1、Shh、Gli1蛋白在CMM的发生及发展中可能发挥重要作用.Wip1、Gli1蛋白表达可以作为CMM预后的评价指标.Gli1蛋白高表达主要受Wip1蛋白的调节,为信号通路靶向阻断剂在CMM治疗中提供指导意义.
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原癌基因Wip1在子宫内膜癌组织中表达水平的研究
目的 观察子宫内膜癌患者临床分期、预后与Wip1表达量的关系.方法 收集唐山市妇幼保健院2002年1月至2012年1月手术的120例子宫内膜癌患者,经手术切除子宫内膜癌蜡块标本作为实验组,标本均被病理证实,同期活检正常的子宫内膜标本120例作为对照组.检测Wip1在2组中的表达水平.结果 (1)Wip1免疫组化染色结果:正常子宫内膜组织细胞中,Wip1免疫组化染色阴性或微弱.子宫内膜癌组织中Wip1染色呈浅黄色至黄褐色不等.Wip1蛋白在子宫内膜癌组织中的阳性表达率为77.5%(93/120),高于正常内膜组织22.5%(27/120),差异具有统计学意义(P<0.05).(2)Wip1蛋白在子宫内膜癌组织、正常内膜组织Western blot结果:Wip1蛋白在子宫内膜癌组织的相对含量为0.635±0.023.高于正常内膜组织的0.325±0.018,两组之间比较差异具有统计学意义(P<0.05).(3)各样品实时荧光定量PCR结果:Wip1 mRNA表达在子宫内膜癌组织高于正常内膜组织,基因表达值分别为0.628±0.053、0.191±0.009,两组之间比较差异具有统计学意义(P<0.05).(4)Wip1的表达水平与年龄、雌孕激素状态、HER2、淋巴结状态、TNM分期均无关(P>0.05),与P53表达水平存在关联(P<0.05).结论 (1)子宫内膜癌中Wip1表达量高,而正常内膜组织表达量低.(2)Wip1的表达水平与年龄、雌孕激素状态、HER2、淋巴结状态、TNM分期均无关,与P53表达水平存在关联.
