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超声靶向微泡破坏联合核因子κB结合基序促进SDF-1α质粒转染血管内皮细胞
目的 应用超声靶向微泡破坏技术(UTMD)和核因子κB(NF-κB)结合基序分别促进人基质细胞衍生因子-1α(SDF-1α)质粒进入细胞质和细胞核,提高对血管内皮细胞的转染效率.方法 构建含NF-κB结合基序的人SDF-1α质粒(phSDF-1α-NF-κB)和不含NF-κB结合基序的人SDF-1α质粒(phSDF-1α),用核酸染料Cy3标记后在优化的UTMD条件下分别转染人脐静脉血管内皮细胞.流式细胞仪检测质粒入胞效率；荧光显微镜观察质粒入核情况；RT-PCR、Western印迹和ELISA分别从基因水平和蛋白水平检测SDF-1α质粒的表达.比较两种质粒的入胞率、入核率以及表达率以评价UTMD和NF-κB结合基序对转染的作用.结果 UTMD能显著提高质粒的入胞效率(81％±7％),同时保持较高细胞存活率(86％±6％).含NF-κB结合基序组的质粒入核效率和蛋白表达效率均较不含NF-κB结合基序组显著提高[65％±12％比10％±3％,(63±10)比(15±5)μg/g蛋白,均P＜0.01].结论 UTMD联合NF-1κB结合基序转染系统通过提高质粒的人胞和入核效率能显著提高SDF-1α质粒对血管内皮细胞的转染效率.
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趋化因子SDF-1α在外周血淋巴细胞中转录与HIV-1感染的相关研究
目的 研究趋化因子SDF-1α在HIV感染者外周血淋巴细胞(PBL)中的表达,以及其表达水平与HIV感染的关系.方法 研究对象包括97名健康人与238例HIV感染患者,后者包括92例A1～A3阶段无症状患者和146例B1～C3阶段患者.首先分离PBL,提取总RNA并行反转录(RT)-PCR.建立荧光定量PCR方法 ,分别进行SDF-1α与β-globin定量,根据SDF-1α拷贝数与β-globin拷贝数比值计算R1值.结果 在健康人、无症状感染者和艾滋病患者中SDF-1α转录水平不同,HIV-1感染晚期暨艾滋病患者的SDF-1α表达上调.相关分析显示Rl值与CD4+T淋巴细胞计数呈明显负相关(P=0.002),而与病毒载量呈明显正相关(P=0.001),表明SDF-1α转录水平与病情进展有一定关系.结论 HIV感染晚期患者PBL内SDF-1α转录上调,影响SDF-1α转录上调的机制及SDF-1α表达升高对机体的病理作用值得深入研究.
关键词： 趋化因子 SDF-1α 获得性免疫缺陷综合征 T淋巴细胞 -
HIV-1辅助受体CXCR4配体暨趋化因子SDF-1α转录子基因多态性研究
目的 研究趋化因子SDF-1α转录子基因突变,分析突变发生频率,以及其对HIV感染的影响.方法 研究对象包括居住在中国香港地区的278名HIV阴性健康中国人,49例HIV阳性白种人和13名高危未感染中国人.分别提取外周血单个核细胞基因组DNA和总RNA.建立PCR及逆转录PCR法,对SDF-1α启动子(promoter)、开放读码区(ORF)和3'端非编码区(3'UTR)基因进行序列分析.用人工引入点突变的错配引物双重PCR法对一新发现突变进行筛查,分析其在研究对象中的分布及意义.结果 对包括13名高危中国人、49例白种人和38名随机选取的健康中国人在内的100份标本测序分析显示,在SDF-1α启动子及ORF区内未见任何突变;在SDF-1α3'UTR发现一"GA"插入式基因突变,命名为SDF-1-3'GA(+),在GenBank中的序列号为AY874118.该突变在3组研究对象中均有发生,在健康中国人中的频率为15.1%(84/556),但在13名有HIV接触而未感染的高危人群中发生频率为30.7%(8/26).结论 与本身重要生理功能相对应,SDF-1α基因十分保守;在其3'UTR新发现突变SDF-1-3'GA(+)是否影响HIV感染,值得进一步研究.
