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小剂量X射线致小鼠海马组织细胞损伤及ATM表达改变
目的 研究小剂量电离辐射对小鼠海马组织细胞超微结构损伤、DNA损伤及毛细血管扩张性共济失调症突变基因(ataxia telangietisa mutant,ATM)蛋白表达变化.方法 32只ICR小鼠随机分为实验组和对照组,分别行X射线照射(0.4 Gy)和假照射(0 Gy)后于4、l2、24、48 h进行取材.电镜观察海马组织细胞超微结构损伤;单细胞凝胶电泳检测DNA损伤；蛋白免疫印迹法检测海马组织中ATM蛋白的表达情况.结果 电镜结果显示,X射线照射后,海马组织细胞的超微结构损伤随时间的延长而加重；单细胞凝胶电泳结果显示DNA损伤由4h开始上升,12h到达高峰,24 h开始有回落趋势,48 h持续下降；Western blot结果显示ATM蛋白表达随时间的延长而增加.结论 小剂量电离辐射致小鼠海马细胞不同程度的超微结构损伤并呈现时间-效应关系；小鼠海马组织中DNA损伤和ATM蛋白表达有明显的时间依赖关系.
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基于 ATM网络架构的 远程医学系统
远程医学系统目前在许多医院已开展并投入使用，基本通讯线路采用电话线、 ISDN等窄带线路进行会诊，所以会诊应用效果一般。我院为提高远程医学水平与省电信局合作开发建立了山东省远程医学网络，它基于山东电信 ATM(非同步传送模式网络 )公共数据网，遍布全省各地县，图像清晰度高，集远程会诊、远程教学、远程手术指导及观摩于一体。
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PACS和远程放射学中若干问题的探讨
本文就PACS开发中涉及的网络选型、长期存储媒质选择、数据安全、显示系统以及PACS资源利用等问题发表了个人的看法.认为:ATM网仍是首选的主干网,长期存储可选磁带库;显示应注意图像的整体性和一致性.图像传输的安全性和利用PACS资源进行数据挖掘等问题已提上议事日程.
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γH2AX和ATM与内源性氧化剂所致DNA损伤关系的研究进展
本文综述了正常细胞及肿瘤细胞系中内源性氧化剂所致的磷酸化ATM(CAA)和γH2AX(CHP)的形成与表达;同时综述了各种影响因子和生长条件对CAA和CHP表达的影响.
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MiR-18a通过靶定ATM调节白血病细胞HL-60对VP-16和VCR化疗敏感性
目的:研究miR-18a调控白血病细胞HL-60对VP-16和VCR化疗敏感性的分子机制.方法:构建稳定过表达miR-18a的HL-60-pcDNA3.1-miR-18a细胞系,检测其对VP-16扣VCR的敏感性;构建ATM 3'UTR区的荧光素酶报告载体,验证miR-18a对ATM的靶向作用;Western blot检测过表达miR-18a的HL-60细胞内ATM的表达水平;siRNA敲减HL-60细胞中ATM水平,CCK-8检测细胞对VP-16和VCR的敏感性;在稳定过表达miR-18a的HL-60细胞内转染miR-18a inhibitor,Western blot检测ATM的表达水平,并检验细胞对VP-16和VCR的敏感性变化.结果:过表达miR-18a后,用相同浓度的VP-16和VCR处理时HL-60细胞存活率降低;荧光素酶活性检测表明,miR-18a能够抑制ATM的荧光素酶活性;过表达miR-18a后HL-60细胞内ATM的表达降低;敲减ATM后的HL-60细胞经VP-16和VCR处理后存活率降低;转染miR-18a inhibitor后,ATM表达水平显著上调,经VP-16和VCR处理的细胞存活率明显高于对照组.结论:miR-18a能够通过靶定ATM而调控白血病细胞HL-60对VP-16和VCR的敏感性.
