首页 > 文献资料
-
加味五子衍宗方总黄酮对大鼠海马锥体细胞VGCC通道的影响
目的:探讨加味五子衍宗方总黄酮成分对Aβ_(25-35)作用后的大鼠海马CA1区锥体神经元电压门控钙通道电流的作用.方法:应用全细胞膜片钳技术记录海马神经元I_(Ca)电流,采用内向电流的幅度作为观察指标,观察模型药物及干预药物对其的作用.采用出生7 d的乳鼠取海马后制成脑片,选取立体感强、状态好的锥体细胞形成全细胞膜片钳记录,从-50 mV到+50 mV范围(步进为5 mV)一系列去极化电压脉冲刺激(脉冲宽度500 ms),以激发出电压依赖性的内向钙离子电流.记录电流后加入Aβ_(25-35)后,再加入总黄酮进行干预.结果:Aβ_(25-35)淀粉蛋白可以通过增强I_(Ca)可引起胞内钙超载,正常幅度平均为-(157.1±19.9)pA,Aβ_(25-35)作用后增大为-(323.2±23.4)pA,125,250,500 mg·L~(-1)的总黄酮作用之后,分别下降为-(257.9±31.6),-(196.4±29.8),-(169.3±34.0)pA.结论:引起胞内钙离子超载可能是Aβ_(25-35)产生神经毒性作用的机制之一,加味五子衍宗方总黄酮成分可通过抑制钙离子内流对神经元起一定保护作用.
-
多巴胺受体两个亚家族对大鼠背根神经节GABAA受体的影响
应用全细胞膜片钳技术在大鼠新鲜分离DRG神经元上观察多巴胺D1、D2受体选择性激动剂SKF38393和R(-)-NPA对GABAA受体激活电流的影响。在60个对GABA反应的细胞，预加SKF38393 30s后观察到对GABA-激活电流幅值的影响：多数为抑制(53/60)，少数为增强(1/60)和无明显作用(6/60)。另外对GABA敏感的50个受检细胞, 预加R(-)-NPA 30s后对GABA-激活电流幅值的影响也是多数为抑制(38/50)，少数为增强(1/50)和无明显作用(11/50)。SKF38393及R(-)-NPA对GABA(10-4mol/L)-激活电流的抑制作用为浓度依赖性的。上述抑制可为胞内透析蛋白激酶抑制剂H7所翻转。
-
硝普钠对豚鼠单离耳蜗外毛细胞全细胞电流的影响
目的研究并探讨硝普钠(sodium nitroprusside,SNP)对豚鼠耳蜗外毛细胞(outer hair cells,OHC)全细胞电流的影响及其作用机制.方法利用急性分离的OHC和特异性的离子通道阻断剂作为工具药,通过膜片钳电压钳记录技术观察了SNP对豚鼠耳蜗OHC全细胞电流的影响,结果①在以+40mV的指令电压刺激时,10-3mol/L的SNP抑制15.34±6.59%的细胞电流(n=5);②SNP对全细胞电流的抑制作用有电压依赖性,在刺激高于0mV时作用明显,10-2mol/L的SNP在+10mV时抑制率为4.97±1.74%,而在+40mV时的抑制率为33.82±1.61%;③SNP对全细胞电流的抑制呈量效关系,在浓度大于10-3mol/L时,抑制作用逐渐明显,10-1mol/L的SNP时接近达到大抑制效应;④分离离子电流成分后,SNP仅对Ca2+电流有抑制作用.结论SNP对豚鼠耳蜗外毛细胞的全细胞电流的抑制作用,主要通过抑制细胞外Ca2+的内流,进而影响Ca2+依赖性K+通道而实现.
