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ER介导鼠尾草酚抑制乳腺癌细胞MCF-7增殖效应的分子机制研究
目的 研究迷迭香活性提取物鼠尾草酚抑制雌激素受体阳性乳腺癌细胞MCF-7增殖效应的分子机制.方法 以雌激素受体ER-α、ER-β特异性拮抗剂MPP、PHTPP为工具药,采用MTT法观察鼠尾草酚对MCF-7细胞增殖的影响,采用流式细胞术检测不同浓度鼠尾草酚对MCF-7细胞周期的影响;采用Western blot法检测MCF-7细胞周期蛋白Cyclin B1的表达情况.结果 1×10-4～1×10-7 mol/L鼠尾草酚能明显抑制MCF-7细胞的增殖,抑制作用被雌激素受体拮抗剂ICI 182,780减弱,被ER-α拮抗剂增强,被ER-β拮抗剂减弱;鼠尾草酚使MCF-7细胞产生S期阻滞现象,同时使Cyclin B1表达减少.结论 鼠尾草酚能抑制雌激素受体阳性乳腺癌细胞MCF-7的增殖,其作用机制可能是通过雌激素受体介导,其中ER-β比ER-α起着更主要的作用;同时,鼠尾草酚能使MCF-7细胞阻滞在S期可能是其抑制MCF-7细胞增殖、分裂的作用机制之一.
关键词： 鼠尾草酚 乳腺癌MCF-7细胞 细胞增殖 雌激素受体 细胞周期蛋白B1 -
体外实验探讨蜜炙紫菀水煎剂对人乳腺癌MCF-7细胞的影响
目的 探讨不同药物浓度的蜜炙紫菀水煎剂在体外实验中对乳腺癌MCF-7细胞的增殖、周期、迁移、凋亡的影响.方法 通过MTT实验观察药物的处理对乳腺癌MCF-7细胞的生长与增殖情况的影响,采用流式细胞术研究蜜炙紫菀水煎剂对乳腺癌MCF-7细胞的增殖、周期和凋亡的影响,通过划痕实验观察蜜炙紫菀水煎剂对乳腺癌MCF-7细胞迁移的影响.结果 MTT实验结果发现,不同浓度的蜜炙紫菀水煎剂(25、30、35、40、80 mg/ml)对乳腺癌MCF-7细胞的增殖具有明显的抑制作用,抑制率分别为2.19%、12.58%、14.36%、15.96%、54.69%.流式细胞术的结果显示,与空白对照组相比较,蜜炙紫菀水煎剂可以使乳腺癌MCF-7细胞周期的各个时相(G1、S和G2期)的细胞所占百分数发生改变.浓度为25 mg/ml和35 mg/ml的蜜炙紫菀水煎剂能使G1期中细胞所占的百分数增加,且两个浓度的细胞凋亡率都大于空白对照组.划痕实验结果显示浓度为25 mg/ml和35 mg/ml蜜炙紫菀水煎剂组较空白对照组划痕愈合率偏低.结论 不同浓度的蜜炙紫菀水煎剂在体外实验中对乳腺癌MCF-7细胞的增殖具有一定的抑制作用,同时能够将细胞的增殖周期阻滞在G1期,促进MCF-7细胞的凋亡.一定浓度的蜜炙紫菀水煎剂对MCF-7细胞的迁移具有抑制作用,为临床应用中药紫菀治疗乳腺癌疾病提供实验基础.
