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截断逆挽方对慢加急性肝衰竭大鼠E2F1信号通路的调节机制
目的 观察“截断逆挽方”对慢加急性肝衰竭(acute-on-chronic liver failure,ACLF)大鼠肝细胞周期转录因子E2F1、调控因子Cdc25表达量及其对肝细胞超微结构的影响,探讨该方通过调节肝细胞再生,预防慢加急性肝衰竭的作用机制. 方法 SPF级Wistar雄性大鼠150只,随机分为正常组、模型组和截断逆挽方组,模型组与中药组给予人血清白蛋白尾静脉注射8周免疫诱导大鼠形成肝硬化模型,再联合D-氨基半乳糖(D-GalN)与脂多糖急性攻击,构建ACLF大鼠模型.截断逆挽方组在急性攻击前给予截断逆挽方连续灌胃3天.各组大鼠在急性攻击后4、8、12小时平行取材.蛋白质印迹法(Western Blot)检测E2F1蛋白表达量,实时荧光定量qRT(quantitative real-time,qRT) PCR法检测肝组织中Cdc25的表达.结果 与正常组相比,模型4小时组E2F1和Cdc25表达量升高(P＜0.05);8、12小时随着时间的推移表达量逐渐降低.与对应时间点模型组相比,截断逆挽方4小时、8小时E2F1和Cdc25表达量有升高趋势,12小时组E2F1和Cdc25表达量较模型组明显升高(P＜0.01).电镜观察肝组织超微结构显示:模型组肝细胞超微结构损伤严重,并随时间的推移逐渐加重,各对应时间点截断逆挽方组细胞结构损伤较模型组轻.结论 截断逆挽方通过调节转录因子E2F1及细胞调控因子Cdc25的表达量,促进了肝细胞的代偿性增殖,从而改善肝细胞的大面积坏死,抑制肝衰竭的发展.
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ATM缺失介导的U937细胞凋亡敏感性与异常细胞周期蛋白依赖性激酶活性的关系
目的探讨共济失调性毛细血管扩张症突变基因(ATM)定向灭活增强细胞凋亡敏感性的关键蛋白分子.方法以U937的变异细胞系U937-ASPI3K(ATM阴性)和U937-pEOSV2(+)(野生型ATM阳性)作为细胞模型.用核小体免疫酶联检测试剂盒定量分析细胞凋亡.用 Western blotting分析总p34cdc2、161位苏氨酸(Thr161)磷酸化的p34cdc2和14位苏氨酸(Thr14)、15位酪氨酸(Tyr15)磷酸化的p34cdc2,并检测细胞核内cdc25A、cdc25B、cdc25C的蛋白丰度.用RT-PCR方法分析cdc25A、cdc25B、cdc25C转录水平的表达.结果蛋白合成抑制剂不能阻断U937-ASPI3K因ATM缺失诱导的细胞凋亡敏感性增强效应.而蛋白丝氨酸-苏氨酸磷酸酯酶抑制剂以及细胞周期蛋白依赖性激酶(CDK)抑制剂可阻断该凋亡敏感性增强效应.U937-pZEOSV2 (+)细胞经放射线照射后,p34cdc2 Thr14和Tyr15被磷酸化而处于灭活状态,该磷酸化修饰与U937-pZEOSV2(+)胞核内三种酸酯酶cdc25A、cdc25B、cdc25C蛋白水平于受照后呈现显著的反应性降低有关.在U937-ASPI3K细胞,ATM缺失抑制受照后细胞cdc25A、cdc25B、cdc25C蛋白反应性降低,p34cdc2激酶Thr14和Tyr15低磷酸化而处于激活状态.这种抑制效应发生在转录后水平上.结论 ATM缺失使受照后细胞核内cdc25蛋白反应性降低被阻断,进而导致CDK的异常激活是ATM缺失介导凋亡敏感性增强的关键环节.
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胃癌组织中TGF-β1、TGF-βRⅡ、Smad2/3和CDC25蛋白的表达及其临床意义
目的 检测TGF-β1、TGF-βRⅡ、Smad2/3及CDC25蛋白在胃癌组织中的表达并探讨它们在胃癌组织中的发生、发展的意义.方法 利用免疫组织化学SP法检测110例胃癌、21例高级别上皮内瘤变、17例低级别上皮内瘤变、54例肠上皮化生、28例慢性萎缩性胃炎和57例正常胃黏膜组织中TGF-β1、TGF-βRⅡ、Smad2/3和CDC25蛋白的表达.结果 TGF-β1、TGF-βRⅡ、Smad2/3和CDC25在胃癌组织中的表达均高于正常胃黏膜组织.TGF-β1在胃癌组织中的表达高于上皮内瘤变、肠上皮化生和慢性萎缩性胃炎组织;Smad2/3在胃癌组织中的表达高于慢性萎缩性胃炎组织;CDC25在胃癌组织中的表达高于低级别上皮内瘤变组织,且在胃癌淋巴结转移组中的表达高于未转移组.TGF-β1与TGF-βRⅡ、Smad2/3和CDC25呈正相关,Smad2/3与CDC25也呈正相关.结论 TGF-β1、TGF-βRⅡ、Smad2/3和CDC25的表达是引起胃癌发生、发展的重要因素,可作为胃癌早期诊断的辅助指标.