-
5-HT2受体介导大鼠DRG神经元膜GABA-激活电流的增强作用
目的探讨5-HT对大鼠DRG神经元膜GABA-激活电流的调节作用及其机制.方法在新鲜分离的大鼠DRG神经元标本上,以全细胞膜片钳技术记录膜电流,用排管快速换液装置行胞外给药,以胞内透析技术分析信号转导途径.结果给予GABA可使多数受检细胞产生浓度依赖性内向电流(IGABA).预加5-HT,可使IGABA增加.此效应可被5-HT2受体特异性激动剂α-methyl-5-HT(1×10-6mol·L-1)所模拟,被5-HT2受体选择性拮抗剂cyproheptadine所阻断.在部分细胞,5-HT本身可引起由5-HT3受体介导的快速内向电流,但并未发现该电流与5-HT对IGABA的增强作用有必然的联系.从GABA激活电流的量效曲线可见,预加5-HT后和对照曲线相比,阈浓度不变、EC50值相近,IGABA大值增加33.6%.胞内透析GDP-β-S或H-7可取消5-HT增强IGABA的效应,而透析H-9无效.结论 5-HT可增强GABA-激活电流,其机制为5-HT2受体激活后通过PKC引起GABAA受体胞内磷酸化所致.
-
IGF-1对海马神经元抑制性突触传递的影响
目的 观察胰岛素样生长因子1(IGF-1)对原代培养海马神经元抑制性突触传递的影响并探讨其可能机制.方法 采用无血清培养基培养海马神经元,在10～14 d时用于实验.电生理实验分为正常对照组和IGF-1处理组(实验前24 h加入IGF-1,终浓度为10 μmol/L).细胞免疫化学实验分为正常对照组、IGF-1处理组和MAPKS转导通路抑制剂(PD98059)预处理组(IGF-1处理前1 h加入PD98059,终浓度为10 μmol/L).采用全细胞膜片钳记录方法观察IGF-1对抑制性突触后电流(IPSC)的影响,用细胞免疫化学方法观察其对γ-氨基丁酸能细胞数目影响.结果 IGF-1能够显著降低IPSC的频率,但与对照组比较其幅度差异无统计学意义;IGF-1能够明显减少GABA阳性细胞数目,应用PD98059后可阻断这种作用.结论 IGF-1的上述作用可能参与海马对学习记忆功能的调节过程.
-
神经肽Y对海马神经元兴奋性突触活动的影响
目的 观察神经肽Y(NPY)对体外培养海马神经元兴奋性突触活动的影响.方法 Wistar大鼠海马神经元体外原代培养,无镁细胞外液处理3h,建立稳定的海马神经元癫痫样放电模型,应用全细胞膜片钳记录技术,观察不同浓度NPY对海马神经元自发兴奋性突触后电流(sEPSCs)的影响.结果 (1)体外培养12d的海马神经元轮廓清晰,折光性良好,彼此间广泛突触联系形成,适于神经元电生理试验.(2)癫痫组神经元sEPSCs发放频率(28.826±1.254HZ)高于对照组(1.296±0.241 HZ),差异有统计学意义(P＜0.05).0.1 μmol NPY组sEPSCs的频率为0.895 ±0.146HZ;1μmol NPY组频率为0.461 ±0.394HZ,与癫痫组(28.826±1.254HZ)相比,均有明显降低,差异有统计学意义(P＜0.05).0.1μ mol NPY组的频率降低的程度小于1μmol NPY组神经元,差异有统计学意义(P＜0.05).sEPSCs幅度各组相比无明显差异(P＞0.05).结论 NPY能够抑制癫痫神经元sEPSCs的频率,而不影响幅度,这为NPY基因治疗癫痫提供了电生理学证据.
关键词： 神经肽Y 癫痫 神经元 全细胞膜片钳记录 自发兴奋性突触后电流 -
咖啡因对大鼠背根神经节急性分离神经元GABA-激活电流的抑制作用
应用全细胞膜片钳记录技术,在大鼠新鲜分离背根神经节(dorsal root ganglion,DRG)神经元上,观察预加咖啡因对GABA-激活电流(IGABA)的调制作用.实验中,大部分受检细胞(97.4%,113/116)对外加GABA敏感.1～1000μmol/L GABA引起一剂量依赖性、有明显去敏感作用的内向电流.在受检的108个DRG细胞中,约有半数(53.7%,58/108)对胞外加咖啡因(0.1～100μmol/L)敏感,产生一幅值很小的内向电流.预加咖啡因(0.1～100μmol/L)30 s后再加GABA能明显抑制GABA(100μmol/L)激活电流的幅值.预加咖啡因后GABA量效曲线明显下移;GABA-激活电流的大值较之对照下降约57%;而Kd值(30 μmol/L)几乎不变,表示此种抑制为非竞争性的.预加安定(diazepam,1 μmol/L)对GABA(100μmol/L)激活电流有增强作用,而预加咖啡因(10 μmol/L)有拮抗安定增强IGABA的作用.胞内透析H-8后,几乎可以完全消除咖啡因对IGABA的抑制作用.已知GABA作用于初级感觉神经元能引起初级传入去极化,因而实验结果提示,咖啡因有可能在初级传入末梢产生对抗突触前抑制的效应.
