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多巴胺受体两个亚家族对大鼠背根神经节GABAA受体的影响
应用全细胞膜片钳技术在大鼠新鲜分离DRG神经元上观察多巴胺D1、D2受体选择性激动剂SKF38393和R(-)-NPA对GABAA受体激活电流的影响。在60个对GABA反应的细胞，预加SKF38393 30s后观察到对GABA-激活电流幅值的影响：多数为抑制(53/60)，少数为增强(1/60)和无明显作用(6/60)。另外对GABA敏感的50个受检细胞, 预加R(-)-NPA 30s后对GABA-激活电流幅值的影响也是多数为抑制(38/50)，少数为增强(1/50)和无明显作用(11/50)。SKF38393及R(-)-NPA对GABA(10-4mol/L)-激活电流的抑制作用为浓度依赖性的。上述抑制可为胞内透析蛋白激酶抑制剂H7所翻转。
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D1及α2受体激动剂对卵母细胞表达的GABAA受体的抑制
目的:研究SKF38393及Clonidine对表达的DRG神经元GABAA受体的调制作用,并与新鲜分离细胞相比较.方法:实验在注射鼠DRG神经元mRNA的卵母细胞上进行,以双电极电压钳技术进行研究.结果:① SKF38393及Clonidine对表达的DRG神经元GABAA受体有明显的抑制作用,其作用呈浓度依赖性.②SKF38393及Clonidine的诱导电流之间有相互抑制作用.③SKF38393及Clonidine对GABAA受体的抑制作用是非竞争性抑制,并且为非电压依赖性.结论:实验结果提示SKF38393及Clonidine可通过胞内转导,由第二信使介导GABAA受体的磷酸化而抑制GABAA诱导电流.
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大鼠鞘内注射多巴胺受体激动剂与拮抗剂对痛及针刺镇痛的影响
在大鼠电刺激甩尾测痛模型上,应用鞘内注射(it)多巴胺(DA)受体选择性激动剂与拮抗剂,分析大鼠脊髓DA受体亚型D1和D2在痛及针刺镇痛(AA)中的作用.结果显示,在正常清醒大鼠,itD2受体选择性激动剂LY171555(LY)或D1/D2受体激动剂阿朴吗啡(APO)有镇痛作用(呈剂量依赖式增加),并加强AA,而itD1受体选择性激动剂SKF38393(SKF)对痛及AA均无影响;it D1受体选择性拮抗剂SCH23390(SCH)或D2受体选择性拮抗剂舒必利(Sul)均减弱AA的效应.结果提示,在脊髓水平,D2受体参与痛觉的调制,兴奋D2受体时有镇痛作用并增强AA;兴奋D1受体时显示不出参与作用,但阻断D1受体能抑制AA.
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SKF38393抑制大鼠DRG分离神经元ATP-激活电流
目的:探讨多巴胺D1受体的选择性激动剂SKF38393 HCl对ATP-激活电流的作用.方法:在大鼠新鲜分离的DRG神经元标本上应用全细胞膜片钳技术,记录SKF38393对ATP-激活电流的作用.结果:大部分受检细胞(87.5%,77/88)对ATP敏感,10-6～10-3mol/L ATP可引起剂量依赖性呈明显去敏感的内向电流.在此77个细胞中,预加SKF38393可引起三类反应:①外向电流(7.8%,6/77);②内向电流(26.0%,20/77);③无反应(66.2%,51/77).与ATP-激活电流相比,SKF38393-激活电流幅值小,无明显去敏感现象.预加SKF38393 30～60 s对ATP-激活电流的影响如下:在74.0%(57/77)的细胞产生抑制作用,15.6%(12/77)的细胞产生增强作用,其余的无明显作用(10.4%,8/77),本文主要针对此抑制作用进行探讨.此种抑制作用与SKF38393本身是否引起或引起的是内向或外向电流无关.在浓度10-9～10-4mol/L范围SKF38393对10-4 mol/L ATP-激活电流的抑制作用依赖于SKF38393的浓度.胞内透析H7上述抑制作用可完全被取消,而胞内透析H9此抑制作用依旧存在.结论:SKF38393对ATP-激活电流的抑制作用可能是由于D1受体激活后经G蛋白偶联及PKC途径使ATP受体磷酸化所致.
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多巴胺D1受体激动剂SKF38393对剥夺血清条件下PC12细胞的保护作用
目的 研究多巴胺D1受体激动剂SKF38393对剥夺血清所致PC12细胞损伤的神经保护作用及其与磷脂酰肌醇-3激酶/蛋白激酶B(phosphatidylinositol 3-kinases/protein kinase B,PI3K/Akt)、细胞外调节蛋白激酶(extracellular signal-regulated kinases,ERK)信号通路的关系.方法 将PC12细胞分为血清剥夺模型组、血清剥夺后加不同剂量SKF38393处理组(1 μmoL、3 μmoL、10 μmoL、30 μmoL和100 μmoL)及1%胎牛血清对照组,比较各组PC12细胞活性;PC12细胞分别加入不同剂量(同上)SKF38393处理40 min,以及以10 μmoL SKF38393处理不同时间(5 ～ 80 min),然后检测PC12细胞的Akt473及ERK1/2的磷酸化水平;PC12细胞分别加入PI3K/Akt信号通路抑制剂LY294002(50 μmoL)、ERK信号通路抑制剂PD98059(50 μmoL)或PD169316(10 μmoL),后再行SKF38393干预,比较各组PC12细胞活性.结果 与剥夺血清组比较,10 μmoL SKF38393即可显著增加PC12细胞的活性[(0.58 ± 0.02) vs (0.37 ± 0.01)],并且随着其剂量(30 μmoL、100 μmoL)的增加PC12细胞活性的增加可更明显[(0.62 ± 0.01)、(0.65 ± 0.02)],上述差异均有统计学意义(P ＜ 0.05).不同剂量SKF38393和不同时间的SKF38393处理PC12细胞后磷酸化的Akt和ERK的表达水平均明显高于剥夺血清组(P ＜ 0.05).与SKF38393组的PC12细胞活性(0.59 ± 0.01)比较,PD169316组细胞活性(0.41 ± 0.14)无明显差异(P ＞ 0.05),但LY294002组 (0.33 ± 0.01)和PD98059(0.33 ± 0.03)组细胞活性均更低(P ＜ 0.05),提示仅后二者可阻断SKF38393对PC12细胞损伤的保护作用.结论 SKF38393能保护剥夺血清所致的PC12细胞损伤,其保护作用可能与激活PI3K/Akt和ERK信号通路有关.