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基质细胞衍生因子1α对子宫内膜癌细胞信号传导通路的激活作用
目的探讨基质细胞衍生因子1 α(SDF-1α)对子宫内膜癌细胞系HEC-1A和Ishikawa磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B(PI-3K/Akt)及丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号传导通路的激活作用.方法应用蛋白免疫印迹杂交技术,检测SDF-1α作用于HEC-1A和Ishikawa细胞后Akt及ERK的活化情况.结果 20 ng/ml SDF-1α作用于HEC-1A细胞15 min时,ERK1/2活化明显,且持续至少达2 h,随着SDF-1α浓度的增加,ERK1/2活化逐渐增强;SDF-1α作用HEC-1A细胞后Akt的活化水平无明显改变.20 ng/ml SDF-1α作用于Ishikawa细胞15 min时,Akt活化明显,且持续至少达2 h,随着SDF-1α浓度的增加,Akt活化逐渐增强;SDF-1α作用Ishikawa细胞后ERK1/2的活化水平无明显改变.结论 SDF-1α作用于雌激素受体阴性的HEC-1A细胞和雌激素受体阳性Ishikawa细胞,激活的信号传导通路不同.
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急性白血病患者血清及脑脊液中SDF-1α的检测及其临床意义
目的 探讨急性白血病(acute leukemia,AL)患者血清及脑脊液(cerebrospinal fluid.CSF)中基质细胞衍生因子-1α(stroml cell-derived factor-1α,SDF-1α)的水平及临床意义.方法 采用酶联免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay,ELl8A)分别检测26例初诊未治及经标准方案化疗2疗程后AL患者和10例非恶性血液病患者(对照组)的血清及CSF中SDF-1α的水平.结果 ①初诊未治及经标准方案化疗2疗程后急性淋巴细胞白血病(ALL)组,急性髓细胞白血病(AML)组血清及CSF中SDF-1α浓度明显高于对照组(P＜0.01),ALL组明显高于AML组(P＜0.01).②初诊未治及经标准方案化疗2疗程后中枢神经系统白血病(CNSL)组、非中枢神经系统白血病(N-CNSL)组血清及CSF中SDF-1α浓度明显高于对照组(P＜0.01);CNSL组明显高于N-CNSL组(P<0.01).结论 ①AL患者初诊时及化疗后血清.及CSF中SDF-1α水平呈高水平表达,提示它可以作为AL特别是CNSL的一种病情变化检测指标,可能与AL耐药及复发相关.②CNSL患者血清及CSF中SDF-1α浓度有一定的相关性,提示在CNSL患者仅检测血清SDF-1α水平就可能有助于判断病情变化,避免反复腰穿给患者带来痛苦.
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SDF-1α基因真核表达载体的构建与鉴定
目的 构建SDF-1α真核表达载体,为研究SDF-1α基因功能提供工具.方法 从大鼠平滑肌细胞中提取总RNA,采用RT-PCR技术扩增SDF-1α的基因编码区序列,将序列定向克隆至真核表达载体pcDNA3.1上,并用PCR、酶切法和DNA测序鉴定.结果 PCR和限制性内切酶分析鉴定,表明获得重组质粒pcDNA3.1/SDF-1α.通过对SDF-1α基因编码区cDNA序列测序证实其与GenBank中的已知序列一致.结论 成功构建了SDF-1α真核表达载体,为SDF-1α基因功能研究奠定基础.