-
川芎嗪对大鼠背根神经节细胞P2X嘌呤受体介导反应的作用
目的探讨川芎嗪(tetramethy1pyrazine,TMP)对嘌呤2X(P2X)受体介导反应的作用.方法在大鼠新鲜分离的背根神经节(dorsal root ganglion,DRG)神经元标本上应用全细胞膜片钳技术记录川芎嗪对P2X受体激动剂激活电流的影响.结果外加ATP(1～1 000 μmol·L-1)可引起DRG神经元产生激活电流(n=102),ATP-激活电流(IATP)显示快失敏和慢失敏两种形式的内向电流.预加川芎嗪(0.1～10 mmol· L-1)后,大部分(89.2%,91/102)受检细胞可观察到ATP(100 μmol·L-1)-激活电流出现明显的抑制作用.川芎嗪 (1 mmol· L-1)使α,β-meATP (10 μmol·L-1)-激活电流减小.预加川芎嗪(1 mmol·L-1)后ATP(1～1 000 μmol·L-1)激活电流的剂量-效应曲线明显下移.预加川芎嗪(1 mmol·L-1)前后ATP(100 μmol·L-1)的I-V曲线反转电位值不变,均接近0 mV.川芎嗪(1 mmol·L-1)可明显抑制被前列腺素E2(100 μmol·L-1)或P物质(0.1 μmol·L-1)增大的ATP激活电流.通过微电极胞内透析注入PKA抑制剂H89(10 μmol·L-1)至胞内,使川芎嗪(1 mmol· L-1)抑制ATP(100 μmol·L-1)激活电流的作用减小.结论川芎嗪可能是通过PKA系统以及P2X受体离子通道复合体细胞外环的变构调制点影响P2X受体激动剂在大鼠DRG神经元的激活电流.
-
硝普钠对豚鼠耳蜗外毛细胞能动性影响的初步研究
目的研究硝普钠(sodium nitroprusside,SNP)对耳蜗OHC在电压刺激下的能动性的改变情况.方法运用全细胞膜片钳电压钳技术,在正常细胞内外液的条件下,观察不同浓度SNP对电压性刺激引起OHC能动性的影响情况.结果在SNP浓度低于100 μMol/L时,SNP对OHC能动性的影响不明显,但当SNP浓度高于100 μMol/L时,SNP对OHC的能动性有明显的抑制作用,结果有统计学意义(P<0.05).结论 SNP对OHC的能动性有抑制作用,作用呈一定的浓度效应关系.
-
Tacrine对大鼠三叉神经节神经元5-HT激活电流的调制作用
目的研究他可林(tacrine)对急性分离的大鼠三叉神经节神经元5-HT3受体的调制作用,探讨tacrine治疗阿尔茨海默病新的可能途径.方法采用全细胞膜片钳技术记录急性分离的三叉神经节神经元膜5-HT3受体介导的电流.结果 83.75%(67/80)受检细胞对胞外加5-HT(10-6～10-3 mol/L)敏感,引起一快去敏感的内向电流,同时应用tacrine(10-6～10-4mol/L),5-HT激活电流被不同程度抑制,抑制作用随tacrine浓度的增加而增强,抑制作用的IC50值为3×10-5 mol/L.结论 Tacrine可抑制5-HT诱导的三叉神经节神经元膜电流,这可能是其改善阿尔茨海默病患者学习记忆功能障碍的机制之一.