关键词： 乳腺癌MCF-7细胞 蜜炙紫菀水煎剂 细胞增殖 细胞周期 细胞凋亡 -
黄癸素对人乳腺癌MCF-7细胞迁移和侵袭的作用机制分析
目的:探讨黄癸素对人乳腺癌MCF-7细胞迁移和侵袭的作用机制.方法:采用Western blot法检测黄癸素对MCF-7细胞信号通路分子STAT3及AKT表达的影响,采用细胞划痕实验检测黄癸素对MCF-7细胞迁移能力的影响以及采用TranswellTM细胞侵袭实验检测黄癸素对MCF-7细胞侵袭能力的影响.结果:黄癸素可明显上调STAT3及AKT的表达;黄癸素组、黄癸素联合DMSO组、黄癸素联合JAK/STAT3组、黄癸素联合PI3K/AKT组平均划痕率与对照组比较差异有统计学意义;黄癸素可促进MCF-7细胞的迁移力,JAK/STAT3信号通路抑制剂AG490及PI3K/AKT信号通路抑制剂LY294002可抑制黄癸素对MCF-7细胞的促迁移作用.黄癸素组、黄癸素联合DMSO组、黄癸素联合JAK/STAT3组、黄癸素联合PI3K/AKT组穿膜细胞数与对照组比较,差异有统计学意义,黄癸素能够促进MCF-7细胞的促侵袭作用.结论:黄癸素对MCF-7细胞的促迁移作用与PI3K/AKT及JAK/STAT3信号通路有关,黄癸素促进MCF-7细胞的侵袭特性与JAK/STAT3信号通路有关.
关键词： 黄癸素 乳腺癌MCF-7细胞 迁移 侵袭 机制 -
miR－21靶向调控STAT3基因抑制人乳腺癌MCF－7细胞的侵袭
目的探讨miR－21和信号传导与转录激活因子3（signal transducer and activator of tran-scription 3， STAT3）基因在人乳腺癌MCF－7细胞中的表达，阐明miR－21对STAT3基因的靶向作用及其对MCF－7细胞侵袭的影响。方法购买并培养MCF－7细胞，采用免疫荧光法检测STAT3在癌细胞中的表达。运用生物信息学方法对miR－21和STAT3基因的靶向配对关系进行预测，采用荧光素酶报告系统鉴定；脂质体2000转染miR－21模拟物后，qRT－PCR检测miR－21和STAT3 mRNA在癌细胞中的表达，Western blot检测STAT3蛋白在癌细胞中的表达，Transwell小室检测MCF－7细胞体外的侵袭性。结果光镜下可见人乳腺癌MCF－7细胞成片生长，有突起；细胞免疫荧光法检测结果显示胞质内有STAT3蛋白的表达，显示红色荧光。生物信息学软件miRanda和TargetScan显示miR－21和STAT3基因二者靶向配对良好，荧光素酶报告系统鉴定发现miR－21 mimics能够抑制STAT3 mRNA表达。 qRT－PCR和Western blot检测结果表明过表达miR－21能够降低STAT3 mRNA和蛋白的表达。 Transwell小室实验结果表明miR－21的过表达能够抑制MCF－7细胞的侵袭。结论 miR－21通过负性调控人乳腺癌MCF－7细胞中STAT3基因的表达，进而抑制癌细胞的侵袭。
关键词： 微小RNA 信号传导与转录激活因子3 乳腺癌MCF-7细胞 生物信息学 -
血管内皮生长因子受体2为靶的反义寡核苷酸筛选及其对乳腺癌MCF-7细胞的抗肿瘤作用
目的筛选出可与血管内皮生长因子受体2(KDR)mRNA高效、特异结合的反义寡核苷酸,探讨其体外抗肿瘤作用.方法先用寡核苷酸库杂交和计算机预测初筛反义寡核苷酸;经寡核苷酸芯片杂交验证,挑选与KDR mRNA有强杂交信号的反义寡核苷酸,用MTT法、逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫印迹(Western blotting)探讨反义寡核苷酸对乳腺癌细胞系MCF-7细胞增殖和KDR表达的抑制作用.结果在寡核苷酸库杂交筛选出的13条反义寡核苷酸中,有8条(8/13,61.5%)在芯片杂交中显示较强杂交信号;而在计算机预测设计的17条探针中,只有1条显示较强信号.合成杂交信号较强的9条硫代反义寡核苷酸,均能有效抑制MCF-7细胞增殖,并呈剂量依赖性.其中抑制率高的2条反义寡核苷酸为asON4和asON7,由寡核苷酸库杂交联合芯片杂交筛出,在0.8 μmol/L时抑制率分别为51.6%和62.2%;同时,这2条反义寡核苷酸在mRNA水平和蛋白质水平抑制了KDR基因表达,并呈剂量相关性.结论寡核苷酸库杂交筛选和寡核苷酸芯片杂交筛选的结果有较好一致性,将寡核苷酸库和寡核苷酸芯片联用是一种较好筛选反义寡核苷酸方法.KDR反义寡核苷酸有明显的抗肿瘤作用.