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蝎毒多肽提取物对白血病小鼠Bcl-2 SDF-1α与TGF-β1表达的影响
目的:探讨蝎毒多肽提取物(PESV)对白血病小鼠Bcl-2、SDF-1α与TGF-β1表达的影响,探究PESV对白血病细胞增殖和浸润的影响与机制.方法:NOD-SCID小鼠60只,按本课题前期研究方法,建立人白血病NOD-SCID小鼠髓外浸润模型.选取造模成功的小鼠40只,随机分为4组,每组10只,分别为高、中、低剂量组和模型组,另设同周龄正常NOD-SCID小鼠10只为空白对照组.高、中、低剂量组每只分别尾静脉注射PESV 1.2mg,(kg·d)、0.6m/(kg·d)、0.3mg/(kg·d),模型组和空白组每只均尾静脉注射0.9%的生理盐水0.3mL/d,35d后全部处死,取血清和骨髓细胞培养液上清,用ELISA法进行Bcl-2、SDF-1α与TGF-β1的检测.结果:高、中、低剂量组存活率均高于模型组.高、中、低剂量组小鼠血清以及骨髓的Bcl-2、SDF-1α均明显低于模型组(P<0.05),而TGF-β1均高于模型组,均以高剂量组效果为明显(P<0.05).结论:蝎毒多肽提取物可以有效的降低白血病小鼠血清及骨髓中Bcl-2、SDF-1α的表达,提高TGF-β1的表达,具有较好的阻抑白血病细胞增殖和浸润的作用.
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早期康复训练对急性脑梗死偏瘫患者运动功能和PCs、SDF-1α水平的影响
目的 探讨早期康复训练对急性脑梗死偏瘫患者运动功能和PCs、SDF-lα水平的影响效果.方法 选取接受治疗的急性脑梗死偏瘫患者80例,按照随机方法将患者均分为2组,每组40例,观察组采用常规药物治疗,并在此基础上对患者进行早期康复训练,对照组仅采用常规药物治疗.所有患者治疗前后采用流式细胞仪检测PCs含量、酶联免疫吸附试验法检测SDF-1α含量;采用FMA和MBI评分法检测患者的运动功能情况并进行记录,观察早期康复训练对急性脑梗死偏瘫患者的影响效果.结果 治疗前,2组患者FMA及BMI评分差异无统计学意义(P>0.05),治疗后评分和治疗前比较有明显改善,并且观察组FMA[(59.65±17.24)分]和MBI[(64.13±15.31)分]变化明显高于对照组,观察组运动功能恢复情况比对照组更加理想,差异有统计学意义(P<0.05);治疗前,观察组与对照组患者外周血PCs和SDF-1α含量比较差异无统计学意义(P>0.05),治疗后,2组患者PCs和SDF-1α均比治疗前有所升高,观察组PCs为(1.53±0.12)pg/ml、SDF-1α为(1811.23±10.45)pg/ml,和对照组比较,升高更为明显,2组差异有统计学意义(P<0.05).结论 对急性脑梗死偏瘫患者进行早期康复训练,有助于患者的运动功能恢复,提高其PCs、SDF-1α水平,值得临床推广应用.
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康复训练对大鼠海马梗死后SDF-1α蛋白表达的影响
目的 探讨康复训练对大鼠海马梗死后SDF-1α蛋白表达的影响.方法 55只健康SD大鼠(雄性,体重200-2508)采用数字随机方法,选取5只作为正常对照组,其余大鼠造模后分为模型组和康复组.每组分为训练前、3天、7天、14天、21天五个亚组,每个亚组各5只.康复训练组给予水迷宫训练,模型组不给予任何处理.与各时间点采用免疫组化法检测大鼠海马组织中SDF-1α蛋白表达情况.结果 与对照组比较,模型组、康复训练组海马缺血区SDF-1α蛋白表达增加(P<0.05);与模型组比较,康复训练3、7、14、21天,康复训练组SDF-1α蛋白的表达增加,两者有统计学差异(P<0.05).结论 康复训练能够促进大鼠海马梗死后缺血区SDF-1α蛋白的表达.
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神经系统疾病中SDF-1α/CXCR4 轴通路的研究进展
SDF-1α 由神经元或胶质细胞生成,CXCR4为G蛋白偶联受体家族成员,在脑组织主要表达于胶质细胞 、神经细胞,极有可能同其他信息传导通路共同构建出具有复杂功能的信息传导体系.SDF-1α/CXCR4还参与中枢神经系统疾病发展过程,参与疾病炎症反应 、免疫细胞等趋化作用以及组织修复过程.由于其分布的广泛性及作用的多样性,SDF-1α/CXCR4可能是多种神经系统疾病的治疗靶点,或对预后水平进行判断的生物标记.