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miR-181a靶向抑制ATM表达促进急性髓系白血病细胞增殖
目的:研究microRNA181a(miR-181a)在人急性髓系白血病(AML)中的作用及其调控机制.方法:采用miR-181a小分子类似物转染人AML细胞系HL-60细胞,采用CCK-8计数法检测miR-181a对细胞增殖的影响.利用生物信息学方法结合文献分析预测miR-181a潜在的靶基因,通过双荧光报告实验在HL-60细胞内以及白血病患者体内多方面对靶基因进行验证.结果:miR-181a能显著促进人HL-60细胞恶性增殖(P＜0.05);在线软件预测发现,抑癌基因ATM可能是白血病细胞miR-181a潜在的靶基因;双荧光报告实验结果表明,miR-181a能显著地抑制含3'-UTR的ATM报告基因活性,荧光素酶活性下降56.8％ (P＜0.01),而对含3'-UTR突变位点的ATM报告基因载体没有抑制作用.在HL-60细胞中过表达miR-181a,Western blot检测显示可以显著抑制内源性ATM的表达(P＜0.01),而在白血病患者中miR-181a的表达增高,与ATM的表达呈负相关(r=-0.766).结论:miR-181a通过抑制抑癌基因ATM表达以促进人AML细胞恶性增殖,从而在AML发病中起着类似“癌基因”的作用.
关键词： 微小RNA-181a 靶基因 ATM 髓系白血病 -
ATM /ATR 在DNA 损伤反应中的作用
DNA 损伤反应(DNA damage response )是细胞应对基因毒压力所产生的反应,包括DNA 修复、细胞周期阻滞(cell cycle ar-rest)、细胞凋亡等,真核生物细胞的遗传物质能够正确复制并被精确传到下一代,主要是由于细胞拥有一套有效的DNA 损伤反应机制.
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ATM基因与大肠癌放射敏感性关系的研究进展
共济失调毛细血管扩张症因ATM基因发生突变所致,一个主要特征是对放射线极度敏感,使ATM成为研究辐射增敏的一个重要的契入点.ATM基因位于人类染色体的11q22-q23,其蛋白主要参与DNA的损伤识别和修复、细胞周期的调控.本文将就有关ATM基因的结构功能及与大肠癌放射敏感性关系的研究进行相关综述.
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卵巢上皮性肿瘤组织ATM基因表达缺失及其临床意义的探讨
目的:探讨卵巢上皮性肿瘤组织ATM基因的表达缺失及其临床意义.方法:应用荧光原位杂交技术(FISH),检测92例卵巢上皮性肿瘤及40例卵巢正常组织中ATM基因表达缺失情况,并分析其与临床病理参数的关系.结果:ATM基因在卵巢正常组织、良性肿瘤、交界性肿瘤和恶性肿瘤组织的表达缺失率分别为20.0%、25.0%、26.7%和64.3%,恶性组的表达缺失率明显高于其他组,差异有统计学意义,P＜0.01;卵巢癌组织中ATM基因的表达缺失率与病理分级、病理分期及淋巴结转移有关(P＜0.05),但与年龄、病理学类型无关,P＞0.05.结论:ATM基因缺失可能与卵巢癌的发生机制有关,有可能成为卵巢癌治疗新的分子靶点.
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宫颈癌组织ATM和DNA-PKcs表达与放疗敏感性及预后关系研究
放射线是通过导致细胞DNA双链断裂(DNA-double strand breaks,DSB)来起到杀死肿瘤细胞的作用,细胞被照射后DNA损伤修复能力是影响肿瘤放射敏感性的主要因素.笔者选择DSB修复通路中毛细血管扩张性共济失调症突变(ataxia telangiectasia mutated,ATM)、DNA依赖蛋白激酶催化亚单位(DNA dependent protein kinase catalytic subunit,DNA-PKcs)两个主要蛋白分析在不同放疗敏感性宫颈癌中的表达差异,初步探明其与宫颈癌放疗敏感性的关系.