关键词： 反义寡核苷酸 血管内皮生长因子受体2 乳腺癌MCF-7细胞 -
灵芝酸A对乳腺癌MCF-7细胞迁移和对激酶插入区受体基因表达的影响
目的 研究灵芝酸A对乳腺癌MCF-7细胞迁移及激酶插入区受体(KDR)基因表达的影响.方法 将对数生长期乳腺癌MCF-7细胞分为空白组、对照组和低、高2个剂量实验组.空白组用改良杜氏伊格尔培养基100 μL处置;对照组用0.25 mg·L-1的表柔比星溶液100 μL处置;低、高2个剂量实验组用0.1,0.5 mmol·L-1的灵芝酸A溶液100 μL处置.用噻唑蓝比色法检测各组乳腺癌MCF-7细胞增殖抑制率,用细胞划痕实验检测乳腺癌MCF-7细胞迁移能力,用逆转录-聚合酶链反应检测各组乳腺癌MCF-7细胞KDRmRNA表达水平,用免疫印迹法检测各组乳腺癌MCF-7细胞KDR蛋白表达水平.结果 处置24h后,空白组、低剂量实验组、高剂量实验组和对照组的MCF-7细胞增殖抑制率分别是(0.00)％,(39.57±5.29)％,(71.37 +7.35)％和(72.03±7.64)％;这4组的细胞愈合率分别是(73.27±8.66)％,(52.48±6.54)％,(18.73±2.31)％和(18.35±2.48)％;这4组的KDR mRNA相对表达量分别是0.95±0.12,0.65±0.07,0.21±0.02和0.20±0.01;这4组的KDR蛋白相对表达量分别是1.05±0.13,0.81±0.10,0.43±0.05和0.41±0.05,3个给药组与空白组比较或高剂量实验组和对照组与低剂量实验组比较,差异均有统计学意义(均P＜0.05).结论 灵芝酸A能剂量依赖性地抑制乳腺癌MCF-7细胞增殖,有效降低细胞迁移能力,其作用可能与下调KDRmRNA及KDR蛋白表达有关.
关键词： 灵芝酸A 乳腺癌MCF-7细胞 细胞迁移 激酶插入区受体基因 -
靶向Bmi-1基因的siRNA脂质复合物的制备及体外对乳腺癌MCF-7的抑制作用
目的:制备装载靶向Bmi-1基因的siRNA脂质复合物(PILP)并考察其体外对乳腺癌MCF-7细胞增殖的抑制作用、转染效率及对Bmi-1 mRNA表达的影响.方法:以磷脂、胆固醇、DSPE-PEG2000和DSPE-PEG2000-maleimide为类脂成分,逆向蒸发法制备载siRNA的肿瘤靶向脂质复合物.激光纳米粒度仪测定脂质复合物的粒径和电位,凝胶电泳测定其对siRNA的包封率,MTT法检测脂质复合物对MCF-7细胞体外增殖的抑制,荧光显微镜观察脂质复合物中siRNA被MCF-7细胞摄取的情况,流式细胞仪检测转染效率,RT-PCR法检测其对MCF-7细胞中Bmi-1 mRNA表达的影响.结果:制备的载siRNA的肿瘤靶向脂质复合物粒径为(122.7±1.7) nm、电位为(-22.74±0.96)mV,对siRNA的包封率高;能显著抑制MCF-7细胞的体外增殖(P＜0.05),作用72 h抑制率为(55.36±3.5)％;其装载的siRNA能被MCF-7细胞有效摄取,转染效率为97.07％;能有效沉默MCF-7细胞中Bmi-1 mRNA,沉默效率为69.5％.结论:采用该方法可制备包封率较高的肿瘤靶向脂质复合物,其介导的siRNA能有效抑制乳腺癌MCF-7细胞的体外增殖、转染效率高、能有效沉默MCF-7细胞中Bmi-1 mRNA.