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HIF-1α及靶基因在糖尿病小鼠创面愈合过程中基因表达的研究及意义
目的 通过研究BALB/c糖尿病小鼠创面愈合过程中HIF-1α、VEGF、SDF-1a和CXCR4在不同时间点的基因表达情况,从血管生成的调控方面探讨糖尿病创面难愈的机制.方法 建立糖尿病小鼠模型后4周,建立小鼠背部皮肤正中近颈侧直径约6mm的圆形皮肤全层缺损模型,分别于伤后即刻,3、7、10 d获取创面组织,计算创面的愈合率,检测损伤后各时间点HIF-1α、VEGF、SDF-1a和CXCR4的基因相对表达量.结果 糖尿病组小鼠的创面愈合率第3、7、10天,分别为(7.0±5.8)％、(38.7±6.0)％、(80.0±3.0)％,明显小于对照组;创伤前糖尿病组小鼠皮肤中的目的基因表达量低于对照组;创伤后对照组和糖尿病组小鼠皮肤中目的基因表达量较创伤前明显增加,于第3或7天时表达量达高峰,但糖尿病组小鼠的表达量总体低于对照组,有统计学意义(P＜0.05).结论 糖尿病组小鼠创面愈合过程中,HIF-1α、VEGF、SDF-1a和CXCR4的基因表达水平降低,导致血管形成不足,可能是糖尿病创面愈合延迟的原因之一.
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氯化钴预处理对全脑缺血再灌注大鼠SDF-1α/CXCR4的表达及对细胞凋亡的影响
目的 通过观察缺血再灌注后大鼠海马区SDF-1 α/CXCR4表达的变化,观察细胞凋亡探讨缺血缺氧环境中SDF-1α/CXCR4生物轴的脑保护作用及氯化钴预处理的影响.方法 将130只成年雄性SD大鼠随机分为正常对照组(n=5)、假手术组(n=5)、模型组(脑缺血组,n =60)、干预组(氯化钴组,n=60).按缺血后再灌注时间不同分为再灌注2h、6h、12h、24 h、48 h、72 h6个亚组.采用四血管阻断法制备大鼠全脑缺血再灌注模型,通过免疫组化法观察脑缺血后再灌注各个时间点海马区SDF-1α及CXCR4的表达变化,TUNEL法观察各组不同时间点细胞凋亡的差异.结果 免疫组化:模型组及干预组SDF-1α、CXCR4的阳性表达均高于假手术组,模型组于脑缺血再灌注6h海马区SDF-1α、CXCR4阳性细胞表达明显增加,48 h表达至各时间点高水平,随后表达逐渐减少,72 h仍有阳性表达.干预组各时间点海马区SDF-1α、CXCR4的阳性细胞表达均高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).TUNEL:与模型组比较,干预组凋亡指数低于模型组(P＜0.05).结论 氯化钴可能通过上调SDF-1α、CXCR4的表达,诱导脑缺氧耐受,促进干细胞向缺血组织迁移,间接发挥脑保护作用.
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人SDF-1α的原核表达、纯化及对小鼠骨髓造血的研究
目的:构建人SDF-1α原核表达载体,进行诱导表达,纯化并研究其对骨髓造血的作用.方法:克隆人SDF-1α成熟肽序列到原核表达载体pET28a(+)中,在大肠杆菌BL21(DE3)中进行诱导表达,用阴离子交换柱Sepharose Q纯化目的蛋白,并检测重组蛋白的活性和内毒素含量.用纯化的蛋白注射小鼠进行药效学研究.结果:用此原核表达系统得到纯度95%以上的重组蛋白,浓度达到0.67mg/mL,产物内毒素含量低于1EU/ug,且具有体外促小鼠T细胞趋化活性.重组人SDF-1α以125ug/kg/day的剂量连续给药可以引起正常小鼠骨髓细胞升高.结论:重组人SDF-1α可以促进小鼠骨髓造血作用.