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DNA双链断裂感应分子ATM能与PTC1相互作用
目的:研究DNA双链断裂感应分子ATM与原癌基因ret重排活化蛋白PTC1的相互作用.方法:用Flag抗体Western印迹检测,ATM免疫共沉淀真核细胞内过表达的PTC1;RET抗体检测ATM免疫共沉淀真核细胞内过表达的c-ret;用HA/myc抗体Western 印迹检测,HA-ret TK+myc-LZPR免疫共沉淀蛋白复合物;荧光蛋白标记的亚细胞定位.结果:PTC1可以与ATM激酶相互作用,此作用不依赖于电离辐射,且不被PI3K家族特异性抑制剂沃氏蓝霉素(wortmannin)所抑制,而野生型RET蛋白则不能同ATM结合;缺失体实验进一步证明两者的结合区段为ATM的LZPR结构域与PTC1的酪氨酸激酶结构域.构建PTC1绿色荧光蛋白表达质粒的亚细胞定位实验显示,PTC1以弥散形式分布于细胞质内.结论:胞浆蛋白PTC1可能借助某种途径使ATM在DNA损伤反应发生后重新定位,介导了细胞的恶性转化机制.
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ATM基因对60Coγ射线照射后AT细胞hTERT表达的影响
目的研究外源性ATM基因对电离辐射照射的毛细血管扩张-共济失调症(ataxiatelangiectasia,AT)患者皮肤的成纤维细胞系AT细胞(AT5BIVA)hTERT mRNA和蛋白表达的影响.方法以正常人皮肤的成纤维细胞系GM细胞(GM0639)为对照,应用RT-PCR与Western blot实验方法,观察经0、1、3和5Gy(剂量率1.0 Gy/min)60Co γ射线照射后,AT细胞、空载体AT细胞、ATM+-AT细胞和GM细胞的hTERT mRNA和蛋白表达的变化.结果未照射时,除GM细胞外,其余各细胞均有hTERT mRNA和蛋白的表达;ATM+-AT细胞的hTERT mRNA和蛋白表达量较AT细胞明显下降(P＜0.05);ATM+-AT细胞的hTERT mRNA和蛋白表达量仍然明显高于GM细胞的hTERT mRNA表达量.在1～5 Gy剂量范围内,AT、空载体AT、ATM+-AT和GM细胞的hTERT mRNA和蛋白表达量呈剂量依赖性增加;在相同照射剂量点,ATM+-AT细胞的hTERT mRNA表达量较AT细胞均有明显降低(P＜0.05).结论电离辐射可诱导细胞hTERT mRNA和蛋白的表达;并且细胞hTERT mRNA和蛋白表达量呈剂量依赖性增加;外源性ATM基因可下调AT细胞hTERT mRNA和蛋白的表达.推测端粒酶参与电离辐射诱导DNA损伤的修复.
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ZEB1通过上调ATM表达调控胃癌细胞AGS的放射敏感性
目的 探究锌指结构E-box结合蛋白1(ZEB1)对胃癌细胞AGS放射敏感性的影响并探究其可能的作用机制.方法 通过不同剂量(0、2、4、6、8 Gy)X射线照射AGS细胞,蛋白质印迹法(Western blot)实验观测细胞中ZEB1的表达量;取对数生长期AGS细胞,将过表达ZEB1、ZEB1干扰表达质粒以及相应的对照质粒(pcDNA3.1)和阴性对照干扰质粒转染至AGS细胞中,分别记为过表达ZEB1组、 沉默ZEB1组、 对照组和阴性对照组,细胞克隆实验检测过表达和沉默ZEB1对AGS细胞存活率的影响;流式细胞术实验检测细胞的凋亡率;Western blot检测细胞损伤相关组蛋白H2A(H2AX)、磷酸化H2AX(γ-H2AX)以及毛细血管扩张突变基因(ATM)表达量.结果ZEB1在AGS细胞中的表达对放射剂量具有依赖性(F=58.57,P<0.05);过表达ZEB1能够提高AGS细胞的存活,抑制γ-H2AX表达(t=12.18,P<0.05),并阻碍细胞的凋亡(t=7.27,P<0.05),并随时间上调ATM表达量(F=165.70,P<0.05);沉默ZEB1降低AGS细胞的存活,增加γ-H2AX表达(t=12.88,P<0.05)和细胞的凋亡(t=8.36,P<0.05),随时间下调ATM表达量(F=44.80,P<0.05).结论 ZEB1通过上调ATM表达调控胃癌AGS细胞放射敏感性.