-
SKF38393抑制大鼠DRG分离神经元ATP-激活电流
目的:探讨多巴胺D1受体的选择性激动剂SKF38393 HCl对ATP-激活电流的作用.方法:在大鼠新鲜分离的DRG神经元标本上应用全细胞膜片钳技术,记录SKF38393对ATP-激活电流的作用.结果:大部分受检细胞(87.5%,77/88)对ATP敏感,10-6～10-3mol/L ATP可引起剂量依赖性呈明显去敏感的内向电流.在此77个细胞中,预加SKF38393可引起三类反应:①外向电流(7.8%,6/77);②内向电流(26.0%,20/77);③无反应(66.2%,51/77).与ATP-激活电流相比,SKF38393-激活电流幅值小,无明显去敏感现象.预加SKF38393 30～60 s对ATP-激活电流的影响如下:在74.0%(57/77)的细胞产生抑制作用,15.6%(12/77)的细胞产生增强作用,其余的无明显作用(10.4%,8/77),本文主要针对此抑制作用进行探讨.此种抑制作用与SKF38393本身是否引起或引起的是内向或外向电流无关.在浓度10-9～10-4mol/L范围SKF38393对10-4 mol/L ATP-激活电流的抑制作用依赖于SKF38393的浓度.胞内透析H7上述抑制作用可完全被取消,而胞内透析H9此抑制作用依旧存在.结论:SKF38393对ATP-激活电流的抑制作用可能是由于D1受体激活后经G蛋白偶联及PKC途径使ATP受体磷酸化所致.
-
神经肽Y对海马神经元“癫痫样”动作电位的影响
目的 探讨神经肽Y (neuropeptide Y,NPY)对海马神经元“癫痫样”动作电位的影响.方法 用无镁细胞外液处理原代培养12 d的海马神经元3h,诱导海马神经元癫痫样放电,建立海马神经元癫痫样放电模型；用全细胞膜片钳电流钳模式检测神经元动作电位,分别给予0.1 μmol/L和1μmol/L NPY各1μL,给药时间10 s,观察其对神经元动作电位频率及波幅的影响.结果 无镁细胞外液处理神经元3h,可以形成稳定的海马神经元癫痫样放电模型,频率16～23 Hz,波幅75 ～ 96 mV.模型组神经元动作电位频率为(18.00±2.32)Hz,而0.1 μmol/L和1μmol/L NPY组分别为(4.75±1.04)Hz和(1.50±0.75) Hz.与模型组相比较,两种浓度NPY组均降低了动作电位发放的频率(P＜0.05).模型组神经元动作电位波幅为(82.25±5.17)mY,而0.1μmol/L和1μmol/L NPY组分别为(49.75±2.49)mV和(40.00±2.20)mV.与模型组相比较,两种浓度NPY组均降低了动作电位发放的波幅(P＜0.05).两种浓度NPY之间相比较,也有统计学差异(P＜0.05).1μmol/LNPY明显抑制了动作电位发放的频率和波幅.结论 NPY能够抑制无镁细胞外液诱发的神经元癫痫样电活动,为应用NPY抑制癫痫发作提供了细胞电生理学证据.
-
大鼠脊髓背角胶状质神经元的去极化反跳及调控机制
目的 研究大鼠脊髓背角胶状质(SG)神经元的去极化反跳及调控机制,以期对去极化反跳相关疾病的临床治疗提供参考.方法 选取3～5周龄SD大鼠,制作离体脊髓纵切片,应用全细胞膜片钳技术记录SG神经元的电生理学特点及接受超极化刺激后的反应,并观察超极化激活环核苷酸门控阳离子(HCN)通道阻断剂和T型钙(Cav3)通道阻断剂对去极化反跳的作用.结果 共记录了63个SG神经元的电活动,其中23个无去极化反跳,19个为去极化反跳无放电,21个为去极化反跳伴放电.无去极化反跳组SG神经元的动作电位阈值(-28.7±1.6 mY)明显高于去极化反跳伴放电组(-36.0±2.0 mV)(P＜0.05).HCN通道阻断剂氯化铯和ZD7288可显著延长去极化反跳伴放电的潜伏期,分别从45.9±11.6 ms增加到121.6±51.3ms(P＜0.05)和从36.2±10.3 ms增加到73.6±13.6ms(P＜0.05);ZD7288也能显著延长去极化反跳不伴放电的潜伏期,从71.9±35.1 ms增加到267.0±68.8 ms (P＜0.05),而T型钙通道阻断剂氯化镍和米贝地尔可显著降低去极化反跳伴放电的振幅,分别从19.9±46.3 mV降到9.5±4.5 mV(P＜0.05)和从26.1±9.4 mV降到15.5±5.0mV(P＜0.05),米贝地尔同样能显著降低去极化反跳不伴放电的振幅,从14.3±3.0 mV降低至7.9±2.0 mY(P＜0.05).结论 近2/3的SG神经元有去极化反跳,其潜伏期和振幅分别受HCN通道和T型钙通道调控.