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BMSCs选择性迁移对大鼠全脑缺血模型认知功能的影响
目的:探究不同时间点移植后骨髓间充质干细胞(BMSCs)的选择性迁移对大鼠全脑缺血/再灌注模型认知功能的影响以及可能的分子机制.方法:成年雄性SD大鼠80只,随机分为四组,全脑缺血再灌注组(model组,n=20),假手术组(sham组,n=20),造模1d后较早BMSCs移植组(early组,n=20),造模7d后较晚移植组(late组,n=20).结扎双侧颈总动脉并结合低血压建立大鼠全脑缺血/再灌注模型,后于不同时间点尾静脉移植GFP+BMSCs.造模后1、3、7、14d用酶联免疫法(ELISA)检测模型损伤区域大鼠皮层和海马部位的SDF-1α和MCP-1的表达水平,28 d后进行Morris水迷宫检测认知改变,32 d通过免疫组织化学染色和Western blot观察GFP+BMSCs的分布情况.结果:水迷宫实验表明细胞移植组相比sham组参数有显著提升,且early组相比late组表现更好(P＜0.05);GFP免疫组化和western结果表明,early组BMSCs移植后分布于海马更多(P＜0.05),而late组中BMSCs在皮层分布更多(P＜0.05);ELISA结果表明,造模后1d模型大鼠海马区域的SDF-1α和MCP-1的表达水平呈现短暂的相对性上调(P＜0.05),而造模7d后相关皮层区域的SDF-1α表达缓慢上调(P＜0.05).结论:造模后早期(1 d)移植BMSCs比晚期能更好的改善模型大鼠的认知功能;造模后SDF-1α和MCP-1的时空变化可能介导了BMSCs的选择行迁移,后者直接决定了对模型大鼠的认知功能改善的疗效.
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趋化因子 SDF-1α及其受体介导涎腺腺样囊性癌细胞的趋化与侵袭
探讨趋化因子SDF-1α及其受体CXCR4对涎腺腺样囊性癌细胞趋化与侵袭活性的促进作用.采用RT-PCR法检测涎腺腺样囊性癌肺高、低转移细胞株ACC M和ACC-2中CXCR4 mRNA的表达;Boyden趋化小室法检测在SDF-1α作用下ACC-M细胞和ACC-2细胞的趋化与侵袭活性;检测CXCR4 mAb对ACC-M细胞和ACC-2细胞趋化活性和侵袭活性的抑制作用.结果显示:2株涎腺腺样囊性癌细胞中均存在不同程度CXCR4 mRNA的表达,其在肺高转移细胞株ACC-M中的表达显著高于肺低转移细胞株ACC-2;SDF-1α对2种细胞均具有趋化活性和侵袭活性,且对ACC-M细胞的趋化活性和侵袭活性显著强于ACC-2细胞;CXCR4 mAb能够抑制涎腺腺样囊性癌细胞的这种趋化活性和侵袭活性.趋化因子SDF-1α及其受体CXCR4能够介导涎腺腺样囊性癌细胞的趋化与侵袭.
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gp130信号可上调神经前体细胞表面分子CXCR4的表达
gp130信号参与了神经前体细胞(NPC)的自我更新,敲除gp130分子的胚胎不能正常地发育,可导致胎儿在出生前天折.CXCR4是趋化因子基质细胞源因子(stromal cell devived factor-1α,SDF-1α)已知的唯一受体,表达CXCR4的NPC可在体外被SDF-1α趋化而定向迁移,在神经功能缺损的修复中起着重要的作用.gp130和CXCR4分子之间可能存在着一定的相关性.本实验在发现NPC表达gp130和CXCR4的基础上,采用gp130激发型单克隆抗体激发NPC,结果表明能上调NPC表达CXCR4分子以及增强NPC的迁徙能力,从而揭示了gp130信号在胚胎NPC定向迁移中可能起着重要的作用.