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p53在DNA损伤反应中的研究进展
p53基因是研究广泛的抑癌基因之一,也是细胞内的一个强大的转录因子,在正常状态下呈低水平表达.在各种应激包括DNA损伤时,p53可以被不同的信号通路激活并稳定,通过增强其下游多种基因的转录而引起细胞周期阻滞、凋亡或衰老,保持细胞基因组的完整性并清除损伤细胞,这些生物学作用取决于不同的应激信号和细胞类型.p53通路是机体应对DNA损伤的天然防护屏障,对这一机制的深入研究可为肿瘤的发生发展和抗肿瘤药物的开发提供重要的信息.
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ATM在淋巴结阴性乳腺癌中的表达及临床意义
目的 探讨淋巴结阴性乳腺癌组织中ATM蛋白的表达,及其与淋巴结阴性乳腺癌临床病理特征和预后之间的关系.方法 采用SP免疫组织化学染色方法检测64例淋巴结阴性乳腺癌标本及48例乳腺良性肿瘤组织或正常乳腺组织标本中ATM蛋白的表达.结果 ATM在64例淋巴结阴性乳腺癌组织中的阳性率为53.1％,而在48例乳腺良性肿瘤及正常乳腺组织中的阳性率为72.9％,二者比较差异具有统计学意义(P =0.033).ATM的表达与患者的HER2受体状态有关(P =0.028),而与患者病理类型、病变部位、年龄、肿块大小、ER状态、PR状态、P53表达状态以及患者总生存率无关.结论 ATM表达降低可能在淋巴结阴性乳腺癌的发生中起到重要作用.ATM可能作为淋巴结阴性乳腺癌患者预后判断的指标.
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DNA损伤修复通路相关蛋白ATM、pCHK2在乳腺癌中的表达及临床意义
目的 研究ATM、pCHK2蛋白在乳腺癌中的表达及与乳腺癌临床病理参数的相关性.方法 利用组织芯片技术,通过免疫组化方法检测292例乳腺癌组织及49例癌旁组织中ATM、pCHK2蛋白的表达情况.统计相应乳腺癌病例的临床病理学特征,并分析与ATM、pCHK2蛋白表达的相关性.结果 ATM蛋白在癌和癌旁组织中的阳性表达无统计学差异(74.62％ vs59.88％,P=0.526),与ER及PR表达呈正相关(ER:r=0.194,P=0.002;PR:r =0.149,P=0.002).pCHK2蛋白在癌组织中的阳性表达显著高于癌旁组织(20.06％ vs 0,P=0.005),与肿瘤病理类型、大小、淋巴结转移数目、TNM分期、ER、PR、Her-2等临床病理特征相关性均无显著性差异(P＞0.05).ATM和pCHK2蛋白表达呈正向直线相关(r=0.130,P=0.049).pCHK2阳性患者总生存率低.结论 DNA损伤修复通路相关蛋白ATM和pCHK2的表达在乳腺癌的发生发展中具有一定的作用,有可能作为乳腺癌潜在的治疗靶点.
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96例浆膜腔积液中的(ATM)结果分析
目的 本文对96例浆膜腔积液患者进行ATM(活动性结核标志物)、PCR、PPD检测进行结果分析比较,探讨ATM对结核性浆膜腔积液检测的效果.方法 96例浆膜腔积液病例全为我院住院及门诊患者,60例结核性浆膜腔积液根据结核病诊断标准确诊病例.ATM检测应用单向免疫扩散法,PCR用罗氏扩增仪检测.结果 ATM与PCR无明显差异,ATM与PPD有明显差异.讨论ATM、PCR、PPD之间有明显差异,ATM检测与PCR无差异但时间短、收费低、稳定性好,在结核性浆膜腔积液诊断上具有较好的意义.
