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葡萄球菌肠毒素A真核表达质粒的构建及其在喉癌Hep-2细胞来源exosomes中的表达
目的 构建葡萄球菌肠毒素A(SEA)与糖基化磷脂酰肌醇(GPI)的真核表达质粒pmiR-RB-REPORT-SEA-GPI并转染人喉癌细胞株Hep-2细胞,检测Hep-2细胞分泌的exosomes中SEA的表达.方法 利用NOT I酶切原核生物质粒pGSI-SEA-GPI粘性末端,琼脂糖凝胶电泳分离、提纯目的基因SEA-GPI,利用T4连接酶连接真核表达质粒pmiR-RB-REPORT与SEA-GPI构建真核表达质粒pmiR-RB-REPORT-SEA-GPI.脂质体法转染pmiR-RB-REPORT-SEA-GPI至Hep-2细胞,荧光定量实时PCR(qRT-PCR)检测Hep-2细胞SEA-GPI mRNA的表达.提取Hep-2细胞分泌的exosomes,免疫印迹测定SEA在exosomes中的表达.结果 琼脂糖凝胶电泳显示成功构建真核表达质粒pmiR-RB-REPORT-SEA-GPI.qRT-PCR检测显示,pmiR-RB-REPORT-SEA-GPI转染的Hep-2细胞SEA-GPI mRNA显著表达.免疫印迹显示Hep-2细胞分泌的exosomes中存在SEA蛋白表达.结论 SEA可能通过GPI结构锚定于exosomes膜上,为制备含有SEA-GPI锚定蛋白的SEA-eoxsomes瘤苗提供了依据.
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大鼠肺缺血再灌注损伤后前炎症细胞因子IL-1β mRNA的表达分析
目的 通过对大鼠移植肺灌洗后、冷缺血保存和再灌注期间前炎症细胞因子IL-1β mRNA的表达进行分析,探讨IL-1β在此过程中介导的移植肺炎性损伤机制.方法 本研究大鼠分6组,包括:正常肺(未灌洗)对照组、仅肺灌洗处理组、肺灌洗后冷缺血保存6 h、12 h、24 h各1组、冷缺血保存24 h后左肺移植再灌注3 h组.在相应各时间点采取肺组织,用荧光定量实时PCR法检测IL-1β mRNA的表达并进行髓过氧化物酶(MPO)活性测定.结果 除冷缺血12 h组和冷缺血24 h组之间IL-1β mRNA表达相对量差别不显著外(P=0.167),其余各组之间IL-1β表达相对量差别均有显著统计学意义(P＜0.05).仅灌洗组、冷缺血组和24 h冷缺血移植再灌注3 h组的IL-1β mRNA表达相对量均高于正常对照组,且随处理时间的延长而表达增加.仅灌洗组、冷缺血组和24 h冷缺血移植再灌注3 h组的MPO活性均高于正常对照组,且随处理时间的延长而表达增加,P＜0.05.各组肺组织中MPO活性和IL-1β mRNA相对表达量呈较强的正相关关系,相关系数r=0.869,P＜0.01.结论 前炎症因子IL-1β在肺缺血再灌注损伤机制中发挥着重要炎性损伤作用,可以作为移植肺功能评价及预后的重要指标之一;IL-1β基因的表达在保存液灌洗后的冷缺血保存早期就开始出现,而不是在再灌注之后的事件.
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α1-A-肾上腺素受体在SD大鼠输尿管上的分布
目的 探讨α1-A-肾上腺素受体(α1-A-AR)在不同性别、不同月龄段SD大鼠输尿管上段、中段及下端的分布.方法 取2.5、8及18月龄的雄性及雌性SD大鼠各5只,处死后分别取上段、中段及下段输尿管,免疫组化实验观察α1-A-AR在3段输尿管中的表达情况;荧光定量实时PCR (qRT-PCR)技术测定α1-A-AR mRNA在3段输尿管中的表达水平.结果 免疫组化实验显示,α1-A-AR在输尿管下段的阳性率显著高于输尿管上段及中段(P<0.001),雌雄性间以及各月龄间的阳性率差异无统计学意义(P>0.05);qRT-PCR结果显示,α1-A-AR在各月龄(P=0.002)和输尿管各段(P<0.001)间的表达量差异有统计学意义,但在性别间差异无统计学意义(P=0.666),其中2.5月龄的SD大鼠中表达量较18月龄显著增多(P=0.001),而8月龄的SD大鼠表达量与2.5及18月龄差异无统计学意义(P>0.05);输尿管下段的α1-A-AR表达量较上段及中段显著增多(P<0.001).结论 输尿管下段结石或许可根据α1-A-AR在输尿管中的表达分布使用高选择性α1-A-AR阻滞剂治疗.
关键词： α1-A-肾上腺素受体 SD大鼠 输尿管 荧光定量实时PCR