-
人肺腺癌A549细胞膜钾离子通道特性与细胞增殖关系的研究
背景与目的肺癌的发生发展、侵袭和转移均受肺癌相关基因的调控,而相关基因的表达、缺失或/和突变常是通过细胞膜信号传导系统和细胞膜离子通道实现的.本研究观察了人肺腺癌细胞系A549细胞膜钾离子通道的特性,以探讨应用钾通道阻断剂抑制肺腺癌细胞增殖的可行性.方法以人肺腺癌细胞系A549细胞为研究对象,采用全细胞膜片钳技术记录细胞膜离子通道特性;通过细胞体外增殖试验,观察钾通道阻断剂四乙胺(TEA)对细胞增殖影响.结果A549细胞在保持电压为-70 mV,测试电压-30～+110 mV时,记录到一种跨膜电流,该跨膜电流具有电压依赖性、外向整流特性,并且500 ms内不失活,可被钾通道阻断剂TEA阻断;细胞体外增殖试验显示,20、40和60 mmol/L的TEA作用24 h能明显抑制人肺腺癌A549细胞的体外增殖,而0.2和2 mmol/L的TEA对细胞的体外增殖无明显抑制作用.结论人肺腺癌细胞系A549细胞中存在外向性电压门控性钾通道,该钾通道可被TEA阻断;钾通道阻断剂TEA能抑制A549细胞的体外增殖,抑制作用与TEA存在剂量依赖关系.
-
人非小细胞肺癌细胞膜钾离子通道特性的研究
目的研究人非小细胞肺癌细胞膜钾离子通道特性。方法采用原代培养的非小细胞肺癌细胞、肺部良性病变和癌旁支气管上皮细胞，应用膜片钳全细胞记录方式检测细胞膜钾离子通道特性。结果 (1)非小细胞肺癌细胞膜K＋通道表达的K＋电流具有电压依赖性，能被K＋通道阻断剂TEA阻断。鳞癌细胞膜电流具有失活趋势和内向整流特点；腺癌细胞膜电流具有不失活特性，无内向整流特点。TP＝50～90?mV时，时间常数(τ值)为3.6～9.8?ms。非小细胞肺癌细胞膜电容为(15.35±0.65)?pF，K＋电流密度为(121.08±8.35)?A／F。(2)非小细胞肺癌细胞膜K＋电流幅度、电流密度和膜电容较支气管上皮细胞明显增高（P＜0.001），癌细胞τ值显著小于支气管上皮细胞的τ值（P＜0.001）。结论 (1)非小细胞肺癌细胞膜存在与延迟整流性类似的钾离子通道,且表达明显增加，活动明显增强。(2)检测肺癌细胞膜K＋通道可为研究肺癌发生、发展、侵袭和转移的信号传导提供理论基础和实验依据。
-
人肺腺癌细胞膜钾通道特性研究
目的 研究人肺腺癌细胞系A-549细胞膜离子通道特性.方法 采用膜片钳技术全细胞记录方式检测A-549细胞膜离子通道的特性.结果 人肺腺癌细胞系A-549细胞获得稳定的高阻封接的佳培养时间是细胞传代培养48 h,细胞膜跨膜离子电流具有电压依赖性,在500 ms内不失活,其翻转电位为-70～-80 mV,与细胞膜K+电流的平衡电位相一致.该细胞平均膜电容为(15.13±1.02) pF,TP为+110 mV时细胞膜跨膜通道的电流密度为(48.73±8.58) pA/pF.TP为-40～+110 mV时,细胞膜跨膜通道激活时间常数为12.57～3.14 ms.该跨膜电流能被钾通道阻断剂TEA和CsCl所阻断,表明该跨膜离子电流为K+电流.结论 在人肺腺癌细胞系A-549细胞膜上存在一种类似于神经元和肌肉细胞膜上的延迟整流性K+通道.