关键词： siRNA 肿瘤靶向性 基因治疗 非病毒载体 乳腺癌MCF-7细胞 -
黄芪注射液对乳腺癌MCF-7细胞增殖周期以及细胞凋亡、迁移影响的实验研究
目的 探讨黄芪注射液对乳腺癌MCF-7细胞增殖、周期、凋亡及迁移的影响.方法 通过MTT法观察药物处理后对乳腺癌MCF-7细胞的生长增殖情况的影响;通过流式细胞术检测黄芪注射液对乳腺癌MCF-7细胞增殖周期、凋亡的影响;利用划痕实验检测黄芪注射液对乳腺癌MCF-7细胞的迁移的影响.结果 MTT结果发现,不同浓度的黄芪注射液(100、200、400、600、800mg/ml)对乳腺癌MCF-7细胞的增殖具有不同程度的抑制作用;流式细胞术结果显示,与空白对照组相比,200和400mg/ml黄芪注射液均能导致G1期增加,且两个浓度的凋亡率都大于空白对照组;划痕实验结果显示200和400mg/ml黄芪注射液组较空白对照组划痕愈合率低.结论 不同浓度的黄芪注射液在体外对乳腺癌MCF-7细胞增殖具有一定的抑制作用;同时可将细胞增殖周期阻滞在G1期,促进MCF-7细胞凋亡;一定浓度的黄芪注射液对MCF-7细胞的迁移具有抑制作用,为乳腺癌的临床应用提供实验基础.
关键词： 乳腺癌MCF-7细胞 黄芪注射液 细胞增殖和细胞周期 细胞凋亡 细胞迁移 -
龙葵碱对乳腺癌MCF-7细胞微管系统的影响
目的 研究龙葵碱对乳腺癌MCF-7细胞微管系统的影响.方法 MTT法检测龙葵碱对人乳腺癌MCF-7细胞增殖的抑制作用,流式细胞仪分析龙葵碱对MCF-7细胞周期的影响以及细胞内α-微管蛋白及微管相关蛋白(MAP-2)的变化.结果 龙葵碱对MCF-7细胞的IC50为22.08 μg/mL,能够将MCF-7细胞阻滞于S期；能够增加MCF-7细胞内α-微管蛋白和MAP-2的量.结论 龙葵碱通过升高MCF-7细胞内的微管蛋白及MAP-2的表达,将MCF-7细胞阻滞于S期,从而抑制乳腺癌MCF-7细胞的生长.