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基质细胞衍生因子-1α促进乳腺癌细胞侵袭和转移
背景与目的:根据基质细胞衍生因子1 α(SDF-1 α)/CXCR4生物学轴的多种生物学功能,本实验在研究CXCR4内化及其调变的基础上,进一步探讨SDF-1 α对乳腺癌细胞体外侵袭转移能力的影响.方法:应用细胞黏附实验、细胞迁徙实验及失巢凋亡实验对比分析SDF-1 α对乳腺癌MCF-7细胞形态、体外黏附能力、迁徙能力及抗失巢凋亡能力的影响.结果:与SDF-1 α共培养的乳腺癌MCF-7细胞形态变为长梭形,伪足更长而伸展,其黏附能力高于MCF-7细胞株[(0.90±0.18)VS(0.68±0.08),P<0.01];侵袭小室实验发现,与SDF-1α共培养的MCF-7细胞侵袭转移能力增强,培养6 h迁徙进入微孔膜的细胞数比MCF-7细胞株明显增多[(151±11)比(135±13),P<0.01].悬浮培养的SDF-1α加MCF-7细胞比MCF-7细胞更容易聚集,形成相对较致密的细胞团块,24 h检测流式细胞凋亡指数下降[(9.1±1.1)%VS(18.4±1.7)%,P<0.01].结论:SDF-1α可明显增强乳腺癌细胞MCF-7体外侵袭及转移能力.
关键词： SDF-1α 乳腺癌MCF-7细胞 侵袭 转移 -
SDF-1α和CXCR4在低氧缺糖海马脑片中的表达变化
目的 研究海马脑片低氧缺糖损伤后SDF-1α和CXCR4蛋白的表达变化情况.方法 运用脑片培养技术建立低氧缺糖海马脑片模型,用免疫组化法和Western blot法检测SDF-1α和CXCR4的表达变化.结果 低氧缺糖损伤前后海马脑片中均可见SDF-1α和CXCR4表达的阳性细胞,其胞膜和胞质呈棕黄色着色,其中部分轴丘可见CXCR4阳性蛋白表达.Western blot发现,损伤后在分子量为11 ku和43 ku处分别检测到SDF-1α、CXCR4阳性条带;与正常对照组相比,OGD组SDF-1α和CXCR4表达均增加,其中SDF-1α表达增加差异有统计学意义(P<0.01).结论 海马脑片缺氧缺糖损伤后SDF-1α蛋白表达增加,提示SDF-1α可能与海马脑片低氧缺糖损伤密切相关.
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类风湿关节炎病人外周血中趋化因子受体CXCR4与其配体SDF-1α的表达研究
目的:探讨类风湿关节炎病人外周血中趋化因子受体CXCR4与其配体SDF-1α的表达水平.方法:选取类风湿性关节炎病人52例为观察组.另外选取同期健康体检的健康人群30名为对照组.采集受试者静脉血,检测外周血CXCR4、SDF-1α及白细胞介素(IL)-8表达水平.结果:观察组外周血CD3+CD4+和CD3+CD8+T淋巴细胞表面CXCR4表达百分率和血清SDF-1α、IL-8表达水平均高于对照组(P<0.01).随着病程的延长,外周血CD3+CD4+和CD3+CD8+T淋巴细胞表面CXCR4表达百分率和血清SDF-1α表达水平上升(P<0.01).直线相关性分析结果显示,外周血CXCR4及SDF-1α表达水平与IL-8均呈正相关关系(P<0.05).结论:SDF-1α/CXCR4信号转导通路和IL-8与类风湿性关节炎的发病和进展过程有关.
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SDF-1α与G-CSF动员造血干细胞的相关性研究
目的: 探讨趋化因子基质细胞衍生因子(SDF-1α)与造血干细胞移植中G-CSF 动员造血干细胞的关系.方法: 应用酶联免疫吸附(ELISA)试验检测8例自体外周血造血干细胞移植(auto-PBSCT)病人及9例异基因外周血干细胞移植(allo-PBSCT)供者应用G-CSF前1天、后第5天血浆SDF-1α水平的变化.结果: 应用G-CSF前1天,allo-PBSCT供者及auto- PBSCT病人SDF-1α的血浆水平分别为(1918.01±73.22)pg/ml;(1443.42±175.37) pg/ml,应用G-CSF后第5天,SDF-1α血浆水平分别降至为(1841.94±60.70)pg/ml;(1312.28±111.33) pg/ml,二者比较有统计学意义.allo-PBSCT供者在G-CSF 动员前1天、后第5天的SDF-1α血浆水平均高于auto- PBSCT病人.结论: SDF-1α不参与G-CSF诱导造血干细胞的动员过程, auto-PBSCT病人的SDF-1α血浆水平的降低可能是骨髓基质细胞功能受损的表现.