-
琥珀酸在海马CA1区对突触前GABA释放的影响
为了观察琥珀酸在大鼠海马CA1区对突触前GABA释放的影响,我们采用红外可视全细胞膜片钳技术记录了琥珀酸对γ-氨基丁酸(GABA)能自发性微小抑制性突触后电流(miniature inhibitory postsynaptie eurrents,mIPSCs)的作用.结果显示不同浓度的琥珀酸(10-6 moL/L、10-5 moL/L、10-4 mol/L和10-3 mol/L)在海马CA1区均能以浓度依赖的方式增强GABA能mlPSCs的频率,而对其电流幅度没有影响.10-4mol/L琥珀酸组GABA能mIPSCs的频率为2.25±0.99 Hz.与正常对照组相比有显著性蔗异(n=8,P＜0.01),而其电流幅度为31.63±6.16 pA.与正常对照组相比没有差异(n=8,P＞0.05).以上实验结果表明琥珀酸能通过增强突触前GABA的自发性释放,对海马CA1区神经元产牛超极化作用,此作用可能足琥珀酸抑制癫痫形成的主要方式之一.
-
咖啡因对急性分离大鼠DRG神经元GABA-激活电流的调制作用
应用全细胞膜片钳记录大鼠新鲜分离背根神经节(DRG)神经元GABA-激活电流,观察咖啡因对GABA-激活电流(IGABA)的调制作用.结果显示:大部分受检细胞(97.4%,113/116) 对外加GABA敏感.1-1000 μmol/L GABA引起一剂量依赖性、有明显去敏感作用的内向电流.预加咖啡因(0.01-100 μmol/L)30 s后再加GABA能明显抑制GABA(100 μmol/L )激活电流的幅值.预加咖啡因后GABA量效曲线明显下移;GABA-激活电流的大值较之对照下降约57%;而Kd值(30 μmol/L)几乎不变.该结果提示此种抑制为非竞争性的.预加氨茶碱(theophylline)亦可明显抑制GABA激活电流,同一浓度(10 μmol/L)下氨茶碱的抑制作用较咖啡因的抑制作用强.预加安定(diazepam, 1 μmol/L)对GABA(10 μmol/L )激活电流有增强作用,而预加咖啡因(10 μmol/L )有拮抗安定增强IGABA的作用.胞内透析H-8后,几乎可以完全消除咖啡因对IGABA的抑制作用.本结果表明咖啡因在初级传入末稍可能产生对抗突触前抑制的效应.
-
大鼠三叉神经节神经元5-羟色胺激活电流及其特征
采用全细胞膜片钳技术观察大鼠三叉神经节神经元5-羟色胺激活电流(I5-HT)及其特征.在大多数受检细胞(64/87,73.6%)特别是中、小型细胞,外加5-HT可引起一快去敏感的内向电流,此内向电流可被5-HT 3受体特异性激动剂2-甲基-5-羟色胺所模拟,被5-HT 3受体拮抗剂ICS 250-930可逆性阻断.I5-HT浓度-反应曲线的阈浓度为3×10-7mol/L,饱和浓度约为3×10-3 mol/L,EC s0为21.4±2.2μmol/L,Hill系数为0.96.I5-HT的翻转电位在-2.5 mV左右.胞内透析GDP-β-S证明I5-HT不依赖于G蛋白而存在.本研究结果为了解5-HT3受体介导电流及其特征提供了有关的资料.
关键词： 5-羟色胺3受体介导电流 全细胞膜片钳记录 三叉神经节 大鼠