关键词： 龙葵碱 乳腺癌MCF-7细胞 细胞周期 微管蛋白 细胞增殖 -
金雀异黄素协同TRAIL诱导乳腺癌MCF-7细胞凋亡作用的研究
目的:研究金雀异黄素是否协同TRAIL诱导乳腺癌MCF-7细胞发生凋亡,并探讨其可能的内在机制.方法:首先,MCF-7细胞分别经过1.25,2.5,5,10,20,40μg/mL金雀异黄素及1,10,100,1000 ng/mL TRAIL单独处理后,应用MTT法检测MCF-7细胞增殖情况,根据其结果选择终浓度为20μg/mL金雀异黄素及100 ng/mL TRAIL作为后续试验的浓度;接着,MCF-7细胞分为4组,即时照组、Gen组(终浓度为20 μg/mL)、TRAIL组(终浓度为100 μg/mL)及Gen+TRAIL组.细胞经不同处理后,流式细胞仪检测细胞凋亡率;免疫荧光法检测细胞凋亡中Caspase-3活性;应用酶联免疫吸附方法检测细胞NF-kB含量.结果:联合应用Gen后,明显增强TRAIL对MCF-7细胞增殖的抑制[抑制率为(63.78±2.61)%],并且促进TRAIL诱导细胞凋亡的发生[凋亡率为(42.20±1.35)%],均分别高于相应的单独TRAIL处理组(P＜0.01).另外,TRAIL单独处理的MCF-7细胞Caspase-3活性为17.324±0.880μmol/L/hr/mg protein,NF-κB的含量为343.333±8.064 pg/mL;而在联合应用Gen以后,Caspase-3活性增高(44.000±0.445μmol/L/hr/mg protein),同时NF-κB的合成受到抑制(177.453±25.389 pg/mL),与相应单独用药组比较差异具有统计学意义(P＜0.01).结论:金雀异黄素可协同TRAIL诱导乳腺癌MCF-7细胞发生凋亡、增加乳腺癌细胞对TRAIL的敏感性,其可能的机制是Gen协同TRAIL激活了细胞凋亡过程中Caspase-3,并进一步抑制了NF-κB的合成,从而终导致乳腺癌MCF-7细胞凋亡的发生.
关键词： 金雀异黄素 TRAIL 细胞凋亡 诱导 乳腺癌MCF-7细胞 -
S-烯丙基巯基半胱氨酸(SAMC)对乳腺癌MCF-7细胞功能的影响
目的 研究S-烯丙基巯基半胱氨酸对乳腺癌MCF-7(Michigan Cancer Foundation-7)细胞功能的影响.方法 不同浓度SAMC对MCF-7细胞进行干预作为观察组,同时设置给予普通培养基的空白对照组,用结晶紫实验方法检测不同浓度SAMC干预下的细胞生长速率,细胞划痕实验检测细胞的迁移能力,Transwell实验检测细胞的侵袭能力.结果 与空白对照组相比,结晶紫实验结果提示SAMC可有效抑制乳腺癌MCF-7的生长速率(P＜0.05),且呈现剂量依赖.细胞划痕实验检结果提示SAMC可减低MCF-7细胞的迁移能力(P＜0.05),且抑制作用呈现剂量依赖.Transwell实验结果提示,100μg/mL SAMC处理后的MCF-7细胞,其细胞的侵袭能力与对照组相比未见明显变化(P＞0.05),200μg/mL、300μg/mLSAMC处理后的MCF-7细胞,迁移能力显著下降(P＜0.05).结论 SAMC可抑制乳腺癌MCF-7细胞的生长、迁移及侵袭的能力,从而发挥抗乳腺癌的作用.
关键词： S-烯丙基巯基半胱氨酸 乳腺癌MCF-7细胞 生长增殖 迁移 侵袭性 -
低频超声联合紫杉醇对人乳腺癌MCF-7细胞增殖和凋亡的影响
目的 研究低频超声和紫杉醇联合应用对乳腺癌MCF-7细胞增殖和凋亡的影响以及其可能机制.方法 培养乳腺癌MCF-7细胞,随机分为4组:对照组、低频超声组、紫杉醇组和低频超声+紫杉醇组.低频超声组为超声840kHz,0.75W/cm2×3min辐照;紫杉醇组为药物浓度为10nmol/L培养24h;联合组叠加处理因素.应用CCK-8检测细胞增殖,应用流式细胞仪和凋亡试剂盒检测各组细胞凋亡,应用流式细胞仪和ROS试剂盒检测各组细胞ROS水平,应用Western Blot实验检测凋亡相关蛋白表达.结果 单独应用低频超声或紫杉醇均能抑制MCF-7细胞增殖,诱导细胞凋亡,升高细胞内活性氧水平,增加凋亡相关蛋白(cleaved casase-3、cleaved caspase-2、Bax)的表达水平,降低Bcl-2的表达水平.与单独应用组相比,低频超声和紫杉醇联合,显著增强了上述作用.结论 低频超声和紫杉醇联合作用,极大增强了抑制MCF-7细胞增殖,诱发其凋亡的作用,其作用可能和线粒体凋亡途径相关.