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GE solar8000m监护仪血压打不上去故障维修
GE solor8O00m监护仪广泛用于我院重症监护室和手术室,现将血压故障的分析与排除过程介绍如下,供参考1故障现象GE solar8000m监护仪血压打不上去(血压达到15 atm(1 atm=101.325 kPa)左右).厂家工程师检修说血压模块损坏,需要更换血压模块2故障分析血压打不上去是监护仪常见的故障,分析原因主要有以下几方面:袖带漏气;连接管路漏气;气泵压力不够;放气电磁阀故障:血压模块板自身故障(气泵供电电路).
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ATM缺失介导的U937细胞凋亡敏感性与异常细胞周期蛋白依赖性激酶活性的关系
目的探讨共济失调性毛细血管扩张症突变基因(ATM)定向灭活增强细胞凋亡敏感性的关键蛋白分子.方法以U937的变异细胞系U937-ASPI3K(ATM阴性)和U937-pEOSV2(+)(野生型ATM阳性)作为细胞模型.用核小体免疫酶联检测试剂盒定量分析细胞凋亡.用 Western blotting分析总p34cdc2、161位苏氨酸(Thr161)磷酸化的p34cdc2和14位苏氨酸(Thr14)、15位酪氨酸(Tyr15)磷酸化的p34cdc2,并检测细胞核内cdc25A、cdc25B、cdc25C的蛋白丰度.用RT-PCR方法分析cdc25A、cdc25B、cdc25C转录水平的表达.结果蛋白合成抑制剂不能阻断U937-ASPI3K因ATM缺失诱导的细胞凋亡敏感性增强效应.而蛋白丝氨酸-苏氨酸磷酸酯酶抑制剂以及细胞周期蛋白依赖性激酶(CDK)抑制剂可阻断该凋亡敏感性增强效应.U937-pZEOSV2 (+)细胞经放射线照射后,p34cdc2 Thr14和Tyr15被磷酸化而处于灭活状态,该磷酸化修饰与U937-pZEOSV2(+)胞核内三种酸酯酶cdc25A、cdc25B、cdc25C蛋白水平于受照后呈现显著的反应性降低有关.在U937-ASPI3K细胞,ATM缺失抑制受照后细胞cdc25A、cdc25B、cdc25C蛋白反应性降低,p34cdc2激酶Thr14和Tyr15低磷酸化而处于激活状态.这种抑制效应发生在转录后水平上.结论 ATM缺失使受照后细胞核内cdc25蛋白反应性降低被阻断,进而导致CDK的异常激活是ATM缺失介导凋亡敏感性增强的关键环节.
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DSB修复蛋白ATM DNA-PKcs与肿瘤放射敏感性关系的研究进展
放射线主要通过导致细胞DNA双链断裂(DSB)而起到杀死肿瘤细胞的作用,但细胞都有不同程度的DSB修复能力,研究证实DSB 修复水平与细胞放射敏感性关系密切.在人类细胞内有2 种DSB 修复途径:一种是以DNA 依赖蛋白激酶(DNA-PK)复合物为主的非同源末端连接(NHEJ)修复,另一种是以毛细血管扩张性共济失调症突变蛋白(ATM)为主的同源重组(HR)修复.在人体内,NHEJ修复是主要的修复途径,DNA依赖蛋白激酶催化亚单位(DNA-PKcs)是DNA-PK复合物的主要功能单位.DNA-PKcs的激酶活性是NHEJ修复所必须的,其在DSB修复中起核心作用.近年来的研究显示ATM、DNA-PKcs蛋白表达水平与肿瘤放射敏感性有关.该综述将有关ATM、DNA-PKcs的功能、在肿瘤组织中的表达及与肿瘤放射敏感性关系的研究进行简要回顾.
