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LPS激活TLR4抑制BMP9诱导iMEFs成骨分化
目的：研究脂多糖（LPS）激活的Toll样受体4（TLR4）信号对骨形态发生蛋白9（BMP9）诱导永生化小鼠胚胎成纤维细胞（iMEFs）成骨分化的影响。方法细胞免疫荧光检测TLR4／NF-κB信号通路的激活；LPS，BAY11-7082和BMP9处理iMEFs，ALP染色和活性检测iMEFs早期成骨分化能力；茜素红S染色检测晚期成骨分化能力；半定量PCR和Western blot检测晚期成骨基因OCN和OPN表达；Western blot 检测Smad1／5／8磷酸化水平；半定量PCR和Western blot检测成骨关键转录因子Runx2和Dlx5的表达。结果 LPS成功激活TLR4／NF-κB信号通路；LPS抑制BMP9诱导的ALP染色和活性（ P＜0.01）、钙盐沉积、OCN的mRNA和蛋白质表达（ P＜0.05）、OPN的mRNA （ P＜0.01）和蛋白质（ P＜0.05）表达、Smad1／5／8信号通路激活（ P＜0.01）、Runx2的mRNA和蛋白质表达（ P＜0.05）、Dlx5的mRNA（P＜0.01）和蛋白质（P＜0.05）表达，BAY11-7082可以部分逆转LPS的抑制作用（P＜0.05）。结论 LPS激活TLR4可以通过NF-κB信号通路抑制BMP9诱导的iMEFs成骨分化。
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Runx3敲减抑制BMP9诱导小鼠胚胎成纤维细胞iMEFs向成骨分化
目的 研究Runx3敲减对BMP9诱导的小鼠胚胎成纤维细胞iMEFs成骨分化的作用.方法 BMP9腺病毒感染iMEFs,用Western blot检测内源性Runx3蛋白的表达.Runx3 干扰腺病毒ad-siRunx3和BMP9条件培养基共同处理iMEFs,用碱性磷酸(ALP)染色和活性定量测定检测成骨早期指标ALP;用茜素红S染色检测成骨晚期指标钙盐沉积;用RT-PCR检测成骨相关基因Id1、Id2、Id3和Runx2,用Western blot检测成骨相关蛋白Dlx5;用SBE荧光素酶报告质粒检测smad 1/5/8的转录活性.结果 BMP9可以使Runx3表达降低(P＜0.05);干扰Runx3可以抑制早期成骨指标ALP活性(P＜0.05)和晚期成骨指标钙盐沉积;ad-siRunx3抑制BMP9诱导的成骨相关转录因子Id1、Id2、Id3和Runx2基因的表达(P＜0.05)及DLX5蛋白的表达(P＜0.05).结论 敲减Runx3可以抑制BMP9诱导小鼠胚胎成纤维细胞向成骨分化.