关键词： 低频超声 紫杉醇 乳腺癌MCF-7细胞 增殖 凋亡 -
人参皂甙Rg3对乳腺癌细胞(MCF-7)表达金属蛋白酶2、9(MMP-2,MMP-9)的影响
目的为了研究人参皂甙Rg3对乳腺癌细胞(MCF-7)细胞分泌的基质金属蛋白酶(MMP-2,MMP-9)表达的影响.方法免疫组化法测定了用人参皂甙Rg3前后MCF-7细胞基质金属蛋白酶(MMP-2,MMP-9)的表达.结果分析表明人参皂甙Rg3能减少MCF-7细胞基质金属蛋白酶(MMP-2,MMP-9)表达.结论人参皂甙Rg3能抑制基质金属蛋白酶MMP-2、MMP-9的分泌.
关键词： 免疫组织化学 基质金属蛋白酶 人参皂甙Rg3 乳腺癌MCF-7细胞 -
MDM2反义寡核苷酸联合紫杉醇对乳腺癌MCF-7细胞株的作用
目的:探讨靶向MDM2反义寡核苷酸(ASON)联合紫杉醇对乳腺癌MCF-7细胞株的影响.方法:合成一段与MDM2 mRNA特异性结合的反义寡核苷酸和与反义寡核苷酸有4个碱基不同的的错义寡核苷酸(MON),脂质体2000介导不同浓度的MDM2ASON转染MCF-7乳腺癌细胞系,转染的乳腺癌细胞通过1μmol/L紫杉醇药物处理后,采用RT-PCR和Western Blot方法检测MDM2ASON联合紫杉醇的协同作用及对乳腺癌MCF-7细胞株的抑制效率,MTT观察给药后MCF-7细胞的增殖能力和药物敏感性.结果:MDM2反义寡核苷酸联合紫杉醇明显下调MDM2 mRNA及MDM2蛋白表达水平,抑制MCF-7细胞的生长,随着MDM2 ASON浓度的增加,MDM2表达越来越低,协同作用越来越强,呈剂量依赖关系,A500联合紫杉醇的协同作用明显,MTT显示紫杉醇处理的转染MCF-7细胞增殖抑制率明显增高,A500抑制增殖作用明显,抑制率达(13.0±0.84)％.结论:不同浓度MDM2 ASON转染后的乳腺癌MCF-7细胞,等浓度紫杉醇处理后,乳腺癌MCF-7细胞MDM2表达明显降低,细胞凋亡增加,,MDM2 ASON联合紫杉醇对MCF-7细胞有协同作用,提高了乳腺癌MCF-7细胞对紫杉醇的药物敏感性.
关键词： mdm2基因 反义寡核苷酸 紫杉醇 乳腺癌MCF-7细胞 -
基质细胞衍生因子-1α促进乳腺癌细胞侵袭和转移
背景与目的:根据基质细胞衍生因子1 α(SDF-1 α)/CXCR4生物学轴的多种生物学功能,本实验在研究CXCR4内化及其调变的基础上,进一步探讨SDF-1 α对乳腺癌细胞体外侵袭转移能力的影响.方法:应用细胞黏附实验、细胞迁徙实验及失巢凋亡实验对比分析SDF-1 α对乳腺癌MCF-7细胞形态、体外黏附能力、迁徙能力及抗失巢凋亡能力的影响.结果:与SDF-1 α共培养的乳腺癌MCF-7细胞形态变为长梭形,伪足更长而伸展,其黏附能力高于MCF-7细胞株[(0.90±0.18)VS(0.68±0.08),P<0.01];侵袭小室实验发现,与SDF-1α共培养的MCF-7细胞侵袭转移能力增强,培养6 h迁徙进入微孔膜的细胞数比MCF-7细胞株明显增多[(151±11)比(135±13),P<0.01].悬浮培养的SDF-1α加MCF-7细胞比MCF-7细胞更容易聚集,形成相对较致密的细胞团块,24 h检测流式细胞凋亡指数下降[(9.1±1.1)%VS(18.4±1.7)%,P<0.01].结论:SDF-1α可明显增强乳腺癌细胞MCF-7体外侵袭及转移能力.
关键词： SDF-1α 乳腺癌MCF-7细胞 侵袭 转移 -
全反式维甲酸对人乳腺癌MCF-7细胞凋亡的影响
目的:探讨全反式维甲酸(ATRA)对人乳腺癌MCF-7细胞凋亡的影响及作用途径.方法:在人乳腺癌细胞株MCF-7培养基中加入一定浓度ATRA和PKC-δ的专一抑制剂rottlerin(RO)并分组,通过SubG1assay by FACS、琼脂糖凝胶电泳检测基因组DNA ladder来观察ATRA对MCF-7的影响.结果:在浓度为5μM的ATRA作用下,MCF-7的凋亡率显著高于其它各组(P＜0.01),并可观察到明显梯状DNA.结论:ATRA能够诱导乳腺癌MCF-7细胞凋亡,但受PKC-δ的专一抑制剂RO的抑制.
关键词： 全反式维甲酸 乳腺癌MCF-7细胞 凋亡 -
塞来昔布对乳腺癌MCF-7细胞的增殖抑制作用及对BCRA1、 Caspase-3、 p53表达的影响
目的 探讨塞来昔布对乳腺癌MCF-7细胞的增殖抑制作用及对BCRA1、Caspase-3、p53表达的影响.方法 乳腺癌MCF-7细胞培养后,取对数生长期细胞用于实验.根据加入塞来昔布终浓度的不同分为实验四组:实验A组(20 μmol/L)、实验B组(40 μmol/L)、实验C组(80μmol/L)和实验D组(160 μmol/L);以加入0.1％ DMSO为正常对照组.采用MTr法检测塞来昔布对MCF-7细胞的体外抑制作用;采用DAPI染色法测定细胞凋亡形态;采用流式细胞仪检测塞来昔布对MCF-7细胞凋亡率的影响;采用Western blot(WB)法检测BCRA1、Caspase-3、p53的表达.结果 MTT法检测结果:实验A、B、C、D组抑制率明显高于正常对照组,且随塞来昔布浓度增加抑制率递升(P＜0.01);半数抑制浓度(IC50) =91.3628 μmol/L.DAPI染色法测定结果:正常对照组细胞完整,未发现细胞凋亡;实验B、C、D组经处理后出现细胞生长抑制及细胞体积缩小现象,DAPI染色后见明显的细胞核固缩和断裂,且细胞凋亡现象随塞来昔布浓度增加而明显.流式细胞仪检测结果:实验B、C、D组凋亡率明显高于对照组,且随塞来昔布浓度增加而递增(P＜0.01);WB法检测结果:实验B、C、D组BCRA1、Caspase-3、p53蛋白的相对表达量明显高于正常对照组,且随塞来昔布浓度的增加BCRA1、Caspase-3、p53蛋白的相对表达量依次上调(P＜0.01).结论 塞来昔布可明显抑制乳腺癌MCF-7细胞的增殖,其作用机制可能与上调BCRA1、Caspase-3、p53的表达相关.
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miR let-7b抑制乳腺癌MCF-7细胞迁移及其机制
目的:观察miR let-7b对乳腺癌MCF-7细胞迁移能力的影响并探讨其作用机制.方法:合成miR let-7b并转染乳腺癌MCF-7细胞,以miR-control作参照.通过划痕实验观察转染前后细胞迁移能力的变化,运用 PCR和蛋白质印迹法检测转染miR let-7b前后MCF-7细胞内IL-6表达水平的变化.后通过信息生物学软件及双荧光酶素报告基因方法验证miR let-7b与IL-6结合.结果:与对照组比较,转染miR let-7b的MCF-7细胞迁移能力明显降低,而anti-miR let-7b明显促进细胞迁移.转染miR let-7b的乳腺癌MCF-7细胞中IL-6的表达水平较对照组明显降低,而转染anti-miR let-7b的细胞内IL-6的表达水平明显提高.信息生物学软件和双荧光酶素报告基因证实miR let-7b与IL-6结合.结论:miR let-7b在转录水平抑制乳腺癌MCF-7细胞IL-6的表达从而抑制MCF-7细胞的迁移.
关键词： miR let-7b IL-6 乳腺癌MCF-7细胞 迁移 -
吗啡对乳腺癌MCF-7细胞生存素及livin表达的影响
目的:探讨吗啡对人乳腺癌MCF-7细胞生存素(survivin)和livin的表达及细胞增殖与凋亡的影响.方法:人乳腺癌MCF-7细胞以1×103个/ml密度接种在6孔板内,随机分为对照组,0.1 μmol/L吗啡组,1.0 μmol/L吗啡组.于吗啡孵育24 h时,分别采用RT-PCR法和蛋白质印迹法测定细胞内生存素及livin mRNA及蛋白表达,流式细胞术检测细胞凋亡改变;于吗啡孵育24,48及72 h时采用MTT法检测细胞增殖改变情况.结果:与对照组比较,0.1 μmol/L吗啡组及1.0 μmol/L吗啡组生存素和livin蛋白及mRNA表达水平均显著降低(P<0.01),0.1 μmol/L吗啡组及1.0 μmol/L吗啡组细胞增殖降低而细胞凋亡增加(P<0.01).结论:吗啡通过下调MCF-7细胞生存素和livin的表达,从而抑制细胞增殖并促进细胞凋亡.
关键词： 吗啡 乳腺癌MCF-7细胞 生存素 Livin -
聚丁二炔生物传感器变色免疫法检测乳腺癌MCF-7细胞
目的 合成能特异性识别肿瘤细胞的聚丁二炔生物传感器.方法 超声乳化-共价修饰法制备聚丁二炔/磷脂(polydiacetylene/Phospholipid,PDA/PC)纳米囊泡,通过共价修饰法将鼠抗人细胞角蛋白抗体CK19共价修饰固定在PDA/PC纳米囊泡表面,制备可变色的PDA/PC生物传感器,用于检测肿瘤细胞.透射电镜负染技术,激光散射粒径测定仪、紫外-可见分光光度计扫描,计算比色响应(colorimetric response,CR)等对合成的PC/PDA生物传感器进行表征,以乳腺癌细胞株MCF-7为模型,模拟考察PDA/PC生物传感器识别鉴定外周血循环肿瘤细胞(circulating tumorcells,CTCs)可行性.结果 TEM检查结果显示制备的PDA/PC生物传感器呈球形或类球形、粒径均匀,平均粒径约为(223.4±23.6)nm;激光散射粒径分析仪显示生物传感器的强均粒径和多分散系数为298.4 nm和0.184;特异性抗原加入后,纳米粒发生团聚,颜色出现由蓝至红的变化,且CR值随着抗原浓度增加而增加,与高表达的乳腺癌细胞MCF-7发生特异性结合,充分混匀后,溶液颜色产生由蓝至红的变化.结论 成功合成由单克隆抗体抗CK19修饰的PDA/PC生物传感器,通过免疫化学显色技术,可快速、有效、灵敏的检测溶液中微量乳腺癌MCF-7细胞,为PDA/PC生物传感器技术在CTC识别上的应用奠定基础.
关键词： 聚丁二炔生物 变色免疫分析 合成 表征 乳腺癌MCF-7细胞
